把馬鈴薯切薄片置于干凈的不銹鋼鍋中，加木肩，麩皮，玉米粉，黃豆粉加水煮沸，煮至馬鈴薯熟透而不爛為宜，用600目的濾網(wǎng)過濾，濾出原液加入蛋白胨、葡萄糖、磷酸二輕鉀、硫酸鎂、維生素，再加入原培養(yǎng)基配方總重量的14倍的潔凈水調(diào)勻，再把培養(yǎng)液裝入培養(yǎng)瓶中；
[0047](2)滅菌處理
[0048]把液體種培養(yǎng)中需要應(yīng)用到的工具，如需要更換的膠頭、氣管、氣接頭、氣源活性碳濾芯，把需要滅菌的工具裝入專用聚丙稀袋中，與液體種培養(yǎng)瓶一并放入滅菌鍋中高壓滅菌；
[0049](3)移入接種室
[0050]液體種培養(yǎng)瓶滅菌冷卻后，移入無菌室，準備好一系列工具，利用紫外線燈照射半小時后，工作人員更換工作服進入接種室接種；
[0051](4)接種
[0052]在接種箱或接種室的無菌環(huán)境下，把原種瓶瓶口與培養(yǎng)瓶瓶口，用75度酒精擦拭，在過酒精燈火焰燒過，打開培養(yǎng)瓶瓶口，把內(nèi)生菌液體種原種倒入培養(yǎng)瓶當中，更換培養(yǎng)瓶培養(yǎng)專用膠頭，連接好培養(yǎng)瓶相關(guān)氣接頭，接種完成；
[0053](5)氣調(diào)處理
[0054]培養(yǎng)瓶接好種后移入培養(yǎng)室，打開空氣壓縮機，使其空轉(zhuǎn)排氣8分鐘，再連接培養(yǎng)瓶之前，培養(yǎng)氣體經(jīng)過滅過菌的活性碳濾芯，把氣體調(diào)壓到適當壓力，把無菌氣體送到培養(yǎng)瓶當中，同時打開膠頭上用棉花塞住的排氣閥，使其形成正壓，來防止雜菌進入瓶中污染，在外圍需要連接氣接頭時，必須用75度酒精擦拭，在酒精燈火焰上方完成連接；
[0055](6)內(nèi)生菌的生長
[0056]在常溫20度左右，經(jīng)過4天的氣調(diào)培養(yǎng)，內(nèi)生菌液體種完成培養(yǎng)。
[0057]實施例三
[0058]—種用于誘導沉香結(jié)香的內(nèi)生菌液體種的培養(yǎng)方法，其特征在于:它包括如下步驟:
[0059](1)培養(yǎng)液的制作
[0060]液體種培養(yǎng)基配方:馬鈴薯70 %，木肩17 %、麩皮5 %、玉米粉4 %、黃豆粉1 %、蛋白胨0.5%、葡萄糖1 %、磷酸二輕鉀0.2%、硫酸鎂0.2%、維生素0.1% ;
[0061]按上述配方把原材料稱好后，先把馬鈴薯切薄片置于干凈的不銹鋼鍋中，加木肩，麩皮，玉米粉，黃豆粉加水煮沸，煮至馬鈴薯熟透而不爛為宜，用600目以上濾網(wǎng)過濾，濾出原液加入蛋白胨、葡萄糖、磷酸二輕鉀、硫酸鎂、維生素，再加入原培養(yǎng)基配方總重量的15倍的潔凈水調(diào)勻，再把培養(yǎng)液裝入培養(yǎng)瓶中；
[0062](2)滅菌處理
[0063]把液體種培養(yǎng)中需要應(yīng)用到的工具，如需要更換的膠頭、氣管、氣接頭、氣源活性碳濾芯，把需要滅菌的工具裝入專用聚丙稀袋中，與液體種培養(yǎng)瓶一并放入滅菌鍋中高壓滅菌；
[0064](3)移入接種室
[0065]液體種培養(yǎng)瓶滅菌冷卻后，移入無菌室，準備好一系列工具，利用巴斯消毒后，工作人員更換工作服進入接種室接種；
[0066](4)接種
[0067]在接種箱或接種室的無菌環(huán)境下，把原種瓶瓶口與培養(yǎng)瓶瓶口，用75度酒精擦拭，在過酒精燈火焰燒過，打開培養(yǎng)瓶瓶口，把內(nèi)生菌液體種原種倒入培養(yǎng)瓶當中，更換培養(yǎng)瓶培養(yǎng)專用膠頭，連接好培養(yǎng)瓶相關(guān)氣接頭，接種完成；
[0068](5)氣調(diào)處理
[0069]培養(yǎng)瓶接好種后移入培養(yǎng)室，打開空氣壓縮機，使其空轉(zhuǎn)排氣10分鐘，再連接培養(yǎng)瓶之前，培養(yǎng)氣體經(jīng)過滅過菌的活性碳濾芯，把氣體調(diào)壓到適當壓力，把無菌氣體送到培養(yǎng)瓶當中，同時打開膠頭上用棉花塞住的排氣閥，使其形成正壓，來防止雜菌進入瓶中污染，在外圍需要連接氣接頭時，必須用75度酒精擦拭，在酒精燈火焰上方完成連接；
[0070](6)內(nèi)生菌的生長
[0071]在常溫20度左右，經(jīng)過5天的氣調(diào)培養(yǎng)，內(nèi)生菌液體種完成培養(yǎng)。
[0072]本發(fā)明的膠頭是指設(shè)置在培養(yǎng)瓶開口處的瓶塞，在膠頭上設(shè)有排氣口和與排氣口相配合的排氣閥，在排氣口處塞一些棉花，以防止細菌和灰塵進入，內(nèi)生菌液體種在培養(yǎng)時將排氣閥打開并且調(diào)松膠頭上的棉花塞，使培養(yǎng)瓶形成正壓進行培養(yǎng)，在取液體種時將排氣閥裝上，排氣閥安裝前要用75度酒精擦拭進行消毒，要在酒精燈火焰上方完成連接安裝，從菌種壓力輸入口輸入壓力，這樣將液體種從導氣管處排出，
[0073]利用本發(fā)明的培養(yǎng)方法對植物內(nèi)生菌進行培養(yǎng)，培養(yǎng)出來的菌種用來誘導白木香樹產(chǎn)香具有極好的效果。
[0074]內(nèi)生菌液體種完成培養(yǎng)后，可每瓶單獨應(yīng)用到生產(chǎn)當中，擴培也只需要把培養(yǎng)液煮好，滅好菌，冷卻，培養(yǎng)瓶與培養(yǎng)瓶之間，在酒精燈下把氣管結(jié)頭連好，再通過多通連接器，把液體種與培養(yǎng)瓶之間引流，再把培養(yǎng)氣體弓I到相應(yīng)的培養(yǎng)瓶中，氣調(diào)培養(yǎng)，從而達到內(nèi)生菌液體種的連續(xù)擴培。
[0075]在圖4中，1、2、3、4、5、6分別表不1號培養(yǎng)瓶、2號培養(yǎng)瓶、3號培養(yǎng)瓶、4號培養(yǎng)瓶、5號培養(yǎng)瓶、6號培養(yǎng)瓶，所述的各個培養(yǎng)瓶之間進行并聯(lián)一起培養(yǎng)，各個培養(yǎng)瓶通過多連通管道與滅菌輸入端口、氣體輸入端口、壓力氣體輸入端口、液體菌種輸入端口連接。
[0076]管道滅菌輸入端口的作用:在培養(yǎng)瓶培養(yǎng)基高壓滅菌冷卻接種后，需接入無菌氣體氣調(diào)培養(yǎng)，需要連接各個管道，用滅菌輸入端口輸入消毒酒精，進行管道滅菌，各管道、端口、閥門都需經(jīng)過酒精消毒滅菌，滅菌后關(guān)閉連通器所有閥門備用。
[0077]管道氣體輸入端口接入高壓無菌氣體，在通過連通器把氣體分流道各培養(yǎng)瓶當中。
[0078]管道壓力氣體輸入端口作為后續(xù)培養(yǎng)瓶菌種培養(yǎng)好后，菌種引流的一個壓力無菌氣體輸出口，該端口可向培養(yǎng)瓶菌種壓力輸入口輸入壓力空氣，產(chǎn)生反作用力，在通過進氣管來取得菌種。
[0079]液體菌種輸入端口是后續(xù)液體種培養(yǎng)好后，用液體種去培養(yǎng)更多的液體種，用該端口向多個并聯(lián)的端口培養(yǎng)瓶輸入菌種來完成接種。
[0080]本方法還可以用于各食藥用菌液體種、酵母菌，益生菌，植物根瘤菌的生產(chǎn)，可還用于各菌絲體類多糖的提取，可適用于大型工廠化的生產(chǎn)。
【主權(quán)項】
1.一種用于誘導沉香結(jié)香的內(nèi)生菌液體種的培養(yǎng)方法，其特征在于:它包括如下步驟: (1)培養(yǎng)液的制作 液體種培養(yǎng)基配方:馬鈴薯70 %，木肩17 %、麩皮5 %、玉米粉4%、黃豆粉1 %、蛋白胨.0.5%、葡萄糖1%、磷酸二輕鉀0.2%、硫酸鎂0.2%、維生素0.1% ; 按上述配方把原材料稱好后，先把馬鈴薯切薄片置于干凈的不銹鋼鍋中，加木肩，麩皮，玉米粉，黃豆粉加水煮沸，煮至馬鈴薯熟透而不爛為宜，用400目以上濾網(wǎng)過濾，濾出原液加入蛋白胨、葡萄糖、磷酸二輕鉀、硫酸鎂、維生素，再加入原培養(yǎng)基配方總重量的12-15倍的潔凈水調(diào)勻，再把培養(yǎng)液裝入培養(yǎng)瓶中； (2)滅菌處理 把液體種培養(yǎng)中需要應(yīng)用到的工具，如需要更換的膠頭、氣管、氣接頭、氣源活性碳濾芯，把需要滅菌的工具裝入專用聚丙稀袋中，與液體種培養(yǎng)瓶一并放入滅菌鍋中高壓滅菌； (3)移入接種室 液體種培養(yǎng)瓶滅菌冷卻后，移入無菌室或接種箱，準備好一系列工具，利用巴斯消毒或紫外線燈照射半小時后，工作人員更換工作服進入接種室接種； (4)接種 在接種箱或接種室的無菌環(huán)境下，把原種瓶瓶口與培養(yǎng)瓶瓶口，用75度酒精擦拭，在過酒精燈火焰燒過，打開培養(yǎng)瓶瓶口，把內(nèi)生菌液體種原種倒入培養(yǎng)瓶當中，更換培養(yǎng)瓶培養(yǎng)專用膠頭，連接好培養(yǎng)瓶相關(guān)氣接頭，接種完成； (5)氣調(diào)處理 培養(yǎng)瓶接好種后移入培養(yǎng)室，打開空氣壓縮機，使其空轉(zhuǎn)排氣5-10分鐘，再連接培養(yǎng)瓶之前，培養(yǎng)氣體經(jīng)過滅過菌的活性碳濾芯，把氣體調(diào)壓到適當壓力，把無菌氣體送到培養(yǎng)瓶當中，同時打開膠頭上用棉花塞住的排氣閥，使其形成正壓，來防止雜菌進入瓶中污染，在外圍需要連接氣接頭時，必須用75度酒精擦拭，在酒精燈火焰上方完成連接； (6)內(nèi)生菌的生長 在常溫20度左右，經(jīng)過3-5天的氣調(diào)培養(yǎng)，內(nèi)生菌液體種完成培養(yǎng)。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種用于誘導沉香結(jié)香的內(nèi)生菌液體種的培養(yǎng)方法。本發(fā)明涉及一種植物內(nèi)生菌的培養(yǎng)方法，其特征在于：它包括如下步驟：培養(yǎng)液的制作、滅菌處理、移入接種室、接種、氣調(diào)處理、內(nèi)生菌的生長。本發(fā)明具有如下優(yōu)點：本發(fā)明的植物內(nèi)生菌的培養(yǎng)整套設(shè)備投資額度少，步驟簡單、容易操作，所培養(yǎng)的內(nèi)生菌存活率高、生菌生長速度快、培養(yǎng)成本低，本發(fā)明中的液體培養(yǎng)基采用的是純天然、無污染的材料，使內(nèi)生菌培養(yǎng)出來對后續(xù)的使用具有更好的效果。
【IPC分類】C12N1/20
【公開號】CN105331560
【申請?zhí)枴緾N201510844762
【發(fā)明人】張傳金
【申請人】張傳金
【公開日】2016年2月17日
【申請日】2015年11月27日