一種依非巴特的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物合成領(lǐng)域，具體設(shè)及一種新的依非己特的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 依非己特（Eptifibatide)是人工合成的環(huán)狀屯膚，為糖蛋白（GP)IIb/IIIa受體 (血小板凝血因子I受體）括抗劑，能夠阻滯血小板聚集，具有非常強大的抗血小板聚集作 用。其膚序結(jié)構(gòu)如下：
CAS# :148031-34-9 ;分子式：C35H49Nu〇9S2;分子量：831. 96。
[0003] 依非己特為糖蛋白（GP)IIb/IIIa受體（血小板凝血因子I受體）括抗劑。能選 擇性、可逆性抑制血小板聚集的最終共同通路（血漿凝血因子I與GPIIb/IIIa結(jié)合），可 逆轉(zhuǎn)因血栓形成而導(dǎo)致的缺血狀態(tài)該品種由美國COR化erapeutics公司開發(fā)，1998年在 美國上市，商品名Intergrelin。能夠阻滯血小板聚集，具有非常強大的抗血小板聚集作用， 用于急性冠脈綜合征及經(jīng)皮冠狀動脈介入治療。
[0004] 依非己特的制備方法，國內(nèi)外已有文獻和專利報道，中國專利CN1500805A、 CN1858060A、CN102584944A公開了依非己特的制備方法，其制備方法都采用Fmoc固相 合成法，W氨基樹脂為開始的載體樹脂，依次接入保護氨基酸，所得膚樹脂酸解而得還原 型依非己特粗品，再氧化得到依非己特。中國專利CN1500805A，原料使用了Mpr度Zl) 和Fmoc-Harg任bf)-〇H，由于Mpr度zl)上的基團Bzl酸解條件苛刻，依非己特膚樹脂 須采用酸解試劑（TFA/皿r/HAc/TIS/邸T)，很容易產(chǎn)生雜質(zhì)，同時Fmoc-化rg任bf)-OH 價格較貴；中國專利CN1858060A，原料使用了片段Mpr燈rt)-化rg(B0C2) -0H，但片段 MpHht)-化rg度oC2)-0H的制備較繁瑣。中國專利CN102584944A原料采用了兩個片段 MpHTrtorAcm)-化rg-OH和Fmoc-Gly-Asp(01:Bu)-〇H，工藝復(fù)雜。本發(fā)明的優(yōu)點采用了 Fmoc-切S巧1)和片段Mpr巧2) -Harg,既避免了使用價格高的Fmoc-Harg任bf) -0H，同時使膚 樹脂酸解條件更為溫和，能有效地避免雜質(zhì)的產(chǎn)生，產(chǎn)品純度可達99. 5%W上，具有產(chǎn)業(yè)化 前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明旨在提供一種新的依非己特的制備方法，該制備方法采用了Fmoc-切S巧1) 和片段Mpr(Rz)-Harg,既避免了使用高價格的原料Fmoc-Harg任bf)-〇H，同時使膚樹脂酸解 條件更為溫和，能有效地避免雜質(zhì)的產(chǎn)生，提高產(chǎn)品收率和純度，有利于規(guī)?；a(chǎn)，具有 產(chǎn)業(yè)化前景。
[0006] 本發(fā)明依非己特的制備方法，（1)、W保護氨基酸、片段和氨基樹脂為原料，采用多 膚固相合成法依次偶聯(lián)得到膚樹脂X-Gly-Asp(0巧11) -T;rp(Boc) -pro-切S巧1)-氨基樹脂， 其中Rl為化t、Mtt、Mmt或Dmt;X為Mpr巧2)-化rg，R2為化t、Mmt或Dmt;似、加入酸解試 劑（TFA/TIS/邸T/UO)酸解，用乙酸沉淀并收集還原型依非己特粗品；（3)、將還原型依非 己特粗品氧化，得依非己特粗品；(4)、將依非己特粗品通過Cis柱分離純化，獲得目標產(chǎn)物 依非己特。
[0007] 本發(fā)明所述的氨基樹脂，可選I^ink Amide樹脂、Rink Amide AM樹脂、Rink MBHA 樹脂和Sieber樹脂中的一種，優(yōu)選為化nk Amide AM樹脂。
[0008] 進一步地，所選氨基樹脂取代值為0. 4~1. 2mmol/g樹脂，優(yōu)選為0. 5~1.Ommol/ g樹脂。
[0009] 本發(fā)明所述的保護氨基酸為Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(01:Bu)-〇H、 Fmoc-1'巧度〇。）-0山尸111〇。斗1'〇-0山尸1]1〇。-切3化）-0]^;其中而為1'1'1:、11:1:、11111:或01111:;所述 片段為Mpr巧2)-化rg-OH或其形成的鹽；Rz為化t、Mmt或Dmt。
[0010] 其中，片段Mpr巧2)-化rg-OH結(jié)構(gòu)：
進一步地，片段MprOg-化rg-OH對應(yīng)W下表1中結(jié)構(gòu)： 表1為片段Mpr巧2)-化rg-OH所對應(yīng)的結(jié)構(gòu)
進一步地，片段Mpr巧2)-Harg-OH還包含它所形成的鹽，如鹽酸鹽、堿金屬鹽、有機胺鹽 等。
[00川 其中，保護Fmoc-切S化)-OH結(jié)構(gòu)：
進一步地，保護氨基酸Fmoc-切S巧I)-OH對應(yīng)W下表2中結(jié)構(gòu)： 表2保護氨基酸Fmoc-切S(Ri)-OH所對應(yīng)的結(jié)構(gòu)
進一步地，本發(fā)明所述的保護氨基酸、片段中Mpr(Rz)-Harg-OH有3種結(jié)構(gòu)可選，F(xiàn)moc-切S巧1) -OH有4種結(jié)構(gòu)可選，保護氨基酸、片段的組合方式有12種。優(yōu)選的，保護氨基 酸、片段為]^口1'(11111:)-化巧-0比肥1少1]1〇。-617-姐[少1]1〇。-/\3口（01:811)-0]^少1]1〇。-1'巧度〇。）-0山 Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys(Mmt)-0H。
[0012] 本發(fā)明所述的偶聯(lián)合成法具體包含=步反應(yīng)：（1)、保護氨基酸或片段的活化反 應(yīng)：將保護氨基酸或片段，加溶劑攬拌溶解，在攬拌冰水冷卻下加入偶聯(lián)劑，反應(yīng)0. 25~2 小時，得保護氨基酸或片段的活化醋溶液。（2)、保護氨基酸或片段與樹脂的偶聯(lián)反應(yīng)：將 保護氨基酸或片段的活化醋溶液加入氨基樹脂或前一步反應(yīng)得到的去Fmoc保護的膚樹脂 中，室溫攬拌偶聯(lián)反應(yīng)，用巧=酬檢測反應(yīng)情況，每隔1小時監(jiān)測1次，直至完全(巧=酬檢 測樹脂呈無色)，反應(yīng)完全后，用溶劑洗涂6次，抽干。（3)、Fmoc基團的脫除反應(yīng)：加入脫除 保護基團Fmoc的試劑的溶液，攬拌反應(yīng)0. 25~1小時，抽干；用溶劑洗涂6次，抽干，得膚 樹脂。
[001引 本發(fā)明所述偶聯(lián)所用的偶聯(lián)劑為DCC/HOBt、DCC/HOAt、DIC/HOBt、DIC/HOAt、皿TU/ DIPEA、皿TU/NMM、皿TU/TEA、TBTU/DIPEA、TBTU/NMM、TBTU/TEA、HATU/DIPEA、HATU/NMM、HATU/TEA中的一種。優(yōu)選為DIC/冊Bt。
[0014] 本發(fā)明所述的偶聯(lián)反應(yīng)，其反應(yīng)物的摩爾比為氨基樹脂：Fmoc-氨基酸或片段=1 : 1. 5-5,優(yōu)選為 1 :3。
[0015] 本發(fā)明所述的保護氨基酸或片段的活化反應(yīng)，其反應(yīng)物的摩爾比為Fmoc-氨基酸 或片段：DIC:H0Bt=l:1. 05-1. 3 :1. 1 ~1. 5,優(yōu)選為 1 :1. 05 :1. 2。反應(yīng)時間為 0. 25-2 小時， 優(yōu)選為0. 5小時。反應(yīng)溶劑為DMF、DCM、NMP、THF，優(yōu)選為DMF。
[0016] 本發(fā)明所述的偶聯(lián)反應(yīng)，其偶聯(lián)反應(yīng)時間為1~8小時，優(yōu)選為2~3小時。
[0017] 本發(fā)明所述的偶聯(lián)反應(yīng)，脫除保護基團Fmoc的試劑為10~30%PIP/DMF(體積百 分數(shù)）溶液，優(yōu)選的為20%。用量為每克料樹脂5~15ml，優(yōu)選為每克投料樹脂8~12ml。 去保護反應(yīng)時間為10~60分鐘，優(yōu)選為20~35分鐘。
[0018] 本發(fā)明所述的偶聯(lián)反應(yīng)洗涂溶劑為DMF、DCM，優(yōu)選為DMF。
[0019] 本發(fā)明所述的依非己特膚樹脂酸解反應(yīng)具體為：依非己特膚樹脂加入酸解試劑， 室溫攬拌反應(yīng)，同時脫去樹脂及側(cè)鏈保護基，過濾、濾洗，濾液和洗液合并，濃縮至少量，加 乙酸沉淀，過濾、濾洗、干燥得還原型依非己特粗品。
[0020] 還原型依非己特粗品結(jié)構(gòu)為Mpr-Harg-Gly-Asp-hp-Pro-切3-畑2。
[0021] 所述依非己特樹脂酸解時采用的酸解試劑為S氣醋酸（TFA)、S異丙基硅烷 (TIS)、1，2-乙二硫醇（EDT)和水化0)混合溶液，其體積比為其體積比為TFA:TIS:EDT: &0=90-95 :1-3 :2-4 :2-4。優(yōu)選的，TFA:TIS:EDT化0=95 :1 :2 :2。
[0022] 所述依非己膚特膚樹脂酸解所需酸解試劑用量為4~15ml/g膚樹脂，優(yōu)選的，8~ 12ml/g膚樹脂。
[0023] 非己膚特膚樹脂酸解反應(yīng)條件為室溫攬拌反應(yīng)1~4小時，優(yōu)選的，2小時。
[0024] 本發(fā)明所述的將還原型依非己特粗品氧化得依非己特粗品，具體為：還原型依非 己特粗品用醋酸溶解，用氧化劑氧化環(huán)化，還原型依非己特結(jié)構(gòu)中Mpr中的琉基（SH)和切S 中的（SH)經(jīng)氧化形成二硫鍵（S-S)而得到依非己特粗品。