一種新的三萜化合物及其制備方法和醫(yī)藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及從燈臺(tái)樹的干燥葉中分離得到的一種具有治 療肝癌作用的=祗類化合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 燈臺(tái)樹Alstoniascholaris(L.)R.Br.為夾竹桃科雞骨常山屬喬木。其性味甘、 淡、平，具有清熱解毒、消腫止痛、平喘止咳、截追、發(fā)汗、健胃等作用。燈臺(tái)樹根、莖、皮、葉均 可入藥，W皮和葉為主。該植物主要分布在我國的廣西南部、西部和云南南部，在尼泊爾、印 度、斯里蘭卡、細(xì)甸、泰國、越南、柬捕寨、馬來西亞、印度尼西亞、菲律賓和澳大利亞熱帶地 區(qū)也有分布。燈臺(tái)樹具有悠久的民間用藥歷史，我國民間用燈臺(tái)樹皮治療頭痛、傷風(fēng)、額氣、 肺炎、百日咳、慢性支氣管炎，外用可治外傷止血、接骨、消腫、瘡巧及配制殺蟲劑等。
[0003] 國內(nèi)外學(xué)者對燈臺(tái)樹的化學(xué)成分進(jìn)行了一系列研究，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的化學(xué)成分主要包 括生物堿類、黃酬類和=祗類，其次還有揮發(fā)油、醬體類、維生素等成分。目前，燈臺(tái)樹的生 物堿、黃酬和=祗類成分研究較為深入，其中W燈臺(tái)樹葉的研究較多，已經(jīng)從中分離得到了 50多個(gè)生物堿成分，主要為單祗嗎I噪生物堿。
[0004] 近年來，隨著對其化學(xué)成分和藥理活性等方面研究的逐步展開，發(fā)現(xiàn)其活性成分 豐富，在抗腫瘤、抗炎、抗菌、抗糖尿病和調(diào)血脂等方面顯示出潛在的藥用價(jià)值。研究表明， 燈臺(tái)樹中含有的=祗類成分羽扇豆醇對不同組織來源的細(xì)胞均具有增殖抑制活性，如黑色 素瘤451LU細(xì)胞、WM35細(xì)胞和B162F2細(xì)胞，人膜腺癌細(xì)胞株AsPC-1，人表皮癌A431細(xì)胞， 肝癌SMMC7721細(xì)胞，前列腺癌細(xì)胞LNCaP、CWR22R丫 1和PC-3。羽扇豆醇可選擇性地抑制無 胸腺裸鼠451LU和CWR22R丫 1細(xì)胞的增殖，通過調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖標(biāo)記物、細(xì)胞調(diào)亡標(biāo)記物和細(xì) 胞周期調(diào)控分子在腫瘤異種移植中的表達(dá)而發(fā)揮作用。燈臺(tái)樹除了具有W上藥理作用外， 還具有退熱、縮宮、降壓、抗追疾等作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從燈臺(tái)樹的干燥葉中分離得到的一種具有治療肝癌作 用的=祗類化合物及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得W實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0008]
[0009] 所述的化合物（I)的制備方法，包含W下操作步驟：(a)燈臺(tái)樹的干燥葉粉碎， 用75~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水飽 和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；化）步驟（a) 中乙酸乙醋萃取物用大孔樹脂除雜，先用15%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用75%乙醇洗脫12 個(gè)柱體積，收集75 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得75 %乙醇洗脫物浸膏；（C)步驟化）中75% 乙醇洗脫物浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、50:1、30:1、10:1和1:1的二氯甲 燒-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟（C)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體 積比為15:1、10:1和5:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中組分2 用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收 集8~10個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)。
[0010] 進(jìn)一步地，步驟（a)中，用80%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0011] 進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0012] 一種藥物組合物，該藥物組合物含有治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物（I) 和藥學(xué)上可接受的載體。
[0013]所述的化合物（I)在制備治療肝癌的藥物中的應(yīng)用。
[0014]所述的藥物組合物在制備治療肝癌的藥物中的應(yīng)用。
[0015]本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可W直接使用，或者W藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、 對人和動(dòng)物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017]所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料W及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物W單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說明】
[001引圖1為化合物（I)結(jié)構(gòu)式；
[0019]圖2為化合物（I)理論ECD值與實(shí)驗(yàn)ECD值比較；
[0020] 圖3化合物（I)對胎pG2及L02細(xì)胞增殖的影響（n= 3)。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不W此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可W對 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[002引實(shí)施例1 :化合物（I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0023] 試劑來源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲燒為分析純，購自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0024] 制備方法：（a)將燈臺(tái)樹的干燥葉（8kg)粉碎，用80%乙醇熱回流提取燭LX3 次），合并提取液，濃縮至無醇味（3L)，依次用石油酸（3LX3次）、乙酸乙醋（3LX3次）和 水飽和的正下醇（化X3次）萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（355g)和正 下醇萃取物；化）步驟（a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用15%乙醇洗脫 8個(gè)柱體積，再用75 %乙醇洗脫12個(gè)柱體積，收集75 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得75 %乙醇 洗脫物浸膏（136g) ;(c)步驟化）中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為 80:1 (8個(gè)柱體積）、50:1 (8個(gè)柱體積）、30:U6個(gè)柱體積）、10:1 (8個(gè)柱體積）和1:1巧個(gè) 柱體積）的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟（C)中組分4 (31g)用正相娃 膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為15:1 (8個(gè)柱體積）、10:1 (10個(gè)柱體積）和5:U6個(gè)柱體 積）的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中組分2 (Ilg)用十八烷基娃 燒鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-10個(gè)柱體 積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)(35mg)。
[00巧]結(jié)構(gòu)確證：HR-ESIMS顯示[M+Na]+為m/z553. 3508,結(jié)合核磁特征可得分子式 為〔32馬。〇6,不飽和度為8。核磁共振氨譜數(shù)據(jù)5h(卵m，DMS0-de，500MHz) :H-l(1.83，m)， H-I(I. 47,m)，H-2 (I. 59,m)，H-2 (I. 48,m)，H-3 (4. 44,dd，J= 11. 6,4. 2)，H-5 (I. 46,m)， H-6(1.88，m)，H-6(1.69，t，J= 14. 6)，H-7(2. 93，d，J= 6. 4)，H-lia.81，m)，H-lia.93， m)，H-12 (I. 49,m)，H-12 (I. 90,m)，H-15 (I. 45,m)，H-15 (I. 16,ddd，J= 12. 5,12. 5, 5. 3)， H-16 (I. 27,m)，H-16 (2. 06,m)，H-17 (I. 59,m)，H-18 〇). 97,s)，H-19 〇). 96,s)，H-20 (I. 33， m)，H-21 (0. 87,d，J= 6. 6)，H-22 (0. 99,m)，H-22 (I. 34,m)，H-23 (I. 76,m)，H-23 (I. 93， m)，H-24(4. 97,tt，J= 7. 1，I. 4)，H-26(l. 51，s)，H-27(l. 59,s)，H-28(0. 89,s)， H-29(0. 90,s)，3-0Ac(1.99,s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù) 5c(ppm，DMS0-de，125Hz) :29. 9(邸2， 1-C)，22. 5 (畑2, 2-C)，79. 3 (CH，3-C)，37.I(C，4-C)，41. 8 (CH，5-C)，20. 2 (畑2, 6-C)， 53.I(CH，7-C)，64. 0(C，8-C)，85. 3(C，9-C)，37.I(C，10-C)，22. 2(邸2, 11-C)，33. 7(細(xì)2， 12-C)，46. 4 (C，13-C)，59.I(C，14-C)，19. 9 (邸2,15-C)，27. 2 (邸2,16-C)，51. 8 (CH，17-C)， 13. 5 (邸3, 18-C)，16.I(細(xì)3, 19-C)，34. 2 (CH，20-C)，17. 7 (邸3, 21-C)，35. 5 (邸2, 22-C)， 24. 4 (細(xì)2, 23-C)，124. 3 (CH，24-C)，130. 6 (C，25-C)，17.I(細(xì)3, 26-C)，25. 3 (細(xì)3, 27-C)， 27. 6 (邸3, 28-C)，16. 3 (邸3, 29-C)，176. 8 (C，30-C)，170.I(C，3-OAc)，21.I(邸3, 3-OAc);碳 原子標(biāo)記參見圖1。IR光譜顯示該化合物含有丫內(nèi)醋（1766cmI)和幾基（1727cmI)基團(tuán)。 咱NMR譜顯示含有屯個(gè)甲基信號5冊.97化-18)，0. 96化-19)，1. 51化-26)，1. 59化-27)， 0. 89 化-28)，0. 90 化-29)和 1. 99 (3-OAc)，W及一個(gè)雙峰信號 5 冊.87 化-21，d，J= 6. 6化），說明該化合物為S祗類化合物。"CNMR和DEPT譜顯示32個(gè)碳信號，包括八個(gè)甲 基，六個(gè)次甲基（兩個(gè)含氧次甲基W及一個(gè)締控碳），九個(gè)亞甲基W及九個(gè)季碳（兩個(gè)內(nèi)醋 幾基碳，兩個(gè)含氧碳W及一個(gè)締控碳）。此外，側(cè)鏈具有24 (25)-雙鍵（5C130. 6,124. 3和 5H4. 97,tt，J= 7. 1，1. 4Hz)信號。HMBC譜中，&-26 和 &-27 與C-24 和C-25 化-21 與 C-17,C-20和C-22 ;W及H-24與C-22,C-23, &-26和&-27的相關(guān)性驗(yàn)證了上述推論。此 夕F，一個(gè)醋幾基信號[5C176.8(C-30)]和兩個(gè)碳信號[5C85. 3(C-9)和59.UC-14)]說 明該化合物存在一個(gè)丫內(nèi)醋結(jié)構(gòu)。HMBC譜中，&-18與C-