真菌寄生大豆胞囊線蟲檢測裝置的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生物實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域,具體設(shè)及用于真菌對不同蟲態(tài)大豆胞囊線蟲寄生 情況測定研究、大豆胞囊線蟲生防資源篩選和測定的實(shí)驗(yàn)設(shè)備。
【背景技術(shù)】
[0002] 大豆胞囊線蟲?。⊿oybean巧Stnematode,簡稱SCN)是世界大豆生產(chǎn)中的主要限 制因子之一。因其病原大豆胞囊線蟲分布廣、危害重、寄主范圍大、傳播途徑多、胞囊抗逆性 強(qiáng)且存活時(shí)間長等特點(diǎn),成為一種極難防治的±傳病害。由于生物防治對環(huán)境和人類的危 害較小,大豆胞囊線蟲病生物防治的研究已經(jīng)成為焦點(diǎn)。
[0003] 目前根據(jù)真菌對大豆胞囊線蟲的作用機(jī)制來分,可W將生防真菌歸納為5類:捕 食性真菌、專性寄生線蟲菌物、機(jī)會(huì)真菌、產(chǎn)毒真菌和菌根菌(VAM)。捕食性真菌是在線蟲的 誘導(dǎo)下,利用自身營養(yǎng)菌絲產(chǎn)生的粘性菌絲、粘性網(wǎng)、收縮環(huán)、=維菌網(wǎng)等捕食器官,對±壤 中運(yùn)動(dòng)的線蟲進(jìn)行捕食。機(jī)會(huì)真菌和內(nèi)寄生真菌則是通過與寄主線蟲的相互識(shí)別,吸附或 粘著于蟲體表面,并同時(shí)在幾下質(zhì)酶的作用下菌絲能夠穿透體壁將其卵殼消解,侵染其中 的卵和幼蟲,通過胞囊和卵中的營養(yǎng)物質(zhì)來進(jìn)行繁殖菌體,從而達(dá)到防治的效果。一些生防 真菌還可W通過分泌某些能夠分解線蟲體壁的酶類物質(zhì)進(jìn)行防治線蟲。例如某些內(nèi)寄生真 菌能夠產(chǎn)生多種與侵染線蟲相關(guān)的胞外蛋白酶,如胞外絲氨酸蛋白酶和幾下質(zhì)酶,它們能 夠降解大豆胞囊線蟲胞囊和卵的蛋白質(zhì)組分,從而達(dá)到抑制大豆胞囊線蟲病的作用。除此 之外還有很多微生物是通過產(chǎn)生具有殺線作用的代謝產(chǎn)物來進(jìn)行防治的。
[0004] 生防資源的篩選成為生防因子在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)用的關(guān)鍵。實(shí)驗(yàn)室篩選工作目前主 要是通過制備不同真菌的發(fā)酵液,通過調(diào)查不同蟲態(tài)的大豆胞囊線蟲在發(fā)酵液中的解化程 度和致死作用,初步判斷該真菌是否對大豆胞囊線蟲具有抑制作用。該方法是從代謝產(chǎn)物 方面篩選生防資源,忽略了真菌自身寄生對大豆胞囊線蟲的防治作用,另外該方法無法直 觀檢測真菌對大豆胞囊線蟲的作用形態(tài),為生防資源的篩選帶來了一定的局限性。
【發(fā)明內(nèi)容】
陽〇化]本發(fā)明目的是為了解決現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)室難W準(zhǔn)確測定寄生真菌對不同蟲態(tài)大豆胞囊 線蟲的寄生情況的問題,而提供一種真菌寄生大豆胞囊線蟲檢測裝置。
[0006] 本發(fā)明真菌寄生大豆胞囊線蟲檢測裝置由檢測管和細(xì)胞培養(yǎng)板組成,其中檢測管 是在管體的上端加蓋有管蓋,管蓋的頂面上開有圓孔,在管體的下端開有通孔,檢測管置 于細(xì)胞培養(yǎng)板中的培養(yǎng)槽中,在檢測管管蓋的上表面蓋有兩層擦鏡紙,在培養(yǎng)槽中填充有 化Clz溶液或滅菌水,ZnCl2溶液或滅菌水的加入量至擦鏡紙的高度。
[0007] 目前利用大豆胞囊線蟲寄生真菌來防治大豆胞囊線蟲病害是研究較為廣泛的生 物防治措施。準(zhǔn)確測定寄生真菌對不同蟲態(tài)大豆胞囊線蟲的寄生情況,是開發(fā)和利用寄生 真菌防治大豆胞囊線蟲病害的關(guān)鍵步驟之一。
[0008] 本發(fā)明所述的真菌寄生大豆胞囊線蟲檢測裝置中的檢測管可W由離屯、管改裝而 成,能夠準(zhǔn)確直接地測定寄生真菌對不同蟲態(tài)大豆胞囊線蟲寄生和抑制作用。目前關(guān)于生 防真菌在生物防治中的研究主要集中在發(fā)酵液對大豆胞囊線蟲的抑制作用,本發(fā)明的檢測 裝置則能夠更直觀的檢測寄生真菌對不同蟲態(tài)大豆胞囊線蟲的作用,同時(shí)為大豆胞囊線蟲 生防資源的篩選提供了一個(gè)更為有效的方法。
【附圖說明】
[0009] 圖1為檢測管的結(jié)構(gòu)示意圖;
[0010] 圖2為檢測管置于細(xì)胞培養(yǎng)板中的結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
【具體實(shí)施方式】 [0011] 一:本實(shí)施方式真菌寄生大豆胞囊線蟲檢測裝置由檢測管1和細(xì)胞 培養(yǎng)板2組成,其中檢測管1是在管體1-1的上端加蓋有管蓋1-2,管蓋1-2的頂面上開有 圓孔1-3,在管體1-1的下端開有通孔1-4,檢測管1置于細(xì)胞培養(yǎng)板2中的培養(yǎng)槽2-1中, 在檢測管1管蓋的上表面蓋有兩層擦鏡紙3,在培養(yǎng)槽2-1中填充有化Clz溶液或滅菌水, 化Clz溶液或滅菌水的加入量至擦鏡紙3的高度。
[0012] 本實(shí)施方式管體下端的通孔起到通氣作用,能夠讓培養(yǎng)板中的液體更加容易接觸 到檢測管的擦鏡紙。
[0013] 本實(shí)施方式能夠檢測真菌對不同蟲態(tài)大豆胞囊線蟲的寄生作用,根據(jù)真菌對大豆 胞囊線蟲胞囊和卵寄生后在化Clz溶液中的解化程度,及被寄生后的大豆胞囊線蟲二齡幼 蟲(J2)是否能通過擦鏡紙爬到檢測管下層水中,來判斷該真菌是否對大豆胞囊線蟲具有 抑制作用,測定真菌對大豆胞囊線蟲的直接作用,更加直觀和充分地體現(xiàn)真菌對大豆胞囊 線蟲的抑制作用,為生防資源的篩選提供更有理的依據(jù),也為生防真菌防治大豆胞囊線蟲 的機(jī)理研究提供參考和幫助。
【具體實(shí)施方式】 [0014] 二:本實(shí)施方式與一不同的是所述的管體1-1的高度 為 12 ~15mm。
【具體實(shí)施方式】 [0015] =:本實(shí)施方式與一或二不同的是所述的管體1-1的 內(nèi)徑為6~20mm。
【具體實(shí)施方式】 [0016] 四:本實(shí)施方式與一至=之一不同的是細(xì)胞培養(yǎng)板2 中的培養(yǎng)槽2-1的深度為15~18mm。
【具體實(shí)施方式】 [0017] 五:本實(shí)施方式與一至四之一不同的是培養(yǎng)槽2-1的 直徑為15~27mm。
【具體實(shí)施方式】 [0018] 六:本實(shí)施方式與一至五之一不同的是在細(xì)胞培養(yǎng)板 2的上表面還覆蓋有滅菌濾紙4。
【具體實(shí)施方式】 [0019] 屯:本實(shí)施方式與一至六之一不同的是檢測管1的材 質(zhì)為硬質(zhì)塑料。
[0020] 實(shí)施例一:本實(shí)施例真菌寄生大豆胞囊線蟲檢測裝置由檢測管1和細(xì)胞培養(yǎng)板2 組成,其中檢測管1是在管體1-1的上端加蓋有管蓋1-2,管蓋1-2頂蓋上開有7mm的圓孔 1-3,在管體1-1的下端開有通孔1-4,檢測管1置于細(xì)胞培養(yǎng)板2中的培養(yǎng)槽2-1中,在檢 測管1管蓋的上表面蓋有兩層擦鏡紙3,在培養(yǎng)槽2-1中填充有化Clz溶液或滅菌水,ZnCl2 溶液或滅菌水的加入量至擦鏡紙3的高度;其中檢測管的高度為13mm,檢測管內(nèi)徑為8mm, 圓柱形培養(yǎng)槽的深度為18mm,培養(yǎng)槽的直徑為17mm。
[0021] 本實(shí)施例所述的檢測管可W通過塑料離屯、管改造而成。
[0022] 應(yīng)用本實(shí)施例所述的真菌寄生大豆胞囊線蟲檢測裝置的檢測過程如下:在實(shí)驗(yàn) 室條件下,用滅菌的蒸饋水將細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)檢測管上端擦鏡紙潤濕,接入待測寄生真菌 菌絲,然后在每個(gè)檢測管擦鏡紙上分別加入經(jīng)化ClO消毒后不同蟲態(tài)(胞囊、二齡幼蟲、 卵)的大豆胞囊線蟲,用濕潤的滅菌濾紙蓋在培養(yǎng)板上用來保濕,25°c條件下培養(yǎng)5-7d, 培養(yǎng)天數(shù)根據(jù)寄生真菌生長速度而定,培養(yǎng)期間注意擦鏡紙和上面濾紙的濕潤程度,要及 時(shí)補(bǔ)充滅菌水保持濕潤。待培養(yǎng)板內(nèi)擦鏡紙上的大豆胞囊線蟲被真菌寄生后,在解剖鏡下 檢查大豆胞囊線蟲的不同蟲態(tài)寄生情況,取出培養(yǎng)板,加入胞囊和卵的培養(yǎng)板沿板壁加入 0. 4mmol?L1化Clz溶液,溶液加入量W剛好到達(dá)測試管擦鏡紙為標(biāo)準(zhǔn),每隔3d記錄胞囊和 卵的解化情況,直到?jīng)]有線蟲解化為止。加入J2的培養(yǎng)板沿板壁加入滅菌水,滅菌水加入 量也W剛好到達(dá)測試管擦鏡紙為標(biāo)準(zhǔn),24h后記錄水中的線蟲數(shù)。根據(jù)線蟲的解化數(shù)和水中 的J2數(shù)量判斷真菌對大豆胞囊線蟲的寄生和抑制作用。
[0023] 在實(shí)驗(yàn)室條件下進(jìn)行應(yīng)用,寄生真菌菌株對大豆胞囊線蟲不同蟲態(tài)的寄生情況如 表1所示,能夠明顯檢測出寄生真菌菌株寄生大豆胞囊線蟲不同蟲態(tài)的情況,不同菌株之 間存在顯著差異。本發(fā)明簡單有效,使用方便,成本低廉,易于推廣應(yīng)用。
[0024]表1 陽0巧]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 真菌寄生大豆胞囊線蟲檢測裝置,其特征在于該真菌寄生大豆胞囊線蟲檢測裝置 由檢測管(1)和細(xì)胞培養(yǎng)板(2)組成,其中檢測管(1)是在管體(1-1)的上端加蓋有管蓋 (1-2),管蓋(1-2)的頂面上開有圓孔(1-3),在管體(1-1)的下端開有通孔(1-4),檢測管 (1) 置于細(xì)胞培養(yǎng)板(2)中的培養(yǎng)槽(2-1)中,在檢測管(1)管蓋的上表面蓋有兩層擦鏡紙 (3),在培養(yǎng)槽(2-1)中填充有211(:12溶液或滅菌水,ZnCl 2溶液或滅菌水的加入量至擦鏡紙 (3)的高度。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的真菌寄生大豆胞囊線蟲檢測裝置,其特征在于所述的管體 (1-1)的高度為12~15_。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的真菌寄生大豆胞囊線蟲檢測裝置,其特征在于所述的管體 (1_1)的內(nèi)徑為6~20mm〇4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的真菌寄生大豆胞囊線蟲檢測裝置,其特征在于細(xì)胞培養(yǎng)板 ⑵中的培養(yǎng)槽(2-1)的深度為15~18mm〇5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的真菌寄生大豆胞囊線蟲檢測裝置,其特征在于培養(yǎng)槽(2-1) 的直徑為15~27謹(jǐn)。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的真菌寄生大豆胞囊線蟲檢測裝置,其特征在于在細(xì)胞培養(yǎng)板 (2) 的上表面還覆蓋有滅菌濾紙(4)。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的真菌寄生大豆胞囊線蟲檢測裝置,其特征在于檢測管(1)的 材質(zhì)為硬質(zhì)塑料。
【專利摘要】真菌寄生大豆胞囊線蟲檢測裝置,本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生物實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域,它為了解決現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)室難以準(zhǔn)確測定寄生真菌對不同蟲態(tài)大豆胞囊線蟲的寄生情況的問題。該真菌寄生大豆胞囊線蟲檢測裝置由檢測管和細(xì)胞培養(yǎng)板組成,其中檢測管是在管體的上端蓋有管蓋,管蓋的頂面上開有圓孔,在管體的下端開有通孔,檢測管置于細(xì)胞培養(yǎng)板中的培養(yǎng)槽中,在檢測管管蓋的上表面蓋有兩層擦鏡紙,培養(yǎng)槽中填充有ZnCl2溶液或滅菌水。本發(fā)明的檢測裝置能夠準(zhǔn)確測定寄生真菌對不同蟲態(tài)大豆胞囊線蟲的寄生情況,直觀的檢測寄生真菌對不同蟲態(tài)大豆胞囊線蟲的作用,為大豆胞囊線蟲生防資源的篩選提供了一個(gè)更為有效的方法。
【IPC分類】C12M1/34
【公開號(hào)】CN105154325
【申請?zhí)枴緾N201510616425
【發(fā)明人】宋潔, 許艷麗, 姚欽
【申請人】中國科學(xué)院東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所
【公開日】2015年12月16日
【申請日】2015年9月24日