為 100mg/L。降解結(jié)果見表1。
[0040]
[0041] 實施例3:紅球菌株C3對焦化廢水中苯酚、吡啶和鄰甲酚的降解
[0042] 量取100ml焦化廢水，苯酚的濃度為350±5mg/L;添加吡啶、鄰甲酚使其濃度分別 為100 ± 5mg/L，接入2ml新鮮菌液，混勾，置于30°C，200r/min的搖床培養(yǎng)，5天后（120h) 取樣測定化合物的降解率。結(jié)果見表2。
[0043]
[0044] 實施例4:固定化微生物菌劑制備
[0045] 1將紅球菌株C3接種到富集培養(yǎng)基30°C，200r/min條件下培養(yǎng)24h，以7000rpm 速度離心5min后得到菌體的對數(shù)生長期細胞，并用磷酸鹽緩沖液洗滌3次；
[0046] 2.將離心出的菌液加入活性炭，吸附?；钚蕴考尤肓繛?wt%。
[0047] 3.將PVA加入水中，在90°C水浴條件下完全溶解，PVA與水的重量/體積比為 1:10,冷卻后加入海藻酸鈉、二氧化硅和碳酸鈣并混合均勻，PVA:海藻酸鈉：二氧化硅：碳 酸鈣的重量比為10:5:3:0. 2,得到PVA凝膠-海藻酸鈉凝膠；
[0048] 4.把上述制得的PVA-海藻酸鈉凝膠和加入活性炭的菌液混合均勻后，得到菌 體-PVA-海藻酸鈉懸液，將菌體-PVA-海藻酸鈉懸液低速滴入連續(xù)攪拌的含5 %CaCl2的硼 酸溶液中，所述的硼酸溶液pH呈中性，在4°C固定化交聯(lián)48h后取出，用去離子水洗滌3次， 即得固定化顆粒。
[0049] 5.將固定化顆粒于固化劑K2HP04固化8h后，用去離子水洗滌3次，即得固定化微 生物制劑。
[0050] 實施例5:菌劑對焦化廢水中苯酚的降解
[0051] 將菌劑以5 % (W/V)的比例投加到焦化廢水中，設置4組實驗考察菌劑對焦化廢水 中苯酚的去除效果：
[0052] (a)于250mL錐形瓶中加入45mL焦化廢水、50mL自來水、5g菌劑；
[0053] (b)于250mL錐形瓶中加入45mL焦化廢水、50mL自來水、5ml菌液；
[0054] (c)于250mL錐形瓶中加入45mL焦化廢水、45mL自來水、5g菌劑和5mL未滅菌的 活性污泥；
[0055] (d)于250mL錐形瓶中加入45mL焦化廢水、45mL自來水、5g菌液和5mL未滅菌的 活性污泥；
[0056] 置于30°C和200r/min的搖床中培養(yǎng)，間隔一定時間取樣檢測培養(yǎng)基中苯酸濃度， 結(jié)果見圖1。結(jié)果表明：菌株C3雖然可以有效降解焦化廢水中的苯酚，但所需時間較長， 而且加入活性污泥后，苯酚的降解速率及降解率均有一定程度的降低；相比較而言，由菌株 C3制備的菌劑苯酚降解率高，并能與活性污泥中的其他微生物共同生長，24h內(nèi)對焦化廢 水中的苯酚的降解率均達到99%以上，生物強化效果顯著。
[0057] 實施例7:紅球菌株C3對焦化加工廢水中苯酚的降解
[0058] 將菌劑以5 % (W/V)的比例投加到焦化加工廢水中，設置4組實驗考察菌劑對焦化 廢水中苯酚的去除效果：
[0059](a)于250mL錐形瓶中加入45mL焦化加工廢水、50mL自來水、5g菌劑；
[0060] (b)于250mL錐形瓶中加入45mL焦化加工廢水、50mL自來水、5ml菌液；
[0061] (c)于250mL錐形瓶中加入45mL焦化加工廢水、45mL自來水、5g菌劑和5mL未滅 菌的活性污泥；
[0062] (d)于250mL錐形瓶中加入45mL焦化加工廢水、45mL自來水、5g菌液和5mL未滅 菌的活性污泥；
[0063] 置于30°C和200r/min的搖床中培養(yǎng)，間隔一定時間取樣檢測培養(yǎng)基中苯酚濃度， 結(jié)果見圖2。結(jié)果表明：菌株C3雖然可以有效降解焦化廢水中的苯酚，但所需時間較長， 而且加入活性污泥后，苯酚的降解速率及降解率均有一定程度的降低；相比較而言，由菌株 C3制備的菌劑苯酚降解率高，并能與活性污泥中的其他微生物共同生長，24h內(nèi)對焦化廢 水中的苯酚的降解率達到99%以上，生物強化效果顯著。
[0064] 實施例8 :紅球菌株C3對煉油廢水中苯酚的降解
[0065] 將菌劑以5 % (W/V)的比例投加到煉油廢水中，設置4組實驗考察菌劑對焦化廢水 中苯酚的去除效果：
[0066] (a)于250mL錐形瓶中加入45mL煉油廢水、50mL自來水、5g菌劑；
[0067] (b)于250mL錐形瓶中加入45mL煉油廢水、50mL自來水、5ml菌液；
[0068] (c)于250mL錐形瓶中加入45mL煉油廢水、45mL自來水、5g菌劑和5mL未滅菌的 活性污泥；
[0069] (d)于250mL錐形瓶中加入45mL煉油廢水、45mL自來水、5g菌液和5mL未滅菌的 活性污泥；
[0070] 置于30°C和200r/min的搖床中培養(yǎng)，間隔一定時間取樣檢測培養(yǎng)基中苯酚濃度， 結(jié)果見圖3。結(jié)果表明：菌株C3雖然可以有效降解焦化廢水中的苯酚，但所需時間較長， 而且加入活性污泥后，苯酚的降解速率及降解率均有一定程度的降低；相比較而言，由菌株 C3制備的菌劑苯酚降解率高，并能與活性污泥中的其他微生物共同生長，24h內(nèi)對焦化廢 水中的苯酚的降解率均達到99%以上，生物強化效果顯著。
【主權項】
1. 一株紅球菌株C3,其特征在于，所述的菌株由下述步驟制備而得： 按1 %接種量吸取一定量的焦化廠廢水生物處理系統(tǒng)的活性污泥樣品至苯酚的新鮮富 集培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)；富集瓶混濁后，取一定量的培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接到增長一定濃度的苯酚液體 培養(yǎng)基中培養(yǎng)；依次類推，逐級提高苯酚濃度至l〇〇〇mg/L;將經(jīng)過苯酚濃度為1000mg/L的 富集培養(yǎng)基富集后的菌體轉(zhuǎn)接苯酚濃度為l〇〇〇mg/L無機鹽培養(yǎng)基中馴化；采用稀釋涂布 和劃線的方法，在分離培養(yǎng)基平板上分離篩選以苯酚為唯一碳源和能源的菌株； 所述液體富集培養(yǎng)基組分為蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉、去離子水和苯酚，其中蛋白胨：牛 肉膏：氯化鈉：去離子水的質(zhì)量比為10:3:5:1000,苯酚濃度根據(jù)需要添加；所述的無機鹽 液體培養(yǎng)基以苯酚為唯一碳源，組分及質(zhì)量比為〇. 5KH2P04:0. 5K2HP04:NH4N03,0. 2MgS04: 0. 2CaCl2:0.0 lFeSO4，7H20 :0.0 lMnSO4，H20,還包括苯酚，苯酚含量根據(jù)需要量加入，加蒸餾 水定容； 制備得到的菌株經(jīng)16SrDNA鑒定為紅球菌屬Rhodococcussp.，革蘭氏染色呈陽性，脲 酶、接觸酶陽性，氧化酶、VP反應和甲基紅反應陰性；在LB固體培養(yǎng)基上劃線分離單菌落， 淡黃半透明，邊緣整齊，質(zhì)地濕潤，易挑起；所述的紅球菌株C3能以苯酚、吡啶、鄰甲酚為碳 源，其在無機鹽液體培養(yǎng)基中能夠降解l〇〇〇mg/L苯酸。2. 根據(jù)權利要求1所述的紅球菌株C3生產(chǎn)的微生物菌劑，其特征在于其活性組分為權 利要求1所述的紅球菌株C3。3. -種權利要求書2所述的微生物菌劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟： (1) 將所述的紅球菌株C33接種到富集培養(yǎng)基30°C，200r/min條件下培養(yǎng)24h-48h，以 7000rpm速度離心3-5min后得到菌體的對數(shù)生長期細胞，并用磷酸鹽緩沖液洗滌2~3次； (2) 將離心出的菌液加入活性炭吸附，其中活性炭加入量為3~10wt% ; (3) 將PVA加入水中，在90°C水浴條件下完全溶解，PVA與水的重量/體積比為1:8~ 10,冷卻后加入海藻酸鈉、二氧化硅和碳酸鈣并混合均勻，PVA :海藻酸鈉：二氧化硅：碳酸 鈣的重量比為10:3~6:35:0. 2~0. 5,得到PVA凝膠-海藻酸鈉凝膠； (4) 把制得的所述PVA-海藻酸鈉凝膠和加入活性炭的菌液混合均勻后，得到菌 體-PVA-海藻酸鈉懸液，將菌體-PVA-海藻酸鈉懸液低速滴入連續(xù)攪拌的含3~5% CaCl2 的硼酸溶液中，所述的硼酸溶液PH呈中性，在4~6°C固定化交聯(lián)24~90h后取出，形成固 定化顆粒； (5) 將固定化顆粒于固化劑K2HPO4固化2-8h后，用去離子水洗滌2~3次，即得固定 化微生物制劑。4. 一種權利要求書1所述的紅球菌株C3在焦化廢水或煉油廢水或焦油加工廢水中酚 類有機污染物的生物處理中的應用。5. -種權利要求2所述的微生物菌劑在處理含酚廢水中的應用，其特征在于，包括以 下操作：將所述的微生物菌劑按重量與體積比為3% -10%的濃度加入含酚廢水中。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種紅球菌株C3，該菌株制備步驟如下：按1％接種量吸取焦化廠廢水生物處理系統(tǒng)的活性污泥樣品至苯酚的新鮮富集培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)；富集瓶混濁后，取一定量的培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接到濃度增長的苯酚液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)；依次類推，逐級提高苯酚濃度至1000mg/L；將經(jīng)過富集培養(yǎng)基富集后的菌體轉(zhuǎn)接苯酚濃度為1000mg/L無機鹽培養(yǎng)基中馴化；采用稀釋涂布和劃線的方法，在分離培養(yǎng)基平板上分離篩選以苯酚為唯一碳源和能源的菌株；該菌株在LB固體培養(yǎng)基上劃線分離單菌落，淡黃半透明，邊緣整齊，質(zhì)地濕潤，易挑起；能以苯酚、吡啶、鄰甲酚為碳源，其在無機鹽液體培養(yǎng)基中能夠降解1000mg/L苯酚。本發(fā)明還提供了一種以該紅球菌株C3為活性組分的微生物菌劑及制備方法。
【IPC分類】C12N11/08, C02F3/34, C12N11/10, C12N1/20, C12N11/04, C02F101/34, C12R1/01
【公開號】CN105039212
【申請?zhí)枴緾N201510400147
【發(fā)明人】鄭貝貝, 霍瑩, 楊勇, 付連超, 張瑩
【申請人】中國海洋石油總公司, 中海油天津化工研究設計院, 中海油能源發(fā)展股份有限公司
【公開日】2015年11月11日
【申請日】2015年7月9日