4，A2(450g)通過聚酰胺柱色譜，以純水為流動(dòng)相洗脫，洗脫液經(jīng)減壓蒸餾后得B，B經(jīng)快 速減壓柱色譜以二氯甲烷-甲醇-水系統(tǒng)50:1:0. 01、20:1:0· 01、10:1:0. 01、5:1:0. 01、 3:1:0. 01、1:1:0. 01梯度洗脫，共得40個(gè)餾分，通過硅膠薄層板層析檢識(shí)，合并為Cl~C5， Cl經(jīng)ODS柱色譜以甲醇-水系統(tǒng)10:90、25:75、55:45、0:100、梯度洗脫得到24個(gè)餾分，經(jīng) 分析液相檢識(shí)，合并為Dl~D7。在D2(0DS甲醇水10:90洗脫）中以乙腈-水系統(tǒng)10:90 在液相色譜柱中制得化合物1，在D4(0DS甲醇水55:45洗脫）中以乙腈-水系統(tǒng)25:75在 液相色譜柱中制得化合物2和3。
[0050] 制備實(shí)施例4
[0051] 取干燥的金銀花花蕾13kg用水煎煮提取5次，每次8小時(shí)，藥材與水的比例為： 1:5,合并提取液濃縮得浸膏，浸膏采用大孔吸附柱色譜，以乙醇-水系統(tǒng)0:100、20:80、 40 :60、60:40、100:0逐漸洗脫，共收集15個(gè)餾分，經(jīng)硅膠薄層層析檢識(shí)，合并為Al~ A4，A2(500g)通過聚酰胺柱色譜，以純水為流動(dòng)相洗脫，洗脫液經(jīng)減壓蒸餾后得B，B經(jīng)快 速減壓柱色譜以二氯甲烷-甲醇-水系統(tǒng)50:1:0. 01、20:1:0· 01、10:1:0. 01、5:1:0. 01、 2:1:0. 01、1:1:0. 01梯度洗脫，共得30個(gè)餾分，通過硅膠薄層板層析檢識(shí)，合并為Cl~C5， Cl經(jīng)ODS柱色譜以甲醇-水系統(tǒng)10:90、30:70、55:45、0:100、梯度洗脫得到22個(gè)餾分，經(jīng) 分析液相檢識(shí)，合并為Dl~D7。在D3(0DS甲醇水30:70洗脫）中以乙腈-水系統(tǒng)16:84 在液相色譜柱中制得化合物1、2、3。
[0052] 實(shí)驗(yàn)例1 :
[0053] 白色無定形粉末（甲醇），易溶于甲醇。[α忙-28.7 (c 2.05, McOH)高分辨質(zhì)譜給 出準(zhǔn)分子離子峰m/z 453. 1366[M+Na]+，結(jié)合1H，13C NMR譜，確定分子式為C19H26O11?；?物I (15mg)經(jīng)5ml 3N三氟乙酸在密封瓶中IKTC放置4h水解，反應(yīng)液用20ml水稀釋后用 5ml乙酸乙酯萃取三次，萃取后的水層加甲醇后反復(fù)旋蒸至中性干燥殘?jiān)?。殘?jiān)?.05ml 吡啶溶解，然后加〇. 〇5ml六甲基二硅氮烷和0. 02ml三甲基氯硅烷，混合液在60 °C攪拌 30min。靜置后上清液用GC分析，分析結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)糖對(duì)照顯示水解液中含D-葡萄糖。在 1H-NMR中，δ 5. 42 (1H，brs)和7. 54 (1H，s)為環(huán)烯醚萜類化合物1位和3位特征質(zhì)子信號(hào)， δ 5. 63 (1H, m)、δ 5. 22 (1H, brd, J = 17. 3Hz)和 δ 5. 15 (1H, brd, J = 10. 5Hz)提示結(jié)構(gòu)中 存在一個(gè)末端雙鍵結(jié)構(gòu)，δ 4. 54(1H，d，J = 7. 8Hz)為糖端基質(zhì)子信號(hào)，因而推測(cè)該化合物 為一個(gè)簡單裂環(huán)環(huán)烯醚萜苷類化合物。13C-NMR中存在3組烯烴碳信號(hào)（δ 152. 4,107. 9， 134. 9,118. 1，129. 5,127. 7)，2個(gè)酯羰基碳信號(hào)（δ 166. 1和174. 3)，1個(gè)甲氧基碳信號(hào) (S 51.0)以及一個(gè)糖片段碳信號(hào)。進(jìn)一步分析HMBC譜，亞甲基質(zhì)子信號(hào)δ 2.84(2? d，J = 5. 1Hz)分別與羧基（δ 174. 3)、乙烯基（δ 127. 7和129. 5)相關(guān)，表明亞甲基與羧基和雙鍵 相連。NOESY譜中，Η-5和Η-9相關(guān)，H-I和Η-8相關(guān)，表明化合物1的相對(duì)構(gòu)型和已知化合 物secologanin相同，故化合物結(jié)構(gòu)可由此確定，命名為Loniceranan Α。其1H NMR譜，13C NMR譜信號(hào)歸屬見表2, HMBC和NOESY譜圖見下式，相關(guān)圖譜見附圖1-圖5。
[0054]
[0055] 實(shí)驗(yàn)例2
[0056] 無色油狀（甲醇），易溶于甲醇。[α^-34·4 (c 2.63, JVleOH)高分辨質(zhì)譜給出準(zhǔn)分子 離子峰 m/z 441. 1362[M+Na]+，結(jié)合1H，13C NMR 譜，確定分子式為 C18H26O11?；衔?l(13mg) 經(jīng)5ml 3N三氟乙酸在密封瓶中110°C放置4h水解，反應(yīng)液用20ml水稀釋后用5ml乙酸 乙酯萃取三次，萃取后的水層加甲醇后反復(fù)旋蒸至中性干燥殘?jiān)?。殘?jiān)?. 05ml吡啶溶 解，然后加0. 05ml六甲基二硅氮烷和0. 02ml三甲基氯硅烷，混合液在60 °C攪拌30min。靜 置后上清液用GC分析，分析結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)糖對(duì)照顯示水解液中含D-葡萄糖。在1H-NMR中， δ 5. 31 (1H，d，J = 4. IHz)和7. 29 (1H，s)為環(huán)烯醚萜類化合物1位和3位特征質(zhì)子信號(hào)， δ 5. 52(lH，m)、δ 5. 18(lH，brd, J = 11. 3Hz)和 δ 5. 15(lH，brd, J = 16. 5Hz)提示結(jié)構(gòu)中 存在一個(gè)末端雙鍵結(jié)構(gòu)，δ 4. 48 (1H，d，J = 7. 8Hz)為糖端基質(zhì)子信號(hào)，因而推測(cè)該化合物 為一個(gè)簡單裂環(huán)環(huán)烯醚萜苷類化合物。13C-NMR中存在2組烯烴碳信號(hào)（δ 149. 8,108. 0， 133. 9,119. 4)，1個(gè)酯羰基碳信號(hào)（δ 169. 0)，1個(gè)乙氧基碳信號(hào)（δ 59. 6和14. 1)以及一個(gè) 糖片段碳信號(hào)。進(jìn)一步分析HMBC譜，亞甲基質(zhì)子信號(hào)δ 4. 01 (2Η，m)分別與甲基（δ 14. 1)、 羧基（δ 171.9)相關(guān)，表明乙氧基連在2的7位上。NOESY譜中，Η-5和Η-9相關(guān)，H-I 和Η-6、Η-8相關(guān)，表明化合物2的相對(duì)構(gòu)型和1相同，故化合物結(jié)構(gòu)可由此確定，命名為 Loniceranan Β。其1H NMR譜，13C NMR譜信號(hào)歸屬見表2, HMBC和NOESY譜圖見下式，相關(guān) 圖譜見附圖6-圖10。
[0057]
[0058] 實(shí)驗(yàn)例3
[0059] 無色油狀（甲醇），易溶于甲醇。[(1拉-56.9 (c 2.17, Mc'OH)高分辨質(zhì)譜給出準(zhǔn)分子 離子峰 m/z 455. 1535[M+Na]+，結(jié)合1H，13C NMR 譜，確定分子式SC19H28O11?；衔?3(22mg) 經(jīng)5ml 3N三氟乙酸在密封瓶中110°C放置4h水解，反應(yīng)液用20ml水稀釋后用5ml乙酸 乙酯萃取三次，萃取后的水層加甲醇后反復(fù)旋蒸至中性干燥殘?jiān)?。殘?jiān)?. 05ml吡啶溶 解，然后加0. 05ml六甲基二硅氮烷和0. 02ml三甲基氯硅烷，混合液在60 °C攪拌30min。靜 置后上清液用GC分析，分析結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)糖對(duì)照顯示水解液中含D-葡萄糖。在1H-NMR中， δ 5. 39 (1H，d，J = 4. 5Hz)和7. 45 (1H，s)為環(huán)烯醚萜類化合物1位和3位特征質(zhì)子信號(hào)， δ5·54(1Η，πι)、S5.25(lH，brd, J = 15·9Ηζ)和 δ5· 19(lH，brd, J = 8·7Ηζ)提示結(jié)構(gòu)中 存在一個(gè)末端雙鍵結(jié)構(gòu)，δ 4. 49 (1H，d，J = 7. 8Hz)為糖端基質(zhì)子信號(hào)，因而推測(cè)該化合物 為一個(gè)簡單裂環(huán)環(huán)烯醚萜苷類化合物。13C-NMR中存在2組烯烴碳信號(hào)（δ 152. 1，108. 1， 133. 3,119. 9)，1個(gè)酯羰基碳信號(hào)（δ 166. 4)，1個(gè)甲氧基碳信號(hào)（δ 51. 0)，1個(gè)乙氧基碳 信號(hào)（S59.8和14.0)以及一個(gè)糖片段碳信號(hào)。進(jìn)一步分析HMBC譜，亞甲基質(zhì)子信號(hào) δ4·03(2Η，πι)分別與甲基（δ 14.0)、羧基（δ 171.6)相關(guān)，表明乙氧基連在3的7位上。 NOESY譜中，Η-5和Η-9相關(guān)，H-I和Η-8、Η-10相關(guān)，表明化合物3的相對(duì)構(gòu)型和2相同，故 化合物結(jié)構(gòu)可由此確定，命名為Loniceranan C。其1H NMR譜，13C NMR譜信號(hào)歸屬見表2， HMBC和NOESY譜圖見下式，相關(guān)圖譜見附圖11-圖14。
[0060]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 如下所示的環(huán)烯醚萜苷類化合物：2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)烯醚萜苷類化合物，其特征在于：所述環(huán)烯醚萜苷類化合 物是從金銀花干燥的花蕾中提取分離得到的。3. 如權(quán)利要求1所述的環(huán)烯醚萜苷類化合物的制備方法，其特征在于，取干燥的金銀 花用水煎煮，合并提取液濃縮得浸膏，浸膏采用大孔吸附柱色譜，以乙醇-水系統(tǒng)〇: 100~ 100:1逐漸洗脫，共收集10~15個(gè)餾分，經(jīng)硅膠薄層層析檢識(shí)，合并為A1~A4，A2(大 孔樹脂乙醇-水15:85~30:70下洗脫）通過聚酰胺柱色譜，以純水進(jìn)行洗脫，洗脫液經(jīng)減 壓蒸餾后得B，B經(jīng)快速減壓柱色譜以二氯甲烷/三氯甲烷-甲醇-水系統(tǒng)50:1:0. 01~ 1:1:0. 01梯度洗脫，共得20~40個(gè)餾分，通過硅膠薄層板層析檢識(shí)，合并為C1~C5,C1經(jīng) ODS柱色譜以甲醇-水系統(tǒng)10:90~100:0梯度洗脫得到20~30個(gè)餾分，經(jīng)分析液相檢 識(shí)，合并為D1~D7,利用HPLC法以乙腈-水為流動(dòng)相在D2-D5中制備得到化合物1-3。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述的乙腈-水的比例為 10:90-30:70。5. 如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，水煎煮提取2~5次，每次6~10小 時(shí)。6. -種藥物組合物，包含權(quán)利要求1所述的環(huán)烯醚萜苷類化合物和藥學(xué)上可接受的載 體。7. 權(quán)利要求1所述的環(huán)烯醚萜苷類化合物或權(quán)利要求6所述的組合物在制備降糖藥物 中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及從忍冬科植物金銀花(<i>Lonicera？japonica</i>)？干燥的花蕾中提取分離的一系列新的環(huán)烯醚萜苷類化合物L(fēng)oniceranan？A、Loniceranan？B、Loniceranan？C，它們具有相同的裂環(huán)環(huán)烯醚萜苷母核。本發(fā)明還涉及該類新化合物及其制備藥物的降糖生理活性及其醫(yī)藥用途。該類化合物可以和藥學(xué)上可接受的載體結(jié)合制成臨床上可接受的劑型，用于各類糖尿病的治療。本發(fā)明制備方法簡單，重現(xiàn)性好，純度高。獲得的化合物具有良好的降糖活性作用。
【IPC分類】A61P3/10, C07H17/04, A61K31/7048, C07H1/08
【公開號(hào)】CN105017353
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510323346
【發(fā)明人】宋少江, 彭纓, 劉志翔, 李玲芝, 劉慶博, 黃肖霄
【申請(qǐng)人】沈陽藥科大學(xué)
【公開日】2015年11月4日
【申請(qǐng)日】2015年6月12日