一種酶提取紫錐菊多糖的方法
【專利說明】
[0001]
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及多糖提取領(lǐng)域,特別涉及一種酶提取紫錐菊多糖的方法。
[0003]
【背景技術(shù)】
[0004]紫錐菊(Echinacea)是聞名世界的免疫藥草,原產(chǎn)地位于北美和加拿大南部。其 為一種松果菊屬植物,該屬植物共有8個(gè)種和數(shù)個(gè)變種,目前作為藥物開發(fā)的主要有3個(gè) 品種:紫松果菊(Echinaceapurpurea,即通常所說的紫錐菊),狹葉紫錐菊(Echinacea augustifolia)和白色紫錐菊(Echinacenpallida)。研究表明紫錐菊含有多種活性成分, 咖啡酸衍生物類、多糖和糖蛋白、烷酰胺類、生物堿類、多炔類、黃酮類、揮發(fā)油、留醇等,其 活性成分已成為當(dāng)前研究熱點(diǎn)。
[0005] 紫錐菊因具有顯著的免疫增強(qiáng)活性,而被稱為"天然抗生素"。在人類多種保健產(chǎn) 品及復(fù)方產(chǎn)品中都有應(yīng)用。而相對(duì)紫錐菊中其他有效成分,紫錐菊多糖的研究相對(duì)較少, 研究較多的菊苣酸為主的活性成分提取過程復(fù)雜,所獲得的活性成分產(chǎn)品原料量少且成本 高,雖然已有關(guān)于紫錐菊提取多糖的免疫活性研究的報(bào)道,但對(duì)其從藥材到活性成分提取 的系統(tǒng)深入研究尤其是酶法處理提取多糖的系統(tǒng)研究至今未見報(bào)道,純化方法也鮮有研 究。
[0006]
【發(fā)明內(nèi)容】
[0007] 為了解決紫錐菊多糖提取時(shí)間過長,以及提取率低的問題,同時(shí)還能得到較好活 性成分,本發(fā)明提供了一種酶提取紫錐菊多糖的方法。
[0008] 為了達(dá)到上述目的,本發(fā)明提供了一種酶提取紫錐菊多糖的方法,其中,提取方法 包括以下步驟: ① 藥材預(yù)處理:將紫錐菊地上部分粉碎過40-60目篩;加入脫脂溶劑,脫脂后,將脫脂 溶劑于20-80°C條件下?lián)]干,處理后的藥材備用; ② 提取:稱?、偬幚淼玫降乃幉倪m量,加入藥材15-25倍量的水,調(diào)pH為2-4,預(yù)熱至 40°C_60°C后,加入藥材0. 04-0. 06倍量的酶制劑,酶解時(shí)間50min-70min,80°C-100°C滅酶 10-20min,在 80°C-100°C繼續(xù)攪拌保溫l_2h; ③ 濃縮:離心,將上清液旋蒸減壓濃縮至生藥量I:0. 9-1. 5的濃縮液; ④ 醇沉:向濃縮液中加入3-4倍的無水乙醇,0-4°C條件下靜置24-48小時(shí); ⑤ 洗滌:將④得到的醇沉液抽濾,得到的沉淀物依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌; ⑥ 干燥:將沉淀物用1-2倍量的水復(fù)溶,在140°C_160°C的條件下噴霧干燥得到紫錐菊 多糖。
[0009] 其中,所述脫脂溶劑為石油醚。
[0010] 其中,所述脫脂溶劑為石油醚、1,2-環(huán)氧丙烷、乙醚的混合,其質(zhì)量份數(shù)比為: 1-2:0. 05-0. 1:0. 02-0. 08〇
[0011] 其中,所述酶制劑為果膠酶。
[0012] 其中,所述酶制劑為纖維素酶、果膠酶、蝸牛酶、植酸酶的混合,其質(zhì)量份數(shù)比為: 0. 5-1:1-2:0. 1-0. 5 :0. 05-0. 1〇
[0013] 其中,所述紫錐菊藥材來源于紫錐菊屬植物紫錐菊,取自盛花期到花后期的地上 部分。
[0014] 本發(fā)明的有益效果是:本制備方法,具有反應(yīng)條件溫和、提取時(shí)間短、提取率高等 優(yōu)點(diǎn),并且重現(xiàn)性高,穩(wěn)定,制備得到的紫錐菊多糖溶解性較好,外觀均一、水溶性好,并且 獲得較好的活性組分,具有較好的免疫活性。
[0015] 說明書附圖
[0016] 圖IEPPSI分子量測定譜圖; 圖2EPPSII分子量測定譜圖; 圖3EPPSIII分子量測定譜圖; 圖 4EPPSI、EPPSII、EPPSIIIXRD圖; 圖5EPPSI紅外譜圖; 圖6EPPSII紅外譜圖; 圖7EPPSIII紅外譜圖; 圖 8EPPSI的 13CNMR譜圖; 圖 9EPPSI的 13CNMR譜圖; 圖10不同濃度EPPS、EPPSI、EPPSII及EPPSIII對(duì)RAW264. 7細(xì)胞的影響; 圖11不同濃度EPPS、EPPSI、EPPSII及EPPSIII對(duì)RAW264. 7外觀形態(tài)的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 實(shí)施例1 提取方法包括以下步驟: ① 藥材預(yù)處理:將紫錐菊地上部分粉碎過60目篩;加入脫脂溶劑,脫脂后,將石油醚于 60°C條件下?lián)]干,處理后的藥材備用; ② 提?。悍Q?、偬幚淼玫降乃幉膌〇〇g,加入1500g水,調(diào)pH為3,預(yù)熱至50°C后,加入 藥材5g果膠酶,酶解時(shí)間60min,80°C滅酶lOmin,在80°C繼續(xù)攪拌保溫l_h; ③ 濃縮:離心,將上清液旋蒸減壓濃縮至生藥量1 9的濃縮液; ④ 醇沉:向濃縮液中加入3倍的無水乙醇,4°C條件下靜置24小時(shí); ⑤ 洗滌:將④得到的醇沉液抽濾,得到的沉淀物依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌; ⑥ 干燥:將沉淀物用1倍量的水復(fù)溶,在140°C的條件下噴霧干燥得到紫錐菊多糖。
[0018] 實(shí)施例2 提取方法包括以下步驟: ①藥材預(yù)處理:將紫錐菊地上部分粉碎過40目篩;加入石油醚,脫脂后,將石油醚于 60°C條件下?lián)]干,處理后的藥材備用; ② 提取:稱?、偬幚淼玫降乃幉膌〇〇g,加入1500g水,調(diào)pH為2,預(yù)熱至40°C后,加入 藥材4g果膠酶,酶解時(shí)間50min,80°C滅酶lOmin,在80°C繼續(xù)攪拌保溫Ih; ③ 濃縮:離心,將上清液旋蒸減壓濃縮至生藥量1 9的濃縮液; ④ 醇沉:向濃縮液中加入3倍的無水乙醇,(TC條件下靜置24小時(shí); ⑤ 洗滌:將④得到的醇沉液抽濾,得到的沉淀物依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌; ⑥ 干燥:將沉淀物用1倍量的水復(fù)溶,在140°C的條件下噴霧干燥得到紫錐菊多糖。
[0019] 實(shí)施例3 提取方法包括以下步驟: ① 藥材預(yù)處理:將紫錐菊地上部分粉碎過60目篩;加入石油醚脫脂溶劑,脫脂后,將石 油醚于60°C條件下?lián)]干,處理后的藥材備用; ② 提?。悍Q取①處理得到的藥材l〇〇g,加入2500g水,調(diào)pH為4,預(yù)熱至60°C后,加入 藥材6g果膠酶,酶解時(shí)間70min,100°C滅酶20min,在100°C繼續(xù)攪拌保溫2h; ③ 濃縮:離心,將上清液旋蒸減壓濃縮至生藥量I:1. 5的濃縮液; ④ 醇沉:向濃縮液中加入4倍的無水乙醇,4°C條件下靜置48小時(shí); ⑤ 洗滌:將④得到的醇沉液抽濾,得到的沉淀物依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌; ⑥ 干燥:將沉淀物用2倍量的水復(fù)溶,在160°C的條件下噴霧干燥得到紫錐菊多糖。
[0020] 實(shí)施例4 提取方法包括以下步驟: ① 藥材預(yù)處理:將紫錐菊地上部分粉碎過60目篩;加入脫脂溶劑,脫脂后,將脫脂溶劑 于60°C條件下?lián)]干,處理后的藥材備用; ② 提取:稱?、偬幚淼玫降乃幉膌〇〇g,加入1500g水,調(diào)pH為3,預(yù)熱至60°C后,加入 藥材5g酶制劑,酶解時(shí)間60min,80°C滅酶10min,在80°C繼續(xù)攪拌保溫Ih; ③ 濃縮:離心,將上清液旋蒸減壓濃縮至生藥量1 :1的濃縮液; ④ 醇沉:向濃縮液中加入3倍的無水乙醇,4°C條件下靜置24小時(shí); ⑤ 洗滌:將④得到的醇沉液抽濾,得到的沉淀物依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌; ⑥ 干燥:將沉淀物用2倍量的水復(fù)溶,在150°C的條件下噴霧干燥得到紫錐菊多糖。
[0021] 其中,所述脫脂溶劑為石油醚、1,2-環(huán)氧丙烷、乙醚的混合,其質(zhì)量份數(shù)比為: 1-2:0. 05-0. 1:0. 02-0. 08〇
[0022] 其中,酶制劑為I. 19g纖維素酶、2. 38g果膠酶、I. 19g蝸牛酶、0. 24g植酸酶的混 合。
[0023] 實(shí)施例5 提取方法包括以下步驟: ① 藥材預(yù)處理:將紫錐菊地上部分粉碎過60目篩;加入脫脂溶劑,脫脂后,將脫脂溶劑 于60°C條件下?lián)]干,處理后的藥材備用; ② 提?。悍Q取①處理得到的藥材l〇〇g,加入1500g水,調(diào)pH為3,預(yù)熱至60°C后,加入 藥材5g酶制劑,酶解時(shí)間60min,80°C滅酶10min,在80°C繼續(xù)攪拌保溫Ih; ③ 濃縮:離心,將上清液旋蒸減壓濃縮至生藥量1 :1的濃縮液; ④ 醇沉:向濃縮液中加入3倍的無水乙醇,4°C條件下靜置24小時(shí); ⑤ 洗滌:將④得到的醇沉液抽濾,得到的沉淀物依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌; ⑥干燥:將沉淀物用2倍量的水復(fù)溶,在150°C的條件下噴霧干燥得到紫錐菊多糖。
[0024] 其中,脫脂溶劑為石油醚、1,2_環(huán)氧丙烷、乙醚的混合,其質(zhì)量份數(shù)比為: 1:0. 05:0. 02。
[0025] 其中,酶制劑為I. 52g纖維素酶、3. 03g果膠酶、0. 3g蝸牛酶、0. 15g植酸酶的混合。
[0026] 實(shí)施例6 提取方法包括以下步驟: ① 藥材預(yù)處理:將紫錐菊地上部分粉碎過60目篩;加入脫脂溶劑,脫脂后,將脫脂溶劑 于60°C條件下?lián)]干,處理后的藥材備用; ② 提取:稱?、偬幚淼玫降乃幉膌〇〇g,加入1500g水,調(diào)pH為3,預(yù)熱至60°C后,加入 藥材5g酶制劑,酶解時(shí)間60min,80°C滅酶lOmin,在80°C繼續(xù)攪拌保溫Ih; ③ 濃縮:離心,將上清液旋蒸減壓濃縮至生藥量1 :1的濃縮液; ④ 醇沉:向濃縮液中加入3倍的無水乙醇,4°C條件下靜置24小時(shí); ⑤ 洗滌:將④得到的醇沉液抽濾,得到的沉淀物依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌; ⑥ 干燥:將沉淀物用2倍量的水復(fù)溶,在150°C的條件下噴霧干燥得到紫錐菊多糖。
[0027] 其中,所述脫脂溶劑為石油醚、1,2-環(huán)氧丙烷、乙醚的混合,其質(zhì)量份數(shù)比為:2: 0? 1: 0? 08〇
[0028] 其中,酶制劑為I. 39g纖維素酶、2. 78g果膠酶、0. 7g蝸牛酶、0. 13g植酸酶的混合。
[0029