反柄紫芝萜類(lèi)化合物及其藥物組合物與在制藥和食品中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)和食品領(lǐng)域，具體地涉及反柄紫芝中的萜類(lèi)化合物及其藥物 組合物，以及其在制備治療腎臟纖維化的藥物或保健食品中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】：
[0002] 腎臟纖維化是慢性腎病進(jìn)展到腎臟衰竭（尿毒癥）的必經(jīng)階段。腎臟纖維化典型 的病理特征是細(xì)胞外基的分泌增加而降解減少，致使細(xì)胞外基質(zhì)積聚，因此減少細(xì)胞外基 質(zhì)是干預(yù)纖維化的重要思路之一。細(xì)胞外基質(zhì)種類(lèi)較多，其中纖粘連蛋白（fibronectin) 是其主要成分之一。因此，觀察化合物對(duì)TGF-β 1誘導(dǎo)的人腎小管上皮細(xì)胞分泌纖粘連蛋 白的抑制作用可以反映化合物的抗腎臟纖維化效果，這已經(jīng)成為業(yè)界共識(shí)，但目前關(guān)于這 方面的小分子藥物還比較缺乏。
[0003] 反柄紫芝（Ganoderma cochlear)與紫芝具有類(lèi)似功效，在民間被廣泛應(yīng)用。本發(fā) 明發(fā)現(xiàn)其含有抗腎臟纖維化活性物質(zhì)，而現(xiàn)有技術(shù)中未見(jiàn)有本發(fā)明涉及的化合物及其抗腎 臟纖維化的相關(guān)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0004] 本發(fā)明的目的在于提供具有抗腎臟纖維化價(jià)值的化合物cochlearoids A-D (1-4) 及cochlearine B(5)及其該發(fā)明的化合物在制備抗腎臟纖維化的藥物中的應(yīng)用，以及以該 化合物為有效成分的藥物組合物。
[0005] 本發(fā)明的上述目的是由下述的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0006] 具有下述結(jié)構(gòu)式的 cochlearoids A-D (1-4)及 cochlearine B (5):
[0007]
[0008] 制備所述的化合物1-5的方法，取反柄紫芝（Ganoderma cochlear)子實(shí)體100kg， 粉碎后用70%的乙醇室溫提?。?X300LX48h)，合并提取液并減壓回收溶劑得粗提取物， 將粗提取物混懸于適量水中，然后用等體積乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，減壓濃縮得乙 酸乙酯萃取物（2kg)。經(jīng)硅膠色譜柱進(jìn)行分離，以氯仿：甲醇（100:1-1:1)梯度洗脫，每 種溶劑梯度為1. 5倍柱體積，按照每份2000mL收集得7個(gè)合并組份；組份6 (160g)經(jīng)MCI gel CHP 20P柱層析（MeOH :H20, 60% -100% )，TLC檢測(cè)合并斑點(diǎn)相同組分得12個(gè)組份 (組份6. 1-6. 12)。組份6. 10 (18g)經(jīng)S印hadex LH-20 (MeOH)分離得到5個(gè)組份（組份 6. 5. 1-6. 5. 5)。其中組份6. 5. 3(100mg)經(jīng)半制備液相色譜儀（Me0H:H20,66:34)分離得 到消旋的化合物5(6. 8mg)。組份6. 11 (40g)經(jīng)硅膠色譜柱進(jìn)行分離，以（石油醚：丙酮， 30:1 - 1:1)梯度洗脫，收集得7個(gè)合并組份（組份6. 11. 1-6. 11.7);其中組份6. 11. 5(3g) 經(jīng)S印hadex LH-20 (MeOH)分離得到5個(gè)組份；其中組份6. 11. 5. 4 (300mg)經(jīng)半制備液相 色譜儀（acetonitrile:H20,88:12)分離得到消旋的化合物 I (3. lmg)、2(L 2mg)、3(L 8mg)、 4(2. Omg)和5(1. Img)?；衔?-4經(jīng)IC柱，化合物5經(jīng)AD-H柱手性拆分為它們的對(duì) 映體。化合物1_5手性拆分的流動(dòng)相條件分別為n-hexane/ethanol (90:10)，n-hexane/ ethanol, (92:8)，n-hexane/ethanol (90:10)，n-hexane/ethanol (84:16)，n-hexane/ ethanol (70:30)。（Table 1)，流速均為 lmL/min。
[0009] 治療腎臟纖維化的藥物組合物，含有治療有效量的上述化合物和藥學(xué)上可接受的 載體。
[0010] 上述化合物在制備治療腎臟纖維化藥物中的應(yīng)用。
[0011] 上述化合物在制備保健食品中的應(yīng)用。
[0012] 本發(fā)明化合物可以單獨(dú)直接應(yīng)用或組合應(yīng)用，也可以與其它藥物包括植物提取物 組成復(fù)方的形式使用，可以使用不同的藥用輔料，制成多種固體制劑和液體制劑。將本發(fā)明 的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明的藥物可經(jīng)口服和注射兩種形式給 藥。使用量可根據(jù)給藥途徑、患者的年齡、體重、所治療疾病的類(lèi)型和嚴(yán)重程度等變化進(jìn)行 一次或多次使用。
【附圖說(shuō)明】：
[0013] 圖1表示化合物抑制TGF-β 1誘導(dǎo)的人腎小管上皮細(xì)胞分泌纖粘蛋白。圖中 #ρ〈0· 01，TGF-β 1 組 versus Control 組；*ρ〈0· 05, **ρ〈0· 01，加藥組 versus TGF-β 1 組； 抑制率％ =(造模組纖粘連蛋白含量-藥物組纖粘連蛋白含量/造模組纖粘連蛋白含 量-對(duì)照組纖粘連蛋白含量）X 100 %。
[0014] 圖2化合物1-5結(jié)構(gòu)式。
【具體實(shí)施方式】：
[0015] 下面結(jié)合附圖，用本發(fā)明的實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性?xún)?nèi)容，但并不以 此來(lái)限定本發(fā)明。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的簡(jiǎn)單改進(jìn)都屬于本發(fā)明的范圍。
[0016] 實(shí)施例1 :
[0017] 化合物1 - 5的分離純化：
[0018] 取反柄紫芝（Ganoderma cochlear)子實(shí)體100kg，粉碎后用70 %的乙醇室溫提 ?。? X 300L X 48h)，合并提取液并減壓回收溶劑得粗提取物，將粗提取物混懸于適量水中， 然后用等體積乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，減壓濃縮得乙酸乙酯萃取物（2kg)。經(jīng)硅 膠色譜柱進(jìn)行分離，以氯仿：甲醇（100:1 - 1:1)梯度洗脫，每種溶劑梯度為1. 5倍柱體積， 按照每份2000mL收集得7個(gè)合并組份；組份6 (160g)經(jīng)MCI gel CHP 20P柱層析（MeOH : H2O, 60 % -100 % )，TLC檢測(cè)合并斑點(diǎn)相同組分得12個(gè)組份（組份6. 1-6. 12)。組份 6. 10 (18g)經(jīng)S印hadex LH-20 (MeOH)分離得到5個(gè)組份（組份6. 5. 1-6. 5. 5)。其中組份 6. 5. 3(100mg)經(jīng)半制備液相色譜儀（Me0H:H20,66:34)分離得到消旋的化合物5(6.8mg)。 組份6. ll(40g)經(jīng)硅膠色譜柱進(jìn)行分離，以（石油醚：丙酮，30:1-1:1)梯度洗脫，收集 得7個(gè)合并組份（組份6. IL 1-6. IL 7);其中組份6. IL 5 (3g)經(jīng)S印hadex LH-20 (MeOH) 分離得到5個(gè)組份；其中組份6. 11. 5. 4(300mg)經(jīng)半制備液相色譜儀（acetonitrile:H20， 88:12)分離得到消旋的化合物 I (3. lmg)、2(L 2mg)、3(L 8mg)、4(2· Omg)和 5(1. Img)?；?合物1-4經(jīng)IC柱，化合物5經(jīng)AD-H柱手性拆分為它們的對(duì)映體?；衔?-5手性拆分 的流動(dòng)相條件分別為 n-hexane/ethanol (90:10)，n-hexane/ethanol, (92:8)，n-hexane/ ethanol (90:10)，n-hexane/ethanol (84:16)，n-hexane/ethanol (70:30)。（Tablel)，流速 均為 1mT,/mi η η
[0019] 化合物I - 5的結(jié)構(gòu)確證：
[0020] 化合物1 - 5的結(jié)構(gòu)式如下所示：
[0021]
[0022] 化合物I - 5的結(jié)構(gòu)鑒定：
[0023] 表1.化合物I - 51 NMR數(shù)據(jù)
[0024]
[0025]

[0026] 表2.化合物1-5 13C NMR數(shù)據(jù)
[0027]
[0028] Cochlearoid A(I) !yellowish gum；{[a]D23+35.2(c 0.16,Me0H)； CD (MeOH) Δ ε213+3·33，Δ ε 239+7. 85，Δ e 282 - 2 . 58 ;(+)_cochlearoid A} ;{[a]D20 - 44. 5 (cO. 15, MeOH) ；CD (MeOH) Δ ε 213 - 7. 77, Δ ε 239 - 7. 18 ； ( - ) -cochlearoid A} ；UV (MeOH) Amax(l〇g ε ) 337 (3. 91), 204(4. 70)nm ；EIMS m/z 656 [M]+；HREIMS m/z 656. 3347[M] + (calcd for (6^!14808,656.3349).? and 13C NMR data，see Tables I and 2.
[0029] Cochlearoid B (2) : yellowish gum ； {[ a ]D24+99 . 0 (c 0.1 OjMeOH) ；CD (MeOH) Δ ε 213+7. 〇，Λ ε 239+18. 25，Δ ε 278 - 4. 53，Δ ε 325+3. 43 ; (+) -cochlearoid B} ; {[ a ]D24 _98. 4 (c 0· 17, MeOH) ;CD (MeOH) Δ ε 213 - 5. 82，Δ ε 239 - 11. 76，Δ ε 278+2 . 91，Δ ε 325 - 2. 33 ; (-)-cochlearoid B} ；UV (MeOH) Amax(l〇g ε ) 339 (3. 86), 203 (4. 61)nm ；ESIMS m/z 597[M-H]'；HREIMS m/z 598. 3306[M] +(calcd for C38H46O6, 598. 3294) ?'Η and 13C NMR data, see Tables land 2.
[0030] Cochlearoid C (3) : yellowish gum ； {[ a ]D23+84. 6 (c 0. 13, MeOH) ；CD (MeOH) Δ ε 213+3. 97，Δ ε