圖中該 雜質(zhì)主峰與頭孢替坦二鈉樣品溶液中目標(biāo)雜質(zhì)峰重合，且峰面積明顯增大，證明獲得的雜 質(zhì)樣品即為頭孢替坦二鈉樣品中的雜質(zhì)。
[0034] 2、質(zhì)譜解析
[0035] 測試方法：ESI正離子檢測；掃描范圍：100~1000。
[0036] 取上述獲得的雜質(zhì)樣品適量，用水溶解，直接注入質(zhì)譜檢測器。由雜質(zhì)一級質(zhì)譜圖 (圖1)可知，其分子離子峰[M+H]+應(yīng)為592,則m/z 614為[M+Na] +，m/z 630為[M+K]+，即 該雜質(zhì)的分子量為591，比頭孢替坦酸分子量多了 16,初步推斷為頭孢替坦的加氧化合物。 并結(jié)合合成路線可能產(chǎn)生的雜質(zhì)推斷和相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，確定該雜質(zhì)為頭孢替坦氧化物，即 頭孢替坦亞砜。
[0037] 為進(jìn)一步確證該雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)，將雜質(zhì)進(jìn)行二級質(zhì)譜測定。為與文獻(xiàn)報(bào)道的頭孢替 坦的碎片離子進(jìn)行對比，選用ESI負(fù)模式進(jìn)行測定，二級質(zhì)譜圖如圖2所示。
[0038] 通過二級質(zhì)譜將各碎片峰進(jìn)行歸屬，確定頭孢替坦亞砜在負(fù)離子模式下的質(zhì)譜裂 解途徑如下。
[0039]
[0040] 小結(jié)：上述研宄表明，該雜質(zhì)經(jīng)二級質(zhì)譜的碎片解析歸屬，特別是m/z 473. 7, m/z 441. 8, m/z 275. 6等碎片離子的存在，較充分的證明了其結(jié)構(gòu)為頭孢替坦亞砜。
[0041] 3、核磁共振氫譜（1H-NMR)
[0042] 為進(jìn)一步驗(yàn)證該雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)，用上述得到的該雜質(zhì)單體測定1H-NMR。
[0043] 儀器型號：Braker DR X 300型核磁共振儀；
[0044] 測試條件：溶劑DMSO ;
[0045] 測試結(jié)果如下：
[0046]
[0047] 表1雜質(zhì)核磁共振?-NMR數(shù)據(jù)列表
[0048]
[0049] 氫譜解析：
[0050] (1)結(jié)構(gòu)中有二個(gè)甲基，即氮甲基和甲氧基，單峰。
[0051] (2)結(jié)構(gòu)中的4位和17位的二個(gè)亞甲基均表現(xiàn)為不等價(jià)，亦顯示為AB型。
[0052] (3)結(jié)構(gòu)中有二個(gè)次甲基，10位質(zhì)子和β -內(nèi)酰胺6位質(zhì)子均顯示單峰。以重水 為溶劑，活潑氫未觀測到。
[0053] 小結(jié)：MS -級譜給出了雜質(zhì)準(zhǔn)確的分子量信息；MS二級譜給出了雜質(zhì)在負(fù)離子模 式下主要的碎片離子峰，通過對裂解途徑的分析，m/z 473. 7，m/z 441.8，m/z 275. 6，m/z 239. 2, m/z 216. 0等碎片離子的存在，與頭孢替坦亞砜的主要骨架片段相符；IH-NMR譜給 出的質(zhì)子信息與其結(jié)構(gòu)信息基本相符；與頭孢替坦二鈉的IH-NMR譜比較4位氫的化學(xué)位移 (4-Ha 3. 25 - 3. 65、4-Hb 3. 58 - 3. 76)向低場移動(dòng)，說明其鄰位連接有較強(qiáng)的吸電子基 團(tuán)。綜上所述，可確證樣品中的雜質(zhì)為頭孢替坦亞砜?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)如下：
[0054]
[0055] 雜質(zhì)：頭孢替坦亞砜。
[0056] 盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言，可以 理解在不脫離本發(fā)明的原理和精神的情況下可以對這些實(shí)施例進(jìn)行多種變化、修改、替換 和變型，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求及其等同物限定。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種頭孢替坦二鈉中雜質(zhì)的制備與結(jié)構(gòu)確證方法，其特征在于：所述方法的具體步 驟如下： (1) 取頭孢替坦二鈉樣品，以水溶解，配制為1. 〇g/ml雜質(zhì)制備供試液，加入高效液相 色譜儀，進(jìn)樣量100U1，流速3.Oml/min，檢測波長254nm，柱溫30°C，在該色譜條件下，雜質(zhì) 約在7分鐘出峰，頭孢替坦二鈉約20分鐘出峰，雜質(zhì)經(jīng)紫外檢測器檢測出峰后，在峰頂位置 開始柱后收集餾分，富集樣品； (2) 取收集的餾分，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮，取該濃縮液經(jīng)HPLC檢測，餾分的出峰時(shí)間 約5. 6分鐘，與樣品中雜質(zhì)的出峰時(shí)間一致，即獲得的餾分為目標(biāo)物質(zhì)； (3) 經(jīng)過反復(fù)的富集，得到的制備濃縮液先經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀去除有機(jī)溶劑，將剩余溶液經(jīng) 凍干處理，得到的凍干粉末以五氧化二磷減壓干燥，得雜質(zhì)單體； (4) 將步驟（3)得到的雜質(zhì)單體進(jìn)行質(zhì)譜解析，將雜質(zhì)樣品用水溶解，直接注入質(zhì)譜檢 測器，由雜質(zhì)一級質(zhì)譜圖可知，其分子離子峰[M+H] +應(yīng)為592,則m/z614為[M+Na]+，m/z 630為[M+K]+，即該雜質(zhì)的分子量為591，比頭孢替坦酸分子量多了 16,初步推斷為頭孢替 坦的加氧化合物，并結(jié)合合成路線可能產(chǎn)生的雜質(zhì)推斷和相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，確定該雜質(zhì)為頭 孢替坦氧化物，即頭孢替坦亞砜； 將雜質(zhì)進(jìn)行二級質(zhì)譜測定，為與文獻(xiàn)報(bào)道的頭孢替坦的碎片離子進(jìn)行對比，選用ESI負(fù)模式進(jìn)行測定，該雜質(zhì)經(jīng)二級質(zhì)譜的碎片解析歸屬，特別是m/z473.7,m/z441.8,m/z 275. 6碎片離子的存在，較充分的證明了其結(jié)構(gòu)為頭孢替坦亞砜。2. 如權(quán)利要求1所述的頭孢替坦二鈉中雜質(zhì)的制備與結(jié)構(gòu)確證方法，其特征在于：所 制備的頭孢替坦二鈉中雜質(zhì)為頭孢替坦亞砜，化學(xué)結(jié)構(gòu)為3. 如權(quán)利要求1所述的頭孢替坦二鈉中雜質(zhì)的制備與結(jié)構(gòu)確證方法，其特征在 于：步驟（1)中，色譜條件流動(dòng)相為0. 1 %三氟乙酸水溶液-甲醇-乙腈，三者體積比為 70-90:5-15:5-15。4. 如權(quán)利要求1所述的頭孢替坦二鈉中雜質(zhì)的制備與結(jié)構(gòu)確證方法，其特征在于：步 驟（2)中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮溫度為5°C-40°C，時(shí)間為3-6小時(shí)。5. 如權(quán)利要求1所述的頭孢替坦二鈉中雜質(zhì)的制備與結(jié)構(gòu)確證方法，其特征在于：步 驟（3)中，凍干處理中，凍干時(shí)間為24小時(shí)。6. 如權(quán)利要求1所述的頭孢替坦二鈉中雜質(zhì)的制備與結(jié)構(gòu)確證方法，其特征在于：步 驟（3)中，五氧化二磷減壓干燥時(shí)間為48小時(shí)。7. 如權(quán)利要求1所述的頭孢替坦二鈉中雜質(zhì)的制備與結(jié)構(gòu)確證方法，其特征在于：步 驟⑶中，質(zhì)譜解析中采用ESI正離子檢測；掃描范圍：100~1000。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種頭孢替坦二鈉中雜質(zhì)的制備與結(jié)構(gòu)確證方法，屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域，原有文獻(xiàn)報(bào)道，采用HPLC-MS方法對樣品中的雜質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)推導(dǎo)，但針對較小含量的雜質(zhì)，液質(zhì)聯(lián)用很難獲得滿意結(jié)果，也未見有該雜質(zhì)的文獻(xiàn)和專利報(bào)道。本發(fā)明針對以上問題，采用制備柱分離，富集目標(biāo)雜質(zhì)，并進(jìn)一步分離純化，最終獲得雜質(zhì)單體，進(jìn)行確證得出該雜質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)，方法簡單，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于頭孢類樣品的雜質(zhì)分析控制。
【IPC分類】C07D501/12, C07D501/57
【公開號】CN104910192
【申請?zhí)枴緾N201510245193
【發(fā)明人】王宇馳, 唐克慧, 孫樣, 曹勝華, 張春然, 張靜霞, 李強(qiáng), 趙經(jīng)緯, 徐明琴, 李喆宇, 楊晨, 李成龍, 鄧思思
【申請人】中國醫(yī)藥集團(tuán)總公司四川抗菌素工業(yè)研究所
【公開日】2015年9月16日
【申請日】2015年5月13日