一種頭孢替坦二鈉中雜質(zhì)的制備與結(jié)構(gòu)確證方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物分析技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種頭孢替坦二鈉中雜質(zhì)的制備與結(jié)構(gòu) 確證方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 頭孢替坦二鈉化學(xué)名稱：(6R，7S)-7-[4-(2-氨基-1-羧基-2-氧代亞乙 基）-1，3-二硫雜環(huán)丁烷-2-甲酰氨基]-7-甲氧基-3-[l-甲基-IH-四氮唑-5-硫甲 基] _8_氧代_5_硫雜-1-氣雜二環(huán)[4. 2. 0]辛_2_條_2_幾酸二納鹽。
[0003] 化學(xué)結(jié)構(gòu)式：
[0004] 〇
[0005] 頭孢替坦二鈉 （Cefotetan Disodium)為注射用第二代頭孢菌素類抗生素，具有第 三代頭孢菌類藥物抗菌譜廣的特性，于1993年在日本首先上市銷售，美國阿斯利康公司的 同名產(chǎn)品于2003年被FDA批準在美國上市，我國尚未進口該品。按照我國的藥品注冊管理 辦法化學(xué)藥品注冊分類的規(guī)定，頭孢替坦二鈉的研制屬于三類新藥的開發(fā)。目前，僅查見美 國藥典收載該品種，但無有關(guān)物質(zhì)檢查項，也未列出雜質(zhì)；日本藥典收載了頭孢替坦，其已 知雜質(zhì)中未列本發(fā)明的化合物，也未見其他文獻對該雜質(zhì)的制備與確證報道。
[0006] 頭孢替坦二鈉收載標準中，無該雜質(zhì)的制備與結(jié)構(gòu)報道，《LC/MS法分析頭孢替坦 二鈉原料中的雜質(zhì)》中報道采用HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)分析頭孢替坦二鈉原料中存在的雜質(zhì)，對 其中的4個雜質(zhì)進行了快速鑒定，但未實現(xiàn)對本發(fā)明的雜質(zhì)的制備與結(jié)構(gòu)確認方法。
[0007] 頭孢替坦二鈉為注射用原料，其含有的雜質(zhì)，將影響產(chǎn)品使用的安全性，特別是頭 孢類藥物的臨床副反應(yīng)較多，更應(yīng)對樣品中的雜質(zhì)進行徹底研宄，嚴格限制?，F(xiàn)有方法和文 獻對其中的有些雜質(zhì)進行了歸屬，但仍有一個較大雜質(zhì)屬未知雜質(zhì)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明提供了 一種頭孢替坦二鈉中雜質(zhì)的制備與結(jié)構(gòu)確證方法，本發(fā)明對該未知 雜質(zhì)進行了分離制備，獲得了雜質(zhì)單體，進行了結(jié)構(gòu)確證，以此基礎(chǔ)制訂了嚴格的雜質(zhì)限 度，為本藥品的安全使用提供了理論依據(jù)。
[0009] 本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0010] 本發(fā)明的頭孢替坦二鈉中雜質(zhì)的制備與結(jié)構(gòu)確證方法的具體步驟如下：
[0011] (1)取頭孢替坦二鈉樣品，以水溶解，配制為I. 〇g/ml雜質(zhì)制備供試液，加入高效 液相色譜儀，進樣量100 μ 1，流速3. Oml/min，檢測波長254nm，柱溫30°C，在該色譜條件下， 雜質(zhì)約在7分鐘出峰，頭孢替坦二鈉約20分鐘出峰，雜質(zhì)經(jīng)紫外檢測器檢測出峰后，在峰頂 位置開始柱后收集餾分，富集樣品；
[0012] (2)取收集的餾分，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮，取該濃縮液經(jīng)HPLC檢測，餾分的出峰 時間約5. 6分鐘，與樣品中雜質(zhì)的出峰時間一致，即獲得的餾分為目標物質(zhì)；
[0013] (3)經(jīng)過反復(fù)的富集，得到的制備濃縮液先經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀去除有機溶劑，將剩余溶 液經(jīng)凍干處理，得到的凍干粉末以五氧化二磷減壓干燥，得雜質(zhì)單體；
[0014] (4)將步驟⑶得到的雜質(zhì)單體進行質(zhì)譜解析，將雜質(zhì)樣品用水溶解，直接注入質(zhì) 譜檢測器，由雜質(zhì)一級質(zhì)譜圖可知，其分子離子峰[M+H] +應(yīng)為592,則m/z 614為[M+Na]+， m/z 630為[M+K]+，即該雜質(zhì)的分子量為591，比頭孢替坦酸分子量多了 16,初步推斷為頭 孢替坦的加氧化合物，并結(jié)合合成路線可能產(chǎn)生的雜質(zhì)推斷和相關(guān)文獻報道，確定該雜質(zhì) 為頭孢替坦氧化物，即頭孢替坦亞砜。
[0015] 將雜質(zhì)進行二級質(zhì)譜測定，為與文獻報道的頭孢替坦的碎片離子進行對比，選用 ESI負模式進行測定，該雜質(zhì)經(jīng)二級質(zhì)譜的碎片解析歸屬，特別是m/z 473. 7, m/z 441.8， m/z 275. 6碎片離子的存在，較充分的證明了其結(jié)構(gòu)為頭孢替坦亞砜。
[0016] 本發(fā)明所制備的頭孢替坦二鈉中雜質(zhì)為頭孢替坦亞砜，化學(xué)結(jié)構(gòu)為
[0017]
[0018] 步驟（1)中，色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的半制備柱 (IOmmX250mm，10 μm)，以0· 1 %三氟乙酸水溶液-甲醇-乙腈為流動相，三者體積比為 70-90:5-15:5-15,優(yōu)選比例為 80:10:10。
[0019] 步驟（2)中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮溫度為5°C -40°C，優(yōu)選溫度為15°C，時間為3-6 小時，優(yōu)選4小時。
[0020] 步驟（3)中，凍干處理中，凍干時間為24小時。
[0021] 步驟（3)中，五氧化二磷減壓干燥時間為48小時。
[0022] 步驟⑶中，質(zhì)譜解析中采用ESI正離子檢測；掃描范圍：100~1000。
[0023] 相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的積極效果如下：
[0024] 原有文獻報道，采用HPLC-MS方法對樣品中的雜質(zhì)進行結(jié)構(gòu)推導(dǎo)，但針對較小含 量的雜質(zhì)，液質(zhì)聯(lián)用很難獲得滿意結(jié)果，也未見有該雜質(zhì)的文獻和專利報道。本發(fā)明針對以 上問題，采用制備柱分離，富集目標雜質(zhì)，并進一步分離純化，最終獲得雜質(zhì)單體，進行確證 得出該雜質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)，方法簡單，結(jié)果準確，可用于頭孢類樣品的雜質(zhì)分析控制。
【附圖說明】
[0025] 圖1是雜質(zhì)一級質(zhì)譜圖。
[0026] 圖2是雜質(zhì)二級質(zhì)譜圖。
【具體實施方式】
[0027] 下面的實施例是對本發(fā)明的進一步詳細描述。
[0028] 實施例1
[0029] 1、雜質(zhì)的制備
[0030] 色譜條件如下：Agilent 1200 高效液相色譜儀，Unitary C18IOOA(10_X250_， IOym)半制備柱，以0.1%三氟乙酸水溶液-甲醇-乙腈（80 : 10 : 10)為流動相，取樣 品適量，以水溶解，配制為I. 〇g/ml雜質(zhì)制備供試液，進樣量100 μ 1，流速3. Oml/min，檢測 波長254nm，柱溫30°C。在該色譜條件下，雜質(zhì)約在7分鐘出峰，頭孢替坦二鈉約20分鐘出 峰，雜質(zhì)經(jīng)紫外檢測器檢測出峰后，在峰頂位置開始柱后收集餾分，富集樣品。
[0031] 取收集的餾分，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮（15°C )約4小時，取該濃縮液經(jīng)HPLC檢 測，餾分的出峰時間約5. 6分鐘，與樣品中雜質(zhì)的出峰時間一致，即獲得的餾分為目標物 質(zhì)。
[0032] 經(jīng)過反復(fù)的富集，得到的制備濃縮液先經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀去除有機溶劑，將剩余溶液 經(jīng)凍干處理（凍干時間為24小時），得到的凍干粉末以五氧化二磷減壓干燥約48小時，得 雜質(zhì)單體。
[0033] 取該雜質(zhì)單體適量，以稀釋劑配制為0. 5mg/ml的溶液，按頭孢替坦二鈉有關(guān)物質(zhì) 檢查方法測定，以面積歸一化法計算主峰的純度為98. 2%。為進一步驗證該樣品即為目標 雜質(zhì)，將供試液添加到頭孢替坦二鈉樣品溶液中作為混合溶液進行HPLC測定，色譜