良的限氮M9培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基含有0. 5% (分別為v/ V 和w/v)的脂肪酸或植物油、12. 8gI^1Na2HPO4JH2OjOgLlHfOpO.SgL1NH4CKO-Sg L4NaCl以及由2.OmlI.OMMgSO4. 7H20儲備液和Iml0.IMCaCl2儲備液組成的微量元素； (iv) 在好氧條件下將所述細(xì)胞在所述改良的限氮M9培養(yǎng)基中進(jìn)一步培養(yǎng)72小時； (V)收獲所述細(xì)胞并用氯仿從所述細(xì)胞中提取PHA;以及 (vi)通過使PHA/氯仿在冷凍甲醇中反復(fù)沉淀的工序來獲得純的聚合中等鏈長聚3-羥 基鏈燒酸醋。
2. -種生產(chǎn)寡聚中等鏈長聚3-羥基鏈烷酸酯的方法，其包括： (i) 將惡臭假單胞菌PGAl在8.OgI71營養(yǎng)肉湯即一種營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基中孵育20小 時以產(chǎn)生高濃度的惡臭假單胞菌PGAl細(xì)胞； (ii) 通過離心工序來收獲所述細(xì)胞； (iii) 將所述細(xì)胞轉(zhuǎn)移至改良的限氮M9培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基含有0. 5% (分別為v/ V 和w/v)的脂肪酸或植物油、12. 8gI^1Na2HPO4JH2OjOgLlHfOpO.SgL1NH4CKO-Sg L4NaCl以及由2.OmlI.OMMgSO4. 7H20儲備液和Iml0.IMCaCl2儲備液組成的微量元素； (iv) 在好氧條件下將所述細(xì)胞在所述改良的限氮M9培養(yǎng)基中進(jìn)一步培養(yǎng)72小時； (V)然后在細(xì)菌培養(yǎng)之后通過在4°C下以8000rpm離心30分鐘來無菌收獲所述細(xì)菌細(xì) 胞并用氯仿從所述細(xì)胞中提取PHA; (vi) 通過使PHA/氯仿在冷凍甲醇中反復(fù)沉淀的工序來獲得純的聚合中等鏈長聚3-羥 基鏈燒酸醋； (vii) 將所述純的聚合中等鏈長聚3-羥基鏈烷酸酯在真空中干燥24小時； (viii) 將經(jīng)干燥的所述純的聚合中等鏈長聚3-羥基鏈烷酸酯從環(huán)境溫度加熱到 170°C并維持該等溫條件30分鐘；以及 (ix) 通過將經(jīng)熱處理的所述中等鏈長聚3-羥基鏈烷酸酯溶解于少量氯仿中，隨后在 室溫下在通風(fēng)櫥中使溶劑完全蒸發(fā)來收集所述寡聚中等鏈長聚3-羥基鏈烷酸酯。
3. -種生產(chǎn)聚合中等鏈長聚3-羥基鏈烷酸酯的方法，其包括： (i) 將惡臭假單胞菌PGAl在8.OgI71營養(yǎng)肉湯即一種營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基中孵育20小 時以產(chǎn)生高濃度的惡臭假單胞菌PGAl細(xì)胞； (ii) 然后在細(xì)菌培養(yǎng)之后通過在4°C下以8000rpm離心30分鐘來無菌收獲所述細(xì)菌 細(xì)胞； (iii) 將所述細(xì)胞轉(zhuǎn)移至改良的限氮M9培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基含有0. 5% (分別為v/ V 和w/v)的油酸（OA)或皂化棕櫚仁油（SPKO)、12. 8gI^1Na2HPO4. 7H20、3.OgI^1KH2PCVO. 5g I^1NH4CKO. 5gL-1NaCl以及由 2.OmlI.OMMgSO4. 7H20 儲備液和Iml0?IMCaClJiI備液組 成的微量元素； (iv) 在好氧條件下將所述細(xì)胞在所述改良的限氮M9培養(yǎng)基中進(jìn)一步培養(yǎng)72小時； (V)收獲所述細(xì)胞并用氯仿從所述細(xì)胞中提取PHA;以及 (vi)通過使PHA/氯仿在冷凍甲醇中反復(fù)沉淀的工序來獲得純的聚合中等鏈長聚3-羥 基鏈燒酸醋。
4. 一種生產(chǎn)寡聚中等鏈長聚3-羥基鏈烷酸酯的方法，其包括： (i) 將惡臭假單胞菌PGAl在8.OgI71營養(yǎng)肉湯即一種營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基中孵育20小 時以產(chǎn)生高濃度的惡臭假單胞菌PGAl細(xì)胞； (ii) 通過離心工序來收獲所述細(xì)胞； (iii) 將所述細(xì)胞轉(zhuǎn)移至改良的限氮M9培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基含有0. 5% (分別為v/v 和w/v)的油酸或皂化棕櫚仁油、12. 8gT1Na2HPO4JH2OjOgLlHfCVOigL1NH4CKO-Sg L4NaCl以及由2.OmlI.OMMgSO4. 7H20儲備液和Iml0.IMCaCl2儲備液組成的微量元素； (iv) 在好氧條件下將所述細(xì)胞在所述改良的限氮M9培養(yǎng)基中進(jìn)一步培養(yǎng)72小時； (V)然后在細(xì)菌培養(yǎng)之后通過在4°C下以8000rpm離心30分鐘來無菌收獲所述細(xì)菌細(xì) 胞并用氯仿從所述細(xì)胞中提取PHA; (vi) 通過使PHA/氯仿在冷凍甲醇中反復(fù)沉淀的工序來獲得純的聚合中等鏈長聚3-羥 基鏈燒酸醋； (vii) 將所述純的聚合中等鏈長聚3-羥基鏈烷酸酯在真空中干燥24小時； (viii) 將經(jīng)干燥的所述純的聚合中等鏈長聚3-羥基鏈烷酸酯從環(huán)境溫度加熱到 170°C并維持該等溫條件30分鐘；以及 (ix) 通過將經(jīng)熱處理的所述中等鏈長聚3-羥基鏈烷酸酯溶解于少量氯仿中，隨后在 室溫下在通風(fēng)櫥中使溶劑完全蒸發(fā)來收集所述寡聚中等鏈長聚3-羥基鏈烷酸酯。
5. -種聚合中等鏈長聚3-羥基鏈烷酸酯作為基于天然的環(huán)保聚氯乙烯增塑劑的用 途。
6. 如權(quán)利要求5所述的聚合中等鏈長聚3-羥基鏈烷酸酯，其中所述聚合中等鏈長聚 3-羥基鏈烷酸酯是使用脂肪酸或植物油作為可再生碳源通過如權(quán)利要求1所述的方法來 產(chǎn)生和/或是使用油酸或皂化棕櫚仁油作為可再生碳源通過如權(quán)利要求3所述的方法來產(chǎn) 生的。
7. 如權(quán)利要求5所述的聚合中等鏈長聚3-羥基鏈烷酸酯，其中在PVC中用作增塑劑的 所述聚合中等鏈長聚3-羥基鏈烷酸酯的使用量為2. 5份至5. 0份/ 一百份PVC。
8. -種寡聚中等鏈長聚3-羥基鏈烷酸酯作為基于天然的環(huán)保PVC增塑劑的用途。
9. 如權(quán)利要求8所述的寡聚中等鏈長聚3-羥基鏈烷酸酯，其中所述寡聚中等鏈長聚 3-羥基鏈烷酸酯是使用脂肪酸或植物油作為可再生碳源通過如權(quán)利要求2所述的方法來 產(chǎn)生和/或是使用油酸或皂化棕櫚仁油作為可再生碳源通過如權(quán)利要求4所述的方法來產(chǎn) 生的。
10. 如權(quán)利要求8所述的寡聚中等鏈長聚3-羥基鏈烷酸酯，其中在PVC中用作增塑劑 的所述寡聚中等鏈長聚3-羥基鏈烷酸酯的使用量為2. 5份至5. 0份/ 一百份PVC。
11. 一種用于增強(qiáng)PVC彈性的基于天然的且環(huán)保的PVC添加劑，其由使用脂肪酸或植物 油作為可再生碳源通過惡臭假單胞菌PGAl經(jīng)由發(fā)酵工序產(chǎn)生的聚合中等鏈長聚3-羥基鏈 烷酸酯組成。
12. 如權(quán)利要求11所述的PVC添加劑，其中用于PVC中的所述聚合中等鏈長聚3-羥基 鏈烷酸酯的使用量為2. 5份至5.O份/ 一百份PVC。
13. -種用于增強(qiáng)PVC彈性的基于天然的且環(huán)保的PVC添加劑，其由使用油酸或皂化棕 櫚仁油作為可再生碳源通過惡臭假單胞菌PGAl經(jīng)由發(fā)酵工序產(chǎn)生的聚合中等鏈長聚3-羥 基鏈烷酸酯組成。
14. 如權(quán)利要求13所述的PVC添加劑，其中用于PVC中的所述聚合中等鏈長聚3-羥基 鏈烷酸酯的使用量為2. 5份至5.O份/ 一百份PVC。
15. -種用于增強(qiáng)PVC彈性的基于天然的且環(huán)保的PVC添加劑，其由使用脂肪酸或植物 油作為可再生碳源通過惡臭假單胞菌PGAl經(jīng)由發(fā)酵工序產(chǎn)生的寡聚中等鏈長聚3-羥基鏈 烷酸酯組成。
16. 如權(quán)利要求15所述的PVC添加劑，其中用于PVC中的所述寡聚中等鏈長聚3-羥基 鏈烷酸酯的使用量為2. 5份至5.O份/ 一百份PVC。
17. -種用于增強(qiáng)PVC彈性的基于天然的且環(huán)保的PVC添加劑，其由使用油酸或皂化棕 櫚仁油作為可再生碳源通過惡臭假單胞菌PGAl經(jīng)由發(fā)酵工序產(chǎn)生的寡聚中等鏈長聚3-羥 基鏈烷酸酯組成。
18. 如權(quán)利要求17所述的PVC添加劑，其中用于PVC中的所述寡聚中等鏈長聚3-羥基 鏈烷酸酯的使用量為2. 5份至5.O份/ 一百份PVC。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用作基于天然的環(huán)保聚氯乙烯(PVC)增塑劑的中等鏈長聚3-羥基鏈烷酸酯(mcl-PHA)。在本發(fā)明中，mcl-PHA是使用油酸和棕櫚仁油作為可再生碳源通過惡臭假單胞菌PGA1經(jīng)由發(fā)酵來生物合成。mcl-PHA是可用于改善PVC的材料特性的綠色天然聚合物的來源。與常規(guī)基于石油化工的增塑劑相比，mcl-PHA因無毒、可生物降解以及生物相容的特性而不會危害人類健康和環(huán)境。
【IPC分類】C12P1-04, C08L27-06, C08L67-00
【公開號】CN104822835
【申請?zhí)枴緾N201380046379
【發(fā)明人】唐·艾琳·柯特·平, 甘·森·尼農(nóng), 安努瓦爾·默罕默德·蘇菲安·賓·默罕默德, 申·梅·陳
【申請人】馬來亞大學(xué)
【公開日】2015年8月5日
【申請日】2013年6月24日
【公告號】WO2014014337A2, WO2014014337A3