Zr標(biāo)記伊匹單抗的標(biāo)記產(chǎn)物及其制備方法、質(zhì)量控制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于放射性標(biāo)記技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及89Zr標(biāo)記伊匹單抗的標(biāo)記產(chǎn)物及其制 備方法、質(zhì)量控制方法
【背景技術(shù)】
[0002] 黑色素瘤是臨床上較為常見的皮膚黏膜和色素膜腫瘤，惡性程度極高，黑色素瘤 晚期患者的中位生存期為7~9個(gè)月，1年內(nèi)的生存率僅為25%。在過去30年，黑色素瘤 發(fā)病率明顯增加，死亡率也在持續(xù)性上升。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO)統(tǒng)計(jì)，每年死于皮膚癌的 患者大約有66000人，其中80%死于黑色素瘤。
[0003]目前，對(duì)于晚期黑色素瘤的治療主要有化學(xué)療法和免疫療法，化學(xué)療法的效果通 常并不理想，非特異性的免疫療法也很少能產(chǎn)生持續(xù)性的療效。2011年3月25日美國抑A 批準(zhǔn)百時(shí)美-施貴寶炬M巧公司推出的伊匹單抗，可用于治療晚期黑色素瘤，其分子式為： C64n_H99n_Nl732_〇2004_S40。
[0004] 伊匹單抗（Ipilimumab)是一種單克隆抗體，能有效阻滯一種叫做細(xì)胞毒性T細(xì)胞 相關(guān)抗原-4 (c}ftotoxic T lymphocyte-associated antigen-4,簡(jiǎn)稱 CTLA-4,又名 CD152) 的分子。CTLA-4是一種白細(xì)胞分化抗原，是T細(xì)胞（胸腺依賴性淋己細(xì)胞）上的一種跨 膜受體，與CD28分子共同享有B7分子配體，即CTLA-4與CD28均可與B7分子結(jié)合，但是， CTLA-4與B7分子結(jié)合后會(huì)誘導(dǎo)T細(xì)胞無反應(yīng)性，是T細(xì)胞活化時(shí)的負(fù)性調(diào)節(jié)蛋白。在正常 情況下，T細(xì)胞的激活依賴于第一信號(hào)（抗原-抗體復(fù)合物的形成）和第二信號(hào)炬7介導(dǎo) 的活化信號(hào)）雙活化。CTLA-4與B7結(jié)合將產(chǎn)生抑制性信號(hào)，并抑制T細(xì)胞活化，而T細(xì)胞 介導(dǎo)的抗腫瘤免疫應(yīng)答可發(fā)揮抗腫瘤作用，因此，CTLA-4會(huì)影響人體的免疫系統(tǒng)，削弱其殺 死癌細(xì)胞的能力。Ipilimumab對(duì)CTLA-4的阻滯作用即是與CTLA-4結(jié)合，進(jìn)而阻礙CTLA-4 與其配體的相互作用，從而增加T細(xì)胞的活化和增殖。因此，Ipilimum油對(duì)于黑色素瘤的 作用是間接的，是通過阻滯CTLA-4與B7分子配體結(jié)合，進(jìn)而保障T細(xì)胞的活化和增殖，最 終實(shí)現(xiàn)抗腫瘤作用。該作用機(jī)制可能是幫助人體免疫系統(tǒng)識(shí)別、瞄準(zhǔn)并攻擊黑色素瘤癌細(xì) 胞的途徑之一。因此，利用Ipilimum油作為顯像劑的載體可能會(huì)具有較好的祀向性，但是， 用正電子核素標(biāo)記Ipilimum油過程中，標(biāo)記產(chǎn)物在體外具有良好的穩(wěn)定性、較高的放射性 化學(xué)純度，可滿足使用需要，用于體內(nèi)顯像時(shí)能夠客觀準(zhǔn)確的反應(yīng)體內(nèi)代謝的情況等，均是 獲得理想的伊匹單抗的標(biāo)記產(chǎn)物需要綜合考慮與解決的難題。
[000引有研究用64化標(biāo)記CTLA-4抗體進(jìn)而制備生物探針用于腫瘤探測(cè)，但是由于 64化半 衰期為12h，與抗體在血液中的半衰期不相符，導(dǎo)致陽T顯像不能真實(shí)反映腫瘤攝取抗體的 量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明所要解決的第一個(gè)技術(shù)問題是現(xiàn)有技術(shù)中的采用1中\(zhòng)64化正電子核素標(biāo)記 抗體W探測(cè)黑色素瘤的探針與抗體在血液中的半衰期不相符、陽T顯像結(jié)果不夠客觀的問 題，進(jìn)而提供一種與抗體在血液中的半衰期相符、PET顯像結(jié)果較為客觀的正電子核素89Zr 標(biāo)記伊匹單抗的標(biāo)記產(chǎn)物。
[0007] 本發(fā)明解決的第二個(gè)技術(shù)問題是采用正電子核素標(biāo)記伊匹單抗不僅需要得到標(biāo) 記產(chǎn)物，還需保證標(biāo)記產(chǎn)物在體外具有良好的穩(wěn)定性、較高的放射性化學(xué)純度，可滿足使用 需要，用于體內(nèi)顯像時(shí)能夠客觀準(zhǔn)確的反應(yīng)體內(nèi)代謝的情況的問題，進(jìn)而提供一種操作簡(jiǎn) 單、可得到具有較為理想的穩(wěn)定性與放射性化學(xué)純度的伊匹單抗標(biāo)記產(chǎn)物的方法。
[0008] 本發(fā)明還提供了上述方法得到的標(biāo)記產(chǎn)物的質(zhì)量控制方法。
[0009] 本發(fā)明的89化標(biāo)記伊匹單抗的標(biāo)記產(chǎn)物為rZr]-Df-Bz-NCS-Ipilimum油。
[0010] 本發(fā)明的89化標(biāo)記伊匹單抗的方法，采用89Zr標(biāo)記Df-Bz-NCS-Ipilimum油。
[0011] 所述的89Zr標(biāo)記伊匹單抗的方法，具體包括W下步驟：取Df-Bz-NCS-Ipilimumab 與含 89Zr4+離子溶液，混合均勻，調(diào)節(jié)混合液的抑值為6. 8-7. 2,形成反應(yīng)液，在20-35°C下 反應(yīng)至生成標(biāo)記產(chǎn)物rZr]-Df-Bz-NCS-Ipilimum油。需要說明的是，本領(lǐng)域技術(shù)人員可根 據(jù)實(shí)際情況選擇調(diào)節(jié)混合液的抑調(diào)節(jié)劑，只要使所述反應(yīng)液的抑值在6. 8-7. 2的范圍內(nèi) 即可。
[001引所述含89Zr4+離子溶液為89Zr草酸溶液。
[0013] 進(jìn)一步的，所述的89Zr標(biāo)記伊匹單抗的方法，還包括向所述反應(yīng)液中加入絡(luò)合劑 的步驟。優(yōu)選的，所述絡(luò)合劑為醋酸-醋酸鋼緩沖液、己二胺四己酸鋼緩沖溶液中的一種。
[0014] 所述的89Zr標(biāo)記伊匹單抗的方法，還包括將所述標(biāo)記產(chǎn)物 [ 89Zr] -Df-Bz-NCS-Ipi 1 imumab采用層析柱純化的步驟。進(jìn)一步的，將所述標(biāo)記產(chǎn)物 [89Zr]-Df-Bz-NCS-Ipilimumab層析柱純化后，采用0. 22 ym的無菌濾膜過濾，獲得可用于 臨床使用的無菌、熱原符合規(guī)定的rZr]-Df-Bz-NCS-Ipi 1 imuma注射液。
[0015] 本發(fā)明所述的[89Zr]-Df-Bz-NCS-Ipilimumab在制備PET顯像劑中的應(yīng)用。
[0016] 本發(fā)明提供的PET顯像劑，包含所述rZr]-Df-Bz-NCS-Ipilimum油。
[0017] 本發(fā)明所述的標(biāo)記產(chǎn)物[89Zr]-Df-Bz-NCS-Ipilimumab的質(zhì)量控制方法，包括W 下步驟：
[001引取所述標(biāo)記產(chǎn)物[89Zr]-Df-Bz-NCS-Ipilimumab在TLC層析上點(diǎn)樣，W抑值 為6. 5的巧樣酸-巧樣酸鋼為展開劑，展開、干燥，掃描斑點(diǎn)位置，計(jì)算所述標(biāo)記產(chǎn)物 rZr]-Df-Bz-NCS-Ipilimum油的放射性化學(xué)純度；或者/和
[0019] 采用高效液相色譜法檢測(cè)所述標(biāo)記產(chǎn)物rZr]-Df-Bz-NCS-Ipilimum油的放射性 化學(xué)純度，色譜柱為300X7. 8mm規(guī)格的凝膠柱，流動(dòng)相為0.Imol/L的PBS緩沖液-0. 5mol/ L的化C1，流速為Iml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。所述PBS緩沖液為磯酸緩沖鹽溶液。
[0020] 本發(fā)明所述的Df-Bz-NCS-Ipilimumab，即去鐵敏-苯甲酯基-N-氯代了二酷亞 胺-伊匹單抗，是去鐵敏B值f)Df衍生活性分子，其結(jié)構(gòu)式如下：
[0021]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種89Zr標(biāo)記伊匹單抗的標(biāo)記產(chǎn)物[89Zr]-Df-Bz-NCS-IpiIimumab。
2. 權(quán)利要求1所述的標(biāo)記產(chǎn)物[89Zr]-Df-Bz-NCS-Ipilimumab的制備方法，其特征在 于，米用89Zr標(biāo)記Df-Bz-NCS-IpiIimumab〇
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，具體包括以下步驟：取 Df-Bz-NCS-IpiIimumab與含89Zr4+離子溶液，混合均勻，調(diào)節(jié)混合液的pH值為6. 8-7. 2,形 成反應(yīng)液，在20-35°C下反應(yīng)至生成標(biāo)記產(chǎn)物[89Zr]-Df-Bz-NCS-IpiIimumab。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述含89Zr4+離子溶液為89Zr草酸溶液。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2-4任一所述的方法，其特征在于，還包括向所述反應(yīng)液中加入絡(luò)合 劑的步驟；所述絡(luò)合劑為醋酸-醋酸鈉緩沖液、乙二胺四乙酸鈉緩沖溶液中的一種。
6. 根據(jù)權(quán)利要求2-5任一所述的方法，其特征在于，還包括將所述標(biāo)記產(chǎn)物 [89Zr]-Df-Bz-NCS-Ipilimumab采用層析柱純化的步驟。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，將所述標(biāo)記產(chǎn)物 [89Zr] -Df-Bz-NCS-IpiIimumab層析柱純化后，采用無菌濾膜過濾。
8. 權(quán)利要求1中所述的[89Zr]-Df-Bz-NCS-IpiIimumab在制備PET顯像劑中的應(yīng)用。
9. 一種PET顯像劑，其特征在于，包含權(quán)利要求8中所述的[89Zr]-Df-Bz-NCS-Ipilim umabo
10. 一種權(quán)利要求1中所述的標(biāo)記產(chǎn)物[89Zr]-Df-Bz-NCS_Ipilimumab的質(zhì)量控制方 法，其特征在于，包括以下步驟： 取所述標(biāo)記產(chǎn)物[89Zr]-Df-Bz-NCS-IpiIimumab在TLC層析上點(diǎn)樣，以pH值 為6. 5的檸檬酸-檸檬酸鈉為展開劑，展開、干燥，掃描斑點(diǎn)位置，計(jì)算所述標(biāo)記產(chǎn)物 [89Zr]-Df-Bz-NCS-IpiIimumab的放射性化學(xué)純度；或者/和 采用高效液相色譜法檢測(cè)所述標(biāo)記產(chǎn)物 [89Zr] -DF-Bz-NCS-IpiIimumab的放射性化學(xué)純度，色譜柱為300X7. 8mm規(guī)格的凝 膠柱，流動(dòng)相為〇?lmol/L的PBS緩沖液+0? 5mol/L的NaCl，流速為lml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為 280nm。
【專利摘要】89Zr標(biāo)記伊匹單抗的標(biāo)記產(chǎn)物，為[89Zr]-Df-Bz-NCS-Ipilimumab，采用89Zr標(biāo)記Df-Bz-NCS-Ipilimumab，并進(jìn)一步提供了89Zr標(biāo)記Df-Bz-NCS-Ipilimumab的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明的標(biāo)記產(chǎn)物，正電子核素與抗體在血液中的半衰期相符、PET顯像結(jié)果較為客觀，且制備操作簡(jiǎn)單、成本低，可得到具有較為理想的穩(wěn)定性與放射性化學(xué)純度的伊匹單抗標(biāo)記產(chǎn)物。
【IPC分類】C07K1-13, A61K103-00, A61K51-10, C07K16-28
【公開號(hào)】CN104725510
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510042503
【發(fā)明人】王正, 羅志剛, 方鵬, 虞善友, 張京超
【申請(qǐng)人】米度（南京）生物技術(shù)有限公司
【公開日】2015年6月24日
【申請(qǐng)日】2015年1月27日