一種根據(jù)分裂行為對體外受精治療胚胎進行評估的等級分類方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及輔助生殖技術(shù)中接受體外受精治療患者胚胎的評估與用于移植的優(yōu) 質(zhì)胚胎的選擇，具體是對治療中經(jīng)時差成像技術(shù)觀察的胚胎依據(jù)分裂行為的異常模式進行 等級劃分，篩選胚胎進行移植的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 體外受精-胚胎移植（IVF-ET)已成為不孕癥治療的常規(guī)手段。傳統(tǒng)的方法往往 依賴于同時移植多個胚胎以提高妊娠率，但多胚胎移植導(dǎo)致多胎妊娠率增高，使母親和胎 兒的醫(yī)源性并發(fā)癥風險增加，可行的辦法是建立一種有效的胚胎評估方法在卵裂期選擇優(yōu) 質(zhì)胚胎進行移植。傳統(tǒng)的卵裂期靜態(tài)形態(tài)學胚胎篩選體系是利用原核形態(tài)，第三天胚胎卵 裂球數(shù)目、對稱性、碎片多少等對胚胎進行評估和選擇。但該方法存在評估指標單一，主觀 性大，無法準確判斷胚胎發(fā)育潛能的缺點。時差技術(shù)（time-lapse)是一種瞬時曝光連續(xù)拍 攝的成像技術(shù)，利用該技術(shù)能獲取胚胎發(fā)育各個階段的形態(tài)以及各事件發(fā)生的特定時間， 并將所有記錄照片合并成動態(tài)視頻，實現(xiàn)對胚胎發(fā)育過程的全程監(jiān)控。而目前已有的利用 時差技術(shù)的形態(tài)動力學胚胎評估篩選方法是利用胚胎發(fā)育過程中的卵裂時間（如受精至 五細胞形成的時間）、卵裂同步性（如從三細胞形成至四細胞形成的時間）等指標對胚胎進 行評估。但是該方法存在如下缺點：形態(tài)動力學指標受多種因素，如培養(yǎng)系統(tǒng)、病人年齡、卵 子成熟情況、授精方式、促排方案等的影響。僅有少數(shù)指標得到一致認可，且同一指標的范 圍存在一定波動。因此形態(tài)動力學指標在各實驗室無法通用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明旨在克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種根據(jù)分裂行為對體外受精治療胚胎進 行評估的等級分類方法。
[0004] 為了達到上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為；
[0005] 所述根據(jù)分裂行為對體外受精治療胚胎進行評估的等級分類方法是將受精后第 一天的胚胎移入胚胎培養(yǎng)基中，于培養(yǎng)箱的時差系統(tǒng)攝像頭下觀察受精后第一至五天的胚 胎卵裂情況，設(shè)置攝像頭拍攝頻率為5-15min/次；然后按如下步驟對胚胎進行等級分類：
[0006] (1)將胚胎分裂行為分為如下八種：
[0007] ①正常分裂；②分裂異常；③不等大；④卵裂球碎裂；⑤大碎片；⑥異常胞質(zhì)運動； ⑦發(fā)育阻滯；⑧分裂次序紊亂；
[0008] (2)根據(jù)各分裂行為對囊胚形成的影響程度將胚胎的上述八種分裂行為歸納為如 下兩類：
[0009] I類分裂行為：正常分裂、異常胞質(zhì)運動、不等大、大碎片對囊胚形成的影響程度 小于50% ;
[0010] II類分裂行為：發(fā)育阻滯、分裂異常、分裂次序紊亂、卵裂球碎裂對囊胚形成的影 響程度大于等于50% ;
[0011] (3)根據(jù)步驟⑴和步驟⑵將胚胎分為A、B、C、D、E、F六個等級：
[0012] A級：第一次（出現(xiàn)在受精后第一至二天，從一細胞至二細胞）、第二次（出現(xiàn)在受 精后第二至三天，從二細胞至四細胞）、第三次卵裂（出現(xiàn)在受精后第三至四天，從四細胞 至八細胞）均發(fā)生正常分裂行為的胚胎；
[0013] B級：第一、二、三次卵裂中至少發(fā)生一次除正常分裂行為外的I類分裂行為（異 常胞質(zhì)運動、不等大、大碎片）的胚胎；
[0014] C級：第一、二次卵裂發(fā)生I類分裂行為，第三次卵裂發(fā)生II類分裂行為（發(fā)育阻 滯、分裂異常、分裂次序紊亂、卵裂球碎裂）的胚胎；
[0015] D級：第一次卵裂發(fā)生I類分裂行為，第二次卵裂時其中一個細胞（部分）發(fā)生II 類分裂行為的胚胎；
[0016] E級：第一次卵裂發(fā)生I類分裂行為，第二次卵裂時兩個細胞（全部）均發(fā)生II類 分裂行為的胚胎；
[0017] F級：第一次卵裂發(fā)生II類分裂行為的胚胎；
[0018] 其中，A級胚胎為最優(yōu)選擇的用于移植的胚胎；若沒有A級胚胎則選擇B級胚胎用 于移植；若沒有A級和B級胚胎，則選擇C級胚胎用于移植；D、E、F級胚胎不被用于移植。
[0019] 上述技術(shù)方案中，所述正常分裂是指胚胎的分裂情況為：受精后一至五天內(nèi)，一次 有絲分裂形成2個直徑相差1/5以下的子細胞及占原有細胞體積10%以下的散在、無細胞 核碎片；
[0020] 分裂異常是指胚胎的分裂情況為：受精后一至五天內(nèi)，一次有絲分裂形成3個或3 個以上直徑相差1/5以下的子細胞；
[0021] 不等大是指胚胎的分裂情況為：受精后一至五天內(nèi)，分裂后形成的2個子細胞直 徑相差1/5以上；
[0022] 卵裂球碎裂是指胚胎的分裂情況為：受精后一至五天內(nèi)，分裂形成的子細胞碎裂 成4-10塊直徑為原有細胞直徑1/3以下的無細胞核碎片或分裂過程中產(chǎn)生占原有細胞體 積50%以上的散在、無細胞核碎片；
[0023] 大碎片是指胚胎的分裂情況為：受精后一至五天內(nèi)，分裂過程中產(chǎn)生兩個直徑相 差1/5以下的子細胞及1-2塊直徑為子細胞直徑1/3至1/2的無細胞核碎片或占原有細胞 體積10 %至50%的散在、無細胞核碎片；
[0024] 異常胞質(zhì)運動是指胚胎的分裂情況為：受精后一至五天內(nèi)，分裂過程中胞膜出現(xiàn) 凹陷的卵裂溝但卵裂球不分裂現(xiàn)象或出現(xiàn)胞質(zhì)扭曲、旋轉(zhuǎn)等不正常運動；
[0025] 發(fā)育阻滯是指胚胎的分裂情況為：受精后一至五天內(nèi)，卵裂球發(fā)育停滯，不再繼續(xù) 進行有絲分裂形成相應(yīng)的子細胞；
[0026] 分裂次序紊亂是指胚胎的分裂情況為：受精后一至五天內(nèi)，分裂的先后順序發(fā)生 紊亂；正常情況下，A細胞經(jīng)過一次有絲分裂形成A1、A2兩個子細胞，Al細胞經(jīng)過有絲分裂 形成All及A12兩個子細胞，A2細胞經(jīng)過有絲分裂形成A21及A22兩個子細胞，以此類推； 分裂次序紊亂，A細胞經(jīng)過一次有絲分裂形成AU A2兩個子細胞，Al細胞經(jīng)過有絲分裂形 成All及A12兩個子細胞，在A2細胞尚未分裂時，All細胞或A12細胞提前有絲分裂，形成 相應(yīng)的兩個子細胞，隨后A2細胞發(fā)生有絲分裂形成相應(yīng)的兩個子細胞。
[0027] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：
[0028] (1)利用時差成像技術(shù)對人類胚胎進行動態(tài)觀察的數(shù)據(jù)，對體外受精的人類卵裂 期胚胎出現(xiàn)的分裂異常行為進行了收集、描述及分類，用于對體外受精治療胚胎進行評估。
[0029] (2)根據(jù)分裂行為對胚胎發(fā)育潛能影響的嚴重程度對分裂行為進行分類，將對囊 胚形成的影響程度小于50 %的分裂行為歸為一類，定義為I類分裂行為；將對囊胚形成的 影響程度大于等于50%的分裂行為歸為一類，定義為II類分裂行為。
[0030] (3)結(jié)合不同的卵裂時期及分裂行為在胚胎中的涉及范圍，建立了一種根據(jù)分裂 行為對體外受精治療胚胎進行評估的等級分類方法。
[0031] 總之，本發(fā)明的目的在于在不干涉人類胚胎細胞也不破壞人類胚胎細胞的情況 下，利用時差成像技術(shù)對人類胚胎進行動態(tài)觀察的數(shù)據(jù)，對體外受精的人類卵裂期胚胎出 現(xiàn)的分裂異常行為進行了收集及詳細的描述，并分為7種類型。根據(jù)異常分裂的嚴重程度、 異常分裂行為累及的卵裂球范圍以及異常分裂行為的發(fā)