欧美在线观看视频网站,亚洲熟妇色自偷自拍另类,啪啪伊人网,中文字幕第13亚洲另类,中文成人久久久久影院免费观看 ,精品人妻人人做人人爽,亚洲a视频

一種花生果腐病病原菌的致病性鑒定方法

文檔序號(hào):8392481閱讀:441來源:國(guó)知局
一種花生果腐病病原菌的致病性鑒定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種花生果腐病病原菌的致病性鑒定方法,屬于花生病原菌致病性鑒定方法技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]花生是重要的油料作物和經(jīng)濟(jì)作物,近年來花生果腐病,俗稱爛果病,在我國(guó)花生產(chǎn)區(qū)尤其是北方產(chǎn)區(qū)呈連年加重之勢(shì)。由于花生果長(zhǎng)于地下的特殊性,使得花生果腐病的發(fā)病不易觀測(cè)。這對(duì)花生果腐病病原菌的鑒定、檢測(cè)技術(shù)提出了挑戰(zhàn)。
[0003]目前國(guó)內(nèi)外已報(bào)道的花生果腐病病原菌主要有solani, Pythiummyr1tylum, Fusarium solani, Sclerotium rolfsii, Cylindrocladium parasiticum熱Sclerotinia心‘/?#幾種真菌。但目前條件下,采用田間及盆栽回接檢測(cè)方法不僅受花生種植周期的限制,而且檢測(cè)周期長(zhǎng),且絕大多數(shù)病原菌存在土壤回接、擴(kuò)繁困難的缺陷。因此需要一種方法能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)果腐病病原菌的致病性進(jìn)行隨時(shí)檢測(cè),不受上述條件制約。目前尚無此方面報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種花生果腐病病原菌的致病性鑒定方法,以克服現(xiàn)有條件下果腐病病原菌田間及盆栽回接檢測(cè)受花生種植周期限制、且檢測(cè)周期長(zhǎng)的難題。
[0005]該方法將易感病品種曬干的花生果和仁分別消毒、沖洗、浸泡后,進(jìn)行微創(chuàng)處理,置于培養(yǎng)皿中并接入相應(yīng)病原菌,皿中倒入1/4濃度的相應(yīng)病原菌培養(yǎng)基,使花生果/仁與病原菌實(shí)現(xiàn)共培養(yǎng)。10天后更換一次培養(yǎng)基,之后10-15天觀察統(tǒng)計(jì)侵染致病情況。該方法能夠隨時(shí)對(duì)果腐病病原菌的致病性進(jìn)行檢測(cè),快速簡(jiǎn)便、穩(wěn)定性高、重復(fù)性好。
[0006]本發(fā)明還進(jìn)一步提供了上述花生果腐病病原菌致病性鑒定方法的優(yōu)選技術(shù)方案:
作為優(yōu)選,所述的病原菌是從花生果腐病病果中分離、純化獲得,經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定與分子生物學(xué)鑒定后,獲知其可能為花生果腐病病原菌。
[0007]作為優(yōu)選,所述的易感病品種為花育38,花育43,中華12號(hào)和冀花9號(hào)四個(gè)品種。單次實(shí)驗(yàn)(針對(duì)一種菌)每個(gè)品種分別需準(zhǔn)備150個(gè)/粒飽滿、健康的果和仁,50個(gè)作為一個(gè)重復(fù),設(shè)置3次重復(fù)。
[0008]作為優(yōu)選,所述的消毒、沖洗、浸泡是將花生果和仁分別用75%酒精浸泡10分鐘后用I %。生未浸泡25min和15min完成消毒,用無菌水沖洗3_4次,之后分別用無菌水浸泡36h和5h。將浸泡后的果和仁于超凈臺(tái)中置于無菌濾紙上吸干水分。
[0009]作為優(yōu)選,所述的微創(chuàng)處理是指用無菌手術(shù)刀在花生果上劃出3-5道1mm左右的劃痕,在花生仁上同樣劃出3-5道5_左右的劃痕,以利于病原菌侵染。
[0010]作為優(yōu)選,所述的接入病原菌是用滅菌牙簽挑取2mm左右菌斑抹于微創(chuàng)傷口上,每個(gè)果/仁均在兩個(gè)不同傷口接入菌斑。每個(gè)培養(yǎng)皿中分別放10個(gè)果/仁。之后在果的培養(yǎng)皿中接入6個(gè)5mm的菌斑(打孔法),仁的培養(yǎng)皿中接入4個(gè)5mm的菌斑,達(dá)到擴(kuò)繁目的。
[0011]作為優(yōu)選,所述的培養(yǎng)皿,果和仁用的分別是15cm和9cm直徑的。提前需要鋪好兩層無菌濾紙并倒入相應(yīng)的1/4濃度的病原菌液體培養(yǎng)基,果中培養(yǎng)基深度約5mm,仁中約3mm ο
[0012]作為優(yōu)選,所述的暗培養(yǎng)需在培養(yǎng)皿底部墊一層無菌濾紙,以防止移動(dòng)培養(yǎng)皿時(shí)因封口膜粘破而染菌。
[0013]作為優(yōu)選,所述的更換培養(yǎng)基需用消毒棉球擦拭培養(yǎng)皿封口處,之后置于超凈臺(tái)中,拆除封口膜,并倒入相應(yīng)培養(yǎng)基,并用封口膜封口后再培養(yǎng)。
[0014]作為優(yōu)選,所述的觀察統(tǒng)計(jì)侵染致病情況包括兩方面,一是分別統(tǒng)計(jì)病原菌在果和仁上的附著、生長(zhǎng)情況,X=A/50X 100%,X為侵染率,A為培養(yǎng)皿中附著菌絲/孢子的花生仁/果的個(gè)數(shù),50即為花生果/仁的原始個(gè)數(shù)。統(tǒng)計(jì)完3個(gè)重復(fù)后進(jìn)行比較分析;另外分別統(tǒng)計(jì)果和仁發(fā)生褐變的比率,并按褐變程度進(jìn)行分級(jí),以比較各病原菌的致病力。
【具體實(shí)施方式】
[0015]下面通過具體實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案,本發(fā)明包括但不限于以下實(shí)施方式。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)對(duì)本發(fā)明所進(jìn)行的不脫離本發(fā)明實(shí)質(zhì)內(nèi)容的改變,仍屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0016]實(shí)施例1:
以從花生果腐病病果中分離、純化獲得的Calonectria sp.(保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心,保藏日期為2014.10.20,保藏號(hào)為CGMCC N0.9807)為檢測(cè)對(duì)象,以花育38,花育43,中華12號(hào)和冀花9號(hào)四個(gè)易感品種作為供試材料。
[0017]每個(gè)品種分別選取150個(gè)/粒飽滿、健康的果和仁,50個(gè)作為一個(gè)重復(fù),設(shè)置3次重復(fù)。將花生果和仁分別用75%酒精浸泡10分鐘后用1%。生汞浸泡25min和15min完成消毒,用無菌水沖洗3-4次,之后分別用無菌水浸泡36h和5h。將浸泡后的果和仁于超凈臺(tái)中置于無菌濾紙上吸干水分。用無菌手術(shù)刀在花生果上劃出3-5道1mm左右的劃痕,在花生仁上同樣劃出3-5道5_左右的劃痕。然后用滅菌牙簽挑取2_左右菌斑抹于微創(chuàng)傷口上,每個(gè)果/仁均在兩個(gè)不同傷口接入菌斑。每個(gè)培養(yǎng)皿中分別放10個(gè)果/仁。果和仁用的培養(yǎng)皿分別是15cm和9cm直徑的,提前需要鋪好兩層無菌濾紙并倒入1/4濃度的改良察氏液體培養(yǎng)基,果中培養(yǎng)基深度約5_,仁中約3_。之后在果的培養(yǎng)皿培養(yǎng)基中接入6個(gè)5mm的菌斑(打孔法),仁的培養(yǎng)皿中接入4個(gè)5mm的菌斑,達(dá)到擴(kuò)繁目的。用封口膜將培養(yǎng)皿封好口并置于28°C培養(yǎng)箱暗培養(yǎng),培養(yǎng)皿底部墊一層無菌濾紙以防止因移動(dòng)培養(yǎng)皿時(shí)封口膜粘破而染菌。10天后更換一次培養(yǎng)基,需用消毒棉球擦拭培養(yǎng)皿封口處,之后置于超凈臺(tái)中,拆除封口膜,倒入相應(yīng)培養(yǎng)基,并用封口膜封口后繼續(xù)培養(yǎng),12天后進(jìn)行觀察統(tǒng)計(jì),結(jié)果表明,該菌對(duì)四個(gè)花生品種花生果的侵染率為91-95%,對(duì)花生仁的侵染率為96-100%。四個(gè)品種果的褐變率為35-41%,仁的褐變率為55-68%。三個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性好,表明了該方法的可
當(dāng)前第1頁1 2 
網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評(píng)論。精彩留言會(huì)獲得點(diǎn)贊!
1
铜陵市| 石门县| 平原县| 福安市| 沾化县| 曲水县| 昆山市| 咸宁市| 保定市| 桐城市| 临西县| 九龙城区| 鄂尔多斯市| 绥棱县| 松潘县| 永靖县| 呼图壁县| 环江| 长寿区| 腾冲县| 吉首市| 广平县| 广南县| 阳泉市| 年辖:市辖区| 大荔县| 四平市| 广丰县| 大渡口区| 阿勒泰市| 玉田县| 福安市| 伊金霍洛旗| 安阳县| 民丰县| 崇信县| 攀枝花市| 乐陵市| 庆阳市| 华蓥市| 永年县|