一種h7亞單位抗原在動(dòng)物模型評(píng)價(jià)中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，尤其涉及一種由H7亞單位抗原制成的疫苗以及在動(dòng) 物模型評(píng)價(jià)中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] H7N9型禽流感是一種新型禽流感，于2013年3月底在上海和安徽兩地率先發(fā)現(xiàn)。 H7N9型禽流感是全球首次發(fā)現(xiàn)的新亞型流感病毒，尚未納入我國(guó)法定報(bào)告?zhèn)魅静”O(jiān)測(cè)報(bào)告 系統(tǒng)，并且至2013年4月初尚未有疫苗推出。被該病毒感染均在早期出現(xiàn)發(fā)熱等癥狀，至 2013年4月尚未證實(shí)此類病毒是否具有人傳染人的特性。2013年4月經(jīng)調(diào)查，H7N9禽流 感病毒基因來(lái)自于東亞地區(qū)野鳥和中國(guó)上海、浙江、江蘇雞群的基因重配。截至2015年01 月25日，全國(guó)已確診133人，37人死亡，76人痊愈。病例分布于北京、上海、江蘇、浙江、安 徽、山東、河南、臺(tái)灣、福建、東堯、汕尾等地。
[0003] 人感染H7N9禽流感潛伏期一般為7天以內(nèi)。患者一般表現(xiàn)為流感樣癥狀，如發(fā) 熱，咳嗽，少痰，可伴有頭痛、肌肉酸痛和全身不適。重癥患者病情發(fā)展迅速，表現(xiàn)為重癥肺 炎，體溫大多持續(xù)在39攝氏度以上，出現(xiàn)呼吸困難，可伴有咳血痰；可快速進(jìn)展出現(xiàn)急性呼 吸窘迫綜合征、縱隔氣腫、膿毒癥、休克、意識(shí)障礙及急性腎損傷等。
[0004] 目前尚未有快速、有效的疫苗來(lái)防止禽流感病毒傳播以及完整的動(dòng)物模型評(píng)價(jià)方 法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 鑒于現(xiàn)有技術(shù)的存在問題，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種H7亞單位抗 原以及在動(dòng)物模型評(píng)價(jià)中的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：
[0007] -種H7亞單位抗原，所述H7亞單位抗原具有SEQ ID N0 :1所示核酸序列。
[0008] 進(jìn)一步，所述H7亞單位抗原具有SEQ ID N0 :2所示氨基酸序列。
[0009] -種H7亞單位抗原在動(dòng)物模型評(píng)價(jià)中的應(yīng)用，所述動(dòng)物模型為小鼠或者雪貂。
[0010] 本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明以H7亞單位抗原制備的疫苗具有穩(wěn)定、快速、有效 等優(yōu)點(diǎn)。通過(guò)小鼠或者雪貂作為動(dòng)物模型，可以準(zhǔn)確、快速的評(píng)價(jià)制備的疫苗。本發(fā)明以H7 亞單位抗原制備的疫苗能夠有效的預(yù)防小鼠、雪貂感染H7N9病毒，具有良好的應(yīng)用前景。
【附圖說(shuō)明】
[0011] 圖1為本發(fā)明所述重組禽流感亞單位疫苗圖，泳道M為blue plus2marker,泳道 1-2為純化前的樣品，泳道3-4為流出液，泳道5-14為純化后的樣品；
[0012] 圖2為本發(fā)明所述H7抗原樣品電泳圖，泳道M為blue plus2 marker,泳道1-3 為H7抗原樣品，泳道4為0. 5微克牛血清白蛋白，泳道5為1. 0微克牛血清白蛋白，泳道6 為1.5微克牛血清白蛋白；
[0013] 圖3為本發(fā)明所述重組禽流感亞單位疫苗血凝抑制試驗(yàn)圖；
[0014] 圖4為本發(fā)明所述重組禽流感亞單位疫苗對(duì)小鼠體重的影響結(jié)果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本發(fā)明，并 非用于限定本發(fā)明的范圍。
[0016] 本發(fā)明所述的實(shí)驗(yàn)方法若無(wú)特別說(shuō)明均采用本領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)手段，可參見說(shuō)明 書或者分子生物學(xué)克隆指南第三版。本發(fā)明所使用的實(shí)驗(yàn)試劑若無(wú)特別說(shuō)明均為本領(lǐng)域的 常規(guī)實(shí)際，市場(chǎng)上可以購(gòu)買到。
[0017]實(shí)施例1培養(yǎng)病毒株A/Anhui/1/2013 (H7N9)，提取病毒株中的RNA
[0018]所述 A/Anhui/1/2013 (H7N9)來(lái)自中國(guó)疾控中心（CDC)。
[0019] 將禽流感病毒株A/Anhui/1/2013 (H7N9)取0. 2mL接種于15日齡雞胚，37攝氏度 培養(yǎng)40h，置于4攝氏度冰箱過(guò)夜，無(wú)菌收集尿囊液。取病毒尿囊液500mL4攝氏度條件下 6000rpm離心20min收集上清，25000rpm離心2h超速離心，沉淀用5mLTEN重懸，用質(zhì)量分 數(shù)10 % -40 %的蔗糖梯度離心，35000rpm離心2h，收集質(zhì)量分?jǐn)?shù)30 % -35 %的病毒帶，透析 脫糖，用無(wú)RNA酶的TE緩沖液懸浮，分裝，凍存。
[0020] 利用QIANGEN Rneasy Mini Kit試劑盒提取RNA，具體操作步驟參見說(shuō)明書。
[0021] 實(shí)施例2利用反轉(zhuǎn)錄PCR獲得cDNA
[0022] 取RNA菌懸液10微升，加入20pmol引物1 (如SEQ ID NO :3所示核酸序列）混 勻后置于70攝氏度水浴中反應(yīng)lOmin，再加入5*反轉(zhuǎn)錄酶緩沖液、0. lmol/LDTT2微升、 2. 5mmol/LdNTP 4微升、RNA酶抑制劑1微升、M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶10U，37攝氏度水浴lh，97攝 氏度作用l〇min。獲得cDNA。
[0023] 實(shí)施例3以獲得的cDNA為模板，擴(kuò)增HA基因
[0024] 按照如下反應(yīng)體系配置反應(yīng)液：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種H7亞單位抗原，其特征在于，所述H7亞單位抗原具有SEQIDNO:1所示核酸 序列。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種，H7亞單位抗原，其特征在于，所述H7亞單位抗原具有SEQ IDNO: 2所示氨基酸序列。
3. -種權(quán)利要求1所述H7亞單位抗原在動(dòng)物模型評(píng)價(jià)中的應(yīng)用。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述H7亞單位抗原在動(dòng)物模型評(píng)價(jià)中的應(yīng)用，其特征在于，所述動(dòng) 物模型為小鼠或者雪貂。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種H7亞單位抗原，所述H7亞單位抗原具有SEQ ID NO：1所示核酸序列。所述H7亞單位抗原具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列，以及利用上述H7亞單位抗原在動(dòng)物模型評(píng)價(jià)中的應(yīng)用。本發(fā)明以H7亞單位抗原制備的重組疫苗具有穩(wěn)定、有效等優(yōu)點(diǎn)，通過(guò)小鼠或者雪貂作為動(dòng)物模型，可以準(zhǔn)確、快速的評(píng)價(jià)本發(fā)明制備的疫苗。本發(fā)明以H7亞單位抗原制備的疫苗能夠有效的預(yù)防小鼠、雪貂感染H7N9病毒，具有良好的應(yīng)用前景。
【IPC分類】A61K49-00, A61P31-16, C07K14-11, A61K39-145
【公開號(hào)】CN104693291
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510086104
【發(fā)明人】王華瑞, 李永亮
【申請(qǐng)人】武漢思齊源生物科技有限公司
【公開日】2015年6月10日
【申請(qǐng)日】2015年2月16日