一種微生物次級代謝產(chǎn)物鹽酸巴馬汀及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及一種微生物次級代謝產(chǎn)物鹽酸巴馬汀及其應(yīng)用，屬微生物農(nóng)藥生產(chǎn)技 術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】：
[0002] 水稻細(xì)菌性條斑病，由稻黃單胞菌稻生致病變種（Xanthomonoas oryzae pv. oryzicola)侵染引起，廣泛分布于亞洲的熱帶和亞熱帶地區(qū)，國內(nèi)主要分布于華南、華 中、西南等稻區(qū)，現(xiàn)已成為我國南方稻區(qū)的主要病害之一。該病發(fā)生時，蔓延迅速，導(dǎo)致稻葉 變黃枯死、空秕粒增多、產(chǎn)量下降，嚴(yán)重時可達(dá)40-60%，該病嚴(yán)重的威脅著水稻生產(chǎn)。
[0003] 水稻白葉枯病，由稻黃單胞菌水稻致病變種（Xanthomonas oryzae pv. oryzae)侵 染引起，廣泛分布于全球各水稻產(chǎn)區(qū)，國內(nèi)主要分布于我國南方各省，近年來北方稻田也越 發(fā)嚴(yán)重；除新疆及東北北部外，該病一直是影響我國水稻安全生產(chǎn)的一個重要病害。水稻白 葉枯病在中國的發(fā)生已有70年以上的歷史，是僅次于稻瘟病的第二大病害。該病發(fā)生時， 蔓延迅速，葉片枯死，蔓延到重病田的產(chǎn)量損失高達(dá)60 %。
[0004] 十字花科作物繁多，由蕓薹根腫菌（Plasmodiophora brassicae woron)侵染引起 的十字花科根腫病，每年發(fā)病面積達(dá)2000多萬畝（次），嚴(yán)重影響十字花科蔬菜品質(zhì)與產(chǎn) 量，嚴(yán)重時導(dǎo)致減產(chǎn)70-80%，且病菌能在土壤中存活10年以上，防治十分困難。
[0005] 針對上述主要農(nóng)作物和蔬菜上病害，由于長期大量使用各類化學(xué)農(nóng)藥，抗藥性菌 株不斷出現(xiàn)，加大化學(xué)農(nóng)藥的使用量及使用頻率；同時化學(xué)農(nóng)藥使用和殘留嚴(yán)重阻礙了經(jīng) 濟(jì)作物的出口貿(mào)易。隨著我國人民生活水平的提高，蔬菜等農(nóng)產(chǎn)品的安全質(zhì)量問題收到高 度關(guān)注，尤其是農(nóng)藥殘留問題。農(nóng)藥殘留可致使化學(xué)農(nóng)藥在自然界和食物鏈中長期殘留，造 成環(huán)境污染、生態(tài)平衡破壞、社會公害等嚴(yán)重后果。保守的病害控制措施如：農(nóng)業(yè)栽培措施， 抗病品種等，效果均不理想。微生物制劑具有對非靶標(biāo)生物安全、毒副作用小、對環(huán)境兼容 性好等特點，在控制植物病蟲害方面倍受青睞。特別在人類環(huán)保意識增強(qiáng)的今天，采用高 效、無毒、安全無殘留、使用簡便的微生物農(nóng)藥替代目前副作用大的化學(xué)農(nóng)藥已逐步成為世 界各國的共識。因此，研宄開發(fā)高效、無毒、安全無殘留、使用簡便的植物病害防治的生物制 劑，已經(jīng)是我國農(nóng)業(yè)發(fā)展中迫在眉睫的問題。
[0006] 菌株YFY 02分離自云南省富源縣竹園鎮(zhèn)的玉米根際，結(jié)合形態(tài)學(xué)、培養(yǎng)性狀、 常規(guī)生理生化及Biolog全自動鑒定系統(tǒng)等鑒定結(jié)果，鑒定為抗生素溶桿菌（Lysobacter antibioticus)。本研宄室基于抗生素溶桿菌菌株YFY 02發(fā)酵液對十字花科蔬菜根腫病、 水稻白葉枯病及水稻細(xì)菌性條斑病等病害的防治效果，對該菌株的次級代謝產(chǎn)物進(jìn)行了分 離、純化、鑒定及生防應(yīng)用。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，未見利用抗生素溶桿菌次級代謝產(chǎn)物鹽酸巴馬汀 防治水稻細(xì)菌病害及十字花科蔬菜根腫病的公開報道。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0007] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)之不足，提供一種高效、無毒、安全無殘留的微生 物次級代謝產(chǎn)物鹽酸巴馬汀及其應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明的生產(chǎn)菌株抗生素溶桿菌YFY 02已保藏。保藏單位：中國微生物菌種保藏 管理委員會普通微生物中心；地址：北京市朝陽區(qū)大屯路，中國科學(xué)院微生物研宄所；保藏 日期：2008年03月17日；保藏號：CGMCC NO. 2403。
[0009] 本發(fā)明的生產(chǎn)菌株抗生素溶桿菌YFY 02,菌株YFY 02分離自云南省富源縣竹園 鎮(zhèn)的玉米根際。該菌株具有以下特征：（1)菌落圓形，不透明稀液狀，初期培養(yǎng)為暗黃色，后 期轉(zhuǎn)為棕褐色或黑褐色菌落，菌體長桿狀；（2)該菌株抑菌譜廣，能在十字花科蔬菜根際及 水稻葉片長期定殖，對水稻白葉枯病菌、條斑病菌等病原細(xì)菌都有較強(qiáng)的拮抗作用，對根腫 病菌孢子萌發(fā)有明顯抑制作用。
[0010] 本發(fā)明的微生物次級代謝產(chǎn)物鹽酸巴馬汀經(jīng)如下步驟得到：
[0011] a.生產(chǎn)菌株為抗生素溶桿菌（Lysobacter antibioticus) YFY02,保藏號：CGMCC NO. 2403 ；
[0012] b.利用KB培養(yǎng)基培養(yǎng)菌株YFY02兩天后，采用常規(guī)發(fā)酵方法進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，將發(fā) 酵液經(jīng)由乙酸乙酯萃取后進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)獲得次級代謝粗提物；
[0013] c.利用常規(guī)的液相色譜法、S印hadex LH-20凝膠柱層析、紅外光譜（IR)、紫外 光譜（UV)、旋光（polarimeter)、質(zhì)譜（MS)、核磁共振（NMR)、二色光譜（⑶）的波譜技術(shù)， 將次級代謝粗提物進(jìn)行分離、提純及鑒定；液相色譜分析條件為：色譜柱，Diamonsil C18 柱（4.6mmX200mm，5ym);流動相，CH3CN:H20(4:6);檢測波長 235nm;柱溫 40°C，流速 ImL/ min，進(jìn)樣量20 μ L ;
[0014] d.抗生素溶桿菌菌株YFY02的有效次級代謝產(chǎn)物鑒定結(jié)果為：2, 3, 9, 10-tetra methoxy-5，13a-dihydro_6H-isoquino,即鹽酸巴馬汀（Palmatine chloride)，分子式為： C21H20N04,結(jié)構(gòu)式如下：
[0015]
【主權(quán)項】
1. 一種微生物次級代謝產(chǎn)物鹽酸巴馬汀，其特征在于該次級代謝產(chǎn)物鹽酸巴馬汀經(jīng)如 下步驟得到： a. 生產(chǎn)菌株為抗生素溶桿菌（Lysobacterantibioticus)YFY02,保藏號：CGMCC NO. 2403 ； b. 利用KB培養(yǎng)基培養(yǎng)菌株YFY02兩天后，采用常規(guī)發(fā)酵方法進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，將發(fā)酵液 經(jīng)由乙酸乙酯萃取后進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)獲得次級代謝粗提物； c. 利用液相色譜法、SephadexLH-20凝膠柱層析、紅外光譜、紫外光譜、旋光、質(zhì)譜、核 磁共振等波譜技術(shù)，將次級代謝粗提物進(jìn)行分離、提純及鑒定； d. 抗生素溶桿菌菌株YFY02的有效次級代謝產(chǎn)物鑒定結(jié)果為：2, 3, 9, 10-tetrame thoxy-5, 13a-dihydro_6H-isoquino，即鹽酸巴馬?。≒almatinechloride)，分子式為： C21H20N04,化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下所示：
2. 權(quán)利要求1所述的微生物次級代謝產(chǎn)物鹽酸巴馬汀在制備防治水稻白葉枯病菌、條 斑病菌細(xì)菌、十字花科根腫病菌制劑中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種微生物次級代謝產(chǎn)物鹽酸巴馬汀及其應(yīng)用，屬生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域。該次級代謝產(chǎn)物經(jīng)如下步驟得到：a.生產(chǎn)菌株為抗生素溶桿菌YFY02，保藏號：CGMCC？NO.2403；b.利用KB培養(yǎng)基培養(yǎng)菌株YFY02兩天后，采用常規(guī)發(fā)酵方法進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，將發(fā)酵液經(jīng)由乙酸乙酯萃取后進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，獲得代謝粗提物；c.利用液相色譜法、Sephadex？LH-20凝膠柱層析、質(zhì)譜、核磁共振等波譜技術(shù)，將次級代謝粗提物進(jìn)行分離、提純及鑒定；d.經(jīng)鑒定獲得有效次級代謝產(chǎn)物鹽酸巴馬汀。該微生物次級代謝產(chǎn)物鹽酸巴馬汀作在制備防治水稻白葉枯病菌、條斑病菌細(xì)菌、十字花科根腫病菌制劑中的應(yīng)用。本發(fā)明具有對環(huán)境無污染、成本低、防治水稻細(xì)菌病害及十字花科根腫病效果極佳的優(yōu)點。CGMCC NO. 240320080317
【IPC分類】A01N43-90, A01P1-00, C12P17-18, A01P3-00, C12R1-01
【公開號】CN104561179
【申請?zhí)枴緾N201410639916
【發(fā)明人】姬廣海, 周麗洪, 魏蘭芳
【申請人】云南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2014年11月13日