專利名稱:穩(wěn)定的二核苷酸類組合物和方法
概括地說，本發(fā)明涉及穩(wěn)定輔酶類的方法和組合物，特別是涉及穩(wěn)定在溶液中的NADH(煙酰胺腺嘌呤二核苷酸)的方法和組合物。
生化反應(yīng)幾乎普遍地都是通過酶來催化的，每種酶都是一種蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)在底物中能引發(fā)高度特異的化學變化。
對許多種類的酶而言，為了發(fā)揮其功能，需要有稱為輔酶的一類低分子量分子參加催化。一般說來，輔酶的化學變化能均衡底物的化學變化，底物的變化是一個反應(yīng)所期望的結(jié)果，例如，輔酶可以從底物中接受氫離子或向底物給出氫離子。
一些臨床診斷化驗包括氧化還原反應(yīng)，在這些診斷反應(yīng)中都是起輔酶作用的二核苷酸的那些氧化-還原反應(yīng)，這些二核苷酸包括煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸2′磷酸(NADP)和黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)。
二核苷酸是單核苷酸通過磷酸酯電橋連接起來的，單核苷酸是含氮堿和醣的一種磷酸酯，在NAD和NADP中，第一單核苷酸是由堿腺嘌呤和醣核糖而生成的核苷酸的磷酸酯，而第二單核苷酸是由堿煙酰胺和核糖而生成的核苷酸的磷酸酯，在FAD中，由腺嘌呤和核糖的磷酸酯而生成的第一單核苷酸是與堿7，8-二甲基異咯嗪和糖醇D-核糖醇連接的。
在可逆反應(yīng)中，無論是NAD還是NADP都可以從還原的底物(Sr)通過用締合的電子接受氫，作為電子受體或?qū)ρ趸牡孜?So)作為電子給體，即
這些反應(yīng)的有效特征是，這些二核苷酸(即NADH和NADPH)的還原態(tài)能吸收340毫微米波長的光，而氧化態(tài)(即NAD+和NADP+)就不能吸收。因此，在繪出已知酶量的反應(yīng)速率的校準曲線后，由已知量的底物、該酶的已知活性和在340毫微米處的光密度可觀測到的變化速率，就可以求催化其中一個反應(yīng)的酶的未知量，同樣，由該校準曲線，已知活性的酶的已知量和在340毫微米處的光密度已測定出的變化速率可以求出催化其中一個反應(yīng)的酶的底物的量。
雖然以診斷化驗的價值而言，NADH類似其他還原的二核苷酸，在水溶液中是十分不穩(wěn)定的，由于配制NADH的水溶液要比配制較穩(wěn)定的干粉形式的NADH更容易的多、更廉價以及更精確，這樣，就給成套診斷化驗的生產(chǎn)者和使用者帶來了特殊的問題。
一種穩(wěn)定NADH溶液的方法包括把混合物與有機溶劑一起盡可能多地除去水分，在美國專利申請?zhí)?，153，511中，采用一種惰性的吸濕劑和一種有機溶劑來獲得含有小于0.5%水的NADH溶液，然而，可得到的非水溶劑的NADH溶液趨向粘性，要準確而又精確地配制達到這一程度是很困難的。
在另一種方法中，如NAD和NADP的輔酶，在酸性pH下，被穩(wěn)定在一種有機溶劑，最好是如丙三醇或丙二醇的液態(tài)多羥基化合物中，如Modrovich美國專利申請?zhí)?，153，511所述。然而，這些溶液都比較不穩(wěn)定且對實際上要求該還原輔酶有100%穩(wěn)定性的自動化化驗特別不適用。
按照本發(fā)明的一種穩(wěn)定的輔酶組合物包括一種堿性水溶液;一種還原的二核苷酸，優(yōu)選的是在水溶液中，在第一濃度下的NADH或NADPH;一種多羥基烷基溶劑，最好是在水溶液中的丙二醇;和硼酸鹽順式羥基鍵聯(lián)化合物，最好是在水溶液中，在第二濃度下的硼酸或其鹽，該第二濃度約等于或大于第一濃度。
按照本發(fā)明，目前一種優(yōu)選的、穩(wěn)定的輔酶組合物包括pH在約8和約11之間的水溶液;濃度約介于10毫摩爾-500毫摩爾之間的Bicine緩沖液(N-N-二〔2-羥乙基甘氨酸〕);濃度介于約0.001毫摩爾-50毫摩爾之間的NADH;硼酸濃度至少等于NADH的濃度且在約10毫摩爾-500毫摩爾范圍內(nèi);丙二醇濃度介于該水溶液的約20%(體積/體積)-90%(體積/體積)范圍內(nèi)，最優(yōu)選的輔酶組合物是其中NADH濃度為10毫摩爾，硼酸濃度為50毫摩爾，丙二醇濃度為50%(體積/體積)和Bicine緩沖液濃度為200毫摩爾并將pH調(diào)至約10.0。
按照本發(fā)明，一種穩(wěn)定還原的二核苷酸溶液的方法包括以下幾個步驟將第一濃度的還原的二核苷酸溶解在堿性水溶液中，將該水溶液緩沖到pH介于約8.0和約11.0之間;在約等于或大于第一濃度的第二濃度下，使該還原的二核苷酸受到硼酸鹽順式羥基鍵聯(lián)化合物的作用;以及通過用多羥基烷基溶劑配制約20%(體積/體積)-90%(體積/體積)的水溶液，以還原暴露于水中的該還原的二核苷酸。
圖1是在不同的pH值下，在被金屬污染的丙二醇中的NADH的穩(wěn)定性與在未被金屬污染的丙二醇中的NADH的穩(wěn)定性比較的圖示。
圖2是在已經(jīng)過各種純化程序的丙二醇溶液中的NADH的穩(wěn)定性的圖示。
圖3是在各種pH值下，在純丙二醇中的NADH的穩(wěn)定性與在50%(體積/體積)丙二醇/水中的NADH的穩(wěn)定性比較的圖示。
圖4是按照本發(fā)明的穩(wěn)定的二核苷酸溶液最佳pH的測定結(jié)果的圖示。
NADH是在臨床化學中廣泛應(yīng)用在一種輔酶，現(xiàn)行配方通常是按照重新組成的裝填的干配方或干凍配方，且都是不穩(wěn)定的，干配方通過消耗器混合時是易于消耗的試劑，而且干配方的生產(chǎn)包括干凍和干混合的損耗，當必須依賴消耗器適當?shù)刂亟M試劑時，還有由生產(chǎn)者質(zhì)量檢查的損耗。
本發(fā)明包括制備和使用高度穩(wěn)定的NADH水溶液，目前可得到的液體NADH配方被說成是基本上無水的，很難用吸管吸出，與本發(fā)明的配方相比較，這些配方更易消耗、且其生產(chǎn)需要更大的勞動強度。
本發(fā)明提供了一種液態(tài)NADH的溶液，它至少約一年是穩(wěn)定的?？刹捎迷撊芤合到y(tǒng)，其中NADH的氧化被用于分析物濃度的測定。NADH的損失可直接通過在340毫微米處的吸光率的損失而測定出或通過偶聯(lián)的比色系統(tǒng)，熒光分析或電化學分析的損失而測定出。此外，NADH水溶液的應(yīng)用為前面配制的全部有機溶液提供了更大靈活性。本發(fā)明的一個優(yōu)點，在NADH溶液內(nèi)除水能測定NADH的性能，該性能取決于導電溶液的存在。
雖然，NADH被結(jié)合到帶有硼酸鹽鍵聯(lián)基的親和層析柱上，用硼酸鈉溶液洗脫，并在NADH存在時，通過分光光度分析來測定洗脫液〔Maestas等人色層分析法雜志189 225-231(1980)〕，但迄今為止尚沒有人提出NADH在這種洗脫液中特別穩(wěn)定或向這種洗脫液加入一種有機溶劑就會產(chǎn)生一種特別穩(wěn)定的輔酶組合物。
一般說來，按照本發(fā)明，通過用4埃(
)分子篩來處理丙二醇并用硼氫化鈉從該溶液中除去少量的氧化劑來穩(wěn)定本發(fā)明的NADH或其他還原的二核苷酸，該經(jīng)處理的丙二醇與含有硼酸的緩沖液，以1∶1混合并將pH調(diào)至10.0，該NADH或NADH的還原類似物很容易溶解在含水的堿性物質(zhì)中，該溶液可在塑料或玻璃貯藏裝置中貯藏至少約一年，該NADH溶液可以重復(fù)使用多次且在敞開的容器中不會遭受任何損失。
人們認為硼酸鹽陰離子是通過在核糖的2′，3′位的1，2-順式二醇連接來結(jié)合二核苷酸的，由于這個原因，硼酸及其鹽和硼酸及其鹽的衍生物通?？梢苑Q為順式羥基鍵聯(lián)化合物，見Fulton“Boronate Ligands in Biochemical Seapralions-，Amicon Corporation，Scientific Systems Division，Danvers，Massachusetts(1981)。按照本發(fā)明，有使用價值的硼酸的硼酸鹽包括苯基硼酸鹽、烷烴硼酸鹽、2-苯基乙烷硼酸鹽、3-氨基苯硼酸和其它硼酸鹽酯，見本文收入?yún)⒖嫉南铝泄_文獻Fulton，上述;Glad等人色層分析法雜志200，254-260(1980)及Bouriotis等人色層分析法雜志，210，267-278(1981)。雖然鍵聯(lián)的氫和疏水作用也起一部分作用，但是在NAD(H)、NADP(H)、和FAD(H2)中有多過一個容易接近的1，2-順式二醇的存在將有助于牢固地與硼酸鹽結(jié)合，F(xiàn)ulton上述。
盡管不打算使本發(fā)明受任何特殊作用方式的限制，但人們認為硼酸鹽結(jié)合到二核苷酸的這些順式羥基上，通過在相信的不穩(wěn)定的鍵的這些羥基會阻止親核的作用，這種親核作用可引起該分子降解到單核苷酸上。
按照本發(fā)明，采用丙二醇使水和還原吡啶鎓化合物之間的互相作用減至最小，并借此使氧化作用減至最小。人們認為通過降低該溶液的電介質(zhì)常數(shù)可以提供更穩(wěn)定的NADH。
采用Bicine緩沖液可使該溶液的pH保持在約8-11之間，NADH在高pH時，特別是pH8.0以上更穩(wěn)定，Lowry等人生物化學雜志，236 2756-2759(1961)和Wu等人臨床化學，32 314-319(1986)，通常認為高pH能維持二核苷酸的還原態(tài)并防止硼酸鹽的損失，用硼氫化鈉處理約200毫克/升的丙醇過夜，這種處理將使溶液中的氧化作用降到最小值，當反應(yīng)時，就生成了水、硼酸和氫氣，雖然，目前獲優(yōu)選的是硼氫化鈉，但是預(yù)先處理其它的硼氫鹽類，由于硼氫鹽類分解而生成很有用的硼酸。
用4埃分子篩凈化丙二醇，以除去丙二醇中的水、氧化劑，如醛和過氧化物和其他污染物。
在下列實施例中，將更詳細地說明本發(fā)明。在實施例1中，處理罐裝的、疑有金屬污染的丙二醇以改進其性能，并將該性能與瓶裝的丙二醇的性能相比較，也將純丙二醇組成與實施例1中的水溶液比較。按照本發(fā)明的實施例2，提供了在不同的pH值下，NADH組合物的比較以及確定NADH溶液穩(wěn)定性的最佳pH值。在實施例3中，驗證了本發(fā)明目前優(yōu)選實施的貯藏期限。在實施例4和5中，分別敘述了本發(fā)明的NADH組合物與血脲氮(BUN)試劑結(jié)合或與甘油三酯化驗試劑結(jié)合時的穩(wěn)定性。實施例6，涉及用按照本發(fā)明的穩(wěn)定組合物在各種物質(zhì)中的混合試劑來測定血氨。在實施例7中，驗證本發(fā)明的穩(wěn)定組合物在BUN自動化驗中的適用性。在實施例8中，考慮把本發(fā)明的二核苷酸應(yīng)用在丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶化驗中。實施例9敘述了本發(fā)明穩(wěn)定組合物在天冬酶氨基轉(zhuǎn)移酶化驗中的應(yīng)用，實施例10，涉及本發(fā)明NADPH溶液的應(yīng)用。
實施例1為了研究不同pH的影響，比較使用去除各種污染物經(jīng)處理的丙二醇與未經(jīng)處理的丙二醇以及比較使用“純”丙二醇與使用含水混合物的影響，進行了下列諸實驗。
八個不同實驗條件分為三組第一組，未處理的丙二醇;第二組，經(jīng)處理的丙二醇;和第三組，50%丙二醇溶液。
在第一組中，有四個試樣(1)取自金屬罐的丙二醇和22毫克/毫升NADH;(2)pH8.4的瓶裝丙二醇和22毫克/毫升NADH;(3)pH10.3的瓶裝的丙二醇和22毫克/毫升NADH;和(4)pH11.8的瓶裝的丙二醇和22毫克/毫升NADH。
在第二組中，有三個試樣(5)取自上述第一組的編號(2)和硼氫化鈉加上22毫克/毫升NADH一起處理;(6)取自上述第一組的編號(2)和硼氫化鈉和Chelex樹脂5%重量/體積(西格馬藥品公司St.Louis，Missouri)加上22毫克/毫升NADH一起處理;和(7)取自上述第一組的編號(2)只與分子篩3%重量/體積，8-12目(Davison Chemical Division，Baltimore，Maryland)一起處理。
在第三組中，有一個試樣，即(8)，它包含50%瓶裝丙二醇、100毫摩爾Bicine、和pH8.4的50毫摩爾硼酸;以及11毫克/毫升的NADH。
可將NADH溶液用作含有四唑鎓鹽心肌黃酶的反應(yīng)混合物的試樣，在取樣間隔時間結(jié)束時所剩余的NADH的量是與由下列反應(yīng)而生成的甲
-INT的量成比例的。
即在試驗溶液中，所存在的NADH越多，反應(yīng)結(jié)果所生成的甲-INT就越多。
所有NADH試樣均被貯藏在45℃，取樣間隔時間等于圖1和圖2所示的天數(shù)。
該實驗反應(yīng)結(jié)果的根據(jù)，如圖1和圖2所示，已測出罐裝的丙二醇試樣是十分不穩(wěn)定的，也已測出pH8.4時的溶液要比pH10.3時的溶液更不穩(wěn)定，pH10.3的溶液要比PH11.8的溶液更不穩(wěn)定，雖然在這些條件下，NADH溶液，在14天后，至多只有75%穩(wěn)定。也已推斷出，污染的丙二醇和硼氫化鈉以及分子篩一起處理，可以增加污染的丙二醇的穩(wěn)定性，而Chelex樹脂就無所幫助。
實施例2該實驗是研究NADH在不同的pH值下，在50%體積/體積(溶液/水)中的穩(wěn)定性與上述“純”丙二醇的反應(yīng)結(jié)果的比較，采用實施例1中的試驗程序。
圖3所示的反應(yīng)結(jié)果說明，在下同pH值下，當pH為8.3或以下時，如圖3上面三條線所示的“純”丙二醇組合物要比由圖3下面三條線所示的50%溶液更穩(wěn)定。
實施例3優(yōu)選的二核苷酸穩(wěn)定溶液是由丙二醇和4%重量/體積的4埃分子篩一起處理并加入2毫克/毫升硼氫化鈉而配制的，該溶液貯藏在排氣系統(tǒng)中過夜或至少8小時，配制pH9時的200毫摩爾Bicine和100毫摩爾硼酸蒸餾水溶液，該溶液以1∶1與丙二醇混合，以使最終濃度為50%丙二醇、50毫爾硼酸、和100毫摩爾Bicine，用氫氧化鈉將pH調(diào)至10，慢慢地加入約11毫克/毫升的NADH，該溶液在下文稱為二核苷酸溶液，在2-8℃下，貯藏的未混合的該溶液至少約一年是穩(wěn)定的，標準的穩(wěn)定性為在-20℃下，約一年;在2-8℃下，約一年;在室溫下，2個月;在37℃下，1個月;在45℃下，2周，測定臨床分析物時，該溶液可與酶溶液混合。
如圖4所示，優(yōu)選的、二核苷酸溶液的穩(wěn)定性試驗是在45℃高溫至模擬在低溫下延長貯藏的作用而進行的。如圖4所示的結(jié)果指出，在使用前，貯藏的按照本發(fā)明溶液的pH約10為最佳。
按照該實施例，目前較優(yōu)選的二核苷酸溶液的成分包括Bicine(＃B-3876從西格馬藥品公司St.Louis.Missouri得到);NADH(＃N-8129從西格馬藥品公司得到);硼氫化鈉(＃S-9125從酉格馬藥品公司得到);丙二醇(食品級，從美國密歇根州中部Dow藥品公司得到)和硼酸(從Baker藥公司得到)。
實施例4當將實施例3的二核苷酸溶液與20單位/毫升脲酶溶液及與在pH8.3時，在15毫摩爾三羥甲基氨基甲烷緩沖液中的0.2毫克/毫升α-酮戊二酸以1∶80稀釋的谷氨酸脫氫酶混合時，實施例3的二核苷酸溶液可用于測定BUN的試樣，如該溶液含有0.1%疊氮化鈉，該混合試劑在三個月內(nèi)可用于測定BUN濃度，在三個月后，這種混合的化驗試劑系統(tǒng)僅損失原線性權(quán)利要求
的150毫克/升的15%。
實施例5當實施例3的二核苷酸溶液與含有100單位/毫升脂肪酶、5單位/毫升丙三醇激酶、2單位/毫升丙酮酸激酶、1單位/毫升乳酸脫氫酶的緩沖液;0.7毫摩爾磷酸烯醇丙酮酸;0.05毫摩爾三磷酸腺苷(ATP)及10毫摩爾氯化鎂以1∶80混合時，實施例3的二核苷酸溶液可用于測定在試樣中的甘油三酯的濃度，當該溶液混合時，該溶液在一個月內(nèi)可用于測定試樣中的甘油三酯。
實施例6血清的氨測定在毒理學上是重要的，大多數(shù)醫(yī)院每個月都要進行幾次氨試驗，然而，由于對這個試驗要求有時間間隔期限，因此必須有相對穩(wěn)定的試劑，實施例3的二核苷酸可在pH8.5時在三羥甲基氨基甲烷緩沖液中，與含有10單位/毫升谷氨酸脫氫酶和0.5毫克/毫升α-酮戊二酸的無氨溶液以1∶80混合，快速地用于測定血清中的氨水平，未混合的這種溶液至少穩(wěn)定約一年之久，當混合時，混合溶液至少穩(wěn)定1個月。
實施例7BUN也可以通過采用輻射衰減化驗的試劑進行熒光測定，它是本文收入?yún)⒖嫉拿绹鴮＠?，495，293通常所特有的內(nèi)容，該試劑可分為3瓶，這種試劑可由三瓶物質(zhì)來配制，第一瓶含有NADH溶液;第二瓶含有1600單位/毫升脲酶、16毫克/毫升α-酮戊二酸和在pH7時，在磷酸緩沖液中的400單位/毫升谷氨酸脫氫酶以及25%丙三醇加5×10毫克/升熒光素鈉;第三瓶含有0.5毫克/毫升medola藍、thiazoyl藍和pH2.5檸檬酸鹽緩沖劑。
當?shù)谝黄亢偷诙颗cpH7.5的100毫摩爾磷酸緩沖液以1∶1∶40相混合時，血液試樣被水解，產(chǎn)生的氨在谷氨酸中被吸收與在NADH中伴隨的損失相比是減少了，剩余的NADH在第二反應(yīng)中可與用上述緩沖液以1∶40稀釋的第三瓶反應(yīng)催化生成MTT-甲
，所產(chǎn)生的MTT-甲
的量是與在原試樣中BUN的量成比例的，該試劑系統(tǒng)獨特地產(chǎn)生的CVs小于臨床試樣的6%，第一瓶、第二瓶和第三瓶的混合液可用于檢測試樣中的BUN，至少約一年。
實施例8丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)也可以通過用實施例3的二核苷酸溶液、500毫摩爾L-丙氨酸、15毫摩爾α-酮戊二酸，0.10毫摩爾吡哆醛-5-磷酸(任意的)、及600單位/升乳酸脫氫酶來測定，當該混合物混合時，至少穩(wěn)定一個月，可用于定量地測定血清或血漿中的ALT。
實施例9天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)可通過采用實施例3的二核苷酸溶液與240毫摩爾L-天冬氨酸、12毫摩爾α-酮戊二酸、0.10毫摩爾吡哆醛-5-磷酸、420單位/升蘋果酸脫氫酶及600單位/升乳酸脫氫酶混合來測定，該混合物至少穩(wěn)定一個月，可用于定量地測定血清或血漿中的AST。
實施例10在實施例3的二核苷酸溶液中，可用NADPH代替NADH，在診斷試驗中的某些酶可用NADPH代替NADH，由Proteus SP.純化的谷氨酸脫氫酶只能用NADH，這種酶可用于代替實施例2中的谷氨酸脫氫酶用以測定BUN。
雖然在優(yōu)選的實施例中已描述了本發(fā)明，但要理解本發(fā)明的改進和提高，對本領(lǐng)域技術(shù)熟練的人們來說將會存在，如本發(fā)明主要是通過NADH的穩(wěn)定溶液、按照本發(fā)明可被穩(wěn)定的其他二核苷酸溶液來舉例例證的，又如考慮到，按照本發(fā)明，NADPH、還原的3-乙酰吡啶腺膘呤二核苷酸、還原的3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸磷酸酯、還原的硫逐亭酰胺腺嘌呤二核苷酸、還原的硫逐亭酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸酯及還原的煙酰胺次黃嘌呤二核苷酸也可被穩(wěn)定。
同樣，雖然在上述實施例中采用了Bicine緩沖液，但也考慮了采用在優(yōu)選的pH范圍內(nèi)能維持二核苷酸溶液的pKa和具有充分緩沖容量的任何緩沖液，如其他適宜的緩沖液包括Tris〔三羥甲基氨基甲烷〕;Hepes〔4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸〕;三乙醇胺;MOPS〔4-嗎啉丙烷磺酸〕;CHES〔2-環(huán)己基氨基)乙烷磺酸〕;以及CAPS〔3-環(huán)己基氨基-1-丙烷磺酸〕。
按照本發(fā)明，在其他化驗分析中，有用的輔酶組合物包括涉及乳酸脫氫酸丙酮酸化驗分析乳酸〔即LDH(P到L)〕以及脲酸。
此外，本發(fā)明還考慮到采用與水混溶的其他穩(wěn)定的有機溶劑來代替丙二醇，只要這些有機溶劑不與還原的二核苷酸反應(yīng)，形成氫鍵除外。具有2到4個羥基和2到10個碳原子的液態(tài)多羥基化合物是優(yōu)選的，這些優(yōu)選的多羥基化合物包括丙三醇和1，2-丙二醇。
也考慮到按照本發(fā)明的輔酶組合物可以制成濃溶液和稀溶液使用。
因此，如本發(fā)明包含的所有變化，可用以包括在本發(fā)明的權(quán)利要求
范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種穩(wěn)定的輔酶組合物，它包括一種堿性的水溶液；一種在上述水溶液中的在第一濃度下的還原的二核苷酸；一種在上述水溶液中的多羥基烷基溶劑；及在上述水溶液中的在第二濃度下的硼酸鹽順式羥基鍵聯(lián)化合物，上述第二濃度約等于或大于上述第一濃度。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的輔酶組合物，其中所述多羥基烷基溶劑是在第一濃度下，在上述水溶液約20%(體積/體積)至90%(體積/體積)的范圍內(nèi)。
3.根據(jù)權(quán)利要求
2所述的輔酶組合物，其中所述水溶液包括能有效地維持上述水溶液pH大于8.0的緩沖液。
4.根據(jù)權(quán)利要求
3所述的輔酶組合物，其中所述硼酸鹽順式羥基鍵聯(lián)化合物是從一組包括硼酸、硼酸鹽、硼酸的硼酸鹽衍生物以及硼酸的硼酸鹽衍生物的鹽中選擇的。
5.根據(jù)權(quán)利要求
4所述的組合物，其中所述多羥基烷基溶劑是丙二醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求
5所述的組合物，其中所說上述水溶液的pH是在約8和約11之間。
7.根據(jù)權(quán)利要求
6所述的組合物，其中上述第二濃度是在約10和約50毫摩爾之間。
8.根據(jù)權(quán)利要求
7所述的組合物，其中所說上述多羥基烷基溶劑的濃度約等于上述水溶液的50%(體積/體積)。
9.根據(jù)權(quán)利要求
8所述的輔酶組合物，其中所述還原的二核苷酸是從一組包括還原的吡啶二核苷酸和還原的吡啶二核苷酸磷酸鹽中選擇的。
10.根據(jù)權(quán)利要9所述的輔酶組合物，其中所述還原的二核苷酸是NADH，其中所述第一濃度是介于約0.001毫摩爾-50毫摩爾之間。
11.一種穩(wěn)定還原的二核苷酸溶液的方法，包括以不幾個步驟將第一濃度的還原的二核苷酸溶解在一種堿性水溶液中;將水溶液緩沖至pH介于約8.0和約11.0之間;在約等于或大于第一濃度的第二濃度下，使該還原的二核苷酸受到硼酸鹽順式羥基鍵聯(lián)化合物的作用;以及通過用多羥基烷基溶劑配制約20%(體積/體積)-90%(體積/體積)的水溶液，以還原暴露于水中的該還原的二核苷酸。
專利摘要
一種還原的二核苷酸，最好是煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)被穩(wěn)定在含有丙二醇、硼酸和能在pH8-11范圍內(nèi)緩沖的緩沖液的堿性水溶液中，穩(wěn)定液含有50％(體積/體積)以上的水，剩余體積的穩(wěn)定液含有除去了各種氧化劑經(jīng)化學處理的丙二醇。可將該試劑本身或該試劑與鑒定試劑系統(tǒng)一起用于臨床化驗室中。
文檔編號C12Q1/00GK87100939SQ87100939
公開日1987年11月4日 申請日期1987年2月23日
發(fā)明者戴維·A·約斯特 申請人:艾博特公司導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan