本發(fā)明屬于藥物提取，具體涉及兒茶素的制備方法。

背景技術：

1、茶多酚（tea?polyphenols，又名抗氧靈、維多酚）是茶葉中多酚類物質的總稱，被健康及醫(yī)學界譽為“輻射克星”。?其為不定形粉末，易溶于水，可溶于乙醇、甲醇、乙酸乙酯，不溶于氯仿。它的主要成分為黃烷酮類、花色素類、黃酮醇類、花白素類、酚酸及縮酚酸類6類化合物。本發(fā)明涉及到的兒茶素就是茶多酚成分中的黃烷酮類，占茶多酚總量的60%-80%。兒茶素具有抗腫瘤、抗氧化、抗病菌以及保護心腦器官等多種藥理作用，其中，egcg（表沒食子兒茶素沒食子酸酯）抗氧化性最為突出，可通過清除活性氧簇(reactive?oxygenspecies,?ros)、no或與ros反應生成穩(wěn)定化合物的方式有效平衡人體內自由基。隨著對兒茶素研究愈加深入，更多藥理功能被發(fā)現，兒茶素可通過調節(jié)相關酶活性或與相關酶蛋白特異性結合抑制癌細胞增殖，誘導癌細胞調亡，但不同兒茶素單體間存在明顯差異；兒茶素還可預防心腦血管疾病凹以及保護腎臟、肝臟和神經系統(tǒng)等。

2、而兒茶素的制備方法通常比較復雜，純度也很難達到99%以上，因此有必要對設備要求和工藝過程進行簡化，便于實現工業(yè)生產的放大化。

技術實現思路

1、為解決上述問題，本發(fā)明的目的為提供一種兒茶素的制備方法，利用樹脂柱過濾的方法來達到目的，為抗腫瘤的兒茶素制備提供理論依據，該方法所制備的產品操作簡單、純度高且耗能少，通過hplc檢測分析，其純度在99%以上。

2、為了實現上述目標，本發(fā)明采用如下的技術方案：兒茶素的制備方法，包括如下步驟：

3、1）溶解提取物料—茶多酚，并加水稀釋，得稀釋后的料液，此步驟是為了更好地溶清過柱子；

4、2）將步驟1）稀釋后的料液加入hpd-400型號的大孔樹脂柱中，并依次用純化水+20％乙醇和95%乙醇洗脫，純化水和20％乙醇洗脫是為了更多地洗下物料，使收率盡可能增加，95％乙醇洗脫是為了沖洗樹脂柱以備下次使用；

5、3）步驟2）得到的接收液于60℃—65℃減壓濃縮，分別加入二分之一倍體積和四分之一倍體積的乙酸乙酯萃取，萃取時溫度不高于40℃，萃取時進行攪拌；合并萃取液于55-65℃減壓濃縮成膏狀，加入純化水于55-65℃溶清得料液；60—65℃能夠保持料液處于輕微沸騰但不爆沸的狀態(tài)，能夠更快的減壓濃縮出乙酸乙酯，不高于40℃能夠使物料在不破壞活性特性的狀態(tài)下最大限度地溶于乙酸乙酯中，從而萃取成功，加純化水在55—65℃溶清是因為茶多酚在40—80℃溶解性最好；

6、4）將步驟3）所得料液加入hpd-100型號的大孔樹脂柱中，并用15-25％乙醇洗脫；此濃度乙醇能夠使洗脫下的物料雜質最小且收率較大；

7、5）洗脫液于60℃—65℃減壓濃縮，分別加入二分之一倍和四分之一倍體積的乙酸乙酯萃取，萃取時溫度不高于40℃，萃取時進行攪拌；合并萃取液于55-65℃減壓濃縮成膏狀，加入純化水于55-65℃溶清得料液；

8、6）將步驟5）所得料液在4-10℃析晶24-48h以進行結晶，離心并洗滌，得到中間品a；

9、7）將中間品a加入折干重量8-12倍量的15-25％乙醇于60℃—65℃溶清，加入hpd-100型號的大孔樹脂柱中，并用15-25％乙醇洗脫；4—8℃的析晶環(huán)境是最適合茶多酚的析晶條件，茶多酚隨著溫度的降低會析出晶體，但溫度處于零下時物料會凍住影響析晶量；

10、8）將步驟7）所得料液于60℃—65℃減壓濃縮，分別加入二分之一倍和四分之一倍體積的乙酸乙酯萃取，萃取時溫度不高于40℃，萃取時進行攪拌；合并萃取液于60℃—65℃減壓濃縮成膏狀，加入純化水于60℃—65℃溶清；

11、9）將步驟8）所得料液在4-10℃析晶24-48h以進行結晶，離心并洗滌，得到egcg中間品b，所述egcg為表沒食子兒茶素沒食子酸酯；

12、10）將egcg中間品b加純化水溶解后進行重結晶，過濾并洗滌，得到egcg精制品；

13、11）干燥egcg精制品。

14、在萃取時，溫度不高于40℃，是因為較高的溫度使兒茶素尤其是egcg不能溶于乙酸乙酯萃取相而溶于其自身的溶劑相（乙醇水溶液），大幅降低兒茶素尤其是egcg的收率；萃取應在一定的攪拌速度范圍內進行，過低的攪拌速度降低萃取效率，而過高的攪拌速度則致使整個萃取體系乳化（在實驗中觀察到萃取攪拌速度達到85r/min時就觀察到乳化現象），無法實現萃取分離。

15、本發(fā)明中，先后用不同的樹脂柱，用不同樹脂柱純化除了能充分保留egcg以外，還能夠充分保留egcg以外的其他表兒茶素、兒茶素等與egcg相似的結構成分，且先用hpd-400型號的大孔樹脂柱實現初篩，然后用hpd-100型號的大孔樹脂柱實現純化。本發(fā)明中，egcg中間品b和egcg精制品，其實際是兒茶素產品，其他表兒茶素、兒茶素等與egcg相似的結構成分均為兒茶素，都屬于作為藥物的兒茶素的有效成分，也作為最終產品的有效成分，而不計入雜質中；而egcg為兒茶素產品的主要成分，因此命名為egcg中間品b和egcg精制品。

16、本發(fā)明中，在洗脫液減壓濃縮后進行萃取步驟，而后再進行減壓濃縮，加水上柱，作用是更多地萃取出物料且保持egcg精制品高純度。相比不萃取的“減壓濃縮至干而后加水上柱”的方式，本發(fā)明采用這種方法得到高純度的egcg精制品，而且大大縮短了制備時間，從需要12h以上的時間縮短到需要約8h。

17、在優(yōu)選的實施方案中，egcg的兩次結晶結果為：中間品a純度≥90％，中間品b純度≥99％。

18、在優(yōu)選的實施方案中，步驟1）中在溶解提取物料時溫度為55℃—70℃，時間為0.4-0.6h（優(yōu)選為0.5h）。

19、在優(yōu)選的實施方案中，在料液經過hpd-400和hpd-100型號的大孔樹脂柱時，上下流速（指大孔樹脂柱的上部和下部的流速）要保持一致。

20、在優(yōu)選的實施方案中，步驟11）中采用真空干燥，溫度為60℃±5℃，干燥時間為8-10h。

21、在優(yōu)選的實施方案中，步驟3）、5）、8）中，萃取時攪拌速度為50—80r/min。

22、在優(yōu)先的實施方案中，步驟3）、5）、8）中，萃取時溫度為25℃—35℃。

23、進一步地，步驟3）、5）、8）中于60℃—65℃減壓濃縮至原體積的一半。二分之一倍和四分之一倍體積是指減壓濃縮后體積的二分之一倍和四分之一倍。步驟3）、5）、8）中，萃取時，先加入減壓濃縮后料液的二分之一倍體積乙酸乙酯，經萃取分離，得第一萃取液，而后再將剩余溶液（指第一次萃取后除了第一萃取液以外的剩余溶液）中加入減壓濃縮后料液的四分之一倍體積乙酸乙酯，經萃取分離，得到第二萃取液，合并第一萃取液和第二萃取液。

24、步驟3）和步驟10）中優(yōu)選為加入四倍量的純化水；步驟5）和步驟8）中優(yōu)選為加入兩倍量的純化水；步驟7）中優(yōu)選為加入中間品a折干重量10倍量的20%乙醇。

25、與現有技術相比，本發(fā)明所制備的egcg具有以下優(yōu)點：實驗過程中使用的實驗設備簡單；在egcg的制備純化過程中，所采用的原料成本較低且易得；本發(fā)明的技術方案通過對反應參數和純化工藝參數的設計，并在其協(xié)同配合僅需簡單的純化結晶，即可得到較高純度的egcg產品；在現有技術上，對設備要求和工藝過程進行簡化，便于實現工業(yè)放大的生產化。

26、根據本發(fā)明的制備方法所得到的egcg成品雜質較低，成品純度在99％以上，單個雜質含量≤0.1％，殘渣檢測≤0.1％，水分≤5％，符合產品原料藥質量標準。