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一種與SARS-CoV-2受體結(jié)構(gòu)域結(jié)合的小肽的構(gòu)建方法及應(yīng)用

文檔序號:40528860發(fā)布日期:2024-12-31 13:40閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種與sars-cov-2受體結(jié)構(gòu)域結(jié)合的小肽,其特征在于,其序列為:wgpmlwrafdramsaglggw。

2.一種與sars-cov-2受體結(jié)構(gòu)域結(jié)合的小肽,其特征在于,其序列為以下19條中的一種:

3.一種與sars-cov-2受體結(jié)構(gòu)域結(jié)合的小肽的構(gòu)建方法,其特征在于:包括以下步驟:

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種與sars-cov-2受體結(jié)構(gòu)域結(jié)合的小肽的構(gòu)建方法,其特征在于,所述步驟一包括以下過程:選取spike序列、去掉跨膜結(jié)構(gòu)的序列、密碼子優(yōu)化后的dna序列、加酶切位點、送合成序列。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種與sars-cov-2受體結(jié)構(gòu)域結(jié)合的小肽的構(gòu)建方法,其特征在于,所述步驟二包括以下過程:合成序列、片段擴增、酶切回收、連接反應(yīng)、大腸桿菌轉(zhuǎn)化、質(zhì)粒提取。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種與sars-cov-2受體結(jié)構(gòu)域結(jié)合的小肽的構(gòu)建方法,其特征在于,所述片段擴增采用的擴增引物:

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種與sars-cov-2受體結(jié)構(gòu)域結(jié)合的小肽的構(gòu)建方法,其特征在于,所述步驟三包括ah109感受態(tài)制備和bait質(zhì)粒的ah109轉(zhuǎn)化。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種與sars-cov-2受體結(jié)構(gòu)域結(jié)合的小肽的構(gòu)建方法,其特征在于,所述步驟四包括自激活檢測、文庫篩選。

9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種與sars-cov-2受體結(jié)構(gòu)域結(jié)合的小肽的構(gòu)建方法,其特征在于,所述步驟五包括目標片段的pcr擴增、目標片段的pcr產(chǎn)物測序、spike-rbd結(jié)合肽保守序列,所述目標片段的pcr擴增用pgadt7載體的通用引物擴增所有陽性克隆菌株中靶標質(zhì)粒的插入片段,通過瓊脂糖凝膠電泳篩選出符合文庫基因長度的擴增產(chǎn)物分別等量混勻使用磁珠回收方法回收pcr產(chǎn)物中的所有基因片段,所述目標片段的pcr產(chǎn)物測序是將最終獲得的36個陽性克隆用ad-rev和ad-fwd引物擴增后,得到35個pcr片段,然后通過sanger測序獲得34個隨機肽庫序列。

10.一種與sars-cov-2受體結(jié)構(gòu)域結(jié)合的小肽的應(yīng)用,其特征在于:在阻斷病毒與宿主細胞之間的結(jié)合,抑制病毒進入細胞中的應(yīng)用。


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種與SARS?CoV?2受體結(jié)構(gòu)域結(jié)合的小肽的構(gòu)建方法,包括以下步驟:SARS?CoV?2病毒SPIKE蛋白RBD?domain序列的設(shè)計;SARS?CoV?2病毒SPIKE蛋白RBD?domain克隆;酵母雙雜交Bait株系的構(gòu)建;酵母雙雜交篩選;目標片段序列的解析。本發(fā)明的有益效果為:具有高度多樣性;具有高靈敏度;具有高通量;具有可溶性表達;具有可改造性,增強其作為疫苗或藥物的潛力;能夠應(yīng)用于抗病毒藥物研發(fā),具有高親和力和特異性,可以與RBD結(jié)合并阻斷病毒進入細胞;可以作為疫苗的輔助劑,用于增強疫苗的免疫原性和保護效果;可以用于病毒的診斷和檢測,可以與RBD結(jié)合并形成特異性復(fù)合物,在病毒檢測中作為識別和檢測的工具。

技術(shù)研發(fā)人員:程焱,鄭平,王路路,秦源,王伊寧,曹忠霖,孫進
受保護的技術(shù)使用者:福建農(nóng)林大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2024/12/30
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