本發(fā)明涉及降解菌篩選和應(yīng)用,更具體地說是涉及一種解淀粉芽孢桿菌mrs-n7-2及其應(yīng)用。
背景技術(shù):
1、葡萄是我國主栽果樹之一,種植面積廣大,根據(jù)國際葡萄與葡萄酒組織(oiv)發(fā)布的資料,2020年中國的葡萄種植面積約為78.5萬hm2,產(chǎn)生的廢棄葡萄枝條將達(dá)到942萬~1177.5萬t。而堆肥是枝條資源化利用的常用手段,通過把枝條粉碎,堆肥腐熟后制做有機(jī)肥,作為基肥施用。堆肥化主要是堆肥基質(zhì)由微生物活動主導(dǎo)的生理生化過程,也是葡萄枝條實(shí)現(xiàn)無害化、減量化和資源化的有效途徑。堆肥過程是微生物對有機(jī)質(zhì)作用變化的過程,該過程可分為礦質(zhì)化和腐殖化兩部分,礦質(zhì)化即把大分子有機(jī)質(zhì)分解成簡單物質(zhì);腐殖化即通過微生物活動生成更復(fù)雜腐殖質(zhì)。有機(jī)廢棄物經(jīng)過堆肥腐熟后,可作為有機(jī)肥料應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn),改善土壤理化性質(zhì),促進(jìn)植物生長。
2、然而,葡萄枝條中含有大量的纖維素和木質(zhì)素,存在分解困難,腐熟時(shí)間較長等問題。對于葡萄枝條的降解關(guān)鍵在于對纖維素和木質(zhì)素的降解,微生物在枝條堆肥中扮演著重要角色,在葡萄枝條等廢棄物堆肥發(fā)酵中,通過添加微生物菌劑,使其產(chǎn)生纖維素酶和木質(zhì)素降解酶系,能夠促進(jìn)堆肥啟動迅速,進(jìn)程加快,有機(jī)肥質(zhì)量得到顯著提高。所以菌種在葡萄枝條發(fā)酵中具有重要的作用,尤其是尋找一株能夠高效降解纖維素以及木質(zhì)素的微生物菌株。
3、因此,如何提供一種高效降解纖維素的微生物菌株,并將其應(yīng)用于枝條堆肥中是本領(lǐng)域技術(shù)人員亟需解決的問題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、有鑒于此,本發(fā)明提供了一種解淀粉芽孢桿菌mrs-n7-2及其應(yīng)用。
2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
3、一種解淀粉芽孢桿菌mrs-n7-2,所述解淀粉芽孢桿菌mrs-n7-2已于2024年05月08日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心,保藏編號cgmcc?no.30523,保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號;分類命名為解淀粉芽孢桿菌bacillusamyloliquefaciens。
4、優(yōu)選地,所述解淀粉芽孢桿菌mrs-n7-2的16s?rdna序列如seq?idno.1所示。
5、作為與上述技術(shù)方案相同的發(fā)明構(gòu)思,本發(fā)明還請求保護(hù)所述解淀粉芽孢桿菌mrs-n7-2在降解處理纖維素中的應(yīng)用。
6、優(yōu)選地,所述解淀粉芽孢桿菌mrs-n7-2在降解枝條堆肥中纖維素的應(yīng)用。
7、作為與上述技術(shù)方案相同的發(fā)明構(gòu)思,本發(fā)明還請求保護(hù)所述解淀粉芽孢桿菌mrs-n7-2在生產(chǎn)纖維素酶中的應(yīng)用。
8、作為與上述技術(shù)方案相同的發(fā)明構(gòu)思,本發(fā)明還請求保護(hù)一種解淀粉芽孢桿菌mrs-n7-2的發(fā)酵方法,包括以下步驟:
9、(3)將mrs-n7-2菌株劃線接種在lb培養(yǎng)基上,30℃恒溫培養(yǎng)后得到單株菌落;
10、(4)將單株菌落接種到lb液體培養(yǎng)基中,于30℃,180r/min的條件下培養(yǎng)24h,得到培養(yǎng)液;
11、(3)將培養(yǎng)液接種到滅菌的固體培養(yǎng)基中,于30℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。
12、優(yōu)選地,所述步驟(3)中菌株的最適培養(yǎng)基成分為:8%的糖蜜、9%的酵母粉、1.5%的尿素、0.5%的磷酸二氫鉀。
13、作為與上述技術(shù)方案相同的發(fā)明構(gòu)思,本發(fā)明還請求保護(hù)一種微生物菌劑,所述菌劑包含解淀粉芽孢桿菌mrs-n7-2。
14、優(yōu)選地,所述菌劑中還包括保護(hù)劑,所述保護(hù)劑為海藻糖。
15、作為與上述技術(shù)方案相同的發(fā)明構(gòu)思,本發(fā)明還請求保護(hù)由上述菌劑在降解纖維素中的應(yīng)用。
16、經(jīng)由上述的技術(shù)方案可知,與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明達(dá)到的技術(shù)效果為:
17、本發(fā)明從葡萄枝條堆肥中篩選獲得一株解淀粉芽孢桿菌(bacillusamyloliquefaciens)mrs-n7-2,通過16s?rrna基因序列分析對其進(jìn)行種屬鑒定,并通過解纖維素酶活性確定細(xì)菌作用,以及通過篩選最適溫度、ph、不同轉(zhuǎn)接次數(shù)下的活菌數(shù)和酶活性確定了該菌株的特性。該菌株在30℃,ph=7時(shí)酶活性為418.53u/g,轉(zhuǎn)接14次時(shí)活菌數(shù)可達(dá)到1.88×1010cfu/ml,轉(zhuǎn)接3次時(shí)酶活性高達(dá)588.23u/g。
18、解淀粉芽孢桿菌(bacillus?amyloliquefaciens)mrs-n7-2經(jīng)發(fā)酵條件正交優(yōu)化后發(fā)現(xiàn),固體培養(yǎng)基中8%蜜糖、9%酵母、1.5%尿素和0.5%磷酸二氫鉀時(shí)纖維素酶活性最高;并且,當(dāng)添加5%的海藻糖為保護(hù)劑時(shí),解淀粉芽孢桿菌mrs-n7-2的有效活菌數(shù)最高,達(dá)到6.47×1015cfu/g。
1.一種解淀粉芽孢桿菌mrs-n7-2,其特征在于,所述解淀粉芽孢桿菌mrs-n7-2已于2024年05月08日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心,保藏編號cgmccno.30523,保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號;分類命名為解淀粉芽孢桿菌bacillus?amyloliquefaciens。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種解淀粉芽孢桿菌mrs-n7-2,其特征在于,所述解淀粉芽孢桿菌mrs-n7-2的16s?rdna序列如seq?id?no.1所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的解淀粉芽孢桿菌mrs-n7-2在降解處理纖維素中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的解淀粉芽孢桿菌mrs-n7-2在生產(chǎn)纖維素酶中的應(yīng)用。
5.一種解淀粉芽孢桿菌mrs-n7-2的發(fā)酵方法,其特征在于,包括以下步驟:
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種解淀粉芽孢桿菌mrs-n7-2的發(fā)酵方法,其特征在于,所述步驟(3)中菌株的最適培養(yǎng)基成分為:8%的糖蜜、9%的酵母粉、1.5%的尿素、0.5%的磷酸二氫鉀。
7.一種微生物菌劑,其特征在于,所述菌劑包括解淀粉芽孢桿菌mrs-n7-2。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種微生物菌劑,其特征在于,還包括保護(hù)劑,所述保護(hù)劑為海藻糖。
9.根據(jù)權(quán)利要求7-8任一所述微生物菌劑在降解處理纖維素中的應(yīng)用。