本發(fā)明涉及熒光分子探針，具體涉及一種基于香豆素的小分子熒光探針m及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、ph是一個反映細胞健康狀況的關(guān)鍵參數(shù)，在細胞的生長與凋亡、酶的活性、體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)以及受體之間的信號傳輸?shù)戎T多生理與病理過程中發(fā)揮著十分關(guān)鍵的作用。

2、如今，已有諸多的檢測方法用于檢測ph值，例如：電化學(xué)測量法、酸堿指示劑滴定法、電位滴定法、吸收光譜、微電極等，但是這些方法存在許多弊端，需要較高的儀器精度及處理過程還需要專業(yè)人員進行操作。對比之下，小分子熒光探針則具有操作簡便，可實時監(jiān)測等優(yōu)點。

3、香豆素類化合物由于其特殊的結(jié)構(gòu)和光學(xué)性質(zhì)在熒光探針領(lǐng)域受到廣泛關(guān)注與應(yīng)用，現(xiàn)報道的香豆素?zé)晒馓结樣幸韵聨状髢?yōu)點：斯托克位移大、量子產(chǎn)率和光穩(wěn)定性高，水溶性和生物相容性好等。目前報道的香豆素?zé)晒馓结樰^多，但大多存在靈敏度低、選擇性弱、可逆性差等問題，是本領(lǐng)域人員亟需解決的技術(shù)問題。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明針對上述問題，提供了一種基于香豆素的小分子熒光探針m及其制備方法與應(yīng)用，解決了現(xiàn)有技術(shù)中靈敏度低、選擇性弱、可逆性差等問題。

2、為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：

3、本發(fā)明提供了一種基于香豆素的小分子熒光探針m，該探針m為2-2-(2-(4-(7-羥基2-氧代-2氫-苯并吡喃-3-羰基)哌嗪)乙烷)-6-嗎啉-1氫-苯并異喹啉-1,3(2-氫)二酮，其結(jié)構(gòu)式為：

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5、本發(fā)明還提供了一種上述基于香豆素的小分子熒光探針m的制備方法，具體包括如下步驟：

6、s1：合成化合物2：化合物1(6-溴-1，3-二氫-苯并異喹啉-1,3-二酮)和嗎啉在乙二醇甲醚中，于n2保護下回流，待反應(yīng)液冷卻至室溫過夜，晶體析出后，減壓抽濾，干燥后得化合物2(6-嗎啉-1，3-二氫-苯并異喹啉-1,3-二酮)，化合物2的合成路線如下所示：

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8、s2：合成化合物3：化合物2和n-氨基哌啶溶于乙醇中，在惰性氣體保護下回流；待反應(yīng)完成后，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去多余的溶劑，得到粗產(chǎn)物；然后將產(chǎn)物溶于氯仿中，用飽和nacl溶液洗滌3次，收集有機相，再用無水硫酸鈉固體干燥，旋蒸除去溶劑，得到化合物3(6-嗎啉-2-(2-哌嗪乙基)-1氫-苯并異喹啉-1,3(2氫)-二酮)，化合物3的合成路線如下所示：

9、

10、s3：合成探針m：將羧酸香豆素和hbtu溶于無水dmf溶液中，再依次加入化合物3和二異丙胺得混合液；將混合液在惰性氣體的保護下，于室溫下攪拌反應(yīng)；待反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除去大部分溶劑，得到粗產(chǎn)物，隨后用硅膠柱層析法提純得干凈產(chǎn)物探針m，探針m的合成路線如下所示：

11、

12、進一步地，所述步驟s1中，化合物1的質(zhì)量為2.5g，嗎啉的質(zhì)量為1.57g，乙二醇甲醚的體積為100ml，回流時間為24h。

13、進一步地，所述步驟s2中，化合物2的質(zhì)量為2.00g，n-氨基哌啶的質(zhì)量為1.28g，乙醇的體積為30ml，惰性氣體為n2，回流時間為16h。

14、進一步地，所述步驟s3中，羧酸香豆素的質(zhì)量為0.289g，hbtu的質(zhì)量為0.29g，無水dmf溶液的體積為50ml，化合物3的質(zhì)量為0.2g，二異丙胺的體積為0.11ml，惰性氣體為n2，攪拌反應(yīng)時間為18h。

15、一種上述基于香豆素的小分子熒光探針m在ph檢測中的應(yīng)用。

16、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果：

17、本發(fā)明中，探針m是基于香豆素具有特定熒光，其羧基和羥基可與溶液中氫離子結(jié)合，使得熒光強度發(fā)生改變，以此來檢測ph。探針m在ph值為2.0-11.0范圍內(nèi)，對h+有較好的選擇性和靈敏度。在ph值為3.0-6.5范圍內(nèi)，其熒光強度與ph值具有良好的線性關(guān)系，可精確測定ph值。而且，探針m在常見的不同金屬離子和氨基酸存在下，仍具有良好的選擇性和抗干擾性，同時還具備很好的可逆性和時間穩(wěn)定性。本發(fā)明中合成的探針m選擇性和抗干擾性強、靈敏度高、可逆性強，且可以用于ph的檢測。

技術(shù)特征：

1.一種基于香豆素的小分子熒光探針m，其特征在于：所述探針m的結(jié)構(gòu)式為：

2.一種如權(quán)利要求1所述的基于香豆素的小分子熒光探針m的制備方法，其特征在于：具體包括如下步驟：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于香豆素的小分子熒光探針m的制備方法，其特征在于：所述步驟s1中，化合物1的質(zhì)量為2.5g，嗎啉的質(zhì)量為1.57g，乙二醇甲醚的體積為100ml，回流時間為24h。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于香豆素的小分子熒光探針m的制備方法，其特征在于：所述步驟s2中，化合物2的質(zhì)量為2.00g，n-氨基哌啶的質(zhì)量為1.28g，乙醇的體積為30ml，惰性氣體為n2，回流時間為16h。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于香豆素的小分子熒光探針m的制備方法，其特征在于：所述步驟s3中，羧酸香豆素的質(zhì)量為0.289g，hbtu的質(zhì)量為0.29g，無水dmf溶液的體積為50ml，化合物3的質(zhì)量為0.2g，二異丙胺的體積為0.11ml，惰性氣體為n2，攪拌反應(yīng)時間為18h。

6.一種如權(quán)利要求1所述的基于香豆素的小分子熒光探針m在ph檢測中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種基于香豆素的小分子熒光探針M及其制備方法與應(yīng)用，涉及熒光分子探針技術(shù)領(lǐng)域，探針M的制備方法具體包括如下步驟：S1：合成化合物2；S2：合成化合物3；S3：合成探針M：將羧酸香豆素和HBTU溶于無水DMF溶液中，再依次加入化合物3和二異丙胺得混合液；將混合液在惰性氣體的保護下，于室溫下攪拌反應(yīng)；待反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除去大部分溶劑，得到粗產(chǎn)物，隨后用硅膠柱層析法提純得干凈產(chǎn)物探針M。本發(fā)明中合成的探針M選擇性和抗干擾性強、靈敏度高、可逆性強，且可以用于pH的檢測。

技術(shù)研發(fā)人員：羅維芳,王倩,唐于平,沈夢怡,強琪,張拴,郭惠
受保護的技術(shù)使用者：陜西中醫(yī)藥大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/23