1.一種用于核糖體展示的核酸構建物,其特征在于:所述核酸構建物具有從5’至3’的式(i)結(jié)構:
2.根據(jù)權利要求1所述的用于核糖體展示的核酸構建物,所述的標簽蛋白選自下組:6his、8his以及鏈霉親和素stn中的任意一種或多種的組合;優(yōu)選的,所述的標簽蛋白選擇8his或6his;
3.根據(jù)權利要求1所述的用于核糖體展示的核酸構建物,所述前導肽序列具有如seqno.1所示的序列,或者具有與seq?no.1所示氨基酸序列≥80%的一致性且具有與seq?no.1所示的序列相同的活性;
4.根據(jù)權利要求1所述的用于核糖體展示的核酸構建物,所述外源蛋白來自動物、植物、病原體,優(yōu)選來自哺乳動物;更優(yōu)選地,所述外源蛋白的編碼序列來自靈長動物或嚙齒動物,包括人、小鼠、大鼠。
5.根據(jù)權利要求1或4所述的用于核糖體展示的核酸構建物,所述外源蛋白為根據(jù)實際篩選需求確定的功能性蛋白,包括但不限于以下列舉的任意一種或多種組合:熒光素蛋白、或熒光素酶、綠色熒光蛋白、黃色熒光蛋白、氨酰trna合成酶、甘油醛-3磷酸脫氫酶、過氧化氫酶、肌動蛋白、抗體的可變區(qū)域、α-淀粉酶、腸道菌素a、丙型肝炎病毒e2糖蛋白、胰島素前體、干擾素αa、白細胞介素-1β、溶菌酶素、血清白蛋白、單鏈抗體、甲狀腺素運載蛋白、酪氨酸酶、木聚糖酶。
6.根據(jù)權利要求1-4任一項所述的用于核糖體展示的核酸構建物,所述的標簽蛋白序列與外源蛋白的編碼序列間包含一連接序列l(wèi)inker?1;優(yōu)選的所述linker?1具有如seqno.8所示的序列。
7.根據(jù)權利要求1-4任一項或權利要求6所述的用于核糖體展示的核酸構建物,所述核酸構建物還任選地包括以下片段或其組合:啟動子、5'utr序列、起始密碼子;
8.一種載體或載體組合,所述的載體或載體組合含有權利要求1-7任意一項所述的核酸構建物。
9.一種基因工程細胞,其特征在于:所述基因工程細胞的基因組的一個或多個位點整合有權利要求1-7任意一項所述的核酸構建物,或者所述基因工程細胞中含有權利要求8所述的載體或載體組合。
10.一種用于核糖體展示技術的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒中包含的試劑含有下組中的一種或多種:
11.根據(jù)權利要求10所述的核糖體展示技術的試劑盒,所述試劑盒還包括(d)真核體外生物合成體系;所述真核體外生物合成體系優(yōu)選為酵母體外生物合成體系;優(yōu)選克魯維酵母體外生物合成體系;更優(yōu)選為乳酸克魯維酵母體外生物合成體系,另一優(yōu)選地,所述真核體外生物合成體系為體外轉(zhuǎn)錄翻譯偶聯(lián)體系。
12.一種根據(jù)權利要求1-7任一項所述的構建物、權利要求8所述的載體或載體組合、權利要求9所述的基因工程細胞、權利要求10或11所述試劑盒的用途,其特征在于:用于進行核酸展示,以富集篩選得到目的分子和/或所述目的分子的編碼序列。
13.一種在體外進行核糖體展示的方法,其特征在于包括步驟:
14.根據(jù)權利要求13所述的方法,所述體外轉(zhuǎn)錄和翻譯在體外轉(zhuǎn)錄翻譯偶聯(lián)體系中進行,反應條件為:在室溫下,反應時間為40-120min,優(yōu)選在25-30℃條件下反應60min;