本發(fā)明屬于生物，具體涉及一種靶向foxa3的抗體及其應用。

背景技術：

1、foxa3，全稱forkhead?box?a3，該基因編碼dna結合蛋白的叉頭類成員。foxa3是肝細胞核轉錄因子家族成員，在代謝穩(wěn)態(tài)中起關鍵作用，是肝臟特異性轉錄物(如白蛋白和轉甲狀腺素)的轉錄激活劑，與染色質(zhì)相互作用[1]。在將成纖維細胞轉分化為肝樣細胞的過程中，foxa3作為一個重要的轉錄因子參與其中，對肝養(yǎng)細胞藥物代謝能力和蛋白表達能力的獲得必不可少。目前市售foxa3抗體種類較少，尚不能滿足市場需求。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術問題是為了克服現(xiàn)有技術缺少靈敏度高、特異性好的穩(wěn)定foxa3抗體的技術問題，提供了一種靶向foxa3的抗體及其應用。本發(fā)明的抗foxa3單克隆抗體，可用于體外檢測細胞中foxa3蛋白的表達水平，特異性良好，抗體濃度和純度高，可用于體外分析蛋白或組織中foxa3蛋白的表達水平，具有良好的穩(wěn)定性。

2、本發(fā)明通過以下技術方案解決上述技術問題。

3、本發(fā)明的第一方面提供一種靶向foxa3的抗體或其抗原結合片段，所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含氨基酸序列分別如seqid?no:1、seq?id?no:2和mdy所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；所述輕鏈可變區(qū)包含氨基酸序列分別如seq?id?no:5、seq?id?no:6和seq?id?no:7所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。

4、本發(fā)明一些實施方案中，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:3所示或為與seq?id?no:3具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列同一性的氨基酸序列。

5、本發(fā)明一些實施方案中，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:8所示或為與seq?id?no:8具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列同一性的氨基酸序列。

6、本發(fā)明一些實施方案中，所述抗體為全長抗體、fab、fab’、f(ab’)2、scfv、fv或多特異性抗體。

7、本發(fā)明中，當所述抗體為全長抗體時，所述全長抗體的重鏈恒定區(qū)源自人源抗體的重鏈或其變體，所述全長抗體的輕鏈恒定區(qū)源自人源抗體的κ鏈或者λ鏈或其變體。

8、本發(fā)明一些具體實施方案中，所述重鏈恒定區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:23所示或為與seq?id?no:23具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列同一性的氨基酸序列。

9、本發(fā)明一些具體實施方案中，所述輕鏈恒定區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:25所示或為與seq?id?no:25具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列同一性的氨基酸序列。

10、本發(fā)明的第二方面提供一種分離的核酸，所述核酸編碼如第一方面所述的抗體或其抗原結合片段。

11、本發(fā)明一些具體實施方案中，編碼所述hcdr1的核苷酸序列如seq?id?no:10所示，編碼所述hcdr2的核苷酸序列如seq?id?no:11所示，編碼所述hcdr3的核苷酸序列為atggactac。

12、本發(fā)明一些具體實施方案中，編碼所述lcdr1的核苷酸序列如seq?id?no:14所示，編碼所述lcdr2的核苷酸序列如seq?id?no:15所示，編碼所述lcdr3的核苷酸序列如seq?idno:16所示。

13、本發(fā)明一些實例中，編碼所述重鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no:12所示。

14、本發(fā)明一些實例中，編碼所述輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no:17所示。

15、本發(fā)明的第三方面提供一種重組表達載體，所述重組表達載體包含如第二方面所述的核酸。

16、本發(fā)明一些實施方案中，所述重組表達載體為質(zhì)粒、粘粒、噬菌體或病毒載體。

17、本發(fā)明一些具體實施方案中，所述病毒載體為逆轉錄病毒載體、慢病毒載體、腺病毒載體或腺相關病毒載體。

18、本發(fā)明的第四方面提供一種細胞，所述細胞中包含如第三方面所述的重組表達載體或如第二方面所述的核酸；或表達如第一方面所述的抗體或其抗原結合片段。

19、本發(fā)明一些實施方案中，所述細胞為原核細胞或真核細胞。

20、本發(fā)明一些較佳實施方案中，所述細胞選自酵母細胞、哺乳動物細胞或適用于制備抗體或其抗原結合片段的其它細胞；所述哺乳動物細胞例如為hek293細胞。

21、本發(fā)明的第五方面提供一種制備靶向foxa3的抗體或其抗原結合片段的方法，所述方法包括培養(yǎng)如第四方面所述的細胞，從培養(yǎng)物中獲得靶向foxa3的抗體或其抗原結合片段。

22、本發(fā)明的第六方面提供一種試劑盒，所述試劑盒包括如第一方面所述的抗體或其抗原結合片段。

23、本發(fā)明一些實施方案中，所述試劑盒還包括檢測所述抗體或其抗原結合片段與抗原結合的試劑。

24、本發(fā)明的第七方面提供一種檢測foxa3的方法，所述方法包括將如第一方面所述的抗體或其抗原結合片段與待測樣本進行接觸的步驟。

25、本發(fā)明一些實施方案中，所述方法為非診斷目的的，例如在實驗室進行抗體檢測、免疫學檢測方法的開發(fā)。

26、本發(fā)明的第八方面提供一種如第一方面所述的抗體或其抗原結合片段、如第二方面所述的核酸、如第三方面所述的重組表達載體或者如第四方面所述的細胞在制備foxa3檢測試劑中的應用。

27、在符合本領域常識的基礎上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實例。

28、本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。

29、本發(fā)明的積極進步效果在于：

30、本發(fā)明的抗foxa3單克隆抗體靈敏度高，特異性良好，抗體濃度和純度高，可用于體外分析蛋白或組織中foxa3蛋白的表達水平，具有良好的穩(wěn)定性，有廣泛的使用前景。

技術特征：

1.一種靶向foxa3的抗體或其抗原結合片段，其特征在于，所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含氨基酸序列分別如seq?id?no:1、seqid?no:2和mdy所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；所述輕鏈可變區(qū)包含氨基酸序列分別如seq?idno:5、seq?id?no:6和seq?id?no:7所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。

2.如權利要求1所述的抗體或其抗原結合片段，其特征在于，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:3所示或為與seq?id?no:3具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列同一性的氨基酸序列；和/或，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:8所示或為與seq?id?no:8具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列同一性的氨基酸序列。

3.如權利要求2所述的抗體或其抗原結合片段，其特征在于，所述抗體為全長抗體、fab、fab’、f(ab’)2、scfv、fv或多特異性抗體；

4.一種分離的核酸，其特征在于，所述核酸編碼如權利要求1～3任一項所述的抗體或其抗原結合片段；

5.一種重組表達載體，其特征在于，所述重組表達載體包含如權利要求4所述的核酸；

6.一種細胞，其特征在于，所述細胞中包含如權利要求5所述的重組表達載體或如權利要求4所述的核酸；或表達如權利要求1～3任一項所述的抗體或其抗原結合片段；

7.一種制備靶向foxa3的抗體或其抗原結合片段的方法，其特征在于，所述方法包括培養(yǎng)如權利要求6所述的細胞，從培養(yǎng)物中獲得靶向foxa3的抗體或其抗原結合片段。

8.一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括如權利要求1～3任一項所述的抗體或其抗原結合片段；

9.一種檢測foxa3的方法，其特征在于，所述方法包括將如權利要求1～3任一項所述的抗體或其抗原結合片段與待測樣本進行接觸的步驟；

10.一種如權利要求1～3任一項所述的抗體或其抗原結合片段、如權利要求4所述的核酸、如權利要求5所述的重組表達載體或者如權利要求6所述的細胞在制備foxa3檢測試劑中的應用。

技術總結
本發(fā)明公開了一種靶向FOXA3的抗體及其應用。所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO:1、SEQ?ID?NO:2和MDY所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；所述輕鏈可變區(qū)包含氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO:5、SEQ?ID?NO:6和SEQ?ID?NO:7所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。本發(fā)明的抗FOXA3單克隆抗體，可用于體外檢測細胞中FOXA3蛋白的表達水平，特異性良好，抗體濃度和純度高，可用于體外分析蛋白或組織中FOXA3蛋白的表達水平，具有良好的穩(wěn)定性。

技術研發(fā)人員：田娥,楊晨曦,安曉輝,熊子龍
受保護的技術使用者：上海微知卓生物科技有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/12/30