背景技術：

1、tar?dna結合蛋白43(tdp-43)是一種多功能的rna/dna結合蛋白，參與rna相關代謝。tdp-43沉積物的失調(diào)作為運動神經(jīng)元疾?。杭∥s側索硬化(als)和額顳葉變性(ftld)患者大腦和脊髓中的包涵體(prasad等人，front.mol.neurosci.,2019)。

2、tdp-43主要位于細胞核中，但也因其某些功能穿梭于細胞質(zhì)中(ayala等人，2008)。在疾病中，諸如在als和ftld中，細胞質(zhì)tdp-43濃度的增加導致細胞質(zhì)包涵體形成(neumann等人，2006；winton等人，2008a)。細胞質(zhì)錯誤定位可能與核耗竭有關，導致tdp-43功能減少或丟失。存在導致tdp-43靶rna異常剪接的tdp-43突變，從而導致廣泛的剪接畸變(參見例如arnold等人,pnas?2013?110?e736–745和yang等人,pnas.u.s.a.111,e1121–e1129)。

3、klim等人報告說，stmn2在tdp-43功能降低時的丟失是由于stmn2剪接改變所致，并建議將恢復stmn2作為als的治療策略。

4、tdp-43耗竭在一系列疾病中表現(xiàn)出來，稱為tdp-43病理，并包括諸如以下的疾病：肌萎縮性側索硬化癥(als)、額顳葉變性(ftld)、進行性核上性麻痹(psp)、原發(fā)性側索硬化癥、進行性肌萎縮、阿爾茨海默病、帕金森病、自閉癥、海馬硬化癡呆、唐氏綜合征、亨廷頓病、諸如脊髓小腦性共濟失調(diào)3型的多聚谷氨酰胺疾病、肌病和慢性創(chuàng)傷性腦病。

5、tollervey等人，nature?neuroscience?2010,452-458報告了健康腦組織和ftld患者腦組織中tdp-43的rna靶標和位置依賴性剪接調(diào)節(jié)的特征。大多數(shù)tdp-43結合位點映射到內(nèi)含子、長鏈非編碼rna(lncrna)和基因間轉錄本，這些位點富含ug豐富的基序。tdp-43中的保守rnp片段參與結合具有ug重復的tar?dna序列和rna序列(ayala等人，j.mol.biol.2005；348:575–588)。細胞中的tdp-43耗竭，諸如tdp病理學中的tdp-43耗竭與tdp-43與tdp-43?rna靶標的rna結合丟失相關。

6、人rna中的tdp-43結合位點可從rna結合蛋白和相關基序的數(shù)據(jù)庫在線獲得——參見https://attract.cnic.es/results/e9f29380-8921-406e-84a8-27ce9b9398b4#。公開的某些表征的人rna?tdp-43結合位點包括以下rna序列：gugaauga、guugugc、ugugugugugug(seq?id?no?85)、gaaugg、ugugugug、gaauga、ugugug、guuguuc和guuuugc。

7、melamed等人報告了過早多腺苷酸化介導的stmn2丟失作為tdp-43神經(jīng)變性的標志。wo2019/241648公開了用于增加stmn2表達的2'o-甲氧基乙基aso。

8、本發(fā)明人已經(jīng)鑒定出以下的反義寡核苷酸：其與tdp-43核酸結合位點互補，諸如完全互補，并且能夠恢復在顯示tdp-43功能丟失的細胞中失調(diào)的tdp-43?rna轉錄本靶標的加工和調(diào)節(jié)，例如rna轉錄本的表達和剪接，從而提供了一種在tdp-43耗竭的細胞(即tdp-43功能丟失的細胞)中恢復tdp-43功能的新方法，以及一種用于治療tdp-43病理的新的治療方法。

9、發(fā)明人已經(jīng)確定，通過修飾可以降低反義寡核苷酸的毒性，同時保持或改進效力。

10、發(fā)明目的

11、本發(fā)明涉及與前體mrna轉錄本上的保守tdp-43結合位點互補的反義寡核苷酸，其能夠在tdp-43耗竭的細胞中的多種獨立mrna的加工中恢復rna結合蛋白功能。反義寡核苷酸的連續(xù)核苷酸序列包含一個或多個2'-o-甲氧基乙基-rna(2'-moe)核苷并且反義寡核苷酸附接至至少一個膽固醇部分。

12、本發(fā)明提供了用于在功能性tdp-43水平降低的細胞中恢復rna結合蛋白功能(諸如tdp-43功能或tdp-43樣功能)的反義寡核苷酸。

13、本發(fā)明提供了能夠在一種或多種tdp-43靶rna的rna加工或表達中恢復tdp-43的核功能的寡核苷酸，從而至少部分恢復或增強一種或多種tdp-43靶rna的功能表型。此類寡核苷酸化合物在本文中稱為rna結合蛋白模擬物，諸如tdp-43模擬物。

14、本發(fā)明提供了與tdp-43結合位點互補的反義寡核苷酸，以及它們在治療(諸如用于治療tdp-43病理)中的用途。

15、本發(fā)明進一步提供了與多個rna轉錄本(即從不同遺傳基因座轉錄的rna轉錄本)上的tdp-43結合位點互補的反義寡核苷酸。多個rna轉錄本可以例如獨立地選自由前體mrna、mrna和lncrna組成的組。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供了一種長度為8個至40個核苷酸的反義寡核苷酸，其包含長度為至少8個核苷酸的連續(xù)核苷酸序列，該連續(xù)核苷酸序列與選自由以下項組成的組的序列互補：(5'–3')(ug)n、(gu)n，其中n為4至20、ugugugug、ugugugugu、ugugugugug(seq?id?no?95)、ugugugugugu(seq?id?no?84)、ugugugugugug(seq?id?no?85)、ugugugugugugu(seq?id?no86)、gugugugu、gugugugug、gugugugugu(seq?id?no?87)、gugugugugug(seq?id?no?88)、gugugugugugu(seq?id?no?89)、gugugugugugug(seq?id?no?90)和gugaauga，其中該連續(xù)核苷酸序列包含一個或多個2'-o-甲氧基乙基-rna(2'-moe)核苷并且其中該反義寡核苷酸附接至至少一個膽固醇部分。

2、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列可以包含1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個、15個、16個、17個、18個、19個、20個、21個、22個、23個、24個、25個、26個、27個、28個、29個、30個、31個或32個、33個、34個、35個、36個、37個、38個、39個或40個2'-o-甲氧基乙基-rna(2'-moe)核苷。

3、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列可以包含至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％的2'-o-甲氧基乙基-rna(2'-moe)核苷。

4、在一些實施例中，連續(xù)核苷酸序列或其連續(xù)序列的核苷中的全部均可以為2'-o-甲氧基乙基-rna(2'-moe)核苷。

5、在一些實施例中，反義寡核苷酸可以附接至兩個或更多個或者三個或更多個膽固醇部分。在一些實施例中，反義寡核苷酸可以附接至一個膽固醇部分。在一些實施例中，反義寡核苷酸可以附接至兩個膽固醇部分。在一些實施例中，反義寡核苷酸可以附接至三個膽固醇部分。

6、在一些實施例中，一個或多個膽固醇部分可以共價附接至反義寡核苷酸。

7、在一些實施例中，膽固醇部分可以選自包括以下項的組：5'-膽固醇-teg-ce亞磷酰胺、5'-膽固醇-ce亞磷酰胺或膽甾醇基-teg-ce亞磷酰胺。在一些實施例中，膽固醇部分可以為選自包括以下項的組的組合：5'-膽固醇-teg-ce亞磷酰胺、5'-膽固醇-ce亞磷酰胺或膽甾醇基-teg-ce亞磷酰胺。在一些實施例中，膽固醇部分為5'-膽固醇-teg-ce亞磷酰胺。在一些實施例中，膽固醇部分中的所有都為5'-膽固醇-teg-ce亞磷酰胺。

8、在存在多于一個膽固醇部分的實施例中，獨立地選擇每個膽固醇部分，使得反義寡核苷酸內(nèi)的膽固醇部分可以相同或可以不相同。

9、在一些實施例中，接頭可以位于反義寡核苷酸與膽固醇部分之間。在一些實施例中，接頭可以位于反義寡核苷酸與膽固醇部分中的每一者之間。在一些實施例中，接頭可以位于膽固醇部分中的每一者之間。

10、在一些實施例中，接頭可以為可裂解接頭。

11、在一些實施例中，接頭可以為生理上不穩(wěn)定的接頭，諸如s1核酸酶敏感的接頭。

12、在一些實施例中，烷基基團接頭位于反義寡核苷酸與一個或多個膽固醇部分之間。

13、在一些實施例中，生理上不穩(wěn)定的接頭是具有三個連續(xù)磷酸二酯鍵的磷酸二酯連接的胞苷-腺苷二核苷酸。

14、在一些實施例中，c3烷基基團是位于反義寡核苷酸與一個或多個膽固醇部分之間的接頭。在一些實施例中，c3烷基基團位于反義寡核苷酸與另一接頭之間。

15、在一些實施例中，c6烷基基團是位于反義寡核苷酸與一個或多個膽固醇部分之間的接頭。在一些實施例中，c6烷基基團位于反義寡核苷酸與另一接頭之間。

16、在一些實施例中，c12烷基基團是位于反義寡核苷酸與一個或多個膽固醇部分之間的接頭。在一些實施例中，c12烷基基團位于反義寡核苷酸與另一接頭之間。

17、在一些實施例中，teg基團是位于反義寡核苷酸與一個或多個膽固醇部分之間的接頭。在一些實施例中，另一teg基團位于反義寡核苷酸與另一接頭之間。

18、在一些實施例中，heg基團是位于反義寡核苷酸與一個或多個膽固醇部分之間的接頭。在一些實施例中，heg基團位于反義寡核苷酸與另一接頭之間。

19、在一些實施例中，反義寡核苷酸可以含有在膽固醇部分與接頭之間的硫代磷酸酯(ps)或磷酸二酯(po)鍵。

20、在另一個實施例中，反義寡核苷酸可以含有在接頭與反義寡核苷酸之間的硫代磷酸酯(ps)或磷酸二酯(po)鍵。

21、在另一個實施例中，反義寡核苷酸可以含有在膽固醇部分與接頭之間的硫代磷酸酯(ps)或磷酸二酯(po)鍵，以及在接頭與反義寡核苷酸之間的硫代磷酸酯(ps)或磷酸二酯(po)鍵。例如，在一些實施例中，反義寡核苷酸可以具有以下結構：“膽固醇-po/ps-接頭-po/ps-寡核苷酸”，其中po/ps基團位于接頭與膽固醇部分之間，并且另一po/ps基團位于接頭與反義寡核苷酸之間。這里，硫代磷酸酯(ps)或磷酸二酯(po)鍵可以獨立地選擇，使得兩者都是硫代磷酸酯(ps)鍵，兩者都是磷酸二酯(po)鍵，或者一個是硫代磷酸酯(ps)鍵而另一個是磷酸二酯(po)鍵。

22、在一些實施例中，反義寡核苷酸可以具有如下所示的結構：

23、

24、在一些實施例中，反義寡核苷酸可以具有如下所示的結構：

25、

26、在一些實施例中，反義寡核苷酸可以具有如下所示的結構：

27、

28、在一些實施例中，反義寡核苷酸可以具有如下所示的結構：

29、

30、如背景部分所述，功能性tdp-43主要是一種核定位蛋白，可能存在于細胞質(zhì)中。然而，tdp-43在細胞質(zhì)中的聚集，即所謂的細胞質(zhì)包涵體(也稱為異常tdp-43)，與無功能性的tdp-43有關，這與例如在大量前體mrna的加工中的核tdp-43功能的丟失有關。因此，在細胞質(zhì)包涵體中表達tdp-43的細胞被認為是tdp-43耗竭的。

31、反義寡核苷酸可以是分離的反義寡核苷酸或純化的寡核苷酸。本發(fā)明的反義寡核苷酸是制造的(人造的)反義寡核苷酸。

32、功能表型可以例如是由功能性tdp-43(即非異常tdp-43，通常是核tdp-43)調(diào)節(jié)或依賴于功能性tdp-43和/或其保真度取決于功能性tdp-43的rna加工事件。因此，可以通過評定由功能性tdp-43調(diào)節(jié)或依賴于功能性tdp-43的rna加工事件(如例如本文展示，參考stmn2、camk2b,kalrn、actl6b和unc13a?rna加工)的保真度來評估使用本發(fā)明的反義寡核苷酸對tdp-43功能的增強。

33、有利地，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含至少12個或至少13個連續(xù)核苷酸，其與序列ugugugugugug(seq?id?no?85)或gugugugugugu(seq?id?no?89)或ugugugugugugu(seq?id?no?86)或gugugugugugug(seq?id?no?90)互補，諸如完全互補。

34、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含至少14個連續(xù)核苷酸，其與序列ugugugugugugug(seq?id?no?91)或gugugugugugugu(seq?id?no?92)互補，諸如完全互補。

35、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含至少18個連續(xù)核苷酸，其與序列(ug)n或(gu)n(其中n為6至20的整數(shù)，諸如7至9)互補，諸如完全互補。

36、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含至少18個連續(xù)核苷酸，其與序列ugugugugugugugugug(seq?id?no?93)或gugugugugugugugugu(seq?id?no?94)互補，諸如完全互補。

37、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自cacacac、cacacaca、cacacacac、acacacac或acacacaca的序列。

38、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?1的序列。

39、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?2的序列。

40、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?3的序列。

41、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?4的序列。

42、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?5的序列。

43、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?6的序列。

44、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?7的序列。

45、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?8的序列。

46、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?9的序列。

47、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?10的序列。

48、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?11的序列。

49、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?12的序列。

50、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?13的序列。

51、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?14的序列。

52、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?15。

53、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?16。

54、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?17。

55、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?18。

56、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?19。

57、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?20。

58、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?21。

59、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?22。

60、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?23。

61、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?24。

62、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?25。

63、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?26。

64、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?27。

65、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?28。

66、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?29。

67、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?30。

68、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?31。

69、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?32。

70、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?33。

71、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?34。

72、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?35。

73、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?36。

74、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?37。

75、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?38。

76、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?39。

77、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?40。

78、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?41。

79、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?42。

80、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?43。

81、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?44。

82、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?45。

83、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?46。

84、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?47。

85、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?48。

86、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?49。

87、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?50。

88、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?51。

89、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?52。

90、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?53。

91、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?54。

92、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?55。

93、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?56。

94、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?57。

95、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?58。

96、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?59。

97、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?60。

98、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?61。

99、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?62。

100、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?63。

101、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?64。

102、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?65。

103、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?66。

104、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?67。

105、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?68。

106、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?69。

107、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?70。

108、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?71。

109、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?72。

110、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?73。

111、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?74。

112、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?75。

113、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?76。

114、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?77。

115、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?78。

116、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?79。

117、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?80。

118、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?81。

119、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?82。

120、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列seqid?no?83。

121、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含如表1展示的序列或化合物。

122、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?118-126。

123、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?118。

124、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?119。

125、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?120。

126、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?121。

127、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?122。

128、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?123。

129、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?124。

130、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?125。

131、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含seq?idno?126。

132、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列(ca)n或(ac)n，其中n為整數(shù)1至20，諸如2至20、3至20、4至20、5至20、6至20、7至20、8至20、9至20、10至20、11至20、12至20、13至20、14至20、15至20、16至20、17至20、18至20、19至20、1至15、1至10、1至5、5至15、5至10或10至15。

133、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含序列(ca)n或(ac)n，其中n為整數(shù)，諸如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。

134、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由以下項組成的組的序列：seq?id?no?1-83或seq?id?no?118-126。

135、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列由選自由以下項組成的組的序列組成：seq?id?no?1-83或seq?id?no?118-126。

136、連續(xù)核苷酸序列可以包含seq?id?no?1-83或seq?id?no?118-126中任一者的8個或更多個連續(xù)核苷酸的片段。

137、連續(xù)核苷酸序列可以由seq?id?no?1-83或seq?id?no?118-126中任一者的8個或更多個連續(xù)核苷酸的片段組成。

138、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少8個連續(xù)核苷酸的長度。

139、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少9個連續(xù)核苷酸的長度。

140、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少10個連續(xù)核苷酸的長度。

141、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少11個連續(xù)核苷酸的長度。

142、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少12個連續(xù)核苷酸的長度。

143、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少13個連續(xù)核苷酸的長度。

144、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少14個連續(xù)核苷酸的長度。

145、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少15個連續(xù)核苷酸的長度。

146、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少16個連續(xù)核苷酸的長度。

147、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少17個連續(xù)核苷酸的長度。

148、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少18個連續(xù)核苷酸的長度。

149、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少19個連續(xù)核苷酸的長度。

150、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少20個連續(xù)核苷酸的長度。

151、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少21個連續(xù)核苷酸的長度。

152、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少22個連續(xù)核苷酸的長度。

153、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少23個連續(xù)核苷酸的長度。

154、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少24個連續(xù)核苷酸的長度。

155、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少25個連續(xù)核苷酸的長度。

156、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少26個連續(xù)核苷酸的長度。

157、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少27個連續(xù)核苷酸的長度。

158、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少28個連續(xù)核苷酸的長度。

159、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少29個連續(xù)核苷酸的長度。

160、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少30個連續(xù)核苷酸的長度。

161、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少31個連續(xù)核苷酸的長度。

162、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少32個連續(xù)核苷酸的長度。

163、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少33個連續(xù)核苷酸的長度。

164、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少34個連續(xù)核苷酸的長度。

165、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少35個連續(xù)核苷酸的長度。

166、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少36個連續(xù)核苷酸的長度。

167、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少37個連續(xù)核苷酸的長度。

168、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少38個連續(xù)核苷酸的長度。

169、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少39個連續(xù)核苷酸的長度。

170、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列具有至少40個連續(xù)核苷酸的長度。

171、在一些實施例中，反義寡核苷酸可以由連續(xù)核苷酸序列組成。

172、在一些實施例中，反義寡核苷酸可以為連續(xù)核苷酸序列。

173、在一些實施例中，連續(xù)核苷酸序列可以與靶序列至少75％互補。

174、在一些實施例中，連續(xù)核苷酸序列可以與靶序列至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％互補。

175、在一些實施例中，連續(xù)核苷酸序列可以包含與靶序列的1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個或更多個錯配。

176、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸具有低于約-10δg，諸如低于約-15δg，諸如低于約-17δg的反義寡核苷酸對互補靶rna的吉布斯自由能。

177、反義寡核苷酸可能能夠在tdp-43耗竭的或表達異常tdp-43蛋白的細胞中恢復一種或多種tdp-43靶rna的功能表型。

178、有利地，本發(fā)明的反義寡核苷酸(其包含含有一個或多個2'-o-甲氧基乙基-rna(2'-moe)核苷的連續(xù)核苷酸序列)可以進一步包含一個或多個另外或可替代的經(jīng)修飾的核苷。換句話說，本發(fā)明的反義寡核苷酸包含一個或多個2'-moe核苷并且可以進一步包含一個或多個另外或可替代的經(jīng)修飾的核苷。

179、有利地，本發(fā)明的反義寡核苷酸可以包含lna核苷。連續(xù)核苷酸序列中的lna核苷酸更有利。在一些實施例中，本發(fā)明的反義寡核苷酸可包含lna核苷和非lna核苷，諸如dna核苷。在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列可包含lna核苷和dna核苷。在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列的所有核苷獨立地選自lna和dna核苷。有利地，存在于反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列中的連續(xù)dna核苷的長度受到限制，以防止導致靶rna降解的rna酶h募集。合適地，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列不包含超過四個連續(xù)dna核苷，更有利地不包含超過3個連續(xù)dna核苷。

180、當使用時，有利地，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸能夠調(diào)節(jié)兩種或更多種tdp-43靶前體mrna(靶rna)的剪接。舉例來說，兩種或更多種tdp-43靶rna可以獨立地選自由以下項組成的組：stmn2前體mrna、camk2b前體mrna、kalrn前體mrna、actl6b前體mrna和unc13a前體mrna。

181、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸能夠調(diào)節(jié)一種或多種tdp-43靶前體mrna(靶rna)的剪接。

182、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸能夠調(diào)節(jié)兩種或更多種tdp-43靶前體mrna(靶rna)的剪接。

183、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸能夠調(diào)節(jié)三種或更多種tdp-43靶前體mrna(靶rna)的剪接。

184、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸能夠調(diào)節(jié)四種或更多種tdp-43靶前體mrna(靶rna)的剪接。

185、在一些實施例中，根據(jù)本發(fā)明的反義寡核苷酸能夠調(diào)節(jié)一種、兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種tdp-43靶前體mrna(靶rna)的剪接。

186、在一些實施例中，當施用于tdp-43耗竭的細胞時，反義寡核苷酸能夠增強選自由以下項組成的組的至少一種(諸如兩種或更多種)前體mrna的前體mrna剪接的保真度：stmn2前體mrna、camk2b前體mrna、kalrn前體mrna、actl6b前體mrna和unc13a前體mrna。在一些實施例中，兩種或更多種經(jīng)選擇的前體mrna選自由以下項組成的組：stmn2和camk2b；stmn2和kalrn；stmn2和actl6b；以及stmn2和unc13a。

187、在一些實施例中，當施用于tdp-43耗竭的細胞時，反義寡核苷酸能夠增強選自由以下項組成的組的兩種或更多種前體mrna的前體mrna剪接的保真度：stmn2前體mrna、camk2b前體mrna、kalrn前體mrna、actl6b前體mrna和unc13a前體mrna。在一些實施例中，兩種或更多種經(jīng)選擇的前體mrna選自由以下項組成的組：stmn2和camk2b；stmn2和kalrn；stmn2和actl6b；stmn2和unc13a。

188、在一些實施例中，當施用于tdp-43耗竭的細胞時，反義寡核苷酸能夠增強選自由以下項組成的組的三種或更多種前體mrna的前體mrna剪接的保真度：stmn2前體mrna、camk2b前體mrna、kalrn前體mrna、actl6b前體mrna和unc13a前體mrna。

189、在一些實施例中，當施用于tdp-43耗竭的細胞時，反義寡核苷酸能夠增強以下項的前體mrna剪接的保真度：stmn2前體mrna、camk2b前體mrna、kalrn前體mrna、actl6b前體mrna和unc13a前體mrna。

190、在一些實施例中，當施用于表達stmn2前體mrna的tdp-43耗竭的細胞時，與具有連續(xù)外顯子1/外顯子2結點的野生型stmn2成熟mrna相比，反義寡核苷酸能夠降低在外顯子1和外顯子2之間包含隱蔽外顯子(ce1)的stmn2成熟mrna的比例。

191、在一些實施例中，當施用于表達camk2b前體mrna的tdp-43耗竭的細胞時，反義寡核苷酸能夠降低camk2b?mrna轉錄本中異常外顯子包涵體的水平。

192、在一些實施例中，當施用于表達kalrn前體mrna的tdp-43耗竭的細胞時，反義寡核苷酸能夠降低kalrn?mrna轉錄本中異常外顯子包涵體的水平。

193、在一些實施例中，當施用于表達actl6b前體mrna的tdp-43耗竭的細胞時，反義寡核苷酸能夠降低actl6b?mrna轉錄本中異常外顯子包涵體的水平。

194、在一些實施例中，當施用于表達unc13a前體mrna的tdp-43耗竭的細胞時，反義寡核苷酸能夠降低unc13a?mrna轉錄本中異常外顯子包涵體的水平。

195、在一些實施例中，反義寡核苷酸能夠糾正tdp-43耗竭的細胞中stmn2、camk2b、kalrn、actl6b和unc13a前體mrna中的兩者或更多者的異常剪接。

196、在一些實施例中，反義寡核苷酸不包含超過3個或超過4個連續(xù)dna核苷的區(qū)域。

197、在一些實施例中，反義寡核苷酸不能介導rna酶h切割。

198、在一些實施例中，反義寡核苷酸為嗎啉代反義寡核苷酸。

199、在一些實施例中，包含一個或多個2'-moe核苷的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列可以進一步包含一個或多個親和力增強的核苷，諸如2'糖修飾的核苷，該核苷增強反義寡核苷酸與互補rna分子之間的結合親和力，例如且有利地，以提供較低的吉布斯自由能，諸如低于-10的吉布斯自由能，諸如低于-15的吉布斯自由能。

200、在一些實施例中，包含一個或多個2'-moe核苷的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列可以進一步包含一個或多個經(jīng)修飾的核苷，諸如獨立地選自由以下項組成的組的2'糖修飾的核苷：2'-o-烷基-rna；2'-o-甲基rna(2'-ome)；2'-烷氧基-rna；2'-氨基-dna；2'-氟-rna；2'-氟-dna；阿糖核酸(ana)；2'-氟-ana；鎖核酸(lna)或其組合。

201、在一些實施例中，2'糖修飾的核苷可以是親和力增強的2'糖修飾的核苷。

202、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列中的1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個、15個、16個、17個、18個、19個、20個、21個、22個、23個、24個、25個、26個、27個、28個、29個、30個、31個或32個、33個、34個、35個、36個、37個、38個、39個或40個核苷是2'-o-甲氧基乙基-rna(2'-moe)核苷，其任選地通過一個或多個硫代磷酸酯核苷間鍵連接。

203、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列中的至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％的核苷是2'-o-甲氧基乙基-rna(2'-moe)核苷，任選地通過一個或多個硫代磷酸酯核苷間鍵連接。

204、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列中的所有核苷都是2'-o-甲氧基乙基-rna(2'-moe)核苷，其任選地通過一個或多個硫代磷酸酯核苷間鍵連接。

205、在一些實施例中，包含一個或多個2'-moe核苷的反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列可以進一步包含2'-o-甲基核苷。

206、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列內(nèi)的進一步經(jīng)修飾的核苷中的一者或多者是鎖核酸核苷(lna)，諸如選自由受限的乙基核苷(cet)或β-d-氧基-lna組成的組的lna核苷。

207、在一些實施例中，反義寡核苷酸的連續(xù)核苷酸序列包含核苷lna核苷和dna核苷，其任選地通過硫代磷酸酯核苷間鍵合連接。

208、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列為混聚物或全聚物。

209、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1-83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少8個連續(xù)核苷酸。

210、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少9個連續(xù)核苷酸。

211、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少10個連續(xù)核苷酸。

212、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少11個連續(xù)核苷酸。

213、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少12個連續(xù)核苷酸。

214、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少13個連續(xù)核苷酸。

215、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少14個連續(xù)核苷酸。

216、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少15個連續(xù)核苷酸。

217、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少16個連續(xù)核苷酸。

218、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少17個連續(xù)核苷酸。

219、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少18個連續(xù)核苷酸。

220、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少19個連續(xù)核苷酸。

221、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少20個連續(xù)核苷酸。

222、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少21個連續(xù)核苷酸。

223、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少22個連續(xù)核苷酸。

224、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少23個連續(xù)核苷酸。

225、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少24個連續(xù)核苷酸。

226、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少25個連續(xù)核苷酸。

227、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少26個連續(xù)核苷酸。

228、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少27個連續(xù)核苷酸。

229、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少28個連續(xù)核苷酸。

230、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少29個連續(xù)核苷酸。

231、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少30個連續(xù)核苷酸。

232、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少31個連續(xù)核苷酸。

233、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少32個連續(xù)核苷酸。

234、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少33個連續(xù)核苷酸。

235、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少34個連續(xù)核苷酸。

236、在一些實施例中，反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列包含選自由seq?id?no?1–83或seq?id?no?118-126組成的組的核堿基序列或其至少35個連續(xù)核苷酸。

237、在一些實施例中，存在于反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列中的胞嘧啶堿基獨立地選自由以下項組成的組：胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶。

238、在一些實施例中，存在于反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列中的胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。

239、在一些實施例中，存在于反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列中的lna胞嘧啶堿基是lna?5-甲基胞嘧啶。

240、在一些實施例中，存在于反義寡核苷酸或其連續(xù)核苷酸序列中的lna胞嘧啶堿基是lna?5-甲基胞嘧啶，并且dna胞嘧啶堿基是胞嘧啶。

241、有利地，位于連續(xù)核苷酸序列上的核苷之間的一個或多個核苷間鍵合被修飾。在一些實施例中，位于連續(xù)核苷酸序列上的核苷之間的至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、至少約95％或約100％的核苷間鍵合是經(jīng)修飾的。

242、在一些實施例中，一個或多個或所有經(jīng)修飾的核苷間鍵合是硫代磷酸酯鍵合。在一些實施例中，連續(xù)核苷酸序列內(nèi)的一個或多個或所有的鍵合是硫代磷酸酯鍵合。

243、在一些實施例中，連續(xù)核苷酸序列中存在的所有核苷間鍵合均為硫代磷酸酯核苷間鍵合。

244、在一些實施例中，反義寡核苷酸中存在的所有核苷間鍵合均為硫代磷酸酯核苷間鍵合。

245、在一些實施例中，附接至至少一個膽固醇部分的本發(fā)明的反義寡核苷酸可以進一步包含一個或多個綴合物基團。換言之，本發(fā)明的反義寡核苷酸附接至至少一個膽固醇部分，并且可以進一步包含一個或多個不是膽固醇部分的另外的綴合物基團。

246、在一些實施例中，本發(fā)明的反義寡核苷酸可以共價附接至至少一個綴合物部分。

247、在一些實施例中，本發(fā)明的反義寡核苷酸可以呈藥用鹽的形式。在一些實施例中，鹽可以為鈉鹽或鉀鹽或銨鹽。

248、本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含本發(fā)明的反義寡核苷酸以及藥用的稀釋劑、溶劑、載體、鹽和/或輔助劑。

249、本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含本發(fā)明的反義寡核苷酸以及藥用的稀釋劑或溶劑和陽離子。陽離子可以例如是鈉陽離子或鉀陽離子。稀釋劑/溶劑可以是水。

250、本發(fā)明提供了一種用于增強表達異常或耗竭水平的tdp-43的細胞中的tdp-43功能的方法，諸如體內(nèi)或體外方法，所述方法包括以有效量向所述細胞施用本發(fā)明的反義寡核苷酸或本發(fā)明的組合物。

251、本發(fā)明提供了一種用于治療或預防受試者的tdp-43病理狀況的方法，該方法包括向患有或易患tdp-43病理狀況的受試者施用治療或預防有效量的本發(fā)明的反義寡核苷酸或本發(fā)明的組合物。

252、本發(fā)明提供了一種本發(fā)明的反義寡核苷酸或本發(fā)明的組合物，其用于作為藥物使用。

253、本發(fā)明提供了一種本發(fā)明的反義寡核苷酸或本發(fā)明的組合物，其使用于治療tdp-43病理狀況。

254、本發(fā)明提供了本發(fā)明的反義寡核苷酸或本發(fā)明的組合物用于制備藥物的用途，該藥物用于治療或預防tdp-43病理狀況。

255、本發(fā)明提供了本發(fā)明的方法、根據(jù)本發(fā)明使用的反義寡核苷酸或藥物組合物或者根據(jù)本發(fā)明的用途，其中tdp-43病理狀況是選自由以下項組成的組的神經(jīng)系統(tǒng)疾患：肌萎縮性側索硬化癥(als)、額顳葉變性(ftld)、進行性核上性麻痹(psp)、原發(fā)性側索硬化癥、進行性肌萎縮、阿爾茨海默病、帕金森病、自閉癥、海馬硬化癡呆、唐氏綜合征、亨廷頓病、諸如脊髓小腦性共濟失調(diào)3型的多聚谷氨酰胺疾病、肌病和慢性創(chuàng)傷性腦病。

256、在一些實施例中，tdp-43病理是選自由肌萎縮側索硬化(als)、額顳葉變性(ftld)組成的組的神經(jīng)系統(tǒng)疾患。

257、本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含本發(fā)明的反義寡核苷酸以及藥用溶劑，諸如磷酸鹽緩沖鹽水。

258、在一些實施例中，本發(fā)明的反義寡核苷酸可以呈固體粉末的形式，諸如呈凍干粉末的形式。

259、通常，本發(fā)明的反義寡核苷酸包含長度為至少8個或至少10個核苷酸(長度為諸如10-32個、15-32個、20-32個、21-32個、22-32個、23-32個、24-32個、25-32個、26-32個、27-32個或10-20個核苷酸)的連續(xù)核苷酸序列，其中連續(xù)核苷酸序列與tdp-43?rna結合序列至少75％互補，諸如至少90％互補或完全互補。在一些實施例中，反義寡核苷酸的所有核苷形成連續(xù)核苷酸序列。

260、在一些實施例中，本發(fā)明的反義寡核苷酸能夠調(diào)節(jié)至少兩個人前體mrna的剪接。例如，人stmn2、camk2b、kalrn、actl6b和unc13a前體mrna的剪接取決于tdp-43結合，如實例中所示。

261、在另一方面，本發(fā)明提供了用于治療或預防神經(jīng)變性疾病諸如肌萎縮側索硬化(als)的方法，該方法包括向患有或易患該疾病的受試者施用治療或預防有效量的本發(fā)明的寡核苷酸。

262、在另一方面，本發(fā)明的寡核苷酸或組合物用于治療或預防神經(jīng)變性疾病，如以tdp-43病理或tdp-43從細胞核錯誤定位為特征的神經(jīng)變性疾患，諸如肌萎縮側索硬化(als)。

263、序列表

264、隨本技術一起提交的序列表通過引用特此并入。