本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領域，特別涉及一種胰酶的制備方法。
背景技術：
：胰酶系各國藥典收載的助消化藥，是從動物胰臟中提取的多種酶的混合物，主要成分為胰蛋白酶、胰脂肪酶和胰淀粉酶。胰酶主要用于消化不良，食欲不振及肝、胰腺疾病引起的消化障礙，同時也適用于先天性胰功能不全、腹部手術和外傷胰腺切除導致的胰功能不全。此外，胰酶中含有多種活性物質，可以作為基礎原料從中提取多種生化藥品，如胰激肽酶原，彈性蛋白酶，門冬酰胺酶，糜蛋白酶，羧肽酶等，具有重大的工業(yè)價值。目前胰酶主要采用原料絞碎處理、激活、低濃度有機溶劑提取、沉淀、脫脂、干燥、粉碎等步驟進行生產，如專利號為cn103215246b、名稱為胰酶的新生產工藝的發(fā)明專利，其生產工藝為：(1)自然解凍原料：胰臟和十二指腸；(2)刨片、磨漿：將解凍后的原料用刨胰機刨片后用膠體磨磨漿；(3)激活、提?。合蚰{中加入原料重量0.2％～0.5％的cacl2作為激活劑激活，同時加入原料重量1～2倍的10％～30％丙酮水溶液，攪拌均勻，放入提取罐內提??；(4)分離、過濾：將激活完畢的提取液用分離機分離、過濾，收集胰乳濾液；(5)沉淀：用預冷至-7℃～0℃的丙酮沉淀胰乳濾液，得沉淀液；(6)壓榨：上述沉淀液裝袋用螺旋千斤頂壓榨至袋內殘留物呈塊狀為止，得胰酶塊狀物；(7)脫脂：向盛裝胰酶塊狀物的容器中加入預冷至0℃～5℃的原丙酮脫脂，脫脂結束后瀝干脫脂丙酮；重復脫脂過程2～3次，完畢后，瀝干丙酮并離心脫水，得胰酶塊；(8)制粒、干燥：將胰酶塊制粒；(9)干燥；干燥條件為：維持真空泵壓力500～750mmhg，溫度10～35℃，干燥6～10小時；(10)粉碎：將干燥的胰酶用除塵粉碎機粉碎成胰酶粉。（1）該專利直接使用解凍的新鮮胰臟或十二指腸為原料，在刨片磨漿后即進行激活、提取，此時的胰臟漿料含有大量的水分，直接對其進行激活和提取需要大量的激活劑和提取溶劑，增加生產成本；（2）由于未經過脫脂，所以胰臟漿料中含有大量的油脂，此時直接加入激活劑和提取溶液進行提取，油脂的存在不利于激活劑和提取液的滲透，影響提取效率，更不利于低溫提取保護胰酶活性；（3）使用有機溶劑丙酮作為提取溶劑以及沉淀胰酶時的沉淀溶劑，而且該專利中還是在已經提取到胰酶之后才使用有機溶劑（丙酮）對其進行脫脂，使得有機溶劑消耗大，有機溶劑會對胰酶的活性造成不可避免的影響，且廢液量大；（4）該專利中胰酶產品的主要指標組分胰蛋白酶活性在僅3500u/g左右，胰淀粉酶活性僅100000u/g左右，胰脂肪酶活性僅42000u/g左右，活性較低。技術實現(xiàn)要素：發(fā)明目的：針對現(xiàn)有技術中存在的問題，本發(fā)明提供一種胰酶的制備方法，胰酶產品收率較高，大大降低溶劑消耗，制備出的胰酶中胰蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶的活性較高。技術方案：本發(fā)明提供了一種胰酶的制備方法，包括以下步驟：（1）鮮凍原料：鮮凍胰臟和/或十二指腸；（2）刨片凍干：將鮮凍原料刨片，用凍干機干燥至原料中的水分小于8%；（3）磨粉：將凍干后的原料磨成凍干粉；（4）脫脂：將所述凍干粉脫脂、濾干得脫脂凍干粉；（5）激活、提?。合蛩雒撝瑑龈煞壑屑尤爰せ顒┖吞崛∪軇?，在0~5℃下攪拌提取3~6h，得提取液；（6）沉淀：將所述提取液在0~5℃下冷凍離心后取上清液，鹽析所述上清液后分離得胰酶沉淀；（7）壓榨干燥：將所述胰酶沉淀壓榨至呈塊狀得胰酶塊；（8）將所述胰酶塊干燥后粉碎得胰酶粉。優(yōu)選地，在所述（4）中，將所述凍干粉脫脂的過程中，是在所述凍干粉中加入預冷至0～5℃、重量為所述脫脂凍干粉重量的1~2倍的丙酮對所述凍干粉進行脫脂。優(yōu)選地，所述脫脂的次數(shù)為2~3次。優(yōu)選地，在所述（5）中，所述激活劑為固體cacl2優(yōu)選地，所述固體cacl2的重量占所述脫脂凍干粉重量的0.2～0.5%。優(yōu)選地，所述提取溶劑為ph值為3~4的乙酸水溶液。優(yōu)選地，所述乙酸水溶液與所述脫脂凍干粉的體積重量比為1~2：1。優(yōu)選地，在所述（6）中，鹽析時使用的鹽為固體硫酸銨。優(yōu)選地，鹽析時加入所述固體硫酸銨直至所述固體硫酸銨在所述上清液中的飽和度大于或等于0.75。優(yōu)選地，在所述（8）中，干燥所述胰酶塊的干燥條件為：壓力500～750mmhg，溫度35～45℃，時間12～24h。有益效果：（1）本方法中先將胰臟或十二指腸原料經鮮凍、凍干、粉碎后制備成凍干粉，然后直接對凍干粉進行脫脂、激活、提取、沉淀得胰酶，由于胰臟凍干粉相對于新鮮胰臟來說，水分非常低（低于8%），對其進行脫脂后再激活、提取能夠有效提高激活劑和提取溶劑在其中的滲透性，增加激活率和提取率，還能大幅度減少激活劑和提取溶劑的用量。（2）本方法中是先對凍干粉進行脫脂去除其中的油脂后，再對其進行激活和提取，由于沒有油脂的阻礙作用，低溫下（0~5℃）激活劑和提取溶劑能夠發(fā)揮更好地滲透性，進一步提高激活率和提取率，而且，在脫脂后再進行激活和提取，能夠從根源上避免提取后的胰酶脫脂時脫脂溶液（有機溶劑丙酮）對胰酶活性的影響。（3）本方法采用乙酸水溶液作為提取溶劑，并且是在低溫下（0~5℃）提取，乙酸相對于有機溶劑丙酮來說，滲透性較弱，能夠有效降低對胰酶活性的影響，而且，雖然乙酸的滲透性較低，但是并不會影響本方法中乙酸對胰酶的提取率，因為在本方法中是先脫脂后低溫提取，脫脂后由于沒有油脂的阻礙作用，再進行提取能夠有效增加乙酸的滲透性，所以與
背景技術：
中提到的專利相比，提取率并沒有因為我們使用了滲透性較弱的乙酸提取溶劑而降低。（4）本方法中使用鹽析方法沉淀出胰酶沉淀，減少有機溶劑的使用，大大降低成本。（5）實驗數(shù)據(jù)證明，本方法制備胰酶的收率達14%（與
背景技術：
中的專利相同），但是其中主要指標的組分：胰蛋白酶活性達4000u/g左右，胰淀粉酶活性達120000u/g左右，胰脂肪酶活性達50000u/g左右，可見，本方法制備的胰酶活性較高，遠遠超過普通胰酶標準。具體實施方式下面結合具體實施例對本發(fā)明進行詳細的介紹。實施方式1：（1）鮮凍原料：取冷凍胰臟5kg；（2）刨片凍干：將鮮凍胰臟用刨胰機刨片，用凍干機干燥至水分小于8%；（3）磨粉：將凍干后的胰臟磨成胰臟凍干粉；（4）脫脂：在胰臟凍干粉中加入預冷0~5℃的丙酮1l，脫脂2次，脫脂后濾干得脫脂胰臟凍干粉。（5）激活、提?。合蛎撝扰K凍干粉中加入20g的cacl2作為激活劑，同時加入5lph為3的乙酸水溶液作為提取溶劑，在0～5℃下攪拌提取6h，得提取液；（6）沉淀：提取液在0~5℃冷凍離心后取上清液，并向上清液中加入2.5kg固體硫酸銨進行鹽析（此時固體硫酸鈉在上清液中的飽和度大于0.75）后分離得胰酶沉淀；（7）壓榨干燥：將上述胰酶沉淀裝袋用螺旋千斤頂壓榨至袋內胰酶沉淀呈塊狀為止，得胰酶塊；（8）粉碎：將胰酶塊干燥后用除塵粉碎機粉碎，得胰酶粉700g，干燥條件為：維持真空泵壓力750mmhg，溫度35℃，時間24h。實施方式2：（1）鮮凍原料：取冷凍十二指腸5kg；（2）刨片凍干：將鮮凍十二指腸用刨胰機刨片，用凍干機干燥至水分小于8%；（3）磨粉：將凍干后的十二指腸磨成十二指腸凍干粉；（4）脫脂：在十二指腸凍干粉中加入預冷0~5℃的丙酮2l，脫脂3次，脫脂后濾干得脫脂十二指腸凍干粉。（5）激活、提?。合蛎撌改c凍干粉中加入25g的cacl2作為激活劑，同時加入6lph為3.5的乙酸水溶液作為提取溶劑，在0～5℃下攪拌提取4h，得提取液；（6）沉淀：提取液在0~5℃冷凍離心后取上清液，并向上清液中加入3kg固體硫酸銨進行鹽析（此時固體硫酸鈉在上清液中的飽和度大于0.75）后分離得胰酶沉淀；（7）壓榨干燥：將上述胰酶沉淀裝袋用螺旋千斤頂壓榨至袋內胰酶沉淀呈塊狀為止，得胰酶塊；（8）粉碎：將胰酶塊干燥后用除塵粉碎機粉碎，得胰酶粉690g，干燥條件為：維持真空泵壓力550mmhg，溫度45℃，時間12h。實施方式3：（1）鮮凍原料：取冷凍胰臟和十二指腸共5kg；（2）刨片凍干：將鮮凍胰臟和十二指腸用刨胰機刨片，用凍干機干燥至水分小于8%；（3）磨粉：將凍干后的胰臟和十二指腸磨成凍干粉；（4）脫脂：在凍干粉中加入預冷0~5℃的丙酮1.5l，脫脂3次，脫脂后濾干得脫脂凍干粉。（5）激活、提?。合蛎撝瑑龈煞壑屑尤?0g的cacl2作為激活劑，同時加入4lph為4的乙酸水溶液作為提取溶劑，在0～5℃下攪拌提取5h，得提取液；（6）沉淀：提取液在0~5℃冷凍離心后取上清液，并向上清液中加入2kg固體硫酸銨進行鹽析（此時固體硫酸鈉在上清液中的飽和度大于0.75）后分離得胰酶沉淀；（7）壓榨干燥：將上述胰酶沉淀液裝袋用螺旋千斤頂壓榨至袋內胰酶沉淀呈塊狀為止，得胰酶塊；（8）粉碎：將胰酶塊干燥后用除塵粉碎機粉碎，得胰酶粉680g，干燥條件為：維持真空泵壓力600mmhg，溫度40℃，時間16h。對比例：
背景技術：
中提到的專利中的方法作為對比例。將實施方式1至3以及對比例中得到的胰酶中各主要指標組分的活性以及胰酶的收率進行比較，如表1。表1胰蛋白酶胰淀粉酶胰脂肪酶胰酶收率實施方式14000u/g119800u/g48000u/g13.8%實施方式23900u/g115000u/g50000u/g14%實施方式33950u/g120000u/g49000u/g13.9%對比例3500u/g100000u/g42000u/g14%從表1可以看出，本發(fā)明中的胰酶制備方法制備胰酶的平均收率為13.9%，基本與對比例相同，但是本發(fā)明的方法制備的胰酶中胰蛋白酶的活性比對比例提高了12.9%，胰淀粉酶的活性比對比例提高了18.3%，胰脂肪酶的活性比對比例提高了16.7%，可見，本發(fā)明中的方法制備出的胰酶活性較高，遠遠超過普通胰酶標準。上述實施方式只為說明本發(fā)明的技術構思及特點，其目的在于讓熟悉此項技術的人能夠了解本發(fā)明的內容并據(jù)以實施，并不能以此限制本發(fā)明的保護范圍。凡根據(jù)本發(fā)明精神實質所做的等效變換或修飾，都應涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內。當前第1頁12