本發(fā)明屬于應(yīng)用生物技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及一種裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養(yǎng)物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
野生裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)子實體生長周期可長達20～30年，只有在原始森林中才能采集到，資源相當(dāng)匱乏，價格也相當(dāng)昂貴。
據(jù)文獻記載，裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)子實體的熱水提取物對小白鼠肉瘤180的抑制率為96.7％，可用于治療各種腫瘤、肝病、心臟病、中風(fēng)偏癱、胃病、胃潰瘍、食欲不振等疾病，是一種名貴的藥用真菌。
被稱為抗癌之王的桑黃，根據(jù)現(xiàn)代分子生物學(xué)鑒定其實與裂蹄木層孔菌是同一物種(phellinuslinteus)不同的中文名字。
盡管裂蹄木層孔菌或桑黃(phellinuslinteus)具有很強的抗腫瘤活性，但未見提及有降血壓、降血糖的功能，此外，由于裂蹄木層孔菌資源匱乏，其用于科學(xué)研究也受到局限。
常規(guī)的藥用真菌培養(yǎng)，一般采用木屑作培養(yǎng)基培養(yǎng)出子實體，再用子實體提取其有效成分，其分離純化程序非常繁瑣。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
基于此，本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供了一種裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養(yǎng)物及其制備方法和應(yīng)用。
為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采取了以下技術(shù)方案：
一種用于培養(yǎng)裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養(yǎng)物的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基含有100～1000g/l的小麥胚芽以及10～100g/l的黃豆粉。
在其中一些實施例中，所述培養(yǎng)基含有100～500g/l的小麥胚芽以及10～50g/l的黃豆粉。
在其中一些實施例中，所述培養(yǎng)基含有300～400g/l的小麥胚芽以及20～30g/l的黃豆粉。
在其中一些實施例中，所述培養(yǎng)基含有400g/l的小麥胚芽以及20g/l的黃豆粉。
在其中一些實施例中，所述培養(yǎng)基含有300g/l的小麥胚芽以及30g/l的黃豆粉。
本發(fā)明還提供了一種裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養(yǎng)物的制備方法，采用上述培養(yǎng)基，包括以下步驟：
1)將裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)保藏菌種接入至滅菌的培養(yǎng)基中，所述固體培養(yǎng)基含有100～1000g/l的小麥胚芽以及10～100g/l的黃豆粉；
2)接種后，置于恒溫培養(yǎng)箱，25～28℃培養(yǎng)10～30天，即得。
在其中一些實施例中，步驟1)中所述裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)分離自野生的裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)子實體中，并經(jīng)dna鑒定確認。
在其中一些實施例中，步驟1)中所述滅菌條件為：蒸汽高壓鍋，1kg/cm2，消毒30分鐘。
在其中一些實施例中，步驟2)中所述培養(yǎng)條件為：25～28℃培養(yǎng)30天。
本發(fā)明還提供了上述制備方法制備得到的裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養(yǎng)物。
本發(fā)明還提供了上述裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養(yǎng)物在預(yù)防和治療高血壓和高血糖方面的應(yīng)用。
一種防治高血壓和高血糖的組合物，所述組合物含有上述裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養(yǎng)物。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：
1、本發(fā)明全部采用可食用的原料(麥胚芽、黃豆粉)，經(jīng)裂蹄木層孔菌生物轉(zhuǎn)化成可調(diào)節(jié)人體血壓和血糖的活性物質(zhì)，裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養(yǎng)物可以根據(jù)需要無限放大，解決了關(guān)鍵原料來源的問題；
2、本發(fā)明的固體培養(yǎng)物可直接加工成同時具有降血壓和降血糖的功能的口服液，省略繁瑣的分離純化程序，大大簡化了生產(chǎn)工藝、節(jié)省了生產(chǎn)成本；
3、本發(fā)明的制備方法工藝簡單、成本低廉，有利于在低收入的高血壓、高血糖的人群中推廣。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例進一步敘述本發(fā)明，本發(fā)明未述及之處適用于現(xiàn)有技術(shù)。下面給出本發(fā)明的具體實施例，但實施例僅是為了進一步詳細敘述本說明，并不限制本發(fā)明的權(quán)利要求。以下實施例中所使用的試劑或原料，如無特殊說明，均來源于市售。
本發(fā)明實施例中所使用的裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)是從野生的裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)子實體中分離并經(jīng)dna鑒定確認的菌種，具體分離方法如下：
采集寄生在樺樹、桑樹上，外觀形態(tài)與文獻描述的裂蹄木層孔菌相似的未纖維化的子實體，表面消毒后用手術(shù)剪刀剪開成綠豆粒大小的顆粒。用小鑷子把剪碎的裂蹄木層孔菌子實體放在培養(yǎng)基(含400g/l的小麥胚芽以及20g/l的黃豆粉)上，28*c培養(yǎng)10天。
培養(yǎng)好的菌絲體送專業(yè)的dna公司作菌種鑒定。dna分子鑒定結(jié)果與genbank數(shù)據(jù)庫記載的phellinuslinteus相似度大于99％。
實施例1
本實施例的一種裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養(yǎng)物的制備方法，包括以下步驟：
1)在100克水中添加了50克麥胚芽和1克黃豆粉，裝于廣口玻璃瓶，紗布封口，置于蒸汽高壓鍋，1kg/cm2，消毒30分鐘，得到培養(yǎng)基；
2)將裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)斜面菌種接入至滅菌的培養(yǎng)基中；
3)接種后，置于恒溫培養(yǎng)箱，25～28℃培養(yǎng)30天，即得。
實施例2
本實施例的一種裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養(yǎng)物的制備方法，包括以下步驟：
1)在100克水中添加了40克麥胚芽和2克黃豆粉，裝于廣口玻璃瓶，紗布封口，置于蒸汽高壓鍋，1kg/cm2，消毒30分鐘，得到培養(yǎng)基；
2)將裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)斜面菌種接入至滅菌的培養(yǎng)基中；
3)接種后，置于恒溫培養(yǎng)箱，25～28℃培養(yǎng)30天，即得。
實施例3
本實施例的一種裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養(yǎng)物的制備方法，包括以下步驟：
1)100克水中添加了30克麥胚芽和3克黃豆粉，裝于廣口玻璃瓶，紗布封口，置于蒸汽高壓鍋，1kg/cm2，消毒30分鐘，得到培養(yǎng)基；
2)將裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)斜面菌種接入至滅菌的培養(yǎng)基中；
3)接種后，置于恒溫培養(yǎng)箱，25～28℃培養(yǎng)30天，即得。
實施例4
本實施例的一種裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養(yǎng)物的制備方法，包括以下步驟：
1)在100克水中添加了20克麥胚芽和4克黃豆粉，裝于廣口玻璃瓶，紗布封口，置于蒸汽高壓鍋，1kg/cm2，消毒30分鐘，得到培養(yǎng)基；
2)將裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)斜面菌種接入至滅菌的培養(yǎng)基中；
3)接種后，置于恒溫培養(yǎng)箱，25～28℃培養(yǎng)30天，即得。
實施例5
本實施例的一種裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養(yǎng)物的制備方法，包括以下步驟：
1)在100克水中添加了10克麥胚芽和5克黃豆粉，裝于廣口玻璃瓶，紗布封口，置于蒸汽高壓鍋，1kg/cm2，消毒30分鐘，得到培養(yǎng)基；
2)將裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)斜面菌種接入至滅菌的培養(yǎng)基中；
3)接種后，置于恒溫培養(yǎng)箱，25～28℃培養(yǎng)30天，即得。
試驗例1實施例1～5的裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養(yǎng)物的總黃酮含量測定
黃酮類化合物泛指由兩個具有酚羥基的苯環(huán)通過中央三碳原子相互連結(jié)而成的一系列化合物。據(jù)報道，很多天然的黃酮類化合物具有非常強的生理功能，如降血壓、降血糖、降血脂、降膽固醇，有血管清道夫之稱。
采用分光光度法測定裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養(yǎng)物中總黃酮的含量。固體培養(yǎng)物第10天開始每隔5天取樣，樣品中的黃酮類化合物經(jīng)提取純化后，用分光光度法于510nm波長下測定其吸光度，與蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品對照，計算出每克樣品中總黃酮的含量，結(jié)果如表1所示。
表1裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養(yǎng)物的總黃酮含量
表1結(jié)果表明，本發(fā)明實施例2所制備的裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)總黃酮含量最高；并且發(fā)現(xiàn)麥胚芽與黃豆粉的配比直接影響固體培養(yǎng)物中總黃酮的含量。
試驗例2實施例2的裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養(yǎng)物對降血糖和降血壓的影響
在100克水中加入實施例2的裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養(yǎng)物40克和羅漢果10克，置于蒸汽高壓鍋中，1kg/cm2，蒸煮30分鐘，冷卻后用500目濾布過濾，濾清液分裝于20ml的玻璃瓶，壓蓋機壓蓋密封；置于蒸汽高壓鍋中，1kg/cm2，高壓消毒30分鐘，制得口服液。
尋找5年以上收縮壓180mmhg以上的高血壓志愿者100名、空腹血糖10mmol/l以上高血糖志愿者100名，服用上述口服液，每天1瓶(20毫升)。服用30天。
有效率判斷：收縮壓下降40mmhg、空腹血糖下降3mmol/l為有效。
結(jié)果：高血壓患者治愈有效率為83％，高血糖患者治愈有效率為95％，總有效率達到89％，說明含有本發(fā)明的裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養(yǎng)物對降血糖和降血壓都有顯著的治療作用。
以上所述實施例的各技術(shù)特征可以進行任意的組合，為使描述簡潔，未對上述實施例中的各個技術(shù)特征所有可能的組合都進行描述，然而，只要這些技術(shù)特征的組合不存在矛盾，都應(yīng)當(dāng)認為是本說明書記載的范圍。
以上所述實施例僅表達了本發(fā)明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細，但并不能因此而理解為對發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。因此，本發(fā)明專利的保護范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。