本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域中，一種降解聯(lián)苯菊酯的煙曲霉及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

據(jù)報(bào)道我國(guó)農(nóng)藥土壤污染高達(dá)1.4億畝，蔬菜、水果中農(nóng)藥殘留超標(biāo)問(wèn)題成為制約我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品出口的貿(mào)易壁壘，急慢性中毒事件也時(shí)有發(fā)生。有機(jī)磷、菊酯、氨基甲酸酯、雜環(huán)類(lèi)等農(nóng)藥的廣泛、大劑量使用不僅嚴(yán)重影響農(nóng)產(chǎn)品的食品安全和質(zhì)量，也引起了土壤、地表水和地下水的污染。

菊酯是一種能夠有效殺死蚊蠅的農(nóng)藥，有天然菊酯及化學(xué)合成菊酯。天然菊酯的主要成分為除蟲(chóng)菊素；化學(xué)合成的菊酯稱(chēng)為擬除蟲(chóng)菊酯。

菊酯類(lèi)農(nóng)藥已成為我國(guó)出口的蔬菜、水果中主要農(nóng)藥殘留之一，引起急慢性中毒事件也越來(lái)越多，對(duì)人類(lèi)、水生生物和自然環(huán)境造成很大危險(xiǎn)。據(jù)資料報(bào)道，2003年世界擬除蟲(chóng)菊酯殺蟲(chóng)劑的銷(xiāo)售額為13.0億美元，位列殺蟲(chóng)劑第二位。菊酯類(lèi)農(nóng)藥有蓄積毒性，長(zhǎng)期接觸會(huì)引起慢性疾病，如能刺激乳腺癌細(xì)胞增殖和p52基因的表達(dá)，具有擬雌激素活性，而且對(duì)魚(yú)類(lèi)，蚌類(lèi)等水生生物也有很高的毒性。

聯(lián)苯菊酯是一種中等毒性的擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥，其結(jié)構(gòu)式如式ⅰ所示：

聯(lián)苯菊酯廣泛應(yīng)用于對(duì)棉花、蔬菜、果樹(shù)、茶樹(shù)等害蟲(chóng)的防治及白蟻、螨蟲(chóng)等家庭有害昆蟲(chóng)的防治。聯(lián)苯菊酯具有對(duì)光、熱穩(wěn)定的特點(diǎn)，在環(huán)境中半衰期較長(zhǎng)(在含水率20％的沙質(zhì)和有機(jī)質(zhì)土壤中，聯(lián)苯菊酯的半衰期分別為411d和522d)，因此，很難在自然條件下快速降解，加之長(zhǎng)期頻繁使用，有關(guān)其農(nóng)藥殘留超標(biāo)問(wèn)題日趨嚴(yán)重。當(dāng)前農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全問(wèn)題，越來(lái)越引起社會(huì)的廣泛關(guān)注。

而以微生物為主體的生物修復(fù)技術(shù)可用于降解多種有機(jī)污染物，具有安全、高效、無(wú)二次污染、費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)，是國(guó)際上殘留農(nóng)藥處理技術(shù)研究的前沿和熱點(diǎn)。有關(guān)菊酯類(lèi)農(nóng)藥微生物降解的報(bào)道還不多。如研究表明克雷伯菌屬(klebsiella)、假單胞菌屬(pseudomonassp.)、腸桿菌屬(ehterobactesp.)、產(chǎn)堿桿菌屬(alcaligenessp.)和芽孢桿菌屬(bacillussp.)等對(duì)擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥具有較好的降解作用。王兆守等從茶葉中分離到一株標(biāo)號(hào)為clf6經(jīng)鑒定為假單胞菌屬的菌株可有效地降解聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯和氯氰菊酯，降解率分別為55.64％、44.56％和52.19％。辛偉等分離到的蠟狀芽孢桿菌bacilluscereustr2可以降解氯氰菊酯。因此，開(kāi)展擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥微生物修復(fù)技術(shù)研究，篩選不同類(lèi)型的聯(lián)苯菊酯的高效降解微生物菌株，可為減低土壤或作物中聯(lián)苯菊酯殘留提供有效手段，為保障農(nóng)產(chǎn)品安全和農(nóng)田環(huán)境安全提供技術(shù)支持。

但是，國(guó)內(nèi)外對(duì)擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥的降解研究主要集中在氯氰菊酯和溴氰菊酯等幾種，對(duì)聯(lián)苯菊酯的降解研究較少。目前，對(duì)聯(lián)苯菊酯具有高效降解性能的微生物菌株數(shù)量還比較有限，降解效率不是很高，而且利用微生物實(shí)現(xiàn)對(duì)農(nóng)藥進(jìn)行降解，機(jī)理十分復(fù)雜，具有很強(qiáng)的針對(duì)性。因此，篩選不同類(lèi)型的聯(lián)苯菊酯的高效降解微生物菌株，可為減低水體、土壤或作物中聯(lián)苯菊酯殘留提供有效手段，為保障農(nóng)產(chǎn)品安全和農(nóng)田環(huán)境安全提供技術(shù)支持。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種煙曲霉(aspergillusfumigatus)。

本發(fā)明所提供的煙曲霉(aspergillusfumigatus)為煙曲霉(aspergillusfumigatus)jzb41c006，其在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的保藏編號(hào)為cgmccno.12811。

本發(fā)明還提供了一種菌劑，所述菌劑含有所述煙曲霉(aspergillusfumigatus)jzb41c006。

所述菌劑可以所述煙曲霉(aspergillusfumigatus)jzb41c006為活性成分，還可將所述煙曲霉(aspergillusfumigatus)jzb41c006與其他具有相同功能的物質(zhì)組合在一起作為活性成分。

所述菌劑可具有下述任一功能：

a1)降解菊酯；

a2)降解含菊酯農(nóng)藥；

a3)降解水中菊酯；

a4)降解土壤中菊酯。

所述菊酯可為擬除蟲(chóng)菊酯。

所述擬除蟲(chóng)菊酯具體可為聯(lián)苯菊酯。

上述菌劑中，所述菌劑還可以包括載體。所述載體可為固體載體或液體載體。所述固體載體可為礦物材料、植物材料或高分子化合物；所述礦物材料可為粘土、滑石、高嶺土、蒙脫石、白碳、沸石、硅石和硅藻土中的至少一種；所述植物材料可為玉米粉、豆粉和淀粉中的至少一種；所述高分子化合物可為聚乙烯醇和/或聚二醇。所述液體載體可為有機(jī)溶劑、植物油、礦物油或水；所述有機(jī)溶劑可為癸烷和/或十二烷。所述菌劑中，所述活性成分可以以被培養(yǎng)的活細(xì)胞、活細(xì)胞的發(fā)酵液、細(xì)胞培養(yǎng)物的濾液或細(xì)胞與濾液的混合物的形式存在。所述組合物的劑型可為多種劑型，如液劑、乳劑、懸浮劑、粉劑、顆粒劑、可濕性粉劑或水分散粒劑。

根據(jù)需要，所述菌劑中還可添加表面活性劑(如吐溫20、吐溫80等)、粘合劑、穩(wěn)定劑(如抗氧化劑)、ph調(diào)節(jié)劑等。

本發(fā)明還提供了煙曲霉(aspergillusfumigatus)的下述任一應(yīng)用：

1)在降解菊酯中的應(yīng)用；

2)在制備降解菊酯產(chǎn)品中的應(yīng)用；

3)在降解含菊酯農(nóng)藥中的應(yīng)用；

4)在制備降解含菊酯農(nóng)藥產(chǎn)品中的應(yīng)用；

5)在降解水中菊酯中的應(yīng)用；

6)在制備降解水中菊酯產(chǎn)品中的應(yīng)用；

7)在降解土壤中菊酯中的應(yīng)用；

8)在制備降解土壤中菊酯產(chǎn)品中的應(yīng)用。

所述煙曲霉(aspergillusfumigatus)可為所述煙曲霉(aspergillusfumigatus)jzb41c006。

所述菊酯可為擬除蟲(chóng)菊酯。

所述擬除蟲(chóng)菊酯具體可為聯(lián)苯菊酯。

上述應(yīng)用中，所述煙曲霉(aspergillusfumigatus)降解所述菊酯的溫度可為20-40℃，具體可為25-35℃，如28或30℃。

上述應(yīng)用中，所述煙曲霉(aspergillusfumigatus)降解所述菊酯的ph可為4-8，具體可為5-6或6-7。

上述應(yīng)用中，所述煙曲霉(aspergillusfumigatus)降解聯(lián)苯菊酯的濃度可為5-100mg/l，具體可為10-50mg/l，如10-20mg/l或20-50mg/l。

本發(fā)明還提供了培養(yǎng)所述煙曲霉(aspergillusfumigatus)jzb41c006的方法，所述方法包括將所述煙曲霉(aspergillusfumigatus)jzb41c006在用于培養(yǎng)煙曲霉的培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到所述煙曲霉(aspergillusfumigatus)jzb41c006。

本發(fā)明還提供了所述菌劑的制備方法，所述方法包括：將所述煙曲霉(aspergillusfumigatus)jzb41c006作為活性成分，得到所述菌劑。

實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的煙曲霉(aspergillusfumigatus)jzb41c006對(duì)菊酯具有降解作用，對(duì)于濃度為50mg/l的菊酯處理5、7和10天后降解率分別為75.8％、77.4％、和82.5％；對(duì)初始濃度5、10、20、50、100mg/l的菊酯的降解率分別為93.5％、90.4％、85.6％、75.8％和48.5％；對(duì)水中的菊酯濃度為5和10mg/l時(shí)的降解率分別為70.5％和56.2％；對(duì)土壤中的菊酯濃度為5和10mg/kg時(shí)的降解率分別為53.6％和42.5％。表明，本發(fā)明的煙曲霉(aspergillusfumigatus)jzb41c006可用于降解菊酯。

生物材料保藏說(shuō)明

生物材料的分類(lèi)命名：煙曲霉(aspergillusfumigatus)

生物材料的菌株編號(hào)：jzb41c006

生物材料的保藏單位名稱(chēng)：中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心

生物材料的保藏單位簡(jiǎn)稱(chēng)：cgmcc

生物材料的保藏單位地址：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵政編碼：100101

生物材料的保藏日期：2016年7月22日

生物材料的保藏中心登記入冊(cè)編號(hào)：cgmccno.12811

附圖說(shuō)明

圖1為菌株jzb41c006對(duì)無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液中濃度為50mg/l聯(lián)苯菊酯的降解。

圖2為菌株jzb41c006對(duì)不同初始濃度聯(lián)苯菊酯的降解率。

圖3為ph對(duì)菌株jzb41c006降解聯(lián)苯菊酯的影響。

圖4為溫度對(duì)菌株jzb41c006降解聯(lián)苯菊酯的影響。

圖5為菌株jzb41c006的電鏡掃描照片。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實(shí)施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑、儀器等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。以下實(shí)施例中的定量試驗(yàn)，均設(shè)置三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平均值。

下述實(shí)施例中的富集培養(yǎng)基由溶質(zhì)和溶劑組成，溶劑為水，溶質(zhì)及其濃度分別為蛋白胨5g/l、牛肉膏3g/l和氯化鈉5g/l，ph7.0。

下述實(shí)施例中的普通培養(yǎng)基由溶質(zhì)和溶劑組成，溶劑為水，溶質(zhì)及其濃度分別為蛋白胨5g/l、牛肉膏3g/l、氯化鈉5g/l，瓊脂15g/l，ph7.0。

下述實(shí)施例中的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基由溶質(zhì)和溶劑組成，溶劑為水，溶質(zhì)及其濃度分別為1g/lnh4no3、0.5g/lmgso4·7h2o、0.5g/l(nh4)2so4、0.5g/lkh2po4、0.5g/lnacl和1.5g/lk2hpo4，ph＝7.0。

無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液1為向無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中添加聯(lián)苯菊酯得到的聯(lián)苯菊酯濃度為5mg/l的培養(yǎng)液；無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液2為向無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中添加聯(lián)苯菊酯得到的聯(lián)苯菊酯濃度為10mg/l的培養(yǎng)液；無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液3為向無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中添加聯(lián)苯菊酯得到的聯(lián)苯菊酯濃度為20mg/l的培養(yǎng)液；無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液4為向無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中添加聯(lián)苯菊酯得到的聯(lián)苯菊酯濃度為50mg/l的培養(yǎng)液；無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液5為向無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中添加聯(lián)苯菊酯得到的聯(lián)苯菊酯濃度為100mg/l的培養(yǎng)液；

無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液甲-己為利用hcl或naoh調(diào)節(jié)無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液4的ph至ph分別為4、5、6、7、8和9得到的培養(yǎng)液。

實(shí)施例1、煙曲霉(aspergillusfumigatus)jzb41c006的分離與鑒定

本發(fā)明從北京的土壤中分離到一株編號(hào)為jzb41c006的菌株，具體分離方法如下：

取土樣10g，在無(wú)菌操作條件下，裝入有100ml含聯(lián)苯菊酯濃度為10mg/l富集培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，在28℃，160r/min避光振蕩培養(yǎng)6d；之后按10％的接種量將其轉(zhuǎn)接到含聯(lián)苯菊酯20mg/l下一批富集培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)6d；再轉(zhuǎn)接到含50mg/l聯(lián)苯菊酯的富集培養(yǎng)基中，培養(yǎng)6d；接著轉(zhuǎn)接到含50mg/l的聯(lián)苯菊酯的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)6d；再轉(zhuǎn)接到含100mg/l的聯(lián)苯菊酯的基礎(chǔ)無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)6d；將所得的基礎(chǔ)無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液稀釋成10^-1-10^-6系列溶液，各取1ml分別轉(zhuǎn)接到對(duì)應(yīng)的普通培養(yǎng)基平板上，涂布平板，置于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1d-5d，選取不同形態(tài)特征的菌株，分別進(jìn)行3次分離純化。純化后選取平板上長(zhǎng)勢(shì)較好的單菌落菌株編號(hào)，得到編號(hào)為jzb41c006的菌株，將其保藏于斜面普通培養(yǎng)基試管中。

利用its1和its4對(duì)獲得的編號(hào)為jzb41c006菌株的基因組dna進(jìn)行pcr擴(kuò)增，對(duì)得到的pcr產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，檢測(cè)該菌株的its序列，得到的pcr產(chǎn)物的序列為序列表中seqidno.1，所用的its1和its4的序列如下：

its1(5'-tccgtaggtgaacctgcgg-3')

its4(5'-tcctccgcttattgatatgc-3')

將seqidno.1用dnamanversion5.2.2和blast軟件與genbank中的序列進(jìn)行同源性比對(duì)，發(fā)現(xiàn)該菌與煙曲霉(aspergillusfumigatus)的同源性最高，達(dá)到99％。

上述編號(hào)為jzb41c006的菌株具有以下形態(tài)學(xué)特征：分生孢子穗圓筒形，直徑約40μm，呈深淺不同的綠色；分生孢子梗光滑，直徑6-10μm，帶綠色；頂囊燒瓶狀，僅上半部產(chǎn)生孢子，分生孢子球形，粗糙，直徑2-3μm。

參照《真菌鑒定手冊(cè)》(魏景超)曲霉屬特征，結(jié)合上述its序列同源性分析和形態(tài)學(xué)特征，將上述編號(hào)為jzb41c006的菌株鑒定為煙曲霉(aspergillusfumigatus)，以下簡(jiǎn)稱(chēng)菌株jzb41c006。該菌株jzb41c006已于2016年7月22日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱(chēng)cgmcc，地址為：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào))，保藏編號(hào)為cgmccno.12811。

實(shí)施例2、菌株jzb41c006可以降解聯(lián)苯菊酯

一、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

采用外標(biāo)法定量。用正己烷將聯(lián)苯菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(聯(lián)苯菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液由溶質(zhì)和溶劑組成，溶劑為正己烷，溶質(zhì)為聯(lián)苯菊酯)依次稀釋成聯(lián)苯菊酯的濃度為0.05、0.1、0.2、0.5、1、2、5、10mg/l工作液，然后用氣相色譜儀測(cè)定，每次進(jìn)樣1μl，每個(gè)處理重復(fù)3次，取其峰面積的平均值。然后以聯(lián)苯菊酯濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

二、菌株jzb41c006對(duì)聯(lián)苯菊酯降解的檢測(cè)

將實(shí)施例1的菌株jzb41c002在lb培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對(duì)數(shù)周期，以體積百分比為10％接種量接入無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液4中，在28℃，160r/min的恒溫?fù)u床上振蕩培養(yǎng)10天，同時(shí)設(shè)不接菌的培養(yǎng)液作對(duì)照，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。

培養(yǎng)過(guò)程中，每天吸取發(fā)酵液2ml，按照如下方法檢測(cè)聯(lián)苯菊酯含量：向發(fā)酵液中加入10ml乙腈，2gnacl，渦旋1min,靜置30min，分層，吸取上清液1ml，40℃條件下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至干，用色譜純正己烷定容至10ml，進(jìn)樣1μl氣相色譜電子捕獲檢測(cè)器(gc-ecd)測(cè)定聯(lián)苯菊酯的含量。

聯(lián)苯菊酯的氣相色譜測(cè)定條件：

色譜柱：100％聚甲基硅氧烷db-1柱，30m×0.25mm×0.25μm；進(jìn)樣口溫度：200℃；檢測(cè)器溫度：300℃；載氣：氮?dú)猓兌取?9.999％，流速為1ml/min；輔助氣：氮?dú)?，純度?9.999％，流速為60ml/min；柱溫采用程序升溫：起始150℃，保持2min，以6℃/min升至270℃，保持8min。

菌株jzb41c006對(duì)無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液中濃度為50mg/l聯(lián)苯菊酯的降解曲線見(jiàn)圖1。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，菌株jzb41c006對(duì)無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液中的聯(lián)苯菊酯具有降解作用，對(duì)于濃度為50mg/l的聯(lián)苯菊酯處理5、7和10天后降解率分別為75.8％、77.4％和82.5％。

實(shí)施例3、菌株jzb41c006對(duì)不同濃度聯(lián)苯菊酯的降解效果

將實(shí)施例1的菌株jzb41c006在lb培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對(duì)數(shù)周期，以體積百分比為10％接種量分別接入無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液1-5中，在28℃，160r/min的恒溫?fù)u床上振蕩培養(yǎng)5天，同時(shí)設(shè)不接菌的培養(yǎng)液作對(duì)照，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。培養(yǎng)結(jié)束后，分別取發(fā)酵液按照實(shí)施例2的方法檢測(cè)聯(lián)苯菊酯含量。菌株jzb41c006在不同聯(lián)苯菊酯初始濃度下對(duì)聯(lián)苯菊酯的降解曲線見(jiàn)圖2。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，接種培養(yǎng)5天條件下，菌株jzb41c006對(duì)初始濃度5、10、20、50、100mg/l的聯(lián)苯菊酯的降解率分別為93.5％、90.4％、85.6％、75.8％和48.5％。

實(shí)施例4、接種量對(duì)菌株jzb41c006降解聯(lián)苯菊酯的影響

將實(shí)施例1的菌株jzb41c006在lb培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對(duì)數(shù)周期，以體積百分比分別為5％、10％、20％的接種量接入無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液4中，在28℃，160r/min的恒溫?fù)u床上振蕩培養(yǎng)5天，同時(shí)設(shè)不接菌的培養(yǎng)液作對(duì)照，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。培養(yǎng)結(jié)束后，分別取發(fā)酵液按照實(shí)施例2的方法檢測(cè)聯(lián)苯菊酯含量。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，10％接種量條件下，菌株jzb41c006對(duì)聯(lián)苯菊酯的降解率可達(dá)到75.8％，5％、20％接種量條件下，菌株jzb41c006對(duì)聯(lián)苯菊酯的降解率分別為42.3％，71.6％。表明，處于對(duì)數(shù)周期的菌株jzb41c006的菌液的最佳接種體積百分比為10％。

實(shí)施例5、ph對(duì)菌株jzb41c006降解聯(lián)苯菊酯的影響

將實(shí)施例1的菌株jzb41c006在lb培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對(duì)數(shù)周期，以體積百分比為10％接種量分別接入無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液甲-己中，在28℃，160r/min的恒溫?fù)u床上振蕩培養(yǎng)5天，同時(shí)設(shè)不接菌的培養(yǎng)液作對(duì)照，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。培養(yǎng)結(jié)束后，分別取發(fā)酵液按照實(shí)施例2的方法檢測(cè)聯(lián)苯菊酯含量。菌株jzb41c006在不同ph下對(duì)聯(lián)苯菊酯的降解曲線見(jiàn)圖3。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，接種培養(yǎng)5天，不同ph條件下，菌株jzb41c006對(duì)無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液中10mg/l的聯(lián)苯菊酯的降解率不同，ph為7時(shí)，對(duì)50mg/l的聯(lián)苯菊酯的降解能力達(dá)到最高，降解率為75.8％。

實(shí)施例6、溫度對(duì)菌株jzb41c006降解聯(lián)苯菊酯的影響

將菌株jzb41c006在lb培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對(duì)數(shù)周期，以體積百分比為10％接種量接入無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液4中，然后分別在不同溫度20、25、30、35、40、45、50℃條件下，160r/min的恒溫?fù)u床上振蕩培養(yǎng)5天，同時(shí)設(shè)不接菌的培養(yǎng)液作對(duì)照，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。培養(yǎng)結(jié)束后，分別取發(fā)酵液按照實(shí)施例2的方法檢測(cè)聯(lián)苯菊酯含量。菌株jzb41c006在不同溫度下對(duì)聯(lián)苯菊酯的降解曲線見(jiàn)圖4。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在不同溫度條件下，接種培養(yǎng)5天，菌株jzb41c006對(duì)無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液中10mg/l的聯(lián)苯菊酯的降解率不同，溫度為25-35℃時(shí)，對(duì)10mg/l的聯(lián)苯菊酯的降解能力比較高，在30℃下的降解率可達(dá)75.8％。

實(shí)施例7、模擬聯(lián)苯菊酯污水中降解試驗(yàn)

將聯(lián)苯菊酯溶解于少量丙酮中，然后將得到的溶液溶解至500ml水中，得到聯(lián)苯菊酯的濃度分別為5和10mg/l的聯(lián)苯菊酯溶液。將實(shí)施例2的處于對(duì)數(shù)周期的菌株jzb41c006添加到聯(lián)苯菊酯溶液中，菌株jzb41c006的濃度為1.0×10⁷cfu/ml，并設(shè)不添加菌株jzb41c006對(duì)照，置于28℃培養(yǎng)箱中，在黑暗條件下進(jìn)行培養(yǎng)，在培養(yǎng)1，3，5，7天，分別取樣測(cè)定水中聯(lián)苯菊酯的殘留量，結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果顯示，菌株jzb41c006可以有效降解水中的聯(lián)苯菊酯。在水中的聯(lián)苯菊酯濃度為5和10mg/l時(shí)，菌株jzb41c006處理溶液5天聯(lián)苯菊酯的降解率分別為70.5％和56.2％。

表1菌株jzb41c006對(duì)水中不同濃度聯(lián)苯菊酯的降解率

實(shí)施例8、模擬聯(lián)苯菊酯污染的土壤降解試驗(yàn)

選取未施藥的田間土壤，然后稱(chēng)取該土壤每份280g，置于大表面皿中，向土壤中分別添加聯(lián)苯菊酯，使聯(lián)苯菊酯的濃度分別為5和10mg/kg，將實(shí)施例2的處于對(duì)數(shù)周期的菌株jzb41c006均勻噴施于土壤表面，菌株jzb41c006的噴施量為1.0×10⁷cfu/g土壤，并設(shè)噴施清水對(duì)照，置于28℃培養(yǎng)箱中，在黑暗條件下培養(yǎng)，分別在培養(yǎng)1，3，5和7天，取樣測(cè)定土壤中聯(lián)苯菊酯的殘留量，結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果顯示，菌株jzb41c006可以有效去除聯(lián)苯菊酯在土壤中的殘留。在土壤中的聯(lián)苯菊酯濃度為5和10mg/kg時(shí)，菌株jzb41c006處理土壤5天聯(lián)苯菊酯的降解率分別為53.6％和42.5％。

表2菌株jzb41c006對(duì)土壤中不同濃度聯(lián)苯菊酯的降解率

<110>北京市農(nóng)林科學(xué)院

<120>一種降解聯(lián)苯菊酯的煙曲霉及其應(yīng)用

<160>1

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<213>煙曲霉（aspergillusfumigatus）

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