本發(fā)明屬于分子生物學(xué)和農(nóng)業(yè)領(lǐng)域,具體涉及調(diào)控水稻抗飛虱基因bgiosga015651及其應(yīng)用。
背景技術(shù):
隨著人類進入后基因組時代,全面開展功能基因組研究已成為生命科學(xué)研究的前沿領(lǐng)域。由于水稻的轉(zhuǎn)基因技術(shù)相對容易,并且與其它禾本科作物基因組具有共線性,因而被視做模式植物。目前,水稻基因組精細遺傳圖和物理圖譜已完成,進一步對水稻功能基因進行研究,對社會經(jīng)濟發(fā)展和生物學(xué)研究具有重大意義。
目前世界上有超過一半的人以水稻為主食。糧食安全問題,是全世界人民面臨的挑戰(zhàn)。20世紀50、60年代的矮化育種和70年代的雜交水稻培育兩次科技革命使水稻產(chǎn)量大幅度提高。但近幾十年來水稻受到大面積的病蟲危害,使水稻生產(chǎn)受到威脅。褐飛虱(nilaparvatalugens)是我國水稻生產(chǎn)中的主要害蟲,其成蟲和若蟲以口針刺吸水稻汁液,引起黃葉或枯死,導(dǎo)致減產(chǎn)或絕收。據(jù)中國農(nóng)業(yè)年鑒記載,褐飛虱蟲害在1966、1969、1973、1977、1983和2003年全國性大發(fā)生,1987、1991、2005、2006和2007年全國性特大發(fā)生,危害面積達到水稻總面積的50%以上,給我國水稻生產(chǎn)造成了嚴重的損失。
目前,褐飛虱已經(jīng)成為我國水稻生產(chǎn)中的第一大蟲害,對我國糧食安全已形成嚴重威脅。長期以來,褐飛虱的防治主要依靠施用化學(xué)殺蟲劑。由于褐飛虱爆發(fā)多發(fā)生在水稻成熟灌漿期,此時稻株長勢旺盛,將殺蟲劑施到稻株基部的操作非常困難。又由于連年大量施用化學(xué)殺蟲劑,褐飛虱的抗藥性成倍增加,藥劑防治的效果十分有限。同時,使用化學(xué)殺蟲劑防治褐飛虱,不但會增加農(nóng)民的生產(chǎn)成本,還會造成對非目標(biāo)生物的毒殺、對環(huán)境和糧食的污染等環(huán)境和生態(tài)問題。
利用抗褐飛虱基因培育抗蟲水稻品種是褐飛虱綜合防治中最為經(jīng)濟有效的方法。國際水稻研究所(irri)的研究結(jié)果和東南亞的水稻生產(chǎn)實踐證明,即使是只有中等抗性水平的水稻品種,也足以將褐飛虱的群體控制在造成危害的水平以下,不至于對水稻造成實際的危害和產(chǎn)量損失。因此,挖掘水稻抗褐飛虱基因并在水稻育種項目中加以應(yīng)用,是防治水稻褐飛虱的根本措施。
自20世紀60年代始,褐飛虱的抗性遺傳和育種研究就已經(jīng)開始進行,但是隨著新生物型(或新致害型)的出現(xiàn),抗蟲品種面臨著使用壽命縮短、抗性喪失的風(fēng)險。例如國際水稻研究所于1973年推出具有bph1基因的品種ir26,經(jīng)過2-3年后即出現(xiàn)能致害的生物型2;1977-1978年推出具bph2抗性基因的品種ir36和ir42,結(jié)果1982年相繼在一些國家出現(xiàn)了褐飛虱新的生物型,不得不在1983年又培育出相應(yīng)的新抗性品種ir56和ir64。而且以前常見的高抗水稻品種的抗性水平相當(dāng)一部分已經(jīng)降到中抗甚至到了感蟲的級別。
除了褐飛虱,危害水稻的飛虱的常見種類還有白背飛虱(sogatellafurcifera)和灰飛虱(laodelphaxstriatellus),其中,褐飛虱有遠距離遷飛習(xí)性,是我國和許多亞洲國家當(dāng)前水稻上的首要害蟲。白背飛虱全國所有稻區(qū)均有發(fā)生。白背飛虱除直接刺吸汁液外,還是水稻病毒病的主要傳播媒介?,F(xiàn)有技術(shù)中所研發(fā)的某些抗性水稻品種主要是針對褐飛虱具有抗性,而對白背飛虱的抗性不明確或沒有抗性,影響了這些抗性水稻品種的適用范圍。
因此,繼續(xù)深入篩選與研究抗源材料、尋找新的抗性基因,并對其相關(guān)基因進行定位與克隆,研發(fā)新的能在廣泛地區(qū)適用的、具有高抗性基因材料的水稻品種,具有非常重大的意義。
技術(shù)實現(xiàn)要素:
本發(fā)明的目的在于提供一種調(diào)控水稻抗飛虱基因bgiosga015651及其應(yīng)用。
本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是:
調(diào)控水稻抗飛虱基因bgiosga015651,其核苷酸序列如seqidno:1,或seqidno:2所示,或與seqidno:1或seqidno:2至少90%以上相同的同源序列。
調(diào)控水稻抗飛虱基因bgiosga015651的cdna,其序列如seqidno:3,或seqidno:4所示,或與seqidno:3或seqidno:4至少90%以上相同的同源序列。
調(diào)控水稻抗飛虱蛋白,其氨基酸序列如seqidno:5,或seqidno:6所示。
編碼上述所述水稻抗飛虱蛋白的核苷酸序列。
優(yōu)選的,該核苷酸序列選自seqidno:1-4,或序列seqidno:1-4經(jīng)替換、缺失或增加一個或多個核苷酸,且編碼相同氨基酸序列的核苷酸序列。
調(diào)控水稻抗飛虱基因bgiosga015651在培育抗飛虱水稻中的應(yīng)用,所述基因bgiosga015651的核苷酸序列選自seqidno:1,seqidno:2,與seqidno:1或/和seqidno:2至少90%以上相同的同源序列,seqidno:3,seqidno:4,與seqidno:3或/和seqidno:4至少90%以上相同的同源序列。
所述調(diào)控水稻抗飛虱基因bgiosga015651,定位于秈稻(oryzasativaindica)基因組第四染色體2,507,775–2,510,316位置,全長為2542bp。
優(yōu)選的,所述飛虱包括褐飛虱和白背飛虱。
一種提高水稻抗飛虱性能的方法,敲除或降低上述所述的bgiosga015651基因的表達量從而提高水稻抗飛虱性狀。
所述bgiosga015651基因為調(diào)控水稻抗飛虱基因,其核苷酸序列如seqidno:1,或seqidno:2所示,定位于秈稻(oryzasativaindica)基因組第四染色體2,507,775–2,510,316位置,全長為2542bp。
優(yōu)選的,通過分子育種方法或基因工程的方法,敲除或降低bgiosga015651基因的表達量。
優(yōu)選的,基因工程方法包括rna干擾和基因編輯。
優(yōu)選的,所述飛虱包括褐飛虱和白背飛虱。
本發(fā)明的有益效果是:
本發(fā)明申請人通過對褐飛虱具有穩(wěn)定抗性的水稻品種bg1222和感蟲水稻品種tn1的研究找到一種調(diào)控水稻抗飛虱的基因并進行了測序,記名為bgiosga015651??瓜x品種與感蟲品種相比bgiosga015651的基因表達量存在顯著差異。在抗蟲品種bg1222中bgiosga015651的表達量比感蟲水稻品種tn1的表達量低數(shù)百倍以上。無論是否受到褐飛虱吸食,bg1222中的bgiosga015651的表達量都遠低于tn1的表達量。之前發(fā)現(xiàn)的抗飛虱基因需要有表達甚至要高表達才能有抗蟲性的表現(xiàn),而本發(fā)明中調(diào)控水稻抗飛虱的基因bgiosga015651在bg1222中是極低表達、或不表達(基因敲除)的情況下,即可具有良好的抗蟲性。
雜交f2后代驗證表明bgiosga015651的表達量與水稻抗蟲性成負相關(guān)(表達量越低抗蟲性越強)。后代中抗蟲性越強,其抗性分數(shù)值(grade)越小相對應(yīng)bgiosga015651的表達量越低。
通過基因編輯技術(shù)敲除(knockout)bgiosga015651基因,使bgiosga015651基因在tn1中沒有任何表達,這樣感蟲水稻品種tn1就獲得與水稻品種bg1222一樣的高抗抗蟲性。對褐飛虱與白背飛虱表現(xiàn)高抗性等級。其中,bgiosga015651基因未敲除前,感蟲水稻品種tn1的抗性級別為9級,bgiosga015651基因敲除后,其抗性級別顯著提高到0級-1級(高抗性等級)。而申請人對以前的抗性品種進行苗鑒發(fā)現(xiàn),它們的抗蟲性喪失厲害。目前mudgo(含有bph1)的平均抗性級別5.4級,asd7(含有bph2)的平均抗性級別8.89級,rathuheenati(含有bph3)的平均抗性級別4.61級,babawee(含有bph4)的平均抗性級別8.14級,而抗蟲品種bg1222的平均抗性級別是1.07級。通過對比可以發(fā)現(xiàn),本發(fā)明所公開的調(diào)控水稻抗飛虱的基因bgiosga015651在水稻育種以及提高水稻抗飛虱抗性的應(yīng)用中將具有重大意義。
本發(fā)明的水稻調(diào)控抗飛虱的基因bgiosga015651可在水稻育種中應(yīng)用。通過分子育種方法或基因工程的方法,降低或敲除該蛋白編碼基因的表達可導(dǎo)致感蟲植株具有高抗抗蟲功能,從而可以培育高抗飛虱(抗褐飛虱與白背飛虱)植物。因此,本發(fā)明所述基因及其編碼蛋白可以應(yīng)用于植物遺傳改良。
由于本發(fā)明的水稻調(diào)控抗飛虱的基因bgiosga015651對于褐飛虱與白背飛虱同樣有效,而對于灰飛虱的抗蟲性還在研究中。由于褐飛虱有遠距離遷飛習(xí)性,是我國和許多亞洲國家當(dāng)前水稻上的首要害蟲,不過不能在北緯25℃以北的稻區(qū)越冬。而白背飛虱在全國所有稻區(qū)均有發(fā)生(我國南至海南島,北至黑龍江各稻區(qū),東南亞各國均有分布)。所以本技術(shù)用于育種的水稻可在各地廣泛的水稻種植地區(qū)進行推廣,具有很高的經(jīng)濟價值與突出的生態(tài)效益。
附圖說明
圖1為受到褐飛虱吸食后的水稻品種bg1222和tn1的bgiosga015651表達量時間序列變化;
圖2為雜交f2后代中bgiosga015651的表達量與水稻抗蟲性分數(shù)值的關(guān)系。
具體實施方式
褐飛虱是危害水稻生產(chǎn)的主要害蟲,近年來由于褐飛虱生物型發(fā)生變異及產(chǎn)生抗藥性等原因,褐飛虱災(zāi)害發(fā)生日趨嚴重。生產(chǎn)實踐證明,利用抗性品種是最經(jīng)濟、安全而有效的措施。按照“標(biāo)準苗盤鑒定法”對bg1222進行了多年的苗期抗蟲級別檢測,發(fā)現(xiàn)其對褐飛虱具有穩(wěn)定高抗性,因此在育種上具有較高的利用價值。但是bg1222對褐飛虱有哪些關(guān)鍵的基因與抗蟲性表現(xiàn)相關(guān)聯(lián),國內(nèi)外至今未見文獻涉及。tn1是國際公認不含任何抗蟲基因的感蟲水稻品種。
除了褐飛虱,危害水稻的飛虱的常見種類還有白背飛虱和灰飛虱,而我國南方主要是褐飛虱和白背飛虱危害。白背飛虱除直接刺吸汁液外,還是水稻病毒病的主要傳播媒介。而bg1222對白背飛虱也有一定抗性,bg1222對白背飛虱的抗性也由發(fā)明人經(jīng)過苗期抗蟲級別檢測確認得到,文獻中并無報道。
本發(fā)明申請人通過研究對褐飛虱和白背飛虱具有穩(wěn)定抗性的水稻品種bg1222和感蟲水稻品種tn1,找到一種調(diào)控水稻抗飛虱的基因,記名為bgiosga015651。抗蟲品種與感蟲品種相比bgiosga015651的基因表達量存在顯著差異。在抗蟲品種bg1222中bgiosga015651的表達量比感蟲水稻品種tn1的表達量低數(shù)百倍以上。無論是否受到褐飛虱吸食,bg1222中的bgiosga015651的表達量都遠低于tn1的表達量。雜交f2后代驗證表明bgiosga015651的表達量與水稻抗蟲性成負相關(guān)(表達量越低抗蟲性越強)。后代中抗蟲性越強,其抗性分數(shù)值(grade)越小相對應(yīng)bgiosga015651的表達量越低。利用基因編輯技術(shù)敲除bgiosga015651基因,使感蟲水稻品種tn1獲得與水稻品種bg1222一樣的高抗抗蟲性。
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明,但并不局限于此。
實施例1抗蟲品種與感蟲品種相比bgiosga015651的基因表達量存在顯著差異
一.水稻totalrna提取
1)水稻樣品的研磨:將超低溫凍結(jié)的水稻樣品稱量后迅速轉(zhuǎn)移至用液氮預(yù)冷的研缽中,用研杵研磨組織,其間不斷加入液氮,直至研磨成粉末狀。可以向研缽中加入與樣品勻漿量匹配的適量的rnaisoplus。對于新鮮的組織樣品,立即加入rnaisoplus,充分勻漿。將勻漿液轉(zhuǎn)移至離心管中,室溫(15-30℃)靜置5分鐘。12,000g4℃離心5分鐘。小心吸取上清液,移入新的離心管中。
2)totalrna的提取:向上述的勻漿裂解液中加入氯仿(rnaisoplus的1/5體積量),蓋緊離心管蓋,混合至溶液乳化呈乳白色。室溫靜置5分鐘。12,000g4℃離心15分鐘。從離心機中小心取出離心管,此時勻漿液分為三層,即:無色的上清液(含rna)、中間的白色蛋白層(大部分為dna)及帶有顏色的下層有機相。吸取上清液轉(zhuǎn)移至另一新的離心管中(切勿吸出白色中間層)。向上清中加入0.5-1倍rnaisoplus體積的異丙醇,上下顛倒離心管充分混勻后,室溫下靜置10分鐘。12,000g4℃離心10分鐘。一般在離心后,試管底部會出現(xiàn)rna沉淀。
3)rna沉淀的清洗:小心棄去上清,切勿觸及沉淀,可殘留少量異丙醇。加入與rnaisoplus等量的75%乙醇,輕輕上下顛倒洗滌離心管管壁,7,500g4℃離心5分鐘后小心棄去上清,切勿觸及沉淀。
4)rna的溶解:打開離心管蓋,室溫干燥沉淀幾分鐘。沉淀干燥后,加入適量的rnase-free水溶解沉淀。
二.去基因組
使用rnase-free的dnasei,按以下體系配置反應(yīng)液:
37℃消化30min,65℃滅活10min。
然后按以下步驟操作:
1)加入等體積的苯酚,上下顛倒混勻后10,000rpm,離心5min,取上清;
2)加入等體積的氯仿,上下顛倒混勻后10,000rpm,離心10min,取上清;
3)加入等體積異丙醇,輕柔地充分混勻,-20℃靜置15min;
4)4℃下,10,000g離心10min,收集rna沉淀,去上清;
5)用75%乙醇洗滌兩次,超凈臺風(fēng)干;
6)加入10μldepc水溶解沉淀。
三.純度檢測及電泳檢測
純度檢測:取2μlrna樣品60倍稀釋,在微量分光光度計上測定od值,od260/od280的比值大于1.8,說明制備的rna較純,無蛋白質(zhì)污染。
四.逆轉(zhuǎn)錄
按下列組份配制rt反應(yīng)液(反應(yīng)液配制請在冰上進行)。
*表示反應(yīng)體系可按需求相應(yīng)放大,10μl反應(yīng)體系可最大使用500ng的totalrna。
將上述10μl反應(yīng)溶液在takara-tp600pcr儀上進行反應(yīng):37℃15min;85℃5sec;4℃保溫,之后-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
五.定量
利用下列引物對進行bgiosga015651的基因表達量的分析,其堿基序列如下所示:
re-f:tccagagcaggaaacaaggac(seqidno:7),
re-r:gcctacgccagcacatgaaa(seqidno:8)。
1)反應(yīng)體系:
2)進行realtimepcr反應(yīng):
cfx96real-time(bio-rad)pcr儀上進行:95℃30sec;95℃5sec,60℃30sec,40個循環(huán)。融解曲線分析:溫度60℃-95℃。
結(jié)果見圖1。
圖1為受到褐飛虱吸食后的水稻品種bg1222和tn1的bgiosga015651表達量時間序列變化。
圖1結(jié)果表明:抗蟲品種與感蟲品種相比bgiosga015651的基因表達量存在顯著差異。在抗蟲品種bg1222中bgiosga015651的表達量比感蟲水稻品種tn1的表達量低數(shù)百倍甚至上千倍以上。無論是否受到褐飛虱取食(取食不同小時數(shù)),bg1222中的bgiosga015651的表達量都遠低于tn1的表達量。
實施例2bgiosga015651的基因的克隆,以及多肽分析
分別對抗蟲品種bg1222以及感蟲品種tn1的bgiosga015651基因進行克隆,測序和分析。
其中抗蟲品種bg1222中的bgiosga015651基因,其核苷酸序列如seqidno:1所示(包括外顯子和內(nèi)含子),感蟲品種tn1中的bgiosga015651基因,其核苷酸序列如seqidno:2所示(包括外顯子和內(nèi)含子),兩者之間有多處核苷酸的區(qū)別。
其中抗蟲品種bg1222中bgiosga015651基因的cdna序列如seqidno:3所示;而感蟲品種tn1中bgiosga015651基因的cdna序列如seqidno:4所示。
抗蟲品種bg1222中bgiosga015651基因的編碼蛋白如seqidno:5所示;而感蟲品種tn1中bgiosga015651基因的編碼蛋白如seqidno:6所示,兩者之間共有16處氨基酸的區(qū)別。
實施例3抗蟲品種與感蟲品種進行雜交f2代
通過bg1222與tn1的雜交建立f2后代群體,其中f2后代群體的樣本n=512。從中選取了60個不同抗性分數(shù)值的個體檢測,并對不同抗性級別表型的f2后代個體分別檢測其bgiosga015651的表達量,以確定bgiosga015651的表達量與水稻抗蟲表型的相關(guān)性。
結(jié)果見圖2。
圖2為雜交f2后代中bgiosga015651的表達量與水稻抗蟲性分數(shù)值的關(guān)系。
圖2結(jié)果表明:雜交f2后代中基因bgiosga015651的表達量與水稻抗蟲性成負相關(guān)(表達量越低抗蟲性越強)。后代中抗蟲性越強,其抗性分數(shù)值(grade)越小相對應(yīng)bgiosga015651的表達量越低。
實施例4基因敲除實驗
利用基因編輯技術(shù),在基因敲除實驗(knockout)中敲除bgiosga015651基因,使感蟲水稻品種tn1獲得與水稻品種bg1222一樣的高抗抗蟲性。
一.水稻基因敲除載體的構(gòu)建
根據(jù)bgiosga015651基因cdna序列,選擇其前端的序列作為靶標(biāo)序列,設(shè)計并合成grna(guiderna)序列(序列如下所示,但靶標(biāo)序列和對應(yīng)的grna序列不限于此序列。)把grna序列片段重組到包含有潮霉素抗性標(biāo)簽的pbwa(v)h載體(武漢伯遠公司)中。利用此crispr/cas9基因組編輯載體系統(tǒng),將靶標(biāo)序列其中的一個堿基突變掉(刪除或添加一個堿基到靶標(biāo)序列上)。使bgiosga015651基因cdna序列發(fā)生移碼突變,其表達的產(chǎn)物并不是原來的氨基酸產(chǎn)物,從而達到敲除bgiosga015651基因的目的。
grna序列:5'-catctctcagtgcacggct-3'(seqidno:9);
靶標(biāo)序列:5'-acatctctcagtgcacggctggg-3'(seqidno:10)。
二.通過遺傳轉(zhuǎn)化獲取水稻基因敲除苗
1)以感蟲水稻tn1的成熟胚為材料誘導(dǎo)愈傷組織:取培養(yǎng)好的農(nóng)桿菌(eha105)菌液置于離心管,離心取上清,制農(nóng)桿菌懸浮液;將長到一定大小的愈傷組織挑出,置于農(nóng)桿菌懸浮液侵染;將愈傷組織置于共培養(yǎng)基上。
2)篩選:將愈傷組織取出;將晾干的愈傷轉(zhuǎn)入篩選培養(yǎng)基上進行第一次篩選;將長有抗性愈傷的初始愈傷轉(zhuǎn)導(dǎo)新培養(yǎng)基,進行第二次篩選。
3)抗性愈傷的誘導(dǎo)分化及生根:挑取抗性愈傷,移入裝有分化培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿,封口膜封好,放入恒溫培養(yǎng)室中等待分化成苗。待苗生長至1cm左右,移至生根培養(yǎng)基壯苗。
4)潮霉素(hyg)抗性基因的pcr檢測:用潮霉素抗性基因特異引物,常規(guī)pcr法擴增檢測水稻苗是否含有該基因。如果含有即為轉(zhuǎn)化陽性苗。
抗性基因特異引物:
hyg-f:5'-acggtgtcgtccatcacagtttgcc-3'(seqidno:11);
hyg-r:5'-ttccggaagtgcttgacattggga-3'(seqidno:12)。
5)陽性苗的基因敲除檢測:在靶標(biāo)附近設(shè)計檢測引物進行pcr,之后測序,檢測基因敲除情況(是否獲得成功敲除的純合苗)。獲得對感蟲水稻tn1的bgiosga015651基因成功敲除的純合苗。
三.水稻基因敲除苗抗蟲性鑒定
將感蟲水稻tn1的bgiosga015651基因敲除的純合苗進行苗期抗蟲性鑒定。
鑒定結(jié)果是:感蟲受體品種tn1的死苗率為100%,bgiosga015651基因敲除純合苗的死苗率為0%,而且其抗性級別是0級-1級(高抗性級別)。
驗證了基因bgiosga015651的表達量與水稻抗蟲性成負相關(guān)的關(guān)系(表達量越低抗蟲性越強),基因bgiosga015651是水稻抗飛虱相關(guān)的重要基因。
實施例5bgiosga015651與現(xiàn)有抗褐飛虱基因效果的比較
本發(fā)明將感蟲水稻品種tn1(抗性級別9級)的bgiosga015651基因敲除后,其抗性級別顯著提高到0級-1級(高抗性級別),和抗蟲品種bg1222的抗性相當(dāng)(抗性級別1.07級),或更佳。
申請人對以前的抗性品種進行苗鑒發(fā)現(xiàn),它們的抗蟲性喪失厲害。目前,mudgo(含有bph1)的平均抗性級別5.4級,asd7(含有bph2)的平均抗性級別8.89級,rathuheenati(含有bph3)的平均抗性級別4.61級,babawee(含有bph4)的平均抗性級別8.14級,而抗蟲品種bg1222的平均抗性級別是1.07級。
通過比較可以發(fā)現(xiàn),利用本發(fā)明的水稻抗飛虱基因bgiosga015651用于水稻育種,具有良好的前景。通過分子育種方法或基因工程的方法,降低或敲除該蛋白編碼基因的表達可導(dǎo)致感蟲植株具有高抗抗蟲功能,從而可以培育高抗飛虱(抗褐飛虱與白背飛虱)水稻。
實施例6bgiosga015651抗白背飛虱的效果
本發(fā)明將感蟲水稻品種tn1(抗性級別9級)的bgiosga015651基因敲除后,通過苗期鑒定的方法鑒定其對白背飛虱的抗性級別。
結(jié)果是:感蟲受體品種tn1的死苗率為100%,bgiosga015651基因敲除純合苗的死苗率為0%,而且其抗性級別是0級-1級(高抗性級別)。
因此,本發(fā)明的調(diào)控水稻抗飛虱的基因bgiosga015651應(yīng)用于抗白背飛虱的育種也有良好的效果。
上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式,但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制,其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化,均應(yīng)為等效的置換方式,都包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
sequencelisting
<110>廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所
<120>調(diào)控水稻抗飛虱基因bgiosga015651及其應(yīng)用
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<170>patentinversion3.5
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