本發(fā)明屬于微生物檢測(cè)
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種牛奶中微生物的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
：食品安全是當(dāng)今社會(huì)的熱點(diǎn)話題，隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們對(duì)食品安全越加關(guān)注，不斷頻發(fā)的食品安全事件，如2013年廣東鎘大米事件，2014年福喜公司使用過期肉事件等，促使我們加強(qiáng)食品安全的檢測(cè)。而當(dāng)我們的眼睛緊盯著那些蘇丹紅、三聚氰胺、地溝油、吊白塊、馬桶水的時(shí)候，鮮有人去深度關(guān)注被微生物污染過的食品導(dǎo)致的安全事件，即使如此，它的存在并沒有因公眾的忽略而消失。根據(jù)衛(wèi)計(jì)委2014年發(fā)布的資料，全國(guó)上報(bào)到衛(wèi)生計(jì)生委的案例只有152件，而且中毒人數(shù)是5000多人，即使在不完整的資料當(dāng)中，我們?nèi)匀豢梢钥吹?，主要病因是由微生物病原而引起的達(dá)到3300多人。因此，食品中微生物的檢測(cè)對(duì)保障食品安全發(fā)揮著重要作用。牛奶中微生物的含量是評(píng)價(jià)牛奶質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)，對(duì)于所有乳制品來說，微生物含量對(duì)最終產(chǎn)品質(zhì)量也是十分重要的。細(xì)菌總數(shù)高，其中的致病菌就容易產(chǎn)生非常耐熱的毒素，這些毒素經(jīng)過超高溫處理后仍有少量殘留，消費(fèi)者飲用后會(huì)導(dǎo)致中毒；而且大量的細(xì)菌繁殖會(huì)加速產(chǎn)酸，從而引起牛奶酸度增加，蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性下降。隨著乳品業(yè)和科學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，針對(duì)牛奶中微生物檢測(cè)的方法不斷涌現(xiàn)出來。公開號(hào)為cn104928346a的專利公開了一種牛奶中細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)方法，先將牛奶倒入無菌生理鹽水中，100~150prm震蕩2min，在所得混合液中加入二甲苯，攪拌，1000~1500rpm離心5~15min，去除上層；然后在所得下層留存液中加入含胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的混合酶液，40℃水浴5min，所得酶解液用納濾膜濃縮，濃縮液經(jīng)次甲基藍(lán)染色液染色后，用微生物檢測(cè)儀檢測(cè)計(jì)數(shù)。該發(fā)明能夠?qū)εＤ讨械募?xì)菌總數(shù)進(jìn)行檢測(cè)，與國(guó)標(biāo)gb/t4789.2-2010相比，除時(shí)間上具有優(yōu)勢(shì)外，所用試劑二甲苯具有刺激性，無法回收；所用酶類包括胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶，不僅價(jià)格昂貴，而且對(duì)底物選擇性較強(qiáng)，對(duì)操作過程的控制要求更高；上述酶類還可能會(huì)對(duì)牛奶中所存在的細(xì)菌細(xì)胞造成損傷，使結(jié)果不準(zhǔn)確。公開號(hào)為cn105671121a的專利公開了一種牛奶中微生物的檢測(cè)方法，取待檢測(cè)的牛奶加入燒杯中，再加入無菌水，制成稀釋的牛奶水，置于溫度為33-37℃的無菌環(huán)境中5-10小時(shí)；取牛奶水加入樣本卡的培養(yǎng)槽中，再向培養(yǎng)槽中加入培養(yǎng)液，蓋上樣本卡的上蓋板，并用水封；其中培養(yǎng)液中含有以下原料組份：硝酸銨、硝酸鈣、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、乳糖、茶粉、重過磷酸鈣、氯化鈉、硫酸鉀、尿素、硫酸鋅、硫酸銅；將水封后的樣本卡置于培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)，觀察樣本卡的水封面內(nèi)是否產(chǎn)生了氣泡，產(chǎn)生了氣泡則證明有微生物存在，沒有產(chǎn)生氣泡則證明沒有微生物。該發(fā)明用于檢測(cè)牛奶中是否含有微生物，該檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單，對(duì)檢測(cè)結(jié)果的判定較為直觀，不容易出現(xiàn)誤判。但是實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)該方法雖然檢測(cè)結(jié)果直觀，但是檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，至少需要1.5天以上，檢測(cè)效率有待提高。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種牛奶中微生物的檢測(cè)方法，能夠更加快速準(zhǔn)確地判斷牛奶中是否含有微生物。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種牛奶中微生物的檢測(cè)方法，包括如下步驟：步驟s1：制備半固體培養(yǎng)基，滅菌后均分裝至檢測(cè)盒不同的培養(yǎng)槽內(nèi)，使所述半固體培養(yǎng)基的平面與所述培養(yǎng)槽的開口平面平齊，所述培養(yǎng)槽設(shè)置在基板上，所述培養(yǎng)槽的周側(cè)設(shè)置油性涂層圈，每100ml所述半固體培養(yǎng)基由下述重量配比的原料制成：瓊脂0.1~0.2g、黃原膠0.05~0.15g、酵母膏3~5g、菊粉3~5g、花生粉8~12g、海帶8~12g、磷酸二氫鉀1~3g、余量為水，所述半固體培養(yǎng)基的ph為7.0~7.2，25攝氏度下的粘度為1~3mpa·s；步驟s2：將待檢測(cè)牛奶敞口置于20~30攝氏度的無菌環(huán)境中靜置1~2小時(shí)；步驟s3：在無菌環(huán)境中，將步驟s2靜置后的待檢測(cè)牛奶用孔徑不大于45微米的濾膜過濾，截留所述待檢測(cè)牛奶中的微生物，將所述濾膜截留微生物的一面平整貼合在所述培養(yǎng)槽上，蓋上蓋板，用滴管吸取無菌水將所述蓋板與所述基板之間用水密封，保證兩者之間無氣泡；步驟s4：將所述檢測(cè)盒置于培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)2~6小時(shí)，觀察所述蓋板與所述基板之間是否有氣泡產(chǎn)生。優(yōu)選地，每100ml所述半固體培養(yǎng)基由下述重量配比的原料制成：瓊脂0.12g、黃原膠0.08g、酵母膏4g、菊粉4g、花生粉10g、海帶9g、磷酸二氫鉀2g、余量為水。優(yōu)選地，所述半固體培養(yǎng)基的ph為7.0，25攝氏度下的粘度為1.8mpa·s。優(yōu)選地，所述半固體培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟：首先稱取8~12g海帶，加水100ml，煮沸10~15分鐘，過濾得濾液，補(bǔ)足水分；在所述濾液中依次加入瓊脂0.1~0.2g和黃原膠0.05~0.15g，加熱攪拌使其完全溶解；然后加入酵母膏3~5g、菊粉8~12g、花生粉8~12g和磷酸二氫鉀1~3g，攪拌使其完全溶解，混合充分，冷卻；采用體積分?jǐn)?shù)為10%的鹽酸或體積分?jǐn)?shù)為10%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph為7.0~7.2，補(bǔ)足水分，滅菌。優(yōu)選地，所述步驟s4中恒溫培養(yǎng)的溫度為25~35攝氏度。優(yōu)選地，所述檢測(cè)盒，包括基板和蓋板，所述基板上設(shè)置3個(gè)以上培養(yǎng)槽，所述培養(yǎng)槽的上表面與所述基板的上表面平齊，所述培養(yǎng)槽的底表面凸出所述基板的下表面，所述培養(yǎng)槽的上部周緣設(shè)置油性涂層圈，所述基板的上表面面積大于所述蓋板的下表面面積，所述基板的周緣設(shè)置圍堰。優(yōu)選地，所述蓋板包括若干不連續(xù)的蓋片，所述蓋片的中心對(duì)應(yīng)所述培養(yǎng)槽的中心覆蓋，所述蓋片的中心至該蓋片的周緣任一點(diǎn)的距離大于所述培養(yǎng)槽的中心至所述油性涂層圈的外周任一點(diǎn)的距離。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果如下：1）本發(fā)明通過上述技術(shù)方案提供了一種能夠更加快速、準(zhǔn)確地判斷牛奶中是否含有微生物，該檢測(cè)方法是對(duì)現(xiàn)有牛奶中微生物檢測(cè)技術(shù)的改進(jìn)，通過改進(jìn)培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)條件及預(yù)處理方法等縮短增菌時(shí)間，合并檢驗(yàn)步驟，從而達(dá)到快速檢測(cè)的目的，顯著縮短檢測(cè)時(shí)間，而且過程環(huán)保。2）本發(fā)明微生物培養(yǎng)基采用半固體培養(yǎng)基，并通過瓊脂與黃原膠的配合控制半固體培養(yǎng)基在25攝氏度的粘度為1~3mpa·s，既便于操作，又利于微生物的生長(zhǎng)繁殖，其中，酵母膏為常規(guī)培養(yǎng)基成分，主要是補(bǔ)充氮源；菊粉，源自于菊芋或菊苣，是一種天然低聚果糖，極易溶于水，對(duì)熱很穩(wěn)定，可增加黏性，提高水結(jié)合能力，為微生物生長(zhǎng)提供碳源；花生粉是供微生物生長(zhǎng)的有機(jī)氮源之一，含有豐富的蛋白質(zhì)、微量元素，也含少量的花生油；海帶，營(yíng)養(yǎng)成分豐富，水煮后過濾，取濾液使用，以補(bǔ)充碳源及微量元素，還起到調(diào)節(jié)ph的作用；磷酸二氫鉀，補(bǔ)充鉀、磷元素，緩沖ph。通過上述成分的搭配，滿足微生物的生長(zhǎng)代謝需求以及產(chǎn)物的形成，各成分的配比及濃度對(duì)培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中的變化起著決定作用，合理的搭配能夠加快微生物代謝產(chǎn)物的形成，進(jìn)而觀察到檢測(cè)結(jié)果。而且本發(fā)明培養(yǎng)基所用原料價(jià)格低廉，易于獲得，培養(yǎng)基質(zhì)量穩(wěn)定，可復(fù)制性強(qiáng)。3）為進(jìn)一步縮短增菌時(shí)間，本發(fā)明采用無菌敞口靜置和濾膜過濾的方式結(jié)合實(shí)現(xiàn)微生物的富集，通過與改進(jìn)培養(yǎng)基結(jié)合，可明顯縮短檢測(cè)時(shí)間。實(shí)驗(yàn)表明，采用本發(fā)明檢測(cè)方法檢測(cè)牛奶中是否存在微生物，檢測(cè)時(shí)間在8小時(shí)以內(nèi)，檢出限為101cfu。附圖說明下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明：圖1是本發(fā)明第一種檢測(cè)盒的結(jié)構(gòu)示意圖；圖2是本發(fā)明圖1的a-a剖視圖；圖3是本發(fā)明第二種檢測(cè)盒的結(jié)構(gòu)示意圖。具體實(shí)施方式為了更好地理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步清楚闡述本發(fā)明的內(nèi)容，但本發(fā)明的保護(hù)內(nèi)容不僅僅局限于下面的實(shí)施例。在下文的描述中，給出了大量具體的細(xì)節(jié)以便提供對(duì)本發(fā)明更為徹底的理解。然而，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說顯而易見的是，本發(fā)明可以無需一個(gè)或多個(gè)這些細(xì)節(jié)而得以實(shí)施。實(shí)施例1一種牛奶中微生物的檢測(cè)方法，包括如下步驟：步驟s1：制備半固體培養(yǎng)基，滅菌后均分裝至檢測(cè)盒不同的培養(yǎng)槽內(nèi)，使所述半固體培養(yǎng)基的平面與所述培養(yǎng)槽的開口平面平齊，所述培養(yǎng)槽設(shè)置在基板上，所述培養(yǎng)槽的周側(cè)設(shè)置油性涂層圈，每100ml所述半固體培養(yǎng)基由下述重量配比的原料制成：瓊脂0.12g、黃原膠0.08g、酵母膏4g、菊粉4g、花生粉10g、海帶9g、磷酸二氫鉀2g、余量為水，所述半固體培養(yǎng)基的ph為7.0，25攝氏度下的粘度為1.8mpa·s；步驟s2：將待檢測(cè)牛奶敞口置于25攝氏度的無菌環(huán)境中靜置1小時(shí)；步驟s3：在無菌環(huán)境中，將步驟s2靜置后的待檢測(cè)牛奶用孔徑不大于45微米的濾膜過濾，截留所述待檢測(cè)牛奶中的微生物，將所述濾膜截留微生物的一面平整貼合在所述培養(yǎng)槽上，蓋上蓋板，用滴管吸取無菌水將所述蓋板與所述基板之間用水密封，保證兩者之間無氣泡；步驟s4：將所述檢測(cè)盒置于培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)4小時(shí)，觀察所述蓋板與所述基板之間是否有氣泡產(chǎn)生。參閱圖1~2，本實(shí)施例所用檢測(cè)盒，包括基板1和蓋板2，所述基板上設(shè)置3個(gè)以上培養(yǎng)槽3，所述培養(yǎng)槽的上表面與所述基板的上表面平齊，所述培養(yǎng)槽的底表面凸出所述基板的下表面，所述培養(yǎng)槽的上部周緣設(shè)置油性涂層圈4，所述基板的上表面面積大于所述蓋板的下表面面積，所述基板的周緣設(shè)置圍堰5。其中，蓋板為透明制件；培養(yǎng)槽的槽壁為透明制件；培養(yǎng)槽的數(shù)量設(shè)置為3個(gè)以上，便于做平行實(shí)驗(yàn)。本實(shí)施例中，所述半固體培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟：首先稱取9g海帶，加水100ml，煮沸12分鐘，過濾得濾液，補(bǔ)足水分；在所述濾液中依次加入瓊脂0.12g和黃原膠0.08g，加熱攪拌使其完全溶解；然后加入酵母膏4g、菊粉4g、花生粉10g和磷酸二氫鉀2g，攪拌使其完全溶解，混合充分，冷卻；采用體積分?jǐn)?shù)為10%的鹽酸或體積分?jǐn)?shù)為10%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph為7.0，補(bǔ)足水分，滅菌。本實(shí)施例中，所述步驟s4中恒溫培養(yǎng)的溫度為30攝氏度。經(jīng)過上述檢測(cè)方法檢測(cè)后，若觀察到氣泡產(chǎn)生，則證明牛奶中存在微生物，反之，則證明不存在微生物。在每批次的檢測(cè)中，應(yīng)當(dāng)設(shè)置空白組，即以無菌水作為檢測(cè)對(duì)象，采用上述方法進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)施例2一種牛奶中微生物的檢測(cè)方法，包括如下步驟：步驟s1：制備半固體培養(yǎng)基，滅菌后均分裝至檢測(cè)盒不同的培養(yǎng)槽內(nèi)，使所述半固體培養(yǎng)基的平面與所述培養(yǎng)槽的開口平面平齊，所述培養(yǎng)槽設(shè)置在基板上，所述培養(yǎng)槽的周側(cè)設(shè)置油性涂層圈，每100ml所述半固體培養(yǎng)基由下述重量配比的原料制成：瓊脂0.1g、黃原膠0.05g、酵母膏3.5g、菊粉3g、花生粉8g、海帶10g、磷酸二氫鉀2g、余量為水，所述半固體培養(yǎng)基的ph為7.0，25攝氏度下的粘度為2.1mpa·s；步驟s2：將待檢測(cè)牛奶敞口置于20攝氏度的無菌環(huán)境中靜置2小時(shí)；步驟s3：在無菌環(huán)境中，將步驟s2靜置后的待檢測(cè)牛奶用孔徑不大于45微米的濾膜過濾，截留所述待檢測(cè)牛奶中的微生物，將所述濾膜截留微生物的一面平整貼合在所述培養(yǎng)槽上，蓋上蓋板，用滴管吸取無菌水將所述蓋板與所述基板之間用水密封，保證兩者之間無氣泡；步驟s4：將所述檢測(cè)盒置于培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)2小時(shí)，觀察所述蓋板與所述基板之間是否有氣泡產(chǎn)生。本實(shí)施例中，所述步驟s4中恒溫培養(yǎng)的溫度為35攝氏度。實(shí)施例3一種牛奶中微生物的檢測(cè)方法，包括如下步驟：步驟s1：制備半固體培養(yǎng)基，滅菌后均分裝至檢測(cè)盒不同的培養(yǎng)槽內(nèi)，使所述半固體培養(yǎng)基的平面與所述培養(yǎng)槽的開口平面平齊，所述培養(yǎng)槽設(shè)置在基板上，所述培養(yǎng)槽的周側(cè)設(shè)置油性涂層圈，每100ml所述半固體培養(yǎng)基由下述重量配比的原料制成：瓊脂0.2g、黃原膠0.1g、酵母膏5g、菊粉3g、花生粉10g、海帶12g、磷酸二氫鉀1g、余量為水，所述半固體培養(yǎng)基的ph為7.0，25攝氏度下的粘度為2.6mpa·s；步驟s2：將待檢測(cè)牛奶敞口置于30攝氏度的無菌環(huán)境中靜置1小時(shí)；步驟s3：在無菌環(huán)境中，將步驟s2靜置后的待檢測(cè)牛奶用孔徑不大于45微米的濾膜過濾，截留所述待檢測(cè)牛奶中的微生物，將所述濾膜截留微生物的一面平整貼合在所述培養(yǎng)槽上，蓋上蓋板，用滴管吸取無菌水將所述蓋板與所述基板之間用水密封，保證兩者之間無氣泡；步驟s4：將所述檢測(cè)盒置于培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)6小時(shí)，觀察所述蓋板與所述基板之間是否有氣泡產(chǎn)生。本實(shí)施例中，所述步驟s4中恒溫培養(yǎng)的溫度為25攝氏度。實(shí)施例4一種牛奶中微生物的檢測(cè)方法，包括如下步驟：步驟s1：制備半固體培養(yǎng)基，滅菌后均分裝至檢測(cè)盒不同的培養(yǎng)槽內(nèi)，使所述半固體培養(yǎng)基的平面與所述培養(yǎng)槽的開口平面平齊，所述培養(yǎng)槽設(shè)置在基板上，所述培養(yǎng)槽的周側(cè)設(shè)置油性涂層圈，每100ml所述半固體培養(yǎng)基由下述重量配比的原料制成：瓊脂0.15g、黃原膠0.15g、酵母膏3g、菊粉5g、花生粉12g、海帶10g、磷酸二氫鉀2.5g、余量為水，所述半固體培養(yǎng)基的ph為7.2，25攝氏度下的粘度為3.0mpa·s；步驟s2：將待檢測(cè)牛奶敞口置于30攝氏度的無菌環(huán)境中靜置1.2小時(shí)；步驟s3：在無菌環(huán)境中，將步驟s2靜置后的待檢測(cè)牛奶用孔徑不大于45微米的濾膜過濾，截留所述待檢測(cè)牛奶中的微生物，將所述濾膜截留微生物的一面平整貼合在所述培養(yǎng)槽上，蓋上蓋板，用滴管吸取無菌水將所述蓋板與所述基板之間用水密封，保證兩者之間無氣泡；步驟s4：將所述檢測(cè)盒置于培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)5小時(shí)，觀察所述蓋板與所述基板之間是否有氣泡產(chǎn)生。本實(shí)施例中，所述步驟s4中恒溫培養(yǎng)的溫度為28攝氏度。實(shí)施例5一種牛奶中微生物的檢測(cè)方法，包括如下步驟：步驟s1：制備半固體培養(yǎng)基，滅菌后均分裝至檢測(cè)盒不同的培養(yǎng)槽內(nèi)，使所述半固體培養(yǎng)基的平面與所述培養(yǎng)槽的開口平面平齊，所述培養(yǎng)槽設(shè)置在基板上，所述培養(yǎng)槽的周側(cè)設(shè)置油性涂層圈，每100ml所述半固體培養(yǎng)基由下述重量配比的原料制成：瓊脂0.18g、黃原膠0.12g、酵母膏4.2g、菊粉4g、花生粉8.5g、海帶11g、磷酸二氫鉀1.5g、余量為水，所述半固體培養(yǎng)基的ph為7.0，25攝氏度下的粘度為1.2mpa·s；步驟s2：將待檢測(cè)牛奶敞口置于30攝氏度的無菌環(huán)境中靜置1.2小時(shí)；步驟s3：在無菌環(huán)境中，將步驟s2靜置后的待檢測(cè)牛奶用孔徑不大于45微米的濾膜過濾，截留所述待檢測(cè)牛奶中的微生物，將所述濾膜截留微生物的一面平整貼合在所述培養(yǎng)槽上，蓋上蓋板，用滴管吸取無菌水將所述蓋板與所述基板之間用水密封，保證兩者之間無氣泡；步驟s4：將所述檢測(cè)盒置于培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)4小時(shí)，觀察所述蓋板與所述基板之間是否有氣泡產(chǎn)生。本實(shí)施例中，所述步驟s4中恒溫培養(yǎng)的溫度為32攝氏度。實(shí)施例6參閱圖2，本實(shí)施例所描述的牛奶中微生物的檢測(cè)方法，是在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上進(jìn)行的改進(jìn)，與實(shí)施例1不同的是：所述蓋板2包括若干不連續(xù)的蓋片6，所述蓋片的中心對(duì)應(yīng)所述培養(yǎng)槽的中心覆蓋，所述蓋片的中心至該蓋片的周緣任一點(diǎn)的距離大于所述培養(yǎng)槽的中心至所述油性涂層圈的外周任一點(diǎn)的距離。其中，蓋片的數(shù)量與培養(yǎng)槽的數(shù)量相對(duì)應(yīng)。通過上述改進(jìn)，可以完全避免相鄰培養(yǎng)槽之間的影響，防止誤判，縮小相鄰兩個(gè)培養(yǎng)槽之間的距離，減小檢測(cè)盒的體積。對(duì)比例1該對(duì)比例所描述的牛奶中微生物的檢測(cè)方法，包括如下步驟：步驟s1：將待檢測(cè)牛奶稀釋10倍敞口置于25攝氏度的無菌環(huán)境中靜置4小時(shí)；步驟s2：在無菌環(huán)境中，取步驟s1靜置后的待檢測(cè)牛奶1ml加入檢測(cè)盒的培養(yǎng)槽中；步驟s3：制備液體培養(yǎng)基，滅菌后均分裝至上述培養(yǎng)槽內(nèi)，使所述液體培養(yǎng)基的液面與所述培養(yǎng)槽的開口平面平齊，所述培養(yǎng)槽設(shè)置在基板上，所述培養(yǎng)槽的周側(cè)設(shè)置油性涂層圈，蓋上蓋板，用滴管吸取無菌水將所述蓋板與所述基板之間用水密封，保證兩者之間無氣泡，每100ml所述液體培養(yǎng)基由下述重量配比的原料制成：酵母膏4g、菊粉4g、花生粉10g、海帶9g、磷酸二氫鉀2g、余量為水，所述液體培養(yǎng)基的ph為7.0；步驟s4：將所述檢測(cè)盒置于培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)34小時(shí)，觀察所述蓋板與所述基板之間是否有氣泡產(chǎn)生。經(jīng)該方法檢測(cè)后，若觀察到氣泡產(chǎn)生，則證明牛奶中存在微生物，反之，則證明不存在微生物。使用該檢測(cè)方法所耗用的檢測(cè)時(shí)間至少為38個(gè)小時(shí)，甚至更長(zhǎng)，為本發(fā)明檢測(cè)時(shí)間的3倍以上，而實(shí)際操作中若采用其它同類培養(yǎng)基會(huì)耗用更長(zhǎng)的時(shí)間。對(duì)比例2該對(duì)比例所描述的牛奶中微生物的檢測(cè)方法，與實(shí)施例1基本相同，所不同的是：每100ml所述半固體培養(yǎng)基由下述重量配比的原料制成：瓊脂0.3g、黃原膠0.2g、酵母膏4g、菊粉4g、花生粉10g、海帶9g、磷酸二氫鉀2g、余量為水，所述半固體培養(yǎng)基的ph為6.8，25攝氏度下的粘度為4mpa·s。該半固體培養(yǎng)基的制備方法參閱實(shí)施例1。對(duì)比例3該對(duì)比例所描述的牛奶中微生物的檢測(cè)方法，與實(shí)施例1基本相同，所不同的是：每100ml所述半固體培養(yǎng)基由下述重量配比的原料制成：瓊脂0.12g、黃原膠0.08g、酵母膏5g、菊粉4g、花生粉12g、磷酸二氫鉀2g、余量為水，所述半固體培養(yǎng)基的ph為7.0，25攝氏度下的粘度為1.8mpa·s。效果評(píng)價(jià)采用同批次牛奶作為檢測(cè)對(duì)象，分為實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組和空白組。實(shí)驗(yàn)組：采用本發(fā)明實(shí)施例1的檢測(cè)方法；對(duì)照組：采用對(duì)比例1~3及國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)gb4789.2-2016的檢測(cè)方法；空白組：以無菌水作為檢測(cè)對(duì)象；當(dāng)空白組出現(xiàn)氣泡時(shí)，該組實(shí)驗(yàn)為無效實(shí)驗(yàn)。每種檢測(cè)方法設(shè)3組平行實(shí)驗(yàn)。1）統(tǒng)計(jì)檢測(cè)時(shí)間，見下表所示：方法實(shí)施例1對(duì)比例1對(duì)比例2對(duì)比例3gb4789.2-2016空白組檢測(cè)時(shí)間/小時(shí)5382016360注：國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)gb4789.2-2016中檢測(cè)的是菌落總數(shù)，而在本發(fā)明中并不需要統(tǒng)計(jì)菌落總數(shù)，只需檢出有微生物存在即可，因此，在以國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)gb4789.2-2016進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)時(shí)間以肉眼看到菌落產(chǎn)生為止。2）檢出限的判斷以本發(fā)明方法檢出某批次牛奶中存在微生物為前提，采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)gb4789.2-2016檢測(cè)方法為基準(zhǔn)，檢測(cè)該批次牛奶中微生物的總數(shù)，作為基數(shù)值；分別將該檢測(cè)牛奶稀釋10倍、100倍、1000倍，稀釋倍數(shù)以10倍遞增，采用本發(fā)明實(shí)施例1和對(duì)照組對(duì)比例1~3的方法檢測(cè)牛奶中是否存在微生物，直至檢測(cè)不出微生物存在為止。檢出限粗估：采用基數(shù)值/稀釋倍數(shù)，所得數(shù)值對(duì)應(yīng)的計(jì)數(shù)單位，記為檢出限，以101、102、103cfu表示，結(jié)果見下表所示：方法實(shí)施例1對(duì)比例1對(duì)比例2對(duì)比例3gb4789.2-2016空白組檢出限/cfu101102103103102-上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：采用本發(fā)明檢測(cè)方法檢測(cè)牛奶中是否存在微生物，操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)結(jié)果可靠，檢測(cè)時(shí)間顯著縮短，易于觀察判定，過程環(huán)保。最后說明的是，以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案所做的其他修改或者等同替換，只要不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍，均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。當(dāng)前第1頁12