本發(fā)明屬于食品加工
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種駱駝乳酸飲料及其制備方法的
技術(shù)領(lǐng)域：
。技術(shù)背景近年來，各地霧霾天氣不斷，霧霾中危害人類健康的主要是直徑小于10微米的氣溶膠粒子，它能直接進(jìn)入并粘附在人體上下呼吸道和肺葉中，降低人體的免疫力，引起鼻炎、支氣管炎等病癥，長期處于這種環(huán)境還會誘發(fā)肺癌,霧霾天中的顆粒污染物不僅會引發(fā)心肌梗死，還會造成心肌缺血或損傷，當(dāng)空氣中污染物加重時，心血管病人的死亡率會增高。如何應(yīng)對霧霾天氣已經(jīng)成為全球關(guān)注的焦點。目前，用于預(yù)防治療吸煙和霧霾等對人體健康造成慢性影響的食品、保健食品乃至藥物都很多，例如，公開號為cn103583754b的中國專利，該專利公開了一種清咽除霾保健茶飲料，成分包括綠茶、山藥、黑豆、西蘭花、胡蘿卜、玉米草、黑種草、白果、平菇、金銀花、杭白菊、板藍(lán)根、干姜、佛手、胖大海、紫蘇、桔梗、梔子、甘草、余甘子、川貝母、牡丹皮、蜂蜜和水；公開號為cn104286306a的中國專利，該專利公開了一種無花果寄生排毒茶，成分包括無花果寄生、桔梗、廣藿香、薄荷、玉竹、魚腥草、蘆根、烏梅、山藥、薏苡仁和桃仁，有益效果；以上預(yù)防和治療因霧霾天氣而引起的呼吸系統(tǒng)疾病的藥品或保健品的原料都是采用潤肺、解毒功效的中藥以及綠茶、花茶、五谷雜糧等食品，將多種中藥材料混合在一起，風(fēng)味不佳，無法作為一種飲品或飲料長期飲用，只能作為保健茶飲用，且制備工藝繁雜，成本也難以控制，不利于工業(yè)化生產(chǎn)。駝乳中富含具有抗菌和保護(hù)活性的蛋白，這些蛋白在牛奶中沒有被發(fā)現(xiàn)，駝乳中富含牛奶中所缺少的溶解酵素和乳鐵傳遞蛋白，這兩種蛋白在增強(qiáng)人體免疫系統(tǒng)和殺菌作用上具有重要的功能。此外，駝乳還具有清潔肺和腸道的作用，能夠提高人體的免疫力，在非洲一些國家和地區(qū)，人們用駝乳治療傷口和炎癥。在印度，駝乳在沙漠地區(qū)被用來治療水腫、哮喘黃疸和貧血等疾病。駱駝乳營養(yǎng)豐富，構(gòu)成合理，非常接近人乳，具有多種生物活性，而且過敏原性很低，可作為對牛乳過敏的兒童的奶替代品，因此具有重要的開發(fā)利用價值。目前尚未有關(guān)于駱駝乳應(yīng)用于清肺除霾的報道。在現(xiàn)有駝乳加工工藝的基礎(chǔ)上進(jìn)行研究和開發(fā)，將駱駝乳與多種藥食同源植物和非藥食同源的草藥進(jìn)行復(fù)配，利用產(chǎn)品中的原料配比調(diào)節(jié)風(fēng)味，從而提供一種口感佳且適合霧霾天飲用的駱駝乳飲料。技術(shù)實現(xiàn)要素：針對國內(nèi)駱駝乳酸飲料記載較少的現(xiàn)狀，且現(xiàn)有清肺除霾食品普遍存在口感差、中藥味重且制作成本高等問題，本發(fā)明提供一種清肺除霾駱駝乳酸飲料及其制備方法及其應(yīng)用，通過從新疆阿克蘇驢乳自然發(fā)酵酸奶中分離篩選出的一株香味菌(myroidessp.)l6和乳球菌(lactococcussp.)l122，添加到駱駝乳中進(jìn)行分段變溫發(fā)酵，再與多種藥食同源植物和非藥食同源的草藥進(jìn)行復(fù)配，利用產(chǎn)品中的原料配比調(diào)節(jié)風(fēng)味，采用保溫浸提、榨汁破碎等一系列獨特的制備工藝，有效的解決了現(xiàn)有清肺除霾食品感官品質(zhì)差、制作工藝復(fù)雜的問題，制作出的駱駝乳酸飲料口感綿密、奶香醇郁，對于呼吸道霧霾侵害有緩解作用，對食品加工
技術(shù)領(lǐng)域：
具有廣泛的實用性。本發(fā)明提供一種清肺除霾駱駝乳酸飲料，按照重量份數(shù)計，包括駱駝乳100-150份、木糖醇3-9份、恰瑪古浸提液16-20份、庫魯木提浸提液16-20份、荸薺汁11-13份、白蘿卜汁3-10份、乳球菌混合發(fā)酵劑3-5份、香味菌混合發(fā)酵劑1-3份、純凈水700-1100份。本發(fā)明提供一種清肺除霾的駱駝乳酸飲料的制備方法，具體包括如下步驟：(1)制備發(fā)酵乳：新鮮采集的100-150份駱駝乳采用巴氏殺菌的方式進(jìn)行滅菌處理，滅菌溫度70℃-80℃，滅菌時間5s-10s，滅菌后迅速冷卻至室溫，加入3-9份木糖醇，接種3-5份乳球菌混合發(fā)酵劑，初期在40℃-41℃下發(fā)酵6h-8h,后期降溫至33℃-35℃，接種1-3份香味菌混合發(fā)酵劑，在33℃-35℃條件下發(fā)酵1-1.5h，得到駱駝發(fā)酵乳。(2)制備浸提液：將清洗后的恰瑪古、庫魯木提切成小塊，分別添加3倍體積的純凈水，緩慢加熱，在90℃-100℃的條件下保溫浸提，浸提時間為30min-40min，浸提次數(shù)為2-3次，多次浸提后過濾，得到恰瑪古浸提液和庫魯木提浸提液,冷卻至室溫備用。(3)制備荸薺汁和白蘿卜汁：將清洗后的白蘿卜和清洗去皮后的荸薺切成小塊，分別加入2倍體積的純凈水榨汁破碎，經(jīng)40目震蕩篩過濾3次，在溫度120℃的條件下超高溫瞬時滅菌15s，得到荸薺汁和白蘿卜汁，冷卻至室溫備用。(4)混合：將上述步驟得到的駱駝發(fā)酵乳、16-20份恰瑪古浸提液、16-20份庫魯木提浸提液、11-13份荸薺汁和3-10份白蘿卜汁進(jìn)行混和攪拌，經(jīng)混和制得駱駝乳酸飲料。本發(fā)明中，制備發(fā)酵乳步驟中的滅菌溫度為75℃，滅菌時間為8s，初期時發(fā)酵溫度為41℃，發(fā)酵時間為7h。本發(fā)明中，制備浸提液步驟中的保溫浸提溫度為95℃，浸提時間為35min，浸提次數(shù)為3次。本發(fā)明中，乳球菌混合發(fā)酵劑是由香味菌(myroidessp.)l6和乳球菌(lactococcussp.)l122按照重量比以2：5的比例復(fù)合制得。本發(fā)明中，香味菌混合發(fā)酵劑是由香味菌(myroidessp.)l6和乳球菌(lactococcussp.)l122按照重量比以3：1的比例復(fù)合制得。本發(fā)明從新疆阿克蘇驢乳自然發(fā)酵酸奶中取樣，篩選出一批生長良好的微生物菌株，進(jìn)行微生物菌種的培養(yǎng)、分離與篩選，從中優(yōu)選得到編號為l6的菌株。菌株l6可在4℃-35℃生長良好，革蘭氏染色為陰性，大約0.5–0.8×1.4–2.9μm，好氧，無運(yùn)動性，最適生長溫度34℃，可耐受含有0-5％nacl的培養(yǎng)基上生長。在完全培養(yǎng)基上，菌落為淡紅色，圓形，微突起，邊緣規(guī)則，可產(chǎn)生令人愉悅的香味。菌體氧化酶和觸酶為陽性，可胨化牛奶，可水解明膠、淀粉、酪蛋白，具有堿性磷酸酶，胰蛋白酶和脂肪酶活性，不產(chǎn)吲哚和h2s；對于葡萄糖、甘露醇、肌醇、山梨醇、鼠李糖，阿拉伯糖，甘露糖、蔗糖發(fā)酵不產(chǎn)酸?？衫冒肴樘?、葡萄糖、糊精、阿拉伯糖確定，單甲基丁二酸，α-羥基丁酸、丁二酸、溴代丁二、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、glycyl-l-aspartic、甘氨酰-l-谷氨酸和脯氨酸作為單一碳源生長，通過上述該菌株l6的菌落形態(tài)、生理生化特性可知，菌株l6具有新菌種的特性。通過提取菌株l6的總dna，采用細(xì)菌16srdnapcr擴(kuò)增通用引物，進(jìn)行pcr擴(kuò)增，pcr產(chǎn)物經(jīng)切膠純化，經(jīng)測序。將實驗菌株的所得序列與genbank數(shù)據(jù)庫中的已知序列進(jìn)行blast比較，確定與實驗菌株親緣關(guān)系最近的種屬。并結(jié)合eztaxon中序列比對并調(diào)取相關(guān)模式菌株序列，以進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育樹分析標(biāo)準(zhǔn)模式菌序列，利用mega5.0軟件包采用鄰接法(neighbor-joiningmethod)進(jìn)行聚類分析和系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建。菌株l6與模式菌株myroidesprofundid25t(eu204978)最大同源為97.1％，與同屬其它菌株同源性均小于97.0％，表明該菌種l6具有典型鮮明的新菌種特性，暫命名為香味菌(myroidessp.)。該菌株已于申請日前保藏于布達(dá)佩斯條約微生物國際保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(cgmcc)，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編：100101，保藏日期2017年1月17日，菌種保藏號為cgmccno.13634，經(jīng)微生物學(xué)鑒定為香味菌屬新種，命名為香味菌(myroidessp.)l6。本發(fā)明通過從新疆阿克蘇驢乳自然發(fā)酵酸奶中分離篩選得到菌株乳球菌(lactococcussp.)l122，經(jīng)稀釋后至乳酸細(xì)菌培養(yǎng)基平板上28℃恒溫培養(yǎng)。當(dāng)乳酸菌生長代謝出乳酸后，會使ph下降而使顏色由綠變?yōu)辄S綠，挑取形狀、大小、顏色等不同的菌落分別劃線接種于相應(yīng)的平板，直至無雜菌落，從中優(yōu)選出一株編號為l122的菌株。菌株l122可在10℃-41℃生長良好，革蘭氏染色為陽性，球菌，大約0.77×0.77μm，好氧，無運(yùn)動性。最適生長溫度40℃，可耐受含有3％nacl的培養(yǎng)基上生長，在24小時內(nèi)達(dá)到ph值4.8?？衫冒肴樘恰⑷樘?、蜜二糖，棉子糖，蔗糖、甘露醇和淀粉產(chǎn)酸，利用核糖、木糖不產(chǎn)酸，亮氨酸氨基肽酶和酸性磷酸酶活性陽性，但不可利用β-葡萄糖醛酸酶，阿拉伯糖，n-acetyld-glucosamine，d-木糖，甘露醇，d-核糖，果糖，阿拉伯糖，熊果苷和氨基葡萄糖作為單一碳源同化。提取菌株l122的總dna，采用細(xì)菌16srdnapcr擴(kuò)增通用引物，進(jìn)行pcr擴(kuò)增，pcr產(chǎn)物經(jīng)切膠純化，測序。將實驗菌株的所得序列與genbank數(shù)據(jù)庫中的已知序列進(jìn)行blast比較，確定與實驗菌株親緣關(guān)系最近的種屬。并結(jié)合eztaxon中序列比對并調(diào)取相關(guān)模式菌株序列，以進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育樹分析標(biāo)準(zhǔn)模式菌序列，利用mega5.0軟件包采用鄰接法進(jìn)行聚類分析和系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建。菌株l122與模式菌株lactococcuslaudensisdsm28961t(kj394457)最大同源為97.1％，與同屬其它菌株同源性均小于97.0％，表明該菌種l122具有典型鮮明的新菌種特性，暫命名為乳球菌(lactococcussp.)l122。該菌株已于申請日前保藏于布達(dá)佩斯條約微生物國際保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(cgmcc)，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編：100101，保藏日期2017年1月17日，菌種保藏號為cgmccno.13633，經(jīng)微生物學(xué)鑒定為乳球菌新種，命名為乳球菌(lactococcussp.)l122。進(jìn)一步，本申請?zhí)峁┣宸纬驳鸟橊勅樗犸嬃显谥苽涓纳?、預(yù)防和治療因霧霾引起的一系列不適癥狀及其相關(guān)并發(fā)癥的保健品中的應(yīng)用。通過實施本發(fā)明提供的技術(shù)方案，可以達(dá)到以下效果:(1)本發(fā)明提供一種清肺除霾駱駝乳酸飲料及其制備方法，通過從新疆阿克蘇驢乳自然發(fā)酵酸奶中分離篩選出的一株香味菌(myroidessp.)l6和乳球菌(lactococcussp.)l122，添加到駱駝乳中進(jìn)行分段變溫發(fā)酵，再與多種藥食同源植物和非藥食同源的草藥進(jìn)行復(fù)配，利用產(chǎn)品中的原料配比調(diào)節(jié)風(fēng)味，采用保溫浸提、榨汁破碎等一系列獨特的制備工藝，有效的解決了現(xiàn)有清肺除霾食品感官品質(zhì)差、制作工藝復(fù)雜的問題，制作出清肺除霾駱駝乳酸飲料口感綿密、奶香醇郁，對于呼吸道霧霾侵害有緩解作用，對食品加工
技術(shù)領(lǐng)域：
具有廣泛的實用性。(2)本發(fā)明通過響應(yīng)面法優(yōu)化駱駝乳酸飲料的制備工藝，以及通過系列試驗得出制備工藝的最佳參數(shù)，即初期時發(fā)酵溫度為41℃、發(fā)酵時間為7h、浸提溫度為95℃、浸提時間為35min。在此條件下，制備的駱駝乳酸飲料白色中帶淡棕色，奶香味濃郁，酸度、咸中等，有淡中藥味，感官評分最高達(dá)到98分。(3)將本發(fā)明提供一種清肺除霾駱駝乳酸飲料應(yīng)用到動物實驗中，實驗結(jié)果表明暴露于pm2.5后會使小鼠肺部的炎癥因子顯著偏離正常水平，本發(fā)明提供的駱駝乳酸飲料可以抵抗pm2.5誘導(dǎo)的肺部炎癥，維持肺部的炎癥因子不偏離正常水平。本發(fā)明其他實施例制備的駱駝乳酸飲料具有相似的活性。附圖說明圖1顯示為香味菌(myroidessp.)l6的系統(tǒng)進(jìn)化樹。圖2顯示為乳球菌(lactococcussp.)l122的系統(tǒng)進(jìn)化樹。圖3顯示為發(fā)酵時間和發(fā)酵溫度對駱駝乳酸飲料感官評分影響的等高線圖。圖4顯示為發(fā)酵時間和發(fā)酵溫度對駱駝乳酸飲料感官評分影響的響應(yīng)面圖。圖5顯示為浸提溫度和發(fā)酵溫度對駱駝乳酸飲料感官評分影響的等高線圖。圖6顯示為浸提溫度和發(fā)酵溫度對駱駝乳酸飲料感官評分影響的響應(yīng)面圖。圖7顯示為發(fā)酵溫度和浸提時間對駱駝乳酸飲料感官評分影響的等高線圖。圖8顯示為發(fā)酵溫度和浸提時間對駱駝乳酸飲料感官評分影響的響應(yīng)面圖。圖9顯示為發(fā)酵時間和浸提溫度對駱駝乳酸飲料感官評分影響的等高線圖。圖10顯示為發(fā)酵時間和浸提溫度對駱駝乳酸飲料駱駝乳酸飲料感官評分影響的響應(yīng)面圖。圖11顯示為發(fā)酵時間和浸提時間對駱駝乳酸飲料感官評分影響的等高線圖。圖12顯示為發(fā)酵時間和浸提時間對駱駝乳酸飲料感官評分影響的響應(yīng)面圖。圖13顯示為浸提溫度和浸提時間對駱駝乳酸飲料感官評分影響的等高線圖。圖14顯示為浸提溫度和浸提時間對駱駝乳酸飲料感官評分影響的響應(yīng)面圖。具體實施方式下面，舉實施例說明本發(fā)明，但是，本發(fā)明并不限于下述的實施例。本發(fā)明中使用的原料和試劑:駱駝乳(購自喀什地區(qū)駱駝養(yǎng)殖戶)，咽炎片(產(chǎn)自山東中大千方制藥有限公司)。本發(fā)明中使用的儀器:分析天平(上海第二天平儀器廠)，電子天平(1509001)(德國gamr公司)，高壓滅菌器(yx280b)(上海三申醫(yī)療器械廠)，恒溫水浴鍋(上海金宏實驗設(shè)備有限公司,dkb-501)。另外，在下述的說明中，如無特別說明，％皆指m/m質(zhì)量百分比，本發(fā)明中使用的材料：完全培養(yǎng)基包括蛋白胨10g、酵母膏5g、葡萄糖1g和kh2po43g，ph為7.0。乳酸細(xì)菌培養(yǎng)基(mrs)包括蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母膏5.0g、檸檬酸氫二銨2.0g、葡萄糖20.0g、吐溫801.0ml、乙酸鈉5.0g、磷酸氫二鉀2.0g、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.25g、瓊脂18.0g和蒸餾水1l，ph為6.2-6.6)本發(fā)明中選用的所有試劑、原料和儀器都為本領(lǐng)域熟知選用的，但不限制本發(fā)明的實施，其他本領(lǐng)域熟知的一些試劑和設(shè)備都可適用于本發(fā)明以下實施方式的實施。實施例一：菌株l6香味菌(myroidessp.)的篩選、分類及鑒定(1)菌種的分離與鑒定本發(fā)明所使用的菌株香味菌(myroidessp.)l6通過從新疆阿克蘇驢乳自然發(fā)酵酸奶中分離出一株菌株，經(jīng)梯度稀釋，稀釋液加至完全培養(yǎng)基平板上并涂布，平板置28℃恒溫培養(yǎng)。待長出菌落后挑取形狀、大小、顏色等不同的菌落分別劃線接種于平板，直至無雜菌落，從中優(yōu)選出一株編號為l6的菌株。提取菌株l6的總dna，采用細(xì)菌16srdnapcr擴(kuò)增通用引物，進(jìn)行pcr擴(kuò)增，pcr產(chǎn)物經(jīng)切膠純化，經(jīng)測序，序列參見附后的基因序列表sequencelisting。將實驗菌株的所得序列與genbank數(shù)據(jù)庫中的已知序列進(jìn)行blast比較，確定與實驗菌株親緣關(guān)系最近的種屬。并結(jié)合eztaxon(http://www.ezbiocloud.net/eztaxon)中序列比對并調(diào)取相關(guān)模式菌株序列，以進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育樹分析標(biāo)準(zhǔn)模式菌序列，利用mega5.0軟件包采用鄰接法(neighbor-joiningmethod)進(jìn)行聚類分析和系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建。由系統(tǒng)進(jìn)化樹可示，菌株l6與模式菌株myroidesprofundid25t(eu204978)最大同源為97.1％，兩者主要差異見表1。與同屬其它菌株同源性均小于97.0％，表明該菌種l6具有典型鮮明的新菌種特性，系統(tǒng)進(jìn)化樹見圖1。菌株l6暫命名為香味菌(myroidessp.)。該菌株已于申請日前保藏于布達(dá)佩斯條約微生物國際保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(cgmcc)。地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編：100101。保藏日期2017年1月17日，菌種保藏號為cgmccno.13634。經(jīng)微生物學(xué)鑒定為香味菌屬新種，暫命名為香味菌(myroidessp.)l6。(2)生理生化特性菌株l6可在4℃-35℃生長良好，革蘭氏染色為陰性，大約0.5–0.8×1.4–2.9μm，好氧，無運(yùn)動性，最適生長溫度34℃，可耐受含有0-5％nacl的培養(yǎng)基上生長。在完全培養(yǎng)基上，菌落為淡紅色，圓形，微突起，邊緣規(guī)則，可產(chǎn)生令人愉悅的香味。菌體氧化酶和觸酶為陽性，可胨化牛奶，可水解明膠、淀粉、酪蛋白，具有堿性磷酸酶，胰蛋白酶和脂肪酶活性，不產(chǎn)吲哚和h2s；葡萄糖、甘露醇、肌醇、山梨醇、鼠李糖，阿拉伯糖，甘露糖、蔗糖發(fā)酵不產(chǎn)酸?？衫冒肴樘恰⑵咸烟?、糊精、阿拉伯糖確定，單甲基丁二酸，α-羥基丁酸、丁二酸、溴代丁二、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、glycyl-l-aspartic、甘氨酰-l-谷氨酸和脯氨酸作為單一碳源生長。菌株l6與鄰近模式菌株myroidesprofundid25t(eu204978)主要差異見表1，由此可知，該菌株l6具有新菌種的特性，參見常見前面申報專利對于新菌種的描述。表1：菌株l6與鄰近模式菌株主要差異特性l6myroidesprofundid25t形態(tài)桿狀梭形桿溫度范圍4-30℃8-42℃nacl濃度0-50-8ph范圍4-105-9亞硝酸鹽還原-+硝酸鹽還原+-明膠水解-+脂肪酶++單一碳源利用:糊精+-l-阿拉伯糖++吐溫80--吐溫40--丙酮酸甲酯--組氨酸--胸苷-+乙酸+-α-酮戊二酸-+羥丁酸--實施例2：乳球菌(lactococcussp.)l122的篩選、分類及鑒定(1)菌種的分離與鑒定本發(fā)明所使用的菌株l122乳球菌(lactococcussp.)分離自新疆阿克蘇驢乳自然發(fā)酵酸奶。用槍尖吸取0.5ml梯度稀釋后，稀釋液加至乳酸細(xì)菌培養(yǎng)基平板上并涂布，平板置28℃恒溫培養(yǎng)。當(dāng)乳酸菌生長代謝出乳酸后，會使ph下降而使顏色由綠變?yōu)辄S綠，挑取形狀、大小、顏色等不同的菌落分別劃線接種于相應(yīng)的平板，直至無雜菌落，從中優(yōu)選出一株編號為l122的菌株。提取菌株l122的總dna，采用細(xì)菌16srdnapcr擴(kuò)增通用引物，進(jìn)行pcr擴(kuò)增，pcr產(chǎn)物經(jīng)切膠純化，經(jīng)測序，序列參見附后的基因序列表sequencelisting。將實驗菌株的所得序列與genbank數(shù)據(jù)庫中的已知序列進(jìn)行blast比較，確定與實驗菌株親緣關(guān)系最近的種屬。并結(jié)合eztaxon中序列比對并調(diào)取相關(guān)模式菌株序列，以進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育樹分析標(biāo)準(zhǔn)模式菌序列，利用mega5.0軟件包采用鄰接法(neighbor-joiningmethod)進(jìn)行聚類分析和系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建，菌株l122與模式菌株lactococcuslaudensisdsm28961t(kj394457)最大同源為97.1％，與同屬其它菌株同源性均小于97.0％，極可能為新種，系統(tǒng)進(jìn)化樹見圖2，表明該菌種l6具有典型鮮明的新菌種特性，菌株l122暫命名為乳球菌(lactococcussp.)。該菌株已于申請日前保藏于布達(dá)佩斯條約微生物國際保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(cgmcc)。地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編：100101。保藏日期2017年1月17日，菌種保藏號為cgmccno.13633。經(jīng)微生物學(xué)鑒定為乳球菌潛在新種，菌株l122暫命名為乳球菌(lactococcussp.)l122。(2)生理生化特性菌株l122可在10℃-41℃生長良好，革蘭氏染色為陽性，球菌，大約0.77×0.77μm，好氧，無運(yùn)動性。最適生長溫度40℃，可耐受含有3％nacl的培養(yǎng)基上生長。菌株顯示了良好的牛奶酸化能力，在24小時內(nèi)達(dá)到ph值4.8?？衫冒肴樘恰⑷樘?、蜜二糖，棉子糖，蔗糖、甘露醇和淀粉發(fā)酵產(chǎn)酸，而利用核糖、木糖發(fā)酵不產(chǎn)酸。亮氨酸氨基肽酶和酸性磷酸酶活性陽性，可產(chǎn)生蛋白酶和脂肪酶，但β-葡萄糖醛酸酶為陰性。牛奶胨化陽性，可利用葡萄糖，阿拉伯糖，n-acetyld-glucosamine，d-木糖，甘露醇，d-核糖，果糖，阿拉伯糖，環(huán)糊精，熊果苷和氨基葡萄糖，作為單一碳源生長，確定其為乳球菌新種，菌株l122與鄰近模式菌株lactococcuslaudensisdsm28961t(kj394457)主要差異見表2。表2：菌種l122與最鄰近菌株代謝差異實施例三：本發(fā)明提供一種清肺除霾駱駝乳酸飲料，按照重量份數(shù)計，包括駱駝乳100-150份、木糖醇3-9份、恰瑪古浸提液16-20份、庫魯木提浸提液16-20份、荸薺汁11-13份、白蘿卜汁3-10份、乳球菌混合發(fā)酵劑3-5份、香味菌混合發(fā)酵劑1-3份、純凈水700-1100份。一種清肺除霾駱駝乳酸飲料的制備方法，具體包括如下步驟：(1)制備發(fā)酵乳：新鮮采集的100-150份駱駝乳采用巴氏殺菌的方式進(jìn)行滅菌處理，滅菌溫度70℃-80℃，滅菌時間5s-10s，滅菌后迅速冷卻至室溫，加入3-9份木糖醇，接種3-5份乳球菌混合發(fā)酵劑，初期在40℃-41℃下發(fā)酵6h-8h,后期降溫至33℃-35℃，接種1-3份香味菌混合發(fā)酵劑，在33℃-35℃條件下發(fā)酵1-1.5h，得到駱駝發(fā)酵乳。(2)制備浸提液：將清洗后的恰瑪古、庫魯木提切成小塊，分別添加3倍體積的純凈水，緩慢加熱，在90℃-100℃的條件下保溫浸提，浸提時間為30min-40min，浸提次數(shù)為2-3次，多次浸提后過濾，得到恰瑪古浸提液和庫魯木提浸提液,冷卻至室溫備用。(3)制備荸薺汁和白蘿卜汁：將清洗后的白蘿卜和清洗去皮后的荸薺切成小塊，分別加入2倍純凈水榨汁破碎，經(jīng)40目震蕩篩過濾3次，在溫度120℃的條件下超高溫瞬時滅菌15s，得到荸薺汁和白蘿卜汁，冷卻至室溫備用。(4)混合：將上述步驟得到的駱駝發(fā)酵乳、16-20份恰瑪古浸提液、16-20份庫魯木提浸提液、11-13份荸薺汁和3-10份白蘿卜汁進(jìn)行混和攪拌，經(jīng)混和制得駱駝乳酸飲料。本實施例中，制備發(fā)酵乳步驟中的滅菌溫度為75℃，滅菌時間為8s，初期時的發(fā)酵溫度為41℃，發(fā)酵時間為7h。本實施例中，制備浸提液步驟中的保溫浸提溫度為95℃，浸提時間為35min，浸提次數(shù)為3次。本實施例中，乳球菌混合發(fā)酵劑是由香味菌(myroidessp.)l6和乳球菌(lactococcussp.)l122按照重量比以2：5的比例復(fù)合制得。本實施例中，香味菌混合發(fā)酵劑是由香味菌(myroidessp.)l6和乳球菌(lactococcussp.)l122按照重量比以3：1的比例復(fù)合制得。實施例四：新鮮采集的100份駱駝乳采用巴氏殺菌的方式進(jìn)行滅菌處理，滅菌溫度70℃，滅菌時間5s，滅菌后迅速冷卻至室溫，加入3份木糖醇，接種3份乳球菌混合發(fā)酵劑，初期在40℃下發(fā)酵6h,后期降溫至33℃，接種1份香味菌混合發(fā)酵劑，在33℃條件下發(fā)酵1h，得到駱駝發(fā)酵乳。將清洗后的恰瑪古、庫魯木提切成小塊，分別添加3倍純凈水，緩慢加熱，在90℃的條件下保溫浸提，浸提時間為30min，浸提次數(shù)為2，多次浸提后過濾，得到恰瑪古浸提液和庫魯木提浸提液,冷卻至室溫備用。將清洗后的白蘿卜和清洗去皮后的荸薺切成小塊，分別加入2倍純凈水榨汁破碎，經(jīng)40目震蕩篩過濾3次，在溫度120℃的條件下超高溫瞬時滅菌15s，得到荸薺汁和白蘿卜汁，冷卻至室溫備用。將上述步驟得到的駱駝發(fā)酵乳、16恰瑪古浸提液、16庫魯木提浸提液、11荸薺汁和3白蘿卜汁進(jìn)行混和攪拌，經(jīng)混和制得駱駝乳酸飲料。實施例五：新鮮采集的110份駱駝乳采用巴氏殺菌的方式進(jìn)行滅菌處理，滅菌溫度73℃，滅菌時間7s，滅菌后迅速冷卻至室溫，加入5份木糖醇，接種4份乳球菌混合發(fā)酵劑，初期在41℃下發(fā)酵7h,后期降溫至33℃-35℃，接種2份香味菌混合發(fā)酵劑，在34℃條件下發(fā)酵1h，得到駱駝發(fā)酵乳。將清洗后的恰瑪古、庫魯木提切成小塊，分別添加3倍純凈水，緩慢加熱，在92℃的條件下保溫浸提，浸提時間為32min，浸提次數(shù)為2次，多次浸提后過濾，得到恰瑪古浸提液和庫魯木提浸提液,冷卻至室溫備用。將清洗后的白蘿卜和清洗去皮后的荸薺切成小塊，分別加入2倍純凈水榨汁破碎，經(jīng)40目震蕩篩過濾3次，在溫度120℃的條件下超高溫瞬時滅菌15s，得到荸薺汁和白蘿卜汁，冷卻至室溫備用。將上述步驟得到的駱駝發(fā)酵乳、18份恰瑪古浸提液、18份庫魯木提浸提液、11份荸薺汁和6份白蘿卜汁進(jìn)行混和攪拌，經(jīng)混和制得駱駝乳酸飲料。實施例六：新鮮采集的130份駱駝乳采用巴氏殺菌的方式進(jìn)行滅菌處理，滅菌溫度75℃，滅菌時間8s，滅菌后迅速冷卻至室溫，加入7份木糖醇，接種5份乳球菌混合發(fā)酵劑，初期在40℃下發(fā)酵7h,后期降溫至35℃，接種2份香味菌混合發(fā)酵劑，在35℃條件下發(fā)酵1.5h，得到駱駝發(fā)酵乳。將清洗后的恰瑪古、庫魯木提切成小塊，分別添加3倍純凈水，緩慢加熱，在92℃的條件下保溫浸提，浸提時間為38min，浸提次數(shù)為3次，多次浸提后過濾，得到恰瑪古浸提液和庫魯木提浸提液,冷卻至室溫備用。將清洗后的白蘿卜和清洗去皮后的荸薺切成小塊，分別加入2倍純凈水榨汁破碎，經(jīng)40目震蕩篩過濾3次，在溫度120℃的條件下超高溫瞬時滅菌15s，得到荸薺汁和白蘿卜汁，冷卻至室溫備用。將上述步驟得到的駱駝發(fā)酵乳、19份恰瑪古浸提液、17份庫魯木提浸提液、12份荸薺汁和5份白蘿卜汁進(jìn)行混和攪拌，經(jīng)混和制得駱駝乳酸飲料。實施例七：新鮮采集的140份駱駝乳采用巴氏殺菌的方式進(jìn)行滅菌處理，滅菌溫度78℃，滅菌時間9s，滅菌后迅速冷卻至室溫，加入6份木糖醇，接種5份乳球菌混合發(fā)酵劑，初期在41℃下發(fā)酵6h,后期降溫至33℃-35℃，接種3份香味菌混合發(fā)酵劑，在34℃條件下發(fā)酵1h，得到駱駝發(fā)酵乳。將清洗后的恰瑪古、庫魯木提切成小塊，分別添加3倍純凈水，緩慢加熱，在98℃的條件下保溫浸提，浸提時間為37min，浸提次數(shù)為3次，多次浸提后過濾，得到恰瑪古浸提液和庫魯木提浸提液,冷卻至室溫備用。將清洗后的白蘿卜和清洗去皮后的荸薺切成小塊，分別加入2倍純凈水榨汁破碎，經(jīng)40目震蕩篩過濾3次，在溫度120℃的條件下超高溫瞬時滅菌15s，得到荸薺汁和白蘿卜汁，冷卻至室溫備用。將上述步驟得到的駱駝發(fā)酵乳、19份恰瑪古浸提液、17份庫魯木提浸提液、13份荸薺汁和9份白蘿卜汁進(jìn)行混和攪拌，經(jīng)混和制得駱駝乳酸飲料。實施例八：新鮮采集的150份駱駝乳采用巴氏殺菌的方式進(jìn)行滅菌處理，滅菌溫度80℃，滅菌時間10s，滅菌后迅速冷卻至室溫，加入9份木糖醇，接種5份乳球菌混合發(fā)酵劑，初期在41℃下發(fā)酵8h,后期降溫至35℃，接種3份香味菌混合發(fā)酵劑，在35℃條件下發(fā)酵1.5h，在41℃下發(fā)酵8h,得到駱駝發(fā)酵乳。將清洗后的恰瑪古、庫魯木提切成小塊，分別添加3倍純凈水，緩慢加熱，在100℃的條件下保溫浸提，浸提時間為40min，浸提次數(shù)為3次，多次浸提后過濾，得到恰瑪古浸提液和庫魯木提浸提液,冷卻至室溫備用。將清洗后的白蘿卜和清洗去皮后的荸薺切成小塊，分別加入2倍純凈水榨汁破碎，經(jīng)40目震蕩篩過濾3次，在溫度120℃的條件下超高溫瞬時滅菌15s，得到荸薺汁和白蘿卜汁，冷卻至室溫備用。將上述步驟得到的駱駝發(fā)酵乳、20份恰瑪古浸提液、20份庫魯木提浸提液、13份荸薺汁和10份白蘿卜汁進(jìn)行混和攪拌，經(jīng)混和制得駱駝乳酸飲料。實施例九：清肺除霾的駱駝乳酸飲料制作工藝的優(yōu)化試驗根據(jù)駱駝乳酸飲料的自身特性建立感官評分表，在上述實施例基礎(chǔ)上，采用box－behnken試驗設(shè)計，以駱駝乳酸飲料的感官評分為評價指標(biāo)，考察原料初期的發(fā)酵溫度、初期的發(fā)酵時間、浸提溫度、浸提時間對駱駝乳酸飲料的感官評分的影響，并建立各因素與感官評分關(guān)系的響應(yīng)面數(shù)學(xué)模型。感官評分表見表3，響應(yīng)面試驗因素與水平表見表4。表3：駱駝乳酸飲料感官評分表表4：響應(yīng)面試驗因素與水平表表5：響應(yīng)面試驗設(shè)計與結(jié)果通過designexpert8.0.6采用多元擬合的方法對表5的實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，得到感官評分對發(fā)酵溫度(a)，發(fā)酵時間(b)，浸提溫度(c)，浸提時間(d)的二次多項回歸模型為：感官評分＝+96.40+6.00a+2.25b+2.50c-2.25d+2.50ab-5.00ac-5.50ad+5.75bc+5.00bd+5.75cd-21.37a2-33.99b2-34.37c2-17.74d2，根據(jù)回歸方程，作響應(yīng)曲面圖，考察所擬合的響應(yīng)曲面的形狀，分析發(fā)酵溫度(a)，發(fā)酵時間(b)，浸提溫度(c)，浸提時間(d)對駱駝乳酸飲料感官評分的影響，模型中各因素交互作用的響應(yīng)面及其等高線參見附圖3至附圖14。box－behnken試驗優(yōu)化出制備駱駝乳酸飲料的最佳工藝參數(shù)：發(fā)酵溫度40℃、發(fā)酵時間7h、浸提溫度95℃、浸提時間35min，在此條件下做驗證試驗，得到駱駝乳酸飲料感官評分最高為98分，與理論預(yù)測值相比，其相對誤差約為0.51％，因此，基于box－behnken試驗設(shè)計所得的最佳工藝參數(shù)準(zhǔn)確可靠，具有實用價值。通過響應(yīng)面法優(yōu)化駱駝乳酸飲料的制備工藝，以及通過系列試驗得出制備工藝的最佳參數(shù)，即發(fā)酵溫度為41℃、發(fā)酵時間為7h、浸提溫度為95℃、浸提時間為35min。在此條件下，制備駱駝乳酸白色中帶淡棕色，奶香味濃郁，酸度、咸中等，有淡中藥味，感官評分最高達(dá)到98分。實施例十：駱駝乳酸飲料對霧霾致肺部炎癥的緩解效果驗證實驗將上述實施例得到的駱駝乳酸飲料應(yīng)用到動物實驗中，評價本申請制備的駱駝乳酸飲料對于緩解霧霾致肺部炎癥的效果，實驗設(shè)計如下。(1)pm2.5的采集和處理在烏魯木齊市中心選擇高于十五層的建筑樓頂，要求周圍無明顯污染源，用thermoandersong-2.5大流量采樣器連續(xù)采集2016年10至2017年2月的大氣pm2.5。將采有pm2.5的濾膜裁剪為1cm×3cm大小，浸入三蒸水中超聲振蕩30min×3次洗脫pm2.5，用12層紗布過濾振蕩液，濾液冷凍真空干燥，低溫保存?zhèn)溆谩?2)實驗動物分組及染毒選擇40只wistar大鼠，雌雄各半，4-6周齡，體重65-80g。在動物飼養(yǎng)室，分籠飼養(yǎng)，溫度(21±1)℃，相對濕度40％～60％，自由進(jìn)食、飲水，隨機(jī)分為5組，每組8只，分別為空白對照組、模型對照組、駱駝乳酸飲料低劑量組、駱駝乳酸飲料中劑量組和駱駝乳酸飲料高劑量組。適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，空白對照組和模型對照組每日灌胃生理鹽水0.5ml/只，駱駝乳酸飲料低劑量組每日灌胃實施例三制備的駱駝乳酸飲料0.5ml/只，駱駝乳酸飲料中劑量組每日灌胃實施例三制備的駱駝乳酸飲料1.0ml/只，駱駝乳酸飲料高劑量組每日灌胃實施例三制備的駱駝乳酸飲料1.5ml/只。灌胃30天后，除空白對照組外，其他組分別進(jìn)行pm2.5染毒，劑量為20mg/kgbw，對照組給予相同體積的生理鹽水。以氣管滴注的方式進(jìn)行pm2.5染毒，滴注體積為2.5ml/kgbw，每周2次，連續(xù)暴露3個月。(3)肺泡灌洗液的提取及處理用止血鉗夾閉左主支氣管，暴露氣管，剪一斜口，插入帶有聚乙烯管的肺灌洗針頭，結(jié)扎固定。緩慢注入0.5ml生理鹽水，輕輕按揉胸部的同時緩慢抽出肺內(nèi)的灌洗液，如此反復(fù)灌洗3次，得到支氣管肺泡灌洗液(balf)。灌洗液經(jīng)4℃，1500r/min離心10min。上清液分裝，保存于-80℃冰箱，采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫法(elisa)測定balf中il-6、il-17、il-10及tgf-β的含量。取下層細(xì)胞團(tuán)，加入30μlpbs重懸細(xì)胞，取10μl細(xì)胞懸液用細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)細(xì)胞總數(shù)。余下細(xì)胞懸液涂片，晾干后進(jìn)行g(shù)iemsa染色，光鏡下進(jìn)行細(xì)胞分類計數(shù)，計數(shù)200個細(xì)胞，統(tǒng)計巨噬細(xì)胞，中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞百分比。(5)統(tǒng)計方法用spss19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的錄入和處理，實驗結(jié)果用x±s表示，各組均數(shù)比較采用單因素方差分析(anova)，組間兩兩比較采用最小顯著差法(lsd)檢驗，檢驗水準(zhǔn)α＝0.05。(6)實驗結(jié)果細(xì)胞因子il-6、il-17、il-10及tgf-β的含量比較結(jié)果表明見表6。表6：細(xì)胞因子il-6、il-17、il-10及tgf-β的含量比較由表6可知，暴露于pm2.5后會使小鼠肺部的炎癥因子顯著偏離正常水平，本發(fā)明提供的駱駝乳酸飲料可以抵抗pm2.5誘導(dǎo)的肺部炎癥，維持肺部的炎癥因子不偏離正常水平。本發(fā)明其他實施例制備的駱駝乳酸飲料具有相似的活性。綜上所述，本發(fā)明通過從新疆阿克蘇驢乳自然發(fā)酵酸奶中分離篩選出一株香味菌(myroidessp.)l6和乳球菌(lactococcussp.)l122，利用分離出的兩種菌種混合發(fā)酵，添加多種藥食同源植物，采用保溫浸提、榨汁破碎等一系列獨特的制備工藝，提供一種清肺除霾駱駝乳酸飲料及其制備方法，有效的解決了現(xiàn)有清肺除霾食品感官品質(zhì)差、制作工藝復(fù)雜的問題，制作出清肺除霾駱駝乳酸飲料口感綿密、奶香醇郁，對于呼吸道霧霾侵害有緩解作用，對食品加工
技術(shù)領(lǐng)域：
具有廣泛的實用性。如上所述，即可較好地實現(xiàn)本發(fā)明,上述的實施例僅僅是對本發(fā)明的優(yōu)選實施方式進(jìn)行描述，并非對本發(fā)明的范圍進(jìn)行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計精神的前提下，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員對本發(fā)明的技術(shù)方案做出的各種改變和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明確定的保護(hù)范圍內(nèi)。sequencelisting<110>天山牧歌投資管理有限公司<120>一種清肺除霾駱駝乳酸飲料及其制備方法和應(yīng)用<130>l6<160>1<170>patentinversion3.3<210>1<211>1422<212>dna<213>l6<220><221>l6<222>(1)..(1422)<400>1tggccctacggaggctacacatgcaagtcgaggggtagaaggagcttgcttctttgagac60cggcgcacgggtgagtaacgcgtatgcaacctaccttatacaggggaatagcccgaagaa120attcggattaatgctccatggtttaattgaatggcatcatttaattaataaagatttatc180ggtataagatgggcatgcgtatcattagctagttggtatggtaacggcataccaaggcga240cgatgattaggggtcctgagagggagatcccccacactggtactgagacacggaccagac300tcctacgggaggcagcagtgaggaatattggtcaatggaggcaactctgaaccagccatg360ccgcgtgcaggatgacggtcctatggattgtaaactgcttttgtacaggaagaaacctcc420ctacgtgtagggacttgacggtactgtaagaataaggatcggctaactccgtgccagcag480ccgcggtaatacggaggatccgagcgttatccggaattattgggtttaaagggttcgtag540gcggtttgataagtcagtggtgaaatttcttagcttaactaagacacggccattgatact600gttagacttgaatagtatggaagtaactagaatatgtagtgtagcggtgaaatgcttaga660tattacatggaataccaattgcgaaggcaggttactacgtacttattgacgctgatgaac720gaaagcgtggggagcgaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgatggat780actagctgttcggatttcggtctgagtggctaagcgaaagtgataagtatcccacctggg840gagtacgttcgcaagaatgaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggtggag900catgtggtttaattcgatgatacgcgaggaaccttaccagggcttaaatgtagattgaca960gatttggaaacagatttttcttcggacaatttacaaggtgctgcatggttgtcgtcagct1020cgtgccgtgaggtgtcaggttaagtcctataacgagcgcaacccctattgttagttacca1080gcgcgttaaggcggggactctagcaagactgccggtgcaaaccgagaggaaggtggggat1140gacgtcaaatcatcacggcccttacgtcctgggctacacacgtgctacaatggcaagtac1200agaaagcagctacctggcaacaggatgcgaatctcaaaagcttgtctcagttcggatcgg1260agtctgcaactcgactccgtgaagctggaatcgctagtaatcggatatcagccatgatcc1320ggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcaagccatggaagctgggggtac1380ctgaagtcggtgaccgcaaggagctgcctaggtaaagctggc1422sequencelisting<110>天山牧歌投資管理有限公司<120>一種清肺除霾駱駝乳酸飲料及其制備方法和應(yīng)用<130>l122<160>1<170>patentinversion3.3<210>1<211>1462<212>dna<213>l122<220><221>l122<222>(1)..(1462)<220><221>misc_feature<222>(651)..(651)<223>nisa,c,g,ort<400>1tcaggacgaacgcattgggcgtgcttaatacacaagtgaacgcaacataaacaccagagc60ttgctctacctttatgttgagtagagaacgggtgagcaacgcgtgggtaacctgccttat120agcgggggataactattggaaacgatagctaataccgcataacaatgttagatgcatatt180taacatttgggagtaccaattggtacactatgagatggacccgcgttgtattagctagtt240ggtagtgtaatggactaccaaggcgatgatacatagccgacctgagagggtgatcggcca300cattgggactgagacacggcccaaactcctacgggaggcagcagtagggaatcttcggca360atggacgaaagtctgaccgagcaacgccgcgtgagtgaagaaggttttcggatcgtgtca420ctctgttgttagagaagaacgttgattagagtggaaaattaatcaagtcccggtatctaa480ccagaaagggacggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaggtcccgagcgtt540gtccggatttattgggcgtaaagcgagcgcaggtggtttaataagtctgatgtaaaaggc600agtggctcaaccattgtgtgcattggaaactgttagacttgagtggtctanaggagagtg660gaattccatgtgtagtcggtgaaatgcgtagatatatggaggaacaccggttggcgaaag720cggctcttggactgtcactgacctgaggctcgaacagcctgggtagcaaacaggattaga780tcccctgtagtccatgccgccttatcctatgaagtgctagttcaatgggggctatccagg840ctaattgacgcagctacgcattaagcactccgcctgggattacgaccgcaaggttgaact900caaaggaattgacgggggcccgcacaagcagtggagcatgtggtttaattcgaagcaatt960cgaagaaccttaccaggtcttgacatactcgtgctattcctagagataggccgttccttc1020gggacacgggatacaggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggtt1080aagtcccgcaacgagcgcaacccttattgttagttgccatcattaagttgggcactctag1140cgagactgccggtaataaaccggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgcccctt1200atgacctgggctacacacgtgctacaatcgttggtacaacgagttcgcaagtacagtgat1260gttcaagctcctctcttaaatccaatctcagatcggattgtaggctgcaactcgcctaca1320tgaagtcggaatcgctagtaatcgcggatcagcacgccgcggtgaatacgttcccgggcc1380ttgtacacaccgcccgtcacaccacgagagtttgtaatacccaaagccggtgagctaacc1440ttttaggaggcagccgtctaag1462當(dāng)前第1頁12