本發(fā)明涉及化學(xué)合成技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，是一種立達(dá)霉代謝產(chǎn)物16：N-(3-羥基-2,6-二甲基苯基)-N-(甲氧乙?；?-丙氨酸的合成方法。

背景技術(shù)：

立達(dá)霉(Ridomil)為F.Scwinn于1977年首先報(bào)道的新型高效內(nèi)吸殺菌劑，又名甲霜靈，其性能較穩(wěn)定，對(duì)pH的適應(yīng)范圍廣泛(1.0～9.0)，對(duì)高溫度和強(qiáng)光耐受性好。作為一種新型高效內(nèi)吸殺菌劑，其作用機(jī)理是通過作用于菌絲體、孢子的細(xì)胞壁，以使其選擇通透性，影響水霉菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，使菌絲體細(xì)胞死亡、孢子失去萌發(fā)力，阻斷其生活史，現(xiàn)有研究證明它對(duì)魚體和魚卵的水霉病具有良好的防治效果，如復(fù)方立達(dá)霉粉——“美婷”的潑灑濃度為5～10g/m³、浸浴濃度為20g/m³時(shí)，可有效地防治魚卵、魚苗和成魚的水霉病。

目前，國(guó)內(nèi)主要使用的含立達(dá)霉的劑型有35％拌種劑、25％可濕性粉劑、5％顆粒劑和25％乳油，常見混劑有58％甲霜靈·錳鋅可濕性粉劑(立達(dá)霉+代森錳鋅)、60％甲霜靈·錳鋅可濕性粉劑、72％甲霜靈·錳鋅可濕性粉劑等。

2002年農(nóng)藥殘留聯(lián)席會(huì)議(JMPR)建立了立達(dá)霉的毒理學(xué)，并確立了立達(dá)霉的每日容許攝入量(ADI)。同時(shí)，經(jīng)研究表明，立達(dá)霉在動(dòng)物體內(nèi)代謝主要有16種代謝產(chǎn)物，其中，根據(jù)在不同動(dòng)物中檢測(cè)出的含量，較多的(>0.1mg/kg)的代謝產(chǎn)物為代謝物6、8、12、16。而其中，代謝產(chǎn)物16為N-(3-羥基-2,6-二甲基苯基)-N-(甲氧乙?；?-丙氨酸，目前國(guó)內(nèi)外尚未有合成獲得該種立達(dá)霉主要代謝產(chǎn)物的相關(guān)研究。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種立達(dá)霉代謝產(chǎn)物16：N-(3-羥基-2,6-二甲基苯基)-N-(甲氧乙?；?-丙氨酸的合成方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：一種合成N-(3-羥基-2,6-二甲基苯基)-N-(甲氧乙?；?-丙氨酸的方法，所述的方法的合成路線為：

所述的方法包括以下步驟：

1)取立達(dá)霉(Ⅰ)為原料藥，溶解于酸溶液中，得到化合物(Ⅱ)；

2)將化合物(Ⅱ)加還原劑還原得到化合物(Ⅲ)；

3)化合物(Ⅲ)酸化，得到化合物(Ⅳ)；

4)化合物(Ⅳ)再加入堿溶液得到產(chǎn)物(Ⅴ)。

步驟1)中的酸溶液為65％硝酸和98％濃硫酸的混合酸溶液。

步驟3)中使用硫酸酸化。

一種合成N-(3-羥基-2,6-二甲基苯基)-N-(甲氧乙?；?-丙氨酸的方法，所述的方法包括以下步驟：

1)將65％硝酸10mL和98％濃硫酸30mL在0度混合得到混酸，反應(yīng)容器中加入二氯甲烷150mL，再加入27.9g甲霜靈攪拌溶解透明，在0度滴加所述的混酸，保持溫度在5度，滴加完畢攪拌過夜，原料反應(yīng)完全后加入冰水中分層，水層用二氯甲烷50mL提取兩次，合并二氯甲烷層，用水洗兩次，二氯甲烷層無水硫酸鈉干燥活性炭脫色，抽濾，濾液回收二氯甲烷，得到固體，固體用柱層析純化，洗脫劑PE:EA5:1----3:1，得到產(chǎn)品；

2)取5g上述產(chǎn)品加入50mL甲醇溶解，加入10％Pd/C0.5g，通入氫氣氫化還原過夜得到氨基化合物3g；

3)3g氨基化合物溶解到20％硫酸溶液中，然后冷卻到5度，滴加亞硝酸鈉溶液1.5mL，低溫下重氮化3小時(shí)，然后將重氮化溶液加入到90度的水中，水解半小時(shí)，水解液用乙酸乙酯20mL提取兩次，合并乙酸乙酯層，干燥脫色，抽濾，回收乙酸乙酯，產(chǎn)品用柱層析純化，洗脫劑PE:EA3:1----1:1.得到產(chǎn)品0.6g。

本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于：

本發(fā)明提供的立達(dá)霉中代謝產(chǎn)物16的合成方法，能夠獲得高純度的N-(3-羥基-2,6-二甲基苯基)-N-(甲氧乙?；?-丙氨酸，且該方法獲得的代謝產(chǎn)物具有較好的回收率，具有非?？捎^的應(yīng)用前景。

附圖說明

附圖1是立達(dá)霉代謝產(chǎn)物16：N-(3-羥基-2,6-二甲基苯基)-N-(甲氧乙?；?-丙氨酸的核磁共振氫譜。

附圖2是立達(dá)霉代謝產(chǎn)物16：N-(3-羥基-2,6-二甲基苯基)-N-(甲氧乙?；?-丙氨酸的HPLC圖譜。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式作詳細(xì)說明。

本發(fā)明提供一種立達(dá)霉代謝產(chǎn)物16的合成方法，包括以下步驟：

1)取立達(dá)霉(Ⅰ)為原料藥，溶解于酸溶液中，得到化合物(Ⅱ)。

2)將化合物(Ⅱ)加還原劑還原得到化合物(Ⅲ)。

3)化合物(Ⅲ)酸化，得到化合物(Ⅳ)。

4)化合物(Ⅳ)再加入堿溶液得到代謝產(chǎn)物16(Ⅴ)。

以下為反應(yīng)步驟：

下列實(shí)施例中未具體注明的工藝設(shè)備或裝置均采用本領(lǐng)域內(nèi)的常規(guī)設(shè)備或裝置；所有壓力值和范圍都是指相對(duì)壓力。以下實(shí)施例中使用的試劑如硝酸、硫酸、二氯甲烷、無水硫酸鈉、活性炭、洗脫劑PE、EA、甲醇、Pd、碳、氫氣、亞硝酸鈉、重氮化溶液、乙酸乙酯、乙腈等均為本領(lǐng)域常規(guī)使用的試劑。以下實(shí)施例中使用的立達(dá)霉為甲霜靈分析標(biāo)準(zhǔn)品，由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。薄層色譜板(TLC)、高效液相色譜分析儀(HPLC)、核磁共振氫譜儀(HNMR)均為本領(lǐng)域常規(guī)使用的儀器。

此外應(yīng)理解，本發(fā)明中提到的一個(gè)或多個(gè)方法步驟并不排斥在所述組合步驟前后還可以存在其他方法步驟或在這些明確提到的步驟之間還可以插入其他方法步驟，除非另有說明；還應(yīng)理解，本發(fā)明中提到的一個(gè)或多個(gè)設(shè)備/裝置之間的組合連接關(guān)系并不排斥在所述組合設(shè)備/裝置前后還可以存在其他設(shè)備/裝置或在這些明確提到的兩個(gè)設(shè)備/裝置之間還可以插入其他設(shè)備/裝置，除非另有說明。而且，除非另有說明，各方法步驟的編號(hào)僅為鑒別各方法步驟的便利工具，而非為限制各方法步驟的排列次序或限定本發(fā)明可實(shí)施的范圍，其相對(duì)關(guān)系的改變或調(diào)整，在無實(shí)質(zhì)變更技術(shù)內(nèi)容的情況下，當(dāng)亦視為本發(fā)明可實(shí)施的范疇。

實(shí)施例1

將65％硝酸10mL和98％濃硫酸30mL在0度左右混合得到混酸待用。250mL三口瓶中加入二氯甲烷150mL，再加入27.9g甲霜靈攪拌溶解透明，在0度左右滴加上述混酸，保持溫度在5度左右。滴加完畢攪拌過夜，原料反應(yīng)完全后加入冰水中分層，水層用二氯甲烷50mL提取兩次，合并二氯甲烷層，用水洗兩次，二氯甲烷層無水硫酸鈉干燥活性炭脫色，抽濾，濾液回收二氯甲烷，得到固體26g。固體用柱層析純化，洗脫劑PE:EA5:1----3:1，得到產(chǎn)品10g，取5g上述產(chǎn)品加入50mL甲醇溶解，加入10％Pd/C0.5g，通入氫氣氫化還原過夜得到氨基化合物3g，3g產(chǎn)品溶解到20％硫酸溶液中，然后冷卻到5度，滴加亞硝酸鈉溶液1.5mL，低溫下重氮化3小時(shí)，然后將重氮化溶液加入到90度的水中，水解半小時(shí)，水解液用乙酸乙酯20mL提取兩次，合并乙酸乙酯層，干燥脫色，抽濾，回收乙酸乙酯，產(chǎn)品用柱層析純化，洗脫劑PE:EA3:1----1:1.得到產(chǎn)品0.6g?？偦厥章蕿?0％。

所述摩爾收率的計(jì)算公式(i)如下。

收率＝(目的產(chǎn)物生成量/關(guān)鍵組分起始量)×100％(i)

計(jì)算公式(i)中，根據(jù)原料的分子量算出摩爾量，然后在根據(jù)摩爾量和產(chǎn)物的分子量算出產(chǎn)物的理論量，實(shí)際量除以理論量就是收率。

實(shí)施例2

通過高效液相色譜法和核磁分析的方法對(duì)代謝物的純度進(jìn)行鑒定。

高效液相色譜法：取5mg樣品加乙腈溶解，并滴加少量含有0.1％三氟乙酸的乙腈，進(jìn)樣10μL。色譜條件：Waters Xbridge C18柱(4.6*250*5μm)，流動(dòng)相：乙腈/水＝40/60(v/v)，流速：1mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm，溫度：35℃。

核磁分析方法：取樣品5mg加入合適的氘代試劑0.5mL，超聲5分鐘，溶解均勻澄清后進(jìn)入核磁共振儀器，氫譜掃譜次數(shù)64次。

將實(shí)施例1中獲得的代謝產(chǎn)物16分別進(jìn)行HNMR和HPLC檢測(cè)。

其中，如附圖1所示，通過HNMR檢測(cè)可知，產(chǎn)品在氘代氯仿中不溶解，所以換用氘代試劑(DMSO-d6)溶劑殘留峰為2.5ppm和3.3ppm峰形列分不好。0.89ppm為與次甲基相連的甲基的化學(xué)位移，1.91-2.22ppm為芳環(huán)中甲基的位移，3.4-3.5ppm處為甲醚中甲基化學(xué)位移和甲醚與羰基相連的亞甲基中兩個(gè)氫的重疊區(qū)，共計(jì)5個(gè)氫，4.26ppm處為與甲基相連的次甲基的化學(xué)位移。6.8-6.9ppm處雙重峰為芳環(huán)中兩個(gè)氫化學(xué)位移，9.4ppm處為酚羥基的化學(xué)位移，12.4ppm處為羧酸化學(xué)位移，可見在DMSO中雖然峰形列分不好，但是活潑氫都能清楚的看到，而且從圖譜上看不到明顯的雜質(zhì)峰，可以判定立達(dá)霉代謝物16：N-(3-羥基-2,6-二甲基苯基)-N-(甲氧乙?；?-丙氨酸的純度大于95％。

如附圖2所示，通過HPLC檢測(cè)，采用HPLC面積歸一法測(cè)定獲得代謝產(chǎn)物立達(dá)霉代謝物16：N-(3-羥基-2,6-二甲基苯基)-N-(甲氧乙?；?-丙氨酸的保留時(shí)間約為8.21min，HPLC面積歸一法也表明含量為98.5％。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。