技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種DNA分子克隆方法及其應(yīng)用，所述方法包括以下步驟：獲得入門載體含有ccdB基因，ccdB基因兩端分別依次連接XcmI酶切位點、接頭序列和SfiI酶切位點；獲得表達(dá)載體含有ccdB基因，ccdB基因兩端分別依次連接SfiI酶切位點和接頭序列；通過PCR獲得目標(biāo)DNA，通過TA克隆插入到所述入門載體，獲得入門克隆；或在PCR過程中通過引物加入相應(yīng)的接頭序列，獲得線性PCR產(chǎn)物；將上述入門克隆或線性PCR產(chǎn)物與表達(dá)載體混合，在克隆反應(yīng)液作用下完成克隆。本發(fā)明改進(jìn)了克隆反應(yīng)液以及入門載體和表達(dá)載體的結(jié)構(gòu)，實現(xiàn)單個或多個線性PCR產(chǎn)物或環(huán)狀質(zhì)粒上的DNA在克隆反應(yīng)液作用下直接克隆到環(huán)狀目標(biāo)載體的一個或多個部位，提高了克隆效率，可廣泛用于各種類型的DNA分子克隆。

技術(shù)研發(fā)人員：言普;周鵬;沈文濤;庹德財;黎小瑛
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所
文檔號碼：201710222909
技術(shù)研發(fā)日：2017.04.07
技術(shù)公布日：2017.06.30