本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域，具體涉及一種雷公藤甲素衍生物及其制備方法與制劑。
背景技術：
雷公藤甲素(triptolide，tp)又稱雷公藤內酯、雷公藤內酯醇，是從中藥雷公藤(tripterygiumwilfodiihookf)植物中分離的一種環(huán)氧二萜類內酯化合物，具有很強的生物活性，包括抗炎、免疫抑制、抗腫瘤、抗生育等(liuq.triptolideanditsexpandingmultiplepharmacologicalfunctions[j].internationalimmunopharmacology,2011,11(3):377-383)。作為雷公藤主要活性成分，其抗腫瘤價值被廣泛研究，截至目前至少有60種腫瘤細胞株經研究可以被tp抑制(駱永偉，施暢，廖明陽.雷公藤甲素抗腫瘤作用機制研究進展[j].中國中藥雜志,2009,34(16):2024-2026)。tp作為抗腫瘤藥物有以下四個特點：①在鼠移植瘤動物模型中表現(xiàn)出廣譜的抗腫瘤活性，對乳腺癌、膀胱癌、胃癌和黑色素瘤原發(fā)性腫瘤的抑制率可達50％～90％，不僅對原發(fā)性腫瘤有效，對繼發(fā)性腫瘤也有效；②能夠抑制多種實體瘤的生長和轉移與抑瘤基因(p53)的狀態(tài)無關，對p53缺陷的腫瘤細胞仍能發(fā)揮作用；③對高表達多藥耐藥蛋白(mdr1)的腫瘤細胞有效，而這些細胞對常用化療藥物如紫杉醇等耐藥，因此tp可與化療藥物合用以增加療效；④具有較傳統(tǒng)抗腫瘤藥物更強的抗腫瘤活性，低濃度時即產生很強的抗腫瘤活性(yangs,chenj,guoz,etal.triptolideinhibitsthegrowthandmetastasisofsolidtumors[j].molecularcancertherapeutics,2003,2(1):65-72)。tp抗腫瘤作用的具體機制不明，通過多種信號通路誘導腫瘤細胞凋亡可能是其抗腫瘤作用的最主要機制。此外，tp還可通過抑制血管生成、阻斷細胞周期進程、抑制細胞外基質降解等作用達到抑制腫瘤生長和轉移的目的(mengc,zhuh,songh,etal.targetsandmolecularmechanismsoftriptolideincancertherapy[j].chinesejournalofcancerresearch,2014,26(5):622-626)。其在抗腫瘤方面表現(xiàn)出的廣譜、高效等優(yōu)勢使得tp具有廣闊的臨床應用前景。
雖然早在1972年tp就被證實對白血病有治療作用(kupchansm,courtwa,daileyrg,etal.tumorinhibitors.lxxiv.triptolideandtripdiolide,novelantileukemicditerpenoidtriepoxidesfromtripterygiumwilfordii[j].journaloftheamericanchemicalsociety,1972,94(20):7194-7195)，并且近十余年來，大量體內外研究充分表明tp對多種實體瘤細胞和實體瘤的生長具有抑制作用。然而迄今為止卻仍未開發(fā)出一種針對tp應用于抗腫瘤治療的高效藥物上市。其中困難主要體現(xiàn)在以下幾個方面：
tp毒性大：在發(fā)揮藥效的同時伴隨著嚴重的毒副作用，并表現(xiàn)出窄的治療窗，導致其臨床應用受到了極大的限制。其毒性作用主要反映在一般毒性、靶器官毒性、遺傳毒性、生殖系統(tǒng)毒性、局部刺激毒性等幾個方面。而靶器官毒性涉及機體幾乎所有的有生理功能的器官，即使治療劑量的tp仍然顯示對免疫功能有抑制，超量、中毒則會引起淋巴器官的萎縮和淋巴細胞的壞死(lix,jiangz,zhangl.triptolide:progressonresearchinpharmacodynamicsandtoxicology[j].journalofethnopharmacology,2014,155(1):67-79)。
tp半衰期短：其體內消除速率快，半衰期短，導致在很大程度上削弱了其應有的抗腫瘤效果，并且其入血體積分布廣，靶向性差，反而加重了不良反應的發(fā)生。shao等采用液相色譜/質譜聯(lián)用方法(lc/ms)研究了tp在大鼠體內的藥代動力學特征，結果表明sd大鼠單次口服tp劑量分別為0.6、1.2和2.4mg/kg，血藥濃度達峰時間在10min左右，消除半衰期為16.81～21.70min，比較三者的藥動學參數(shù)顯示auc和cmax值并不會隨劑量的增加而提高，提示臨床應用高劑量時可能呈現(xiàn)非線性動力學特征；sd大鼠單次靜脈注射tp劑量0.6mg/kg其半衰期約為15min。tp可迅速分布到被檢測組織(血漿、心、肝、脾、肺、腎)，且組織中的變化同血漿中濃度的變化相平行(shaof,wangg,xieh,etal.pharmacokineticstudyoftriptolide,aconstituentofimmunosuppressivechineseherbmedicine,inrats[j].biological&pharmaceuticalbulletin,2007,30(4):702-707)。
tp制劑成藥性差：不管是在蒸餾水、0.1mol/lhcl還是ph6.8的pbs中，tp溶解度均小于0.3mg/ml，按照中國藥典2015版描述溶解度術語的規(guī)定，tp屬于極微溶于水的物質(張聰.雷公藤甲素脂質納米粒研究[d].華中科技大學,2014)。此外，tp在其他一些藥劑學上可接受的溶劑和油中的溶解度也不超過0.5％(w/w)，這使得其難以制備成常規(guī)的靜脈注射用溶液。即使開發(fā)成一些脂質體或者納米粒等新型制劑，仍然存在載藥量低、包封率差、制劑不穩(wěn)定等諸多弊端。林綏等人嘗試制備tp納米脂質體，最大載藥量仍只達0.016％(中國專利cn105816428a)；張聰制備tp脂質納米粒，在最佳處方工藝脂質/藥物＝50：1～100：1條件下，包封率仍不超過60％，遠低于中國藥典的規(guī)定要求(張聰.雷公藤甲素脂質納米粒研究[d].華中科技大學,2014)；王淑娟對制備所得脂質體進行穩(wěn)定性考察顯示，新制備的tp脂質體室溫放置10天即有聚集，一個月后基本沉淀，即使進行凍干處理，經冷凍干燥后復水重建的脂質體與凍干前相比包封率仍有不同程度的降低，包封率不足40％(王淑娟.雷公藤甲素脂質體的制備及質量的初步研究[d].揚州大學,2010)。以上性質使得tp難以開發(fā)為利于腫瘤治療的高效體內注射制劑。
如何在保持tp生物活性的前提下，延長體內作用時間，降低毒副作用，是使tp能夠安全有效地應用于臨床所亟需解決的關鍵問題。前體藥物(prodrug，前藥)本身沒有生物活性或活性很低，經過體內代謝后變?yōu)橛谢钚缘奈镔|，這一過程可以改變母體藥物的體內藥動學特性。因此，在對tp的探索中，很多研究者們鐘情于對tp進行結構修飾，以獲得具有良好藥動學特性的tp前藥。受限于其難溶于水的特性，多數(shù)研究者傾向于設計與合成具有良好藥動學特性的新型水溶性tp衍生物，以期降低藥物的毒副作用。比如：pg490-88na、wilgraf、minnelide等皆是tp的水溶性前藥(fidlerjm,lik,chungc,etal.pg490-88,aderivativeoftriptolide,causestumorregressionandsensitizestumorstochemotherapy[j].molecularcancertherapeutics,2003,2(9):855-862；zhouz,yangy,dingj,etal.triptolide:structuralmodifications,structure-activityrelationships,bioactivities,clinicaldevelopmentandmechanisms[j].naturalproductreports,2012,29(4):457-475)。雖然以上前藥將tp成鹽很好的改善了其制劑性質，但并非真如預期設想能夠達到降低毒性改善藥動學性質的目的，仍然存在降解釋放過快或轉化不完全等可能弊端。更有甚者如pg490-88na的i期臨床試驗的劑量遞增研究中，受試對象為晚期實體瘤患者，給藥方式為每周靜脈注射一次，每兩周休息一周。試驗中較常出現(xiàn)的不良反應有貧血、乏力、惡心、嘔吐、腹瀉和便秘等，評級都為1～2級。然而，藥代動力學研究表明，pg490-88na的藥動學特性存在較高的個體間差異(2～3倍)，其轉化為tp的程度難以預測，轉化過程緩慢且不完全。因此，pg490-88na并不是一個理想的tp衍生物，該臨床試驗已被迫暫停(kitzenjj,dejongemj,lamersch,etal.phaseidose-escalationstudyoff60008,anovelapoptosisinducer,inpatientswithadvancedsolidtumours[j].europeanjournalofcancer,2009,45(10):1764-1772)。此后，并無pg490-88na臨床試驗的相關報道更新?？梢妼p成鹽改善水溶性是否是理想的修飾方式使得能夠滿足臨床的需求還有待商榷。
而另一方面，納米制劑作為當前研究開發(fā)的熱點，已表現(xiàn)出廣泛的應用前景，其優(yōu)勢在于：納米藥物可通過靶向作用降低毒性的同時，在保證有效性的基礎上進一步提高療效；將藥物包裹在納米粒中，特別是長循環(huán)納米粒，具有明顯的緩控釋作用，大大減緩了藥物在體內的消除速率，延長半衰期，使其有足夠的時間將藥物靶向在腫瘤部位，減少在正常組織中的分布，從而提高了臨床用藥的安全性。以上特點正是tp迫切需要達到的理想效果。并且隨著制劑技術的發(fā)展，目前已有不少納米制劑相繼應用于臨床，比如阿霉素脂質體
但正如tp制劑成藥性缺陷所決定的，嘗試直接將tp制備成脂質體、膠束、納米粒等包裹納米制劑的可實施性很差，主要原因在于tp脂溶性過低，與包裹材料的相容性不匹配所致。如何改善tp的脂溶性將是納米制劑開發(fā)的重點。鑒于前藥可顯著改善母體藥物的化學性質，是否可利用該手段以滿足制劑成藥性顯得具有重要意義。中國專利cn105263475a中公開了一種tp前藥“mrx102”，但是mrx102不具有成藥性，或成藥性差，主要體現(xiàn)在：①實施例中mrx102乳劑配方中所用的油相量大，絕大部分乳劑油相用量為40％，正像該專利所述，“經典的乳劑配方含有10～30％的甘油三酯”，而40％油相將直接導致配制的乳劑是稠厚的乳膏狀(fidlerjm,anj,carterbz,etal.preclinicalantileukemicactivity,toxicology,toxicokineticsandformulationdevelopmentoftriptolidederivativemrx102[j].cancerchemotherapyandpharmacology,2014,73(5):961-974)，這必然影響制劑的除菌處理，無法過0.22μm濾膜或進行高壓滅菌，此外潛在的通針性不足，更可能造成無法順利注射，導致患者順應性差；②油中溶解度太差，暫且不論三辛酸甘油酯的安全性，該專利表4中即便采用29.4％的三辛酸甘油酯作為油相制備的乳劑，mrx102溶解度才0.681μg/ml，直接導致載藥量太低；③穩(wěn)定性太差，該專利表5中，即便采用40％三辛酸甘油酯作為油相制得的乳劑(以e-3為例)，配制2mg/ml載藥量的乳劑，其藥物含量(溶解度)從0小時、1小時、24小時、8天分別為1529、1514、1353、1176μg/ml，也就是制備的乳劑放置8天后載藥量降低了41.2％，不具有成藥性；④mrx102乳劑配方中均含有高含量的三辛酸甘油酯，該專利中明確，用大豆油部分或全部取代三辛酸甘油酯將降低mrx102在乳劑中的溶解度，說明三辛酸甘油酯不可缺乏性，而該成分目前主要用于護膚品和化妝品中，用于靜脈給藥制劑中其安全性存在隱患；⑤為了增加mrx102在乳劑中溶解，配方中均加入了離子型表面活性劑膽酸鈉進行增溶，這也說明了該前藥并不具有顯著提高脂溶性的特點。而離子型表面活性劑不僅毒性較大，同時還有較強的溶血作用(崔福德.藥劑學[m].北京:人民衛(wèi)生出版社,2011:42)。此外專利中也并未涉及其他諸如脂質體、膠束等納米制劑的制備，或將其進行脂肪乳的開發(fā)也屬無奈之選。
綜上，盡管已有大量針對雷公藤甲素的研究，但是雷公藤甲素制劑成藥性的問題仍然突出，急需進一步的研發(fā)來改善上述問題，開發(fā)針對tp應用于抗腫瘤治療的高效藥物。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明為解決tp成藥性的缺陷，針對tp開展了大量的結構修飾工作，有針對性的從脂溶性前藥角度入手，研究中發(fā)現(xiàn)當tp鍵合飽和脂肪酸后脂溶性明顯提高，通過進一步篩選合成了碳原子數(shù)為2n(n為2～9)范圍內不同鏈長飽和脂肪酸修飾而得的雷公藤甲素脂肪酸酯，結果顯示，以上雷公藤甲素脂肪酸酯制劑成藥性均優(yōu)于tp。而嘗試制備成脂質體、膠束、納米粒、脂肪乳均具有良好的包載效果。進一步的體內外研究表明，制備所得納米制劑同時還具有顯著降低毒性，延長半衰期等優(yōu)勢。
本發(fā)明的第一目的在于提供一種雷公藤甲素衍生物，具體是一種雷公藤甲素脂肪酸酯，其化學結構如式(ⅰ)所示：
式(ⅰ)中，r表示碳原子數(shù)為2n的直鏈烷基?；琻為2～9，優(yōu)選4～9，更優(yōu)選7～9。
本發(fā)明的第二目的在于提供所述的雷公藤甲素脂肪酸酯的制備方法，所述的雷公藤甲素脂肪酸酯可由雷公藤甲素與飽和脂肪酸通過酯化反應得到，合成路線為：
其中，roh為飽和脂肪酸，r定義如權利要求1～3任一項所述；
具體步驟包括：
(a)將飽和脂肪酸、縮合劑及催化劑溶于有機溶劑中，攪拌下冷卻至0～10℃得混合液；
(b)將雷公藤甲素溶解在有機溶劑中滴入上述混合液中，0～10℃條件下反應15～45分鐘，然后室溫下繼續(xù)反應，酯化反應結束后分離得到雷公藤甲素脂肪酸酯。
雷公藤甲素脂肪酸酯的制備方法中，
所述的縮合劑為對硝基苯甲酰氯、n,n'-二環(huán)己基碳二亞胺(dcc)、n,n'-二異丙基碳二亞胺(dic)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(edc·hcl)、2-氯-1-甲基吡啶鎓碘化物(cmpi)、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(pybop)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(hatu)、o-(5-氯苯并三氮唑-1-基)-二(二甲胺基)碳鎓六氟磷酸鹽(hctu)、o-(苯并三氮唑-1-基氧基)-二哌啶碳鎓六氟磷酸鹽(hbpipu)、n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)和n-羥基硫代琥珀酰亞胺(sulfo-nhs)中的一種或兩種以上，優(yōu)選dcc或edc·hcl；
所述的催化劑為1-羥基苯并三唑(hobt)、4-二甲氨基吡啶(dmap)、三乙胺和n,n-二異丙基乙胺(dipea)中的一種或兩種以上，優(yōu)選dmap或dipea；
所述的有機溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷、n,n-二甲基甲酰胺(dmf)和n,n-二甲基乙酰胺(dma)中的一種或兩種以上，有機溶劑優(yōu)選無水的。
所述的飽和脂肪酸與雷公藤甲素摩爾比為1.2～4:1，優(yōu)選2～3:1；所述的縮合劑與雷公藤甲素的摩爾比為1.2～4:1，優(yōu)選2～3:1。
本發(fā)明的所述的雷公藤甲素脂肪酸酯可用于制備抗腫瘤或抗炎藥物。
本發(fā)明的第三目的在于提供所述的雷公藤甲素脂肪酸酯的納米制劑，所述納米制劑為脂質體、聚合物膠束、白蛋白納米?；蛑救?，優(yōu)選脂質體。
本發(fā)明的一些較佳實施例中，所述的脂質體由下列成分按照重量體積比配制而成：
上述配方優(yōu)選為：
其中，
所述的磷脂為蛋黃磷脂、大豆磷脂、以及各種動物來源的磷脂、氫化蛋黃磷脂、氫化大豆磷脂、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰膽堿、心磷脂和鞘磷脂中的一種或兩種以上；優(yōu)選蛋黃磷脂或大豆磷脂。
所述的peg化磷脂為peg化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、peg化二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、peg化二肉豆蔻磷脂酰乙醇胺中的一種或兩種以上，優(yōu)選peg化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺；所述peg化磷脂的peg平均分子量為1000～8000，優(yōu)選1500～3500，更優(yōu)選2000。
所述的凍干保護劑為海藻糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、甘露醇、葡萄糖中的一種或兩種以上；優(yōu)選海藻糖或蔗糖。
所述的ph調節(jié)劑為氫氧化鈉、醋酸鈉、醋酸、磷酸鹽、碳酸鹽、鹽酸、檸檬酸等中的一種或兩種以上；優(yōu)選氫氧化鈉、鹽酸或檸檬酸。
所述的脂質體可通過以下步驟制備：
(a)脂質體粗品的配置，稱取配方量雷公藤甲素脂肪酸酯、磷脂、peg化磷脂及膽固醇，加入適量有機溶媒ⅰ于25～75℃下加熱溶解得有機相，再將有機相緩慢注入25～75℃的適量注射用水中，邊注入邊攪拌混勻，即得脂質體粗品；
(b)脂質體溶液的制備，將所述脂質體粗品置于高壓均質機中均質乳化、或置于擠出器中依次通過不同孔徑的擠出膜擠出、或置于高壓均質機中均質后再行擠出，得脂質體溶液；
(c)稱取配方量凍干保護劑，溶于所述脂質體溶液；加注射用水定容，調節(jié)ph至規(guī)定值；0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得；
或者，
步驟(a)替換為：(a’)稱取配方量雷公藤甲素脂肪酸酯、磷脂、peg化磷脂、膽固醇溶于有機溶媒ⅱ中，40～60℃條件下真空旋蒸除去溶劑得脂質薄膜，用適量注射用水進行水化得脂質體粗品。
所述的有機溶媒ⅰ選自無水乙醇、丙二醇、叔丁醇中的一種或兩種以上；用量為1～10％克/毫升，所述的有機溶媒ⅰ保留在脂質體中，或者在脂質體粗品乳化后再通過超濾或刮板薄膜蒸發(fā)器去除。
所述的有機溶媒ⅱ為二氯甲烷、三氯甲烷、無水乙醇中的一種或兩種以上，用量為1～10％克/毫升。
所述的凍干保護劑可以直接加入步驟(b)制得的脂質體溶液中，也可以先溶于注射用水中再與脂質體溶液混合(即溶于水相內加)。
步驟(b)中的所述擠出膜孔徑選自2.0μm、1.0μm、0.8μm、0.6μm、0.4μm、0.2μm、0.1μm和0.05μm中的一種或兩種以上，擠出時依次通過大孔徑到小孔徑。
本發(fā)明的有益效果在于：
本發(fā)明針對tp開展了大量的結構修飾工作，從提高脂溶性的角度入手，在tp的c14位oh鍵合飽和脂肪酸，將羥基成酯減小極性的同時引入脂肪酸可有效地增強脂溶性，而且性質穩(wěn)定，不易氧化，可顯著改善tp納米制劑成藥性。通過進一步篩選合成了碳原子數(shù)為2n(n為2～9)范圍內不同鏈長飽和脂肪酸修飾而得的雷公藤甲素脂肪酸酯制劑成藥性均優(yōu)于tp，由所述雷公藤甲素脂肪酸酯制備的脂質體、膠束、納米粒、脂肪乳等納米制劑均具有良好的包載效果，制成的納米制劑具有載藥量大、包封率高、性質穩(wěn)定等特點。進一步的體內外研究表明，制備所得納米制劑同時還具有顯著降低毒性，延長半衰期等優(yōu)勢。本發(fā)明為成功開發(fā)雷公藤甲素納米制劑提供了可能，可為雷公藤甲素的研究與應用奠定堅實的基礎。
具體實施方式
以下結合具體實施例，對本發(fā)明作進一步說明。應理解，以下實施例僅用于說明本發(fā)明而非用于限定本發(fā)明的范圍。
本發(fā)明tp購自江蘇倍達醫(yī)藥科技有限公司；飽和脂肪酸購自國藥集團化學試劑有限公司。
下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。
實施例1不同雷公藤甲素脂肪酸酯的制備
1.1.1雷公藤甲素硬脂酸酯(tp-sa)的制備
在反應容器中投量3mmol硬脂酸、3mmol的dcc、3mmol的dmap，加入20ml無水二氯甲烷溶解，冰浴條件下攪拌30分鐘；將1mmol的tp溶解于適量無水二氯甲烷中并緩慢滴加入反應體系，冰浴條件下反應30分鐘，室溫下繼續(xù)反應過夜，將反應物經硅膠柱分離純化得雷公藤甲素硬脂酸酯532.2mg。產率84.9％。
1hnmr(dmso-d6,600mhz)δ4.98(1h,s,14-ch),4.86(1h,d,j＝18.88hz,19-ch),4.77(1h,d,j＝18.88hz,19-ch),3.95(1h,d,11-ch),3.69(1h,d,12-ch),3.56(1h,d,7-ch),2.28-2.39(2h,m,2ˊ-ch2),1.73-2.00(1h,m,15-ch),1.80-1.85(2h,m,3ˊ-ch2),1.57-1.59(2h,m,2-ch2),1.24-1.34(28h,m,14×ch2),0.92(3h,s,20-ch2),0.85-0.87(6h,m,16、17-ch2),0.76(3h,t,18ˊ-ch2).
13cnmr(dmso,150mhz)δ175.52,170.59,71.08,70.66,63.74,63.08,61.30,59.84,55.29,54.93,35.51,34.19,31.78,29.57,29.51,29.37,29.23,29.19,28.71,28.11,25.06,22.85,22.57,17.90,17.05,17.00,14.39,14.13.
esi-ms(m/z)：627.8[m+h]+.
化學結構式如下：
1.1.2雷公藤甲素硬脂酸酯(tp-sa)的制備
在反應容器中投量2.5mmol硬脂酸、2.5mmol的edc·hcl、2.5mmol的dipea，加入20ml無水二氯甲烷溶解，冰浴條件下攪拌30分鐘；將1mmol的tp溶解于適量無水二氯甲烷中并緩慢滴加入反應體系，冰浴條件下反應30分鐘，室溫下繼續(xù)反應過夜，將反應物經硅膠柱分離純化得雷公藤甲素硬脂酸酯524.0mg。產率83.6％。
1.2.1雷公藤甲素棕櫚酸酯(tp-pa)的制備
在反應容器中投量3mmol棕櫚酸、3mmol的dcc、3mmol的dmap，加入20ml無水二氯甲烷溶解，冰浴條件下攪拌30分鐘；將1mmol的tp溶解于適量無水二氯甲烷中并緩慢滴加入反應體系，冰浴條件下反應45分鐘，室溫下繼續(xù)反應過夜，將反應物經硅膠柱分離純化得純化雷公藤甲素棕櫚酸酯504.7mg。產率84.3％。
1hnmr(dmso-d6,600mhz)δ4.96(1h,s,14-ch),4.86(1h,d,j＝18.88hz,19-ch),4.73(1h,d,j＝18.86hz,19-ch),3.98(1h,d,11-ch),3.69(1h,d,12-ch),3.57(1h,d,7-ch),2.28-2.42(2h,m,2ˊ-ch2),1.73-2.00(1h,m,15-ch),1.80-1.85(2h,m,3ˊ-ch2),1.57-1.61(2h,m,2-ch2),1.24-1.35(24h,m,12×ch2),0.93(3h,s,20-ch2),0.85-0.88(6h,m,16、17-ch2),0.78(3h,t,18ˊ-ch2).
13cnmr(dmso,150mhz)δ178.52,173.59,70.88,70.26,63.64,63.18,61.30,59.34,55.29,55.03,35.91,34.21,31.78,29.77,29.23,29.17,28.71,28.05,25.13,22.80,22.57,17.90,17.35,17.09,14.42,14.11.
esi-ms(m/z)：599.8[m+h]+.
化學結構式如下：
1.2.2雷公藤甲素棕櫚酸酯(tp-pa)的制備
在反應容器中投量2mmol棕櫚酸、2mmol的edc·hcl、2mmol的dipea，加入20ml無水二氯甲烷溶解，冰浴條件下攪拌30分鐘；將1mmol的tp溶解于適量無水二氯甲烷中并緩慢滴加入反應體系，冰浴條件下反應30分鐘，室溫下繼續(xù)反應過夜，將反應物經硅膠柱分離純化得純化雷公藤甲素棕櫚酸酯495.2mg。產率82.7％。
1.3.1雷公藤甲素肉豆蔻酸酯(tp-ma)的制備
在反應容器中投量3mmol肉豆蔻酸、3mmol的dcc、3mmol的dmap，加入20ml無水三氯甲烷溶解，冰浴條件下攪拌15分鐘；將1mmol的tp溶解于適量無水三氯甲烷中并緩慢滴加入反應體系，冰浴條件下反應30分鐘，室溫下繼續(xù)反應過夜，將反應物經硅膠柱分離純化得雷公藤甲素肉豆蔻酸酯464.5mg。產率81.4％。
1hnmr(dmso-d6,600mhz)δ4.97(1h,s,14-ch),4.84(1h,d,j＝18.88hz,19-ch),4.73(1h,d,j＝18.83hz,19-ch),3.97(1h,d,11-ch),3.66(1h,d,12-ch),3.61(1h,d,7-ch),2.27-2.41(2h,m,2ˊ-ch2),1.73-2.00(1h,m,15-ch),1.80-1.85(2h,m,3ˊ-ch2),1.57-1.61(2h,m,2-ch2),1.22-1.35(20h,m,10×ch2),0.90(3h,s,20-ch2),0.83-0.87(6h,m,16、17-ch2),0.74(3h,t,18ˊ-ch2).
13cnmr(dmso,150mhz)δ178.92,173.10,70.90,62.73,61.64,59.34,58.43,55.29,55.03,49.97,46.13,46.05,35.91,34.21,34.19,32.22,31.88,31.52,29.57,29.23,29.17,28.71,28.05,25.13,22.80,22.57,17.90,17.35,17.09,14.42,14.08.
esi-ms(m/z)：571.7[m+h]+.
化學結構式如下：
1.3.2雷公藤甲素肉豆蔻酸酯(tp-ma)的制備
在反應容器中投量2mmol肉豆蔻酸、2mmol的edc·hcl、2mmol的dipea，加入20ml無水二氯甲烷溶解，冰浴條件下攪拌15分鐘；將1mmol的tp溶解于適量無水三氯甲烷中并緩慢滴加入反應體系，冰浴條件下反應30分鐘，室溫下繼續(xù)反應過夜，將反應物經硅膠柱分離純化得雷公藤甲素肉豆蔻酸酯476.5mg。產率83.5％。
1.4.1雷公藤甲素月桂酸酯(tp-la)的制備
在反應容器中投量1.2mmol月桂酸、1.2mmol的dic、1.2mmol的hobt，加入20ml無水dmf溶解，冰浴條件下攪拌20分鐘；將1mmol的tp溶解于適量無水二氯甲烷中并緩慢滴加入反應體系，冰浴條件下反應30分鐘，室溫下繼續(xù)反應過夜，將反應物經硅膠柱分離純化得雷公藤甲素月桂酸酯397.3mg。產率73.2％。
1hnmr(dmso-d6,600mhz)δ:4.78(1h,s,14-ch),4.50(1h,d,j＝18.77hz,19-ch),4.43(1h,d,j＝18.77hz,19-ch),3.35(2h,s,11、12-ch),3.21(1h,t,7-ch),2.56-2.60(1h,m,4-ch),2.32-2.37(2h,m,2ˊ-ch2),2.16-2.21(1h,m,3-ch),1.80-1.85(2h,m,3ˊ-ch2),1.73-1.77(1h,m,15-ch),1.57-1.61(4h,m,1、2-ch2),1.44-1.50(2h,m,6-ch2),1.25-1.30(16h,m,8×ch2),1.04-1.10(1h,m,5-ch),0.93(3h,s,20-ch2),0.85-0.88(6h,m,16、17-ch2),0.78(3h,t,12ˊ-ch2).
13cnmr(150mhz,dmso)δ：178.9,173.3,71.0,62.6,61.5,59.3,58.7,52.4,49.7,46.0,34.9,34.2,31.6,29.6,29.3,22.7,21.6,19.3,18.5,14.3.
esi-ms(m/z)：543.7[m+h]+.
化學結構式如下：
1.5.1雷公藤甲素癸酸酯(tp-da)的制備
在反應容器中投量1.5mmol癸酸、1.5mmol的對硝基苯甲酰氯、1.5mmol的三乙胺，加入20ml無水二氯甲烷溶解，冰浴條件下攪拌5分鐘；將1mmol的tp溶解于適量無水二氯甲烷中并緩慢滴加入反應體系，冰浴條件下反應30分鐘，室溫下繼續(xù)反應過夜，將反應物經硅膠柱分離純化得雷公藤甲素癸酸酯390.6mg。產率75.9％。
1hnmr(dmso-d6,600mhz)δ:4.88(1h,s,14-ch),4.54(1h,d,j＝18.71hz,19-ch),4.33(1h,d,j＝18.71hz,19-ch),3.35(2h,s,11、12-ch),3.21(1h,t,7-ch),2.56-2.60(1h,m,4-ch),2.32-2.37(2h,m,2ˊ-ch2),2.16-2.25(1h,m,3-ch),1.82-1.85(2h,m,3ˊ-ch2),1.73-1.77(1h,m,15-ch),1.57-1.61(4h,m,1、2-ch2),1.44-1.50(2h,m,6-ch2),1.25-1.30(12h,m,6×ch2),1.04-1.10(1h,m,5-ch),0.93(3h,s,20-ch2),0.85-0.88(6h,m,16、17-ch2),0.78(3h,t,10ˊ-ch2).
13cnmr(150mhz,dmso)δ：178.9,173.5,71.7,62.6,61.6,59.3,58.4,52.3,49.9,46.0,34.8,34.2,31.5,29.5,26.3,25.0,22.7,21.6,19.1,14.0.
esi-ms(m/z)：515.6[m+h]+.
化學結構式如下：
1.6.1雷公藤甲素辛酸酯(tp-ca)的制備
在反應容器中投量4mmol辛酸、4mmol的dcc、4mmol的dmap，加入20ml無水dma溶解，冰浴條件下攪拌30分鐘；將1mmol的tp溶解于適量無水二氯甲烷中并緩慢滴加入反應體系，冰浴條件下反應45分鐘，室溫下繼續(xù)反應過夜，將反應物經硅膠柱分離純化得雷公藤甲素辛酸酯411.2mg。產率84.5％。
1hnmr(dmso-d6,600mhz)δ:4.81(1h,s,14-ch),4.47(1h,d,j＝18.68hz,19-ch),4.22(1h,d,j＝18.68hz,19-ch),3.37(2h,s,11、12-ch),3.17(1h,t,7-ch),2.56-2.60(1h,m,4-ch),2.33-2.37(2h,m,2ˊ-ch2),2.16-2.21(1h,m,3-ch),1.80-1.86(2h,m,3ˊ-ch2),1.73-1.78(1h,m,15-ch),1.57-1.61(4h,m,1、2-ch2),1.39-1.50(2h,m,6-ch2),1.25-1.30(8h,m,4ˊ、5ˊ、6ˊ、7ˊ-ch2),1.04-1.10(1h,m,5-ch),0.93(3h,s,20-ch2),0.85-0.88(6h,m,16、17-ch2),0.78(3h,t,18ˊ-ch2).
13cnmr(150mhz,dmso)δ：178.8,173.2,71.1,62.6,61.3,59.6,58.2,52.3,49.9,46.0,34.9,34.2,31.5,29.0,26.3,25.0,22.7,21.6,19.0,13.9.
esi-ms(m/z)：487.6[m+h]+.
化學結構式如下：
1.7.1雷公藤甲素己酸酯(tp-ha)的制備
在反應容器中投量2.5mmol己酸、2.5mmol的hatu、2.5mmol的dmap，加入20ml無水dmf溶解，冰浴條件下攪拌15分鐘；將1mmol的tp溶解于適量無水三氯甲烷中并緩慢滴加入反應體系，冰浴條件下反應30分鐘，室溫下繼續(xù)反應過夜，將反應物經硅膠柱分離純化得雷公藤甲素己酸酯352.6mg。產率76.9％。
1hnmr(dmso-d6,600mhz)δ:4.88(1h,s,14-ch),4.45(1h,d,j＝18.78hz,19-ch),4.15(1h,d,j＝18.78hz,19-ch),3.43(2h,s,11、12-ch),3.20(1h,t,7-ch),2.66-2.76(1h,m,4-ch),2.28-2.35(2h,m,2ˊ-ch2),2.17-2.20(1h,m,3-ch),1.80-1.85(2h,m,3ˊ-ch2),1.73-1.79(1h,m,15-ch),1.57-1.61(4h,m,1、2-ch2),1.39-1.50(2h,m,6-ch2),1.25-1.30(4h,m,4ˊ、5ˊ-ch2),1.04-1.10(1h,m,5-ch),0.93(3h,s,20-ch2),0.85-0.88(9h,m,16、17、6ˊ-ch2).
13cnmr(150mhz,dmso)δ：178.5,172.0,71.3,63.1,61.8,59.8,58.6,53.0,49.6,46.3,34.9,34.2,32.2,31.8,26.5,22.4,21.7,19.3,14.1.
esi-ms(m/z)：459.5[m+h]+.
化學結構式如下：
1.8.1雷公藤甲素丁酸酯(tp-ba)的制備
在反應容器中投量3mmol丁酸、3mmol的edc·hcl、3mmol的dipea，加入20ml無水三氯甲烷溶解，冰浴條件下攪拌30分鐘；將1mmol的tp溶解于適量無水三氯甲烷中并緩慢滴加入反應體系，冰浴條件下反應45分鐘，室溫下繼續(xù)反應過夜，將反應物經硅膠柱分離純化得雷公藤甲素丁酸酯341.8mg。產率79.4％。
1hnmr(dmso-d6,600mhz)δ:4.96(1h,s,14-ch),4.86(1h,d,j＝18.88hz,19-ch),4.73(1h,d,j＝18.86hz,19-ch),3.98(1h,d,11-ch),3.93(1h,d,12-ch),3.70(1h,d,7-ch),2.66-2.76(1h,m,4-ch),2.28-2.42(2h,m,2ˊ-ch2),2.17-2.20(1h,m,3-ch),1.80-1.85(2h,m,3ˊ-ch2),1.73-1.78(1h,m,15-ch),1.57-1.61(4h,m,1、2-ch2),1.39-1.50(2h,m,6-ch2),1.04-1.10(1h,m,5-ch),0.99(3h,t,4ˊ-ch3),0.93(3h,s,20-ch2),0.85-0.88(6h,m,16、17-ch2).
13cnmr(150mhz,dmso)δ：178.9,173.1,70.9,62.7,61.7,59.3,58.4,52.4,49.9,46.1,36.4,34.1,32.2,31.9,26.3,21.6,19.2,18.9,13.5.
esi-ms(m/z)：431.5[m+h]+.
化學結構式如下：
實施例2：雷公藤甲素脂肪酸酯不同納米制劑的制備
以實施例1制備所得不同雷公藤甲素脂肪酸酯進行制劑成藥性考察，考察制劑包括脂質體、聚合物膠束、白蛋白納米粒、脂肪乳。
2.1不同雷公藤甲素脂肪酸酯脂質體的制備
2.1.1a雷公藤甲素硬脂酸酯(tp-sa)脂質體的制備
稱取雷公藤甲素硬脂酸酯0.2g、蛋黃磷脂(pc-98t)2g及膽固醇0.2g加入5g無水乙醇中，于60℃下加熱溶解，得有機相；將有機相緩慢注入80ml的60℃注射用水中，邊注入邊攪拌混勻，即得脂質體粗品；將脂質體粗品置于擠出器中，依次通過孔徑0.2μm、0.1μm、0.05μm的擠出膜擠出，得脂質體溶液；超濾除去脂質體中乙醇；稱取25g蔗糖，溶于上述脂質體溶液；加注射用水定容至100ml，用氫氧化鈉、鹽酸調節(jié)ph至4.0；0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.1.1b雷公藤甲素硬脂酸酯(tp-sa)脂質體的制備
稱取雷公藤甲素硬脂酸酯0.2g、蛋黃磷脂(epcs)2g、peg化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe-peg2000)0.2g及膽固醇0.2g溶于適量二氯甲烷中，45℃條件下真空旋蒸除去溶劑得脂質薄膜，用80ml注射用水進行水化得脂質體粗品；將脂質體粗品置于高壓均質機中均質乳化，得脂質體溶液；稱取25g海藻糖，溶于上述脂質體溶液；加注射用水定容至100ml，用氫氧化鈉、鹽酸調節(jié)ph至6.0；0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.1.1c雷公藤甲素硬脂酸酯(tp-sa)脂質體的制備
稱取雷公藤甲素硬脂酸酯0.3g、氫化磷脂(hspc)3g、peg化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe-peg2000)0.3g及膽固醇0.3g溶于適量三氯甲烷中，45℃條件下真空旋蒸除去溶劑得脂質薄膜，用75ml注射用水進行水化得脂質體粗品；將脂質體粗品置于高壓均質機中均質乳化，得脂質體溶液；稱取30g蔗糖，溶于上述脂質體溶液；加注射用水定容至100ml，用氫氧化鈉、檸檬酸調節(jié)ph至8.0；0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.1.1d雷公藤甲素硬脂酸酯(tp-sa)脂質體的制備
稱取雷公藤甲素硬脂酸酯0.2g、蛋黃磷脂(pc-98t)2g、peg化二硬脂酰乙醇胺(dspe-peg2000)0.2g及膽固醇0.2g溶于適量二氯甲烷中，45℃條件下真空旋蒸除去溶劑得脂質薄膜，稱取25g蔗糖溶于80ml注射用水水化薄膜得脂質體粗品；將脂質體粗品置于高壓均質機中均質乳化，得脂質體溶液；稱取25g蔗糖，溶于上述脂質體溶液；加注射用水定容至100ml，用氫氧化鈉、鹽酸調節(jié)ph至6.5；0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.1.2a雷公藤甲素棕櫚酸酯(tp-pa)脂質體的制備
稱取雷公藤甲素棕櫚酸酯0.2g、蛋黃磷脂(pc-98t)2g及膽固醇0.2g加入5g無水乙醇于60℃下加熱溶解，得有機相；將有機相緩慢注入80ml的60℃注射用水中，邊注入邊攪拌混勻，即得脂質體粗品；將脂質體粗品置于擠出器中，依次通過孔徑0.2μm、0.1μm、0.05μm的擠出膜擠出，得脂質體溶液；超濾除去脂質體中乙醇；稱取25g蔗糖，溶于上述脂質體溶液；加注射用水定容至100ml，用氫氧化鈉、鹽酸調節(jié)ph至4.0；0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.1.2b雷公藤甲素棕櫚酸酯(tp-pa)脂質體的制備
稱取雷公藤甲素棕櫚酸酯0.2g、蛋黃磷脂(epcs)2g、peg化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe-peg2000)0.2g及膽固醇0.2g溶于適量二氯甲烷中，45℃條件下真空旋蒸除去溶劑得脂質薄膜，用80ml注射用水進行水化得脂質體粗品；將脂質體粗品置于高壓均質機中均質乳化，得脂質體溶液；稱取25g海藻糖，溶于上述脂質體溶液；加注射用水定容至100ml，用氫氧化鈉、鹽酸調節(jié)ph至6.0；0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.1.2c雷公藤甲素棕櫚酸酯(tp-pa)脂質體的制備
稱取雷公藤甲素棕櫚酸酯0.3g、氫化磷脂(hspc)3g、peg化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe-peg2000)0.3g及膽固醇0.3g溶于適量三氯甲烷中，45℃條件下真空旋蒸除去溶劑得脂質薄膜，用75ml注射用水進行水化得脂質體粗品；將脂質體粗品置于高壓均質機中均質乳化，得脂質體溶液；稱取30g蔗糖，溶于上述脂質體溶液；加注射用水定容至100ml，用氫氧化鈉、檸檬酸調節(jié)ph至8.0；0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.1.2d雷公藤甲素棕櫚酸酯(tp-pa)脂質體的制備
稱取雷公藤甲素棕櫚酸酯0.2g、蛋黃磷脂(pc-98t)2g、peg化二硬脂酰乙醇胺(dspe-peg2000)0.2g及膽固醇0.2g溶于適量二氯甲烷中，45℃條件下真空旋蒸除去溶劑得脂質薄膜，稱取25g蔗糖溶于80ml注射用水水化薄膜得脂質體粗品；將脂質體粗品置于高壓均質機中均質乳化，得脂質體溶液；稱取25g蔗糖，溶于上述脂質體溶液；加注射用水定容至100ml，用氫氧化鈉、鹽酸調節(jié)ph至6.5；0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.1.3a雷公藤甲素肉豆蔻酸酯(tp-ma)脂質體的制備
稱取雷公藤甲素肉豆蔻酸酯0.2g、蛋黃磷脂(epcs)2g、peg化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe-peg2000)0.2g及膽固醇0.2g溶于適量二氯甲烷中，45℃條件下真空旋蒸除去溶劑得脂質薄膜，用80ml注射用水進行水化得脂質體粗品；將脂質體粗品置于高壓均質機中均質乳化，得脂質體溶液；稱取25g海藻糖，溶于上述脂質體溶液；加注射用水定容至100ml，用氫氧化鈉、鹽酸調節(jié)ph至6.0；0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.1.3b雷公藤甲素肉豆蔻酸酯(tp-ma)脂質體的制備
稱取雷公藤甲素肉豆蔻酸酯0.3g、氫化磷脂(hspc)3g、peg化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe-peg2000)0.3g及膽固醇0.3g溶于適量三氯甲烷中，45℃條件下真空旋蒸除去溶劑得脂質薄膜，用75ml注射用水進行水化得脂質體粗品；將脂質體粗品置于高壓均質機中均質乳化，得脂質體溶液；稱取30g蔗糖，溶于上述脂質體溶液；加注射用水定容至100ml，用氫氧化鈉、檸檬酸調節(jié)ph至8.0；0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.1.4a雷公藤甲素月桂酸酯(tp-la)脂質體的制備
稱取雷公藤甲素月桂酸酯0.5g、蛋黃磷脂(e80)5g、peg化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe-peg5000)0.7g及膽固醇0.5g加入4g丙二醇于75℃下加熱溶解，得有機相；將有機相緩慢注入80ml的75℃注射用水中，邊注入邊攪拌混勻，即得脂質體粗品；將脂質體粗品置于擠出器中，依次通過孔徑1.0μm、0.6μm、0.4μm、0.2μm、0.1μm、0.05μm的擠出膜擠出，得脂質體溶液；超濾除去脂質體中丙二醇；稱取25g乳糖，溶于上述脂質體溶液；加注射用水定容至100ml，用鹽酸、磷酸鹽調節(jié)ph至7.0；0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.1.4b雷公藤甲素月桂酸酯(tp-la)脂質體的制備
稱取雷公藤甲素月桂酸酯0.2g、大豆磷脂(pl-100m)4g、peg化二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(dmpe-peg3500)0.4g及膽固醇0.4g溶于適量三氯甲烷中，45℃條件下真空旋蒸除去溶劑得脂質薄膜，用80ml注射用水進行水化得脂質體粗品；將脂質體粗品置于擠出器中，依次通過孔徑0.2μm、0.1μm、0.05μm的擠出膜擠出，得脂質體溶液；稱取25g蔗糖，溶于上述脂質體溶液；加注射用水定容至100ml，用磷酸鹽調節(jié)ph至7.0；0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.1.5a雷公藤甲素癸酸酯(tp-da)脂質體的制備
稱取雷公藤甲素癸酸酯0.7g、大豆磷脂(s100)7g、peg化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe-peg2000)1g及膽固醇1g加入10g無水乙醇于30℃下加熱溶解，得有機相；將有機相緩慢注入75ml的30℃注射用水中，邊注入邊攪拌混勻，即得脂質體粗品；將脂質體粗品置于擠出器中，依次通過孔徑0.2μm、0.1μm、0.05μm的擠出膜擠出，得脂質體溶液；刮板式薄膜蒸發(fā)除去脂質體中乙醇；稱取30g甘露醇，溶于上述脂質體溶液；加注射用水定容至100ml，用醋酸、磷酸鹽調節(jié)ph至6.0；0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.1.5b雷公藤甲素癸酸酯(tp-da)脂質體的制備
稱取雷公藤甲素癸酸酯0.2g、蛋黃磷脂(epcs)2g、peg化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe-peg8000)0.2g及膽固醇0.2g加入8g叔丁醇于50℃下加熱溶解，得有機相；將有機相緩慢注入80ml的50℃注射用水中，邊注入邊攪拌混勻，即得脂質體粗品；將脂質體粗品置于高壓均質機中均質乳化，得脂質體溶液；刮板式薄膜蒸發(fā)除去脂質體中叔丁醇；稱取20g海藻糖，溶于上述脂質體溶液；加注射用水定容至100ml，用氫氧化鈉、鹽酸調節(jié)ph至6.0；0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.1.6a雷公藤甲素辛酸酯(tp-ca)脂質體的制備
稱取雷公藤甲素辛酸酯0.05g、蛋黃磷脂(epcs)0.5g、peg化二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(dppe-peg2000)0.4g溶于適量二氯甲烷中，50℃條件下真空旋蒸除去溶劑得脂質薄膜，用90ml注射用水進行水化得脂質體粗品；將脂質體粗品置于擠出器中，依次通過孔徑0.4μm、0.2μm、0.1μm、0.05μm的擠出膜擠出，得脂質體溶液；稱取4g麥芽糖，溶于上述脂質體溶液；加注射用水定容至100ml，用氫氧化鈉、鹽酸調節(jié)ph至6.0；0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.1.6b雷公藤甲素辛酸酯(tp-ca)脂質體的制備
稱取雷公藤甲素辛酸酯0.1g、大豆磷脂(dopc)1g、peg化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe-peg1500)1g及膽固醇0.1g加入3g叔丁醇于25℃下加熱溶解，得有機相；將有機相緩慢注入95ml的25℃注射用水中，邊注入邊攪拌混勻，即得脂質體粗品；將脂質體粗品置于擠出器中，依次通過孔徑0.2μm、0.1μm、0.05μm的擠出膜擠出，得脂質體溶液；超濾除去脂質體中叔丁醇；稱取10g乳糖，溶于上述脂質體溶液；加注射用水定容至100ml，用氫氧化鈉、鹽酸調節(jié)ph至4.0；0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.1.6c雷公藤甲素辛酸酯(tp-ca)脂質體的制備
稱取雷公藤甲素辛酸酯0.4g、蛋黃磷脂(epcs)4g、peg化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe-peg2000)0.4g及膽固醇0.4g溶于適量無水乙醇中，45℃條件下真空旋蒸除去溶劑得脂質薄膜，用85ml注射用水進行水化得脂質體粗品；將脂質體粗品置于高壓均質機中均質乳化，得脂質體溶液；稱取15g海藻糖，溶于上述脂質體溶液；加注射用水定容至100ml，用氫氧化鈉、鹽酸調節(jié)ph至7.0；0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.1.7a雷公藤甲素己酸酯(tp-ha)脂質體的制備
稱取雷公藤甲素己酸酯1g、蛋黃磷脂(pc-98t)10g、peg化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe-peg2000)0.5g及膽固醇0.5g溶于適量二氯甲烷中，45℃條件下真空旋蒸除去溶劑得脂質薄膜，稱取30g蔗糖溶于80ml注射用水水化薄膜得脂質體粗品；將脂質體粗品置于高壓均質機中均質乳化，得脂質體溶液；稱取30g海藻糖，溶于上述脂質體溶液；加注射用水定容至100ml，用氫氧化鈉、鹽酸調節(jié)ph至8.0；0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.1.7b雷公藤甲素己酸酯(tp-ha)脂質體的制備
稱取雷公藤甲素己酸酯0.2g、大豆磷脂(spc-3)2g、peg化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dppe-peg2000)0.2g溶于適量無水乙醇中，50℃條件下真空旋蒸除去溶劑得脂質薄膜，用75ml注射用水進行水化得脂質體粗品；將脂質體粗品置于擠出器中，依次通過孔徑2.0μm、1.0μm、0.4μm、0.1μm、0.05μm的擠出膜擠出，得脂質體溶液；稱取40g蔗糖，溶于上述脂質體溶液；加注射用水定容至100ml，用醋酸、磷酸鹽調節(jié)ph至5.0；0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.1.8a雷公藤甲素丁酸酯(tp-ba)脂質體的制備
稱取雷公藤甲素丁酸酯0.2g、氫化磷脂(hspc)3g、peg化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe-peg6000)0.3g及膽固醇0.3g加入6g丙二醇于55℃下加熱溶解，得有機相；將有機相緩慢注入85ml的55℃注射用水中，邊注入邊攪拌混勻，即得脂質體粗品；將脂質體粗品置于高壓均質機中均質乳化，再置于擠出器中，過孔徑0.05μm的擠出膜擠出，得脂質體溶液；超濾除去脂質體中丙二醇；稱取9g葡萄糖、6g甘露醇，溶于上述脂質體溶液；加注射用水定容至100ml，用氫氧化鈉調節(jié)ph至10.0；0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.1.8b雷公藤甲素丁酸酯(tp-ba)脂質體的制備
稱取雷公藤甲素丁酸酯0.2g、磷脂(dspc)2g、peg化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe-peg2000)0.2g及膽固醇0.8g加入1g無水乙醇于50℃下加熱溶解，得有機相；將有機相緩慢注入80ml的50℃注射用水中，邊注入邊攪拌混勻，即得脂質體粗品；將脂質體粗品置于擠出器中，依次通過孔徑2.0μm、1.0μm、0.4μm、0.05μm的擠出膜擠出，得脂質體溶液；超濾除去脂質體中乙醇；稱取25g海藻糖，溶于上述脂質體溶液；加注射用水定容至100ml，用氫氧化鈉、鹽酸調節(jié)ph至6.0；0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.2不同雷公藤甲素脂肪酸酯聚合物膠束的制備
2.2.1a雷公藤甲素硬脂酸酯(tp-sa)聚合物膠束的制備
稱取雷公藤甲素硬脂酸酯0.2g、聚乙二醇單甲醚-聚乳酸(mpeg-pdlla)1.2g溶于適量乙腈中；60℃條件下真空旋蒸除去溶劑成膜；用90ml預熱至60℃注射用水振搖水化；加入20g海藻糖溶解，定容至100ml，0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.2.1b雷公藤甲素棕櫚酸酯(tp-pa)聚合物膠束的制備
稱取雷公藤甲素棕櫚酸酯0.3g、聚乙二醇單甲醚-聚乳酸(mpeg-pdlla)1.5g溶于適量乙腈中；60℃條件下真空旋蒸除去溶劑成膜；用90ml預熱至60℃注射用水振搖水化；加入20g蔗糖溶解，定容至100ml，0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.2.2雷公藤甲素肉豆蔻酸酯(tp-ma)聚合物膠束的制備
稱取雷公藤甲素肉豆蔻酸酯0.2g、聚乙二醇單甲醚-聚乳酸(mpeg-pdlla)1.4g溶于適量乙腈中；60℃條件下真空旋蒸除去溶劑成膜；用85ml預熱至60℃注射用水振搖水化；加入12g葡萄糖、8g甘露醇溶解，定容至100ml，0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.2.3雷公藤甲素辛酸酯(tp-ca)聚合物膠束的制備
稱取雷公藤甲素辛酸酯0.4g、聚乙二醇單甲醚-聚乳酸(mpeg-pdlla)5g溶于適量乙腈中；55℃條件下真空旋蒸除去溶劑成膜；用85ml預熱至55℃注射用水振搖水化；定容至100ml，0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.2.4雷公藤甲素丁酸酯(tp-ba)聚合物膠束的制備
稱取雷公藤甲素丁酸酯0.5g、聚乙二醇單甲醚-聚乳酸(mpeg-pdlla)2.5g溶于適量乙腈中；50℃條件下真空旋蒸除去溶劑成膜；用85ml預熱至60℃注射用水振搖水化；加入20g麥芽糖溶解，定容至100ml，0.22μm濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.3雷公藤甲素脂肪酸酯白蛋白納米粒的制備
2.3.1雷公藤甲素硬脂酸酯(tp-sa)白蛋白納米粒的制備
稱取人血清白蛋白4.5g加入100ml注射用水低溫攪拌使混合，待溫度降至2℃，滴加入1ml氯仿，于0℃條件下10000rpm剪切5min是為水相；稱取雷公藤甲素硬脂酸酯0.5g溶于無水乙醇-氯仿混合溶劑3ml(1：2)是為有機相；于高速剪切分散水相條件下緩慢滴加入有機相，10000rpm剪切5min得初乳；將初乳轉移至高壓均質機中，以均質壓力5000psi、10000psi、15000psi、20000psi各循環(huán)2次；均質結束后以5倍量2℃注射用水稀釋，采用刮板式薄膜蒸發(fā)除去溶劑，濃縮定容至100ml；0.22μm濾膜過濾除菌，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.3.2雷公藤甲素棕櫚酸酯(tp-pa)白蛋白納米粒的制備
稱取人血清白蛋白4.5g加入100ml注射用水低溫攪拌使混合，待溫度降至2℃，滴加入1ml氯仿，于0℃條件下10000rpm剪切3min是為水相；稱取雷公藤甲素棕櫚酸酯0.4g溶于無水乙醇-氯仿混合溶劑3ml(1：4)是為有機相；于高速剪切分散水相條件下緩慢滴加入有機相，10000rpm剪切5min得初乳；將初乳轉移至高壓均質機中，以均質壓力5000psi、10000psi、15000psi、20000psi各循環(huán)2次；均質結束后以5倍量2℃注射用水稀釋，采用刮板式薄膜蒸發(fā)除去溶劑，濃縮定容至100ml；0.22μm濾膜過濾除菌，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.3.3雷公藤甲素肉豆蔻酸酯(tp-ma)白蛋白納米粒的制備
稱取人血清白蛋白4.5g加入100ml注射用水低溫攪拌使混合，待溫度降至2℃，滴加入1ml氯仿，于0℃條件下10000rpm剪切3min是為水相；稱取雷公藤甲素肉豆蔻酸酯0.45g溶于無水乙醇-氯仿混合溶劑2.5ml(1：4)是為有機相；于高速剪切分散水相條件下緩慢滴加入有機相，12000rpm剪切8min得初乳；將初乳轉移至高壓均質機中，以均質壓力10000psi、15000psi、20000psi各循環(huán)2次；均質結束后以5倍量2℃注射用水稀釋，采用刮板式薄膜蒸發(fā)除去溶劑，濃縮定容至100ml；0.22μm濾膜過濾除菌，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.3.4雷公藤甲素辛酸酯(tp-ca)白蛋白納米粒的制備
稱取人血清白蛋白4.5g加入100ml注射用水低溫攪拌使混合，待溫度降至2℃，滴加入1ml氯仿，于0℃條件下10000rpm剪切5min是為水相；稱取雷公藤甲素辛酸酯0.5g溶于無水乙醇-氯仿混合溶劑4ml(1：3)是為有機相；于高速剪切分散水相條件下緩慢滴加入有機相，10000rpm剪切5min得初乳；將初乳轉移至高壓均質機中，以均質壓力15000psi循環(huán)2次，20000psi循環(huán)4次；均質結束后以5倍量2℃注射用水稀釋，采用刮板式薄膜蒸發(fā)除去溶劑，濃縮定容至100ml；0.22μm濾膜過濾除菌，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.3.5雷公藤甲素丁酸酯(tp-ba)白蛋白納米粒的制備
稱取人血清白蛋白4.5g加入100ml注射用水低溫攪拌使混合，待溫度降至2℃，滴加入1ml氯仿，于0℃條件下10000rpm剪切3min是為水相；稱取雷公藤甲素丁酸酯0.4g溶于無水乙醇-氯仿混合溶劑2ml(1：5)是為有機相；于高速剪切分散水相條件下緩慢滴加入有機相，10000rpm剪切3min得初乳；將初乳轉移至高壓均質機中，以均質壓力5000psi、10000psi、15000psi、20000psi各循環(huán)2次；均質結束后以5倍量2℃注射用水稀釋，采用刮板式薄膜蒸發(fā)除去溶劑，濃縮定容至100ml；0.22μm濾膜過濾除菌，分裝，冷凍干燥，封口壓蓋，即得。
2.4雷公藤甲素脂肪酸酯脂肪乳的制備
2.4.1雷公藤甲素硬脂酸酯(tp-sa)脂肪乳的制備
稱取注射用中鏈甘油三酯5g、雷公藤甲素硬脂酸酯0.2g，水浴加熱至70℃條件下攪拌使溶解，得油相；稱取磷脂(pl-100m)3g加至90ml注射用水中，剪切使分散，得水相；將油相和水相在70℃下混合，同時用剪切乳化機乳化5min，得初乳，用注射用水定容至100ml；將初乳置于高壓均質機中進一步均質乳化，用鹽酸調節(jié)ph至5.0，過0.22μm濾膜過濾，分裝，封口，121℃下滅菌15min，即得。
2.4.2雷公藤甲素棕櫚酸酯(tp-pa)脂肪乳的制備
稱取注射用中鏈甘油三酯2.5g、大豆油2.5g、雷公藤甲素棕櫚酸酯0.2g，水浴加熱至60℃條件下攪拌使溶解，得油相；稱取磷脂(pl-100m)3g加至90ml注射用水中，剪切使分散，得水相；將油相和水相在60℃下混合，同時用剪切乳化機乳化5min，得初乳，用注射用水定容至100ml；將初乳置于高壓均質機中進一步均質乳化，用磷酸鹽調節(jié)ph至7.0，過0.22μm濾膜過濾，分裝，封口，100℃下滅菌30min，即得。
2.4.3雷公藤甲素肉豆蔻酸酯(tp-ma)脂肪乳的制備
稱取注射用大豆油6g、雷公藤甲素肉豆蔻酸酯0.3g，水浴加熱至70℃條件下攪拌使溶解，得油相；稱取磷脂(pl-100m)3g加至90ml注射用水中，剪切使分散，得水相；將油相和水相在70℃下混合，同時用剪切乳化機乳化8min，得初乳，用注射用水定容至100ml；將初乳置于高壓均質機中進一步均質乳化，用磷酸鹽調節(jié)ph至6.5，分別經0.45μm、0.22μm濾膜過濾除菌，分裝，封口，即得。
2.4.4雷公藤甲素辛酸酯(tp-ca)脂肪乳的制備
稱取注射用中鏈甘油三酯4g、大豆油4g、雷公藤甲素辛酸酯0.4g，水浴加熱至80℃條件下攪拌使溶解，得油相；稱取磷脂(pc-98t)4g、甘油1g加至85ml注射用水中，剪切使分散，得水相；將油相和水相在80℃下混合，同時用剪切乳化機乳化5min，得初乳，用注射用水定容至100ml；將初乳置于高壓均質機中進一步均質乳化，用鹽酸調節(jié)ph至6.0，0.45μm濾膜過濾，分裝，封口，121℃下滅菌15min，即得。
2.4.5雷公藤甲素丁酸酯(tp-ba)脂肪乳的制備
稱取注射用中鏈甘油三酯4g、油酸0.01g、雷公藤甲素丁酸酯0.2g，水浴加熱至80℃條件下攪拌使溶解，得油相；稱取磷脂(spc-3)3g加至90ml注射用水中，剪切使分散，得水相；將油相和水相在65℃下混合，同時用剪切乳化機乳化6min，得初乳，用注射用水定容至100ml；將初乳置于高壓均質機中進一步均質乳化，用乳酸調節(jié)ph至5.0，過0.22μm濾膜過濾，分裝，封口，121℃下滅菌15min，即得。
結果表明：雷公藤甲素脂肪酸酯可有效制備得到脂質體、聚合物膠束、白蛋白納米粒、脂肪乳等納米制劑，成藥性良好。
實施例3：脂質體粒徑及包封率的測定
以實施例2.1.1b項下藥脂比為統(tǒng)一處方分別制備不同雷公藤甲素脂肪酸酯及雷公藤甲素脂質體，測定脂質體粒徑及包封率。結果見表1，
表1脂質體粒徑及包封率測定結果
實驗結果表明，相同處方條件下雷公藤甲素脂肪酸酯可制備成脂質體，粒徑分布100～130nm，包封率大于90％；而雷公藤甲素制備過程中由于藥物析出，脂質體無法有效制備，包封率不足50％。同時綜合比較發(fā)現(xiàn)，碳原子數(shù)≥8的飽和脂肪酸修飾而得雷公藤甲素脂肪酸脂具有更小的粒徑，并且分布更均勻，故優(yōu)選碳原子數(shù)為2n(n為4～9)的飽和脂肪酸。
實施例4：細胞毒性實驗
基于實施例3優(yōu)選基礎上，以實施例2.1.1b項下藥脂比為統(tǒng)一處方分別制備碳原子數(shù)為2n(n為4～9)的不同鏈長飽和脂肪酸修飾的雷公藤甲素脂肪酸酯脂質體，以tp(dmso)溶液作為對照進行mcf-7及a549細胞的抗腫瘤毒性研究，具體操作步驟如下：
1)將生長狀態(tài)良好的細胞用一定培養(yǎng)基稀釋成適宜濃度，然后按每孔5000個細胞的密度接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔100μl。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)24h(37℃，5％co2)。
2)向培養(yǎng)板中分別加入10μl不同濃度藥物(等摩爾給藥，每個濃度3個復孔)。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育48h。
3)向每孔中加入cck-8的培養(yǎng)基10μl。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育4h。
4)用酶標儀測定在450nm處的吸光度。取平均值，計算抑制率。
計算公式：抑制率＝[(ac-as)/(ac-ab)]×100％
as：實驗孔(含有細胞的培養(yǎng)基、cck-8、藥物)
ac：對照孔(含有細胞的培養(yǎng)基和cck-8、不含藥物)
ab：空白孔(不含細胞和藥物的培養(yǎng)基、cck-8)
結果：分別計算各藥物濃度下細胞抑制ic50值見表2。
表2細胞毒性作用ic50值結果
實驗結果表明，雷公藤甲素脂肪酸酯制備所得脂質體相較tp而言，細胞毒性作用更低。體現(xiàn)在針對細胞生長的抑制作用方面，雷公藤甲素脂肪酸酯脂質體達到半數(shù)抑制所需的藥物濃度ic50值更高，并且碳原子數(shù)≥14的飽和脂肪酸修飾所得雷公藤甲素脂肪酸脂脂質體又比其它具有更高的ic50濃度，故進一步優(yōu)選碳原子數(shù)2n(n為7～9)的飽和脂肪酸。
實施例5：大鼠體內藥動學研究
基于實施例4優(yōu)選基礎上，以實施例2.1.1b項下藥脂比為統(tǒng)一處方分別制備c2n(n為7～9)范圍內不同鏈長飽和脂肪酸修飾的雷公藤甲素脂肪酸酯(tp-ma、tp-pa、tp-sa)脂質體，以tp(dmso)溶液作為參照進行大鼠體內藥動學研究。大鼠尾靜脈給藥，劑量為等效tp3mg/kg，取血時間點設置2、5、10、15、30、45、60、90、120、180min，每組藥物各5只sd大鼠(♂)。
樣品處理及分析方法：取血漿加4倍量甲醇沉淀蛋白，12000r/min離心10min，取上清揮去甲醇，剩余殘液加400μl甲基叔丁基醚萃取兩次，12000r/min離心10min。匯集有機萃取相，濃縮揮干，加甲醇100μl復溶，離心取上清進液相測定含量計算血藥濃度，采用das2.0軟件進行藥代動力學擬合，半衰期結果見表3。
表3藥物體內半衰期結果
實驗結果表明，雷公藤甲素脂肪酸酯制備所得脂質體相比tp可有效延長藥物作用半衰期，顯著改善藥代動力學性質。
以上已對本發(fā)明創(chuàng)造的較佳實施例進行了具體說明，但本發(fā)明創(chuàng)造并不限于所述實施例，熟悉本領域的技術人員在不違背本發(fā)明創(chuàng)造精神的前提下還可作出種種的等同的變型或替換，這些等同的變型或替換均包含在本申請權利要求所限定的范圍內。