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一種骨髓蛋白質(zhì)的制備方法及其應(yīng)用與流程

文檔序號:12608784閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種骨髓蛋白質(zhì)的制備方法,其特征在于該方法中的原料為動物屠宰后骨骼中的骨髓,采用緩沖液或無機鹽溶劑提取,具體操作按下列步驟進行:

緩沖液提取:

a、取新鮮骨髓,清洗3次,去掉骨頭和血跡,切成小塊,按重量比為1∶5加入液氮粉碎,反復(fù)粉碎3-4次,得到骨髓粉碎粉,低溫冰箱保存?zhèn)溆茫?/p>

b、將步驟a中得到骨髓粉碎粉100g,加入重量比為1:10的三羥甲基氨基甲烷鹽酸緩沖溶液0.1mol/L,pH=8.4,在溫度40℃條件下置集約式恒溫加熱磁力攪拌機上回流反復(fù)提取2-3次至未見沉淀物為止,得到總提取液;

c、將步驟b得到的總提取按料液比為1:6的石油醚或正己烷脫脂,反復(fù)2-3次,收集下層提取液;

d、將步驟c得到的下層提取液在12000轉(zhuǎn)/分,溫度4℃離心10min,取上清液,得到骨髓蛋白質(zhì)粗提液;

e、將步驟d中得到的蛋白質(zhì)肽粗提液,濃縮至2-5倍,并利用1000Da透析帶在蒸餾水循環(huán)透析24-48小時;

f、將步驟e中透析后的蛋白質(zhì)提取液,用硫酸銨飽和溶液沉淀,先用濃度為30%飽和硫酸銨沉淀,再依次用濃度為60%-90%飽和硫酸銨沉淀,溫度4℃,過夜,離心,透析48h,噴霧干燥或冷凍干燥,即得到1.14g骨髓蛋白質(zhì);

無機鹽溶劑提?。?/p>

a、取新鮮骨髓,清洗3次,去掉骨頭和血跡,切成小塊,按重量比為1∶5加入液氮粉碎,反復(fù)粉碎3-4次,得到骨髓粉碎粉,低溫冰箱保存?zhèn)溆茫?/p>

b、取步驟a中3等份100g的已粉碎好骨髓樣品,每份樣品中按料液比為1:5,分別加入質(zhì)量分數(shù)為0.5%、2.5%和5%的氯化鈉溶液提取,在溫度40℃下置集約式恒溫加熱磁力攪拌機上回流反復(fù)提取2-3次至未平底下未見沉淀物為止,回流時間為3-4h,將提取液過濾,未過濾部分再加氯化鈉溶液提取,過濾,合并濾液;

c、將步驟b得到的合并濾液用料液比為1:4石油醚或正己烷脫脂,反復(fù)2-3次,收集下層提取液;

d、將步驟c中下層液體12000轉(zhuǎn)/分下,溫度4℃,離心10min,取上清液,得到骨髓多蛋白質(zhì)提取液;

e、將步驟d中得到的蛋白質(zhì)粗提取液,濃縮至5/10-2/10倍,并利用1000Da透析帶在蒸餾水循環(huán)透析48-72小時,冷凍干燥,得到骨髓蛋白質(zhì),分別為0.5%氯化鈉1.1g、2.5% 氯化鈉0.925g和5% 氯化鈉0.52g。

2.如權(quán)利要求1所述方法獲得的骨髓蛋白質(zhì)在制備抗細菌生物活性的藥物中的用途。

3.如權(quán)利要求1所述方法獲得的骨髓蛋白質(zhì)在制備抗真菌生物活性的藥物中的用途。

4.如權(quán)利要求1所述方法獲得的骨髓蛋白質(zhì)在制備食品添加劑中的用途。

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