本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種將甲殼素制備成殼寡糖的方法。

背景技術(shù)：

寡糖又叫殼聚寡糖、低聚殼聚糖，是將殼聚糖經(jīng)特殊的生物酶技術(shù)(也有使用化學(xué)降解、微波降解技術(shù)的報(bào)道)降解得到的一種聚合度在2～20之間寡糖產(chǎn)品，分子量≤3200da，是水溶性較好、功能作用大、生物活性高的低分子量產(chǎn)品。它具有殼聚糖所沒有的較高溶解度，全溶于水，容易被生物體吸收利用等諸多獨(dú)特的功能。

目前，制備殼寡糖的方法包括以下步驟：用甲殼素制備殼寡糖，將甲殼素加到50％的濃氫氧化鈉中，加熱煮4-6小時(shí)，用水洗至中性，過濾得到殼聚糖，再將殼聚糖溶解于稀酸中，用堿調(diào)節(jié)ph至5-6，加入酶在合適的溫度下攪拌得到殼寡糖溶液。

上述步驟的不足之處：原料甲殼素要先由甲殼素脫乙酰得到殼聚糖，不能一步到位的生產(chǎn)出殼寡糖，步驟多，而若是以殼聚糖為原料則過于昂貴；生產(chǎn)過程中要經(jīng)過多次過濾洗滌，步驟繁瑣，使用了大量酸堿無法回收，增加了生產(chǎn)成本且會(huì)造成環(huán)境污染；生產(chǎn)出的殼寡糖溶液中還有未反應(yīng)完全的長鏈多糖，產(chǎn)物不純。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，本發(fā)明的目的是提出一種將甲殼素制備成殼寡糖的方法，反應(yīng)條件簡單，步驟少；用酶的方法綠色環(huán)保效率高，有利于工業(yè)大規(guī)模生產(chǎn)；得到較純的殼寡糖產(chǎn)物；而濾出未降解的殼多糖還可以加入到下一批反應(yīng)中繼續(xù)反應(yīng)。

本發(fā)明的目的將通過以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)：

一種將甲殼素制備成殼寡糖的方法，所述方法包括以下步驟：

1)以甲殼素為原料，溶于水中，不斷攪拌，氫氧化鈉溶液調(diào)ph至8.5，50℃，加入甲殼素脫乙酰酶，恒溫反應(yīng)6小時(shí)，得殼聚糖溶液；

2)加鹽酸調(diào)ph至5.5，加殼聚糖酶和纖維素酶，50℃恒溫?cái)嚢?小時(shí)，得殼寡糖溶液；

3)調(diào)ph至堿性，得到未降解的殼聚糖殘?jiān)鸵呀到獾臍す烟侨芤?，所述未降解的殼聚糖殘?jiān)M(jìn)行過濾，返入下一批反應(yīng)中；

4)所述已降解的殼聚糖溶液蒸餾濃縮，得濃縮液，加酒精，過濾，烘干，得殼寡糖。

上述的一種將甲殼素制備成殼寡糖的方法，步驟1)中所述甲殼素與甲殼素脫乙酰酶質(zhì)量比為100∶0.1。

上述的一種將甲殼素制備成殼寡糖的方法，步驟2)中所述殼聚糖酶與所述纖維素酶的質(zhì)量比為1∶1，所述甲殼素與殼聚糖酶質(zhì)量比為100∶0.1。

上述的一種將甲殼素制備成殼寡糖的方法，步驟4)中所述濃縮液的體積與所述殼聚糖溶液的體積比為20∶100。

上述的一種將甲殼素制備成殼寡糖的方法，步驟4)中所述酒精的體積與所述濃縮液的體積比為3∶1。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的一種將甲殼素制備成殼寡糖的方法，達(dá)到了如下效果：將甲殼素直接制成殼寡糖，反應(yīng)條件簡單，步驟少；用酶的方法綠色環(huán)保效率高，有利于工業(yè)大規(guī)模生產(chǎn)；利用殼寡糖在堿性溶液中可溶，而長鏈糖在堿性溶液中不溶的性質(zhì)進(jìn)行過濾去除得到的產(chǎn)物較純；而濾出未反應(yīng)完全的殼多糖還可以加入到下一批反應(yīng)中繼續(xù)反應(yīng)；本發(fā)明重現(xiàn)性好，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。

以下便結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一步的詳述，以使技術(shù)方案更易于理解、掌握。

具體實(shí)施方式

下面通過具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行說明，但本發(fā)明并不局限于此。下述實(shí)施例中所述實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所述試劑和材料，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑獲得，下面實(shí)施例并非用以限制本發(fā)明的專利范圍，凡未脫離本發(fā)明所為的等效實(shí)施或變更，均應(yīng)包含于本專利保護(hù)范圍中。

實(shí)施例一

1)稱取100g甲殼素，溶于1l水中，50℃水浴，不斷攪拌，用10％濃度氫氧化鈉溶液調(diào)ph至8.5，加入0.1g甲殼素脫乙酰酶，恒溫反應(yīng)6小時(shí)，得殼聚糖溶液；

2)加31％鹽酸調(diào)ph至5.5，可見大部分殼聚糖沉淀溶于水中，形成高粘度溶液，加入殼聚糖酶0.1g和纖維素酶0.1g，50℃水浴恒溫?cái)嚢?小時(shí)，得殼寡糖溶液；

3)加入10％氫氧化鈉調(diào)ph至8.2，過濾，得到未降解的殼聚糖殘?jiān)鸵呀到獾臍ぞ厶侨芤?，此時(shí)已降解的殼聚糖溶液為淡黃色澄清液體，上述未降解的殼聚糖殘?jiān)M(jìn)行過濾，加入到下一批制備方法步驟2)中，循環(huán)往返，以提高殼寡糖的產(chǎn)率；

4)蒸餾濃縮至已降解的殼聚糖溶液的20％，得濃縮液，加入與所述3倍體積濃縮液的酒精使殼寡糖析出，再用酒精洗滌一次后過濾烘干粉碎，得殼寡糖，密封包裝儲(chǔ)存。

本實(shí)施例的殼寡糖，外觀呈淺黃色粉末，分子量3500，純度＞95％，脫乙酰度90.5％，灰分＜1％，收率85.3％。

實(shí)施例二

1)稱取100g甲殼素，溶于1l水中，50℃水浴，不斷攪拌，用10％濃度氫氧化鈉溶液調(diào)ph至8.5，加入0.1g甲殼素脫乙酰酶，恒溫反應(yīng)6小時(shí)，得殼聚糖溶液；

2)加31％鹽酸調(diào)ph至5.5，可見大部分殼聚糖沉淀溶于水中，形成高粘度溶液，加入殼聚糖酶0.1g和纖維素酶0.1g，50℃水浴恒溫?cái)嚢?小時(shí)，得殼寡糖溶液；

3)加入10％氫氧化鈉調(diào)ph至8，過濾，得到未降解的殼聚糖殘?jiān)鸵呀到獾臍ぞ厶侨芤?，此時(shí)已降解的殼聚糖溶液為淡黃色澄清液體，上述未降解的殼聚糖殘?jiān)M(jìn)行過濾，加入到下一批制備方法步驟2)中，循環(huán)往返，以提高殼寡糖的產(chǎn)率；

4)蒸餾濃縮至已降解的殼聚糖溶液的20％，得濃縮液，加入與所述3倍體積濃縮液的酒精使殼寡糖析出，再用酒精洗滌一次后過濾烘干粉碎，得殼寡糖，密封包裝儲(chǔ)存。

本實(shí)施例的殼寡糖，外觀呈淺黃色粉末，分子量3500，純度＞95％，脫乙酰度91％，灰分＜1％，收率86％。

實(shí)施例三

1)稱取100g甲殼素，溶于1l水中，50℃水浴，不斷攪拌，用10％濃度氫氧化鈉溶液調(diào)ph至8.5，加入0.1g甲殼素脫乙酰酶，恒溫反應(yīng)6小時(shí)，得殼聚糖溶液；

2)加31％鹽酸調(diào)ph至5.5，可見大部分殼聚糖沉淀溶于水中，形成高粘度溶液，加入殼聚糖酶0.1g和纖維素酶0.1g，50℃水浴恒溫?cái)嚢?小時(shí)，得殼寡糖溶液；

3)加入10％氫氧化鈉調(diào)ph至8.5，過濾，得到未降解的殼聚糖殘?jiān)鸵呀到獾臍ぞ厶侨芤?，此時(shí)已降解的殼聚糖溶液為淡黃色澄清液體，上述未降解的殼聚糖殘?jiān)M(jìn)行過濾，加入到下一批制備方法步驟2)中，循環(huán)往返，以提高殼寡糖的產(chǎn)率；

4)蒸餾濃縮至已降解的殼聚糖溶液的20％，得濃縮液，加入與所述3倍體積濃縮液的酒精使殼寡糖析出，再用酒精洗滌一次后過濾烘干粉碎，得殼寡糖，密封包裝儲(chǔ)存。

本實(shí)施例的殼寡糖，外觀呈白色粉末，分子量3450，純度＞95％，脫乙酰度90.8％，灰分＜1％，收率84.8％。

實(shí)施例四

1)稱取100g甲殼素，溶于1l水中，50℃水浴，不斷攪拌，用10％濃度氫氧化鈉溶液調(diào)ph至8.5，加入0.1g甲殼素脫乙酰酶，恒溫反應(yīng)6小時(shí)，得殼聚糖溶液；

2)加31％鹽酸調(diào)ph至5.5，可見大部分殼聚糖沉淀溶于水中，形成高粘度溶液，加入殼聚糖酶0.1g和纖維素酶0.1g，50℃水浴恒溫?cái)嚢?小時(shí)，得殼寡糖溶液；

3)加入10％氫氧化鈉調(diào)ph至8.5，過濾，得到未降解的殼聚糖殘?jiān)鸵呀到獾臍ぞ厶侨芤?，此時(shí)已降解的殼聚糖溶液為淡黃色澄清液體，上述未降解的殼聚糖殘?jiān)M(jìn)行過濾，加入到下一批制備方法步驟2)中，循環(huán)往返，以提高殼寡糖的產(chǎn)率；

4)蒸餾濃縮至已降解的殼聚糖溶液的20％，得濃縮液，加入與所述3倍體積濃縮液的酒精使殼寡糖析出，再用酒精洗滌一次后過濾烘干粉碎，得殼寡糖，密封包裝儲(chǔ)存。

本實(shí)施例的殼寡糖，外觀呈淺黃色粉末，分子量3550，純度＞95％，脫乙酰度91.2％，灰分＜1％，收率85.6％。

實(shí)施例5以實(shí)施例1的制備方法為例，分別將甲殼素脫乙酰酶、殼聚糖酶和纖維素酶的選取如表1中的溫度與ph，得出最適溫度與ph。

表1甲殼素脫乙酰酶、殼聚糖酶和纖維素酶的最適溫度與ph

由表1得出：甲殼素脫乙酰酶的最適溫度為50℃，最佳ph為8.5；殼聚糖酶和纖維素酶的最適溫度為50℃，最佳ph為5.5，所得的殼寡糖收率最高，效果最理想。其中，

上述說明示出并描述了本發(fā)明的若干優(yōu)選實(shí)施例，但如前所述，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明并非局限于本文所披露的形式，不應(yīng)看作是對其他實(shí)施例的排除，而可用于各種其他組合、修改和環(huán)境，并能夠在本文所述發(fā)明構(gòu)想范圍內(nèi)，通過上述教導(dǎo)或相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)或知識(shí)進(jìn)行改動(dòng)。而本領(lǐng)域人員所進(jìn)行的改動(dòng)和變化不脫離本發(fā)明的精神和范圍，則都應(yīng)在本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。