本發(fā)明涉及小麥分子育種領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及一種與小麥旗葉長(zhǎng)QTL QFll.sicau-2D緊密連鎖的分子標(biāo)記及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

小麥?zhǔn)鞘澜缰匾Z食作物，我國(guó)是小麥生產(chǎn)與消費(fèi)大國(guó)，小麥在保障國(guó)家糧食安全中占有重要地位，常年種植面積在2666.67萬(wàn)公頃以上，約占糧食作物面積的27％；總產(chǎn)量為1億噸以上，約占糧食作物產(chǎn)量的22％。

旗葉是小麥生長(zhǎng)后期光合效率最高的葉片，是小麥籽粒碳水化合物的重要來(lái)源。研究表明，旗葉對(duì)小麥籽粒產(chǎn)量的貢獻(xiàn)可達(dá)1/3，在籽粒和產(chǎn)量形成中起著重要的作用(左寶玉,段續(xù)川.冬小麥不同層次葉片中葉綠體超微結(jié)構(gòu)及其功能的研究[J].Journal of Integrative Plant Biology,1978(3):29-34+93-95.)。旗葉主要是通過(guò)影響小麥的穗粒數(shù)、單穗粒重和千粒重，從而影響小麥產(chǎn)量。旗葉形態(tài)包括：旗葉長(zhǎng)、旗葉寬、旗葉面積、旗葉周長(zhǎng)、旗葉長(zhǎng)寬比等，對(duì)旗葉形態(tài)性狀相關(guān)基因進(jìn)行定位可為選育高產(chǎn)小麥品種提供理論依據(jù)。

旗葉相關(guān)性狀是數(shù)量性狀(Quantitative trait locus，QTL)，受到多基因的控制，并且受環(huán)境作用影響很大。近年來(lái)，合理的旗葉長(zhǎng)、旗葉寬等逐漸成為研究的熱點(diǎn)。在水稻、玉米、大麥中都有對(duì)旗葉QTL研究的相關(guān)報(bào)道，而小麥旗葉的卻是很少。Jia等在5A染色體的Xbarc303～Xwmc區(qū)段上定位到了控制旗葉寬的QTL：Qflw.nau-5A，可解釋25％的表型變異(Jia H,Wan H,Yang S,et al.Genetic dissection of yield-related traits in a recombinant inbred line population created using a key breeding parent in China’s wheat breeding[J].Theoretical and Applied Genetics,2013,126(8):2123-39.)。Xue等利用綿陽(yáng)99-323和PH691構(gòu)建的NIL對(duì)旗葉寬Qflw.nau-5A進(jìn)行了精細(xì)定位，發(fā)現(xiàn)其位于5AL上與抗赤霉病基因Fhb5緊密連鎖(Xue S,Xu F,Li G,et al.Fine mapping TaFLW1,a major QTL controlling flag leaf width in bread wheat(Triticum aestivum L.).[J].Theoretical and Applied Genetics,2013,126(8):1941-9.)。

小麥材料H461相對(duì)于小麥品種川麥107(國(guó)審品種，簡(jiǎn)稱CM107)具有長(zhǎng)旗葉、寡分蘗、多穗粒數(shù)、多小穗數(shù)、高千粒重和高穗粒重等特性(侯永翠，鄭有良，蒲至恩，魏育明，李偉.穗數(shù)型小麥新品種川農(nóng)16與大穗型寡分蘗品系H461遺傳差異研究初報(bào).四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào).2003,21:94-9)。同時(shí)，小麥品種川麥107的旗葉長(zhǎng)數(shù)顯著低于H461。因此，利用H461和川麥107構(gòu)建遺傳研究群體，進(jìn)一步驗(yàn)證小麥H461的旗葉長(zhǎng)特性，定位控制旗葉長(zhǎng)基因，尋找緊密連鎖的分子標(biāo)記，促進(jìn)旗葉長(zhǎng)基因的圖位克隆，同時(shí)為小麥特異旗葉長(zhǎng)材料的創(chuàng)制及株型育種提供新基因資源，進(jìn)一步利用分子標(biāo)記輔助選擇，將增強(qiáng)旗葉長(zhǎng)測(cè)的準(zhǔn)確性，提高育種效率，加速實(shí)現(xiàn)增加小麥單產(chǎn)的目標(biāo)。

分子標(biāo)記輔助選擇，不依賴于表現(xiàn)型選擇，即不受環(huán)境條件、基因間互作、基因型與環(huán)境互作等多種因素的影響，而是直接對(duì)基因型進(jìn)行選擇，因而能大大提高育種效率。高分辨熔解曲線(High Resolution Melting,HRM)技術(shù)近年來(lái)國(guó)際上興起的一種SNP及突變研究工具。這種檢測(cè)方法具有操作簡(jiǎn)便、特異性好、高通量、快速、檢測(cè)成本低、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)勢(shì)，并且實(shí)現(xiàn)了真正的閉管操作而受到普遍的關(guān)注。因此，篩選出與旗葉長(zhǎng)QTL緊密連鎖的，且適用于熒光定量PCR平臺(tái)HRM技術(shù)的分子標(biāo)記，不僅能對(duì)小麥旗葉基因進(jìn)行選擇，有效調(diào)控小麥旗葉形態(tài)，塑造合理的旗葉形態(tài)群體，同時(shí)提高了選擇通量、速度和準(zhǔn)確性，解決了大規(guī)模推廣應(yīng)用的技術(shù)瓶頸，對(duì)規(guī)?；牧夹←溣N群體質(zhì)量和產(chǎn)量具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種與小麥旗葉長(zhǎng)QTL QFll.sicau-2D緊密連鎖的分子標(biāo)記。

本發(fā)明的另一目的是提供所述分子標(biāo)記在小麥育種中的應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明提供的與小麥旗葉長(zhǎng)QTL QFll.sicau-2D緊密連鎖的分子標(biāo)記，其為分子標(biāo)記HRM6，核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。

分子標(biāo)記HRM6與小麥旗葉長(zhǎng)QTL QFll.sicau-2D之間的遺傳距離為0.01cM，二者共定位于小麥2D染色體上標(biāo)記MK10324和MK2107之間0.71cM區(qū)段內(nèi)(圖1)，小麥旗葉長(zhǎng)QTL QFll.sicau-2D能顯著增加小麥旗葉長(zhǎng)，LOD值大于5.26，解釋約23％的表型變異。

本發(fā)明還提供用于熒光定量PCR擴(kuò)增所述分子標(biāo)記HRM6的引物對(duì)，包括上游引物和下游引物，序列分別如SEQ ID No:2-3所示。

本發(fā)明還提供所述分子標(biāo)記HRM6在小麥育種中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供所述分子標(biāo)記HRM6在篩選或鑒定長(zhǎng)旗葉小麥品種中的應(yīng)用。

包括以下步驟：

1)提取待測(cè)小麥的基因組DNA；

2)以待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，設(shè)計(jì)用于熒光定量PCR擴(kuò)增所述分子標(biāo)記的引物對(duì)(SEQ ID No:2-3)，進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增；

3)分析PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，進(jìn)行基因分型。

其中，步驟2)熒光定量PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系：SsoFast EvaGreen超混合液5μL、上游引物和下游引物各300ng、模板DNA 100ng、Dnaes/RNase-free去離子水加至總量為10μL。

熒光定量PCR擴(kuò)增程序：95℃預(yù)變性5min；94℃變性15s、55℃退火30s，共50個(gè)循環(huán)；熔解曲線范圍為65～95℃，每0.2℃讀一次數(shù)，時(shí)間為10s。

步驟3)利用高分辨熔解曲線進(jìn)行基因分型，含有小麥旗葉長(zhǎng)QTL QFll.sicau-2D的小麥品種均出現(xiàn)與小麥H461相同的熔解曲線，而不含有小麥旗葉長(zhǎng)QTL QFll.sicau-2D的小麥品種均出現(xiàn)與小麥H461明顯不同的熔解曲線。

本發(fā)明還提供所述分子標(biāo)記HRM6在鑒定小麥旗葉長(zhǎng)QTL QFll.sicau-2D中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供SEQ ID No:2-3所示引物對(duì)在小麥分子標(biāo)記輔助育種中的應(yīng)用。

在本發(fā)明中，小麥旗葉長(zhǎng)QTLQFll.sicau-2D及分子標(biāo)記HRM6是通過(guò)以下方法獲得的：

(1)利用長(zhǎng)旗葉小麥H461作為母本，以川麥107為父本雜交，得到雜種F1，F(xiàn)1代單株自交獲得F2，采用單粒傳法獲得含有200個(gè)株系的F8代RIL群體，隨機(jī)選擇165個(gè)株系構(gòu)成遺傳作圖群體。

(2)用CTAB法提取所述的遺傳作圖群體的各株系的DNA，用DArT芯片技術(shù)，以親本H461和川麥107的DNA為模板，進(jìn)行基因分型，獲得所述RIL群體的基因型資料。親本H461的帶型記為A，親本川麥107的帶型記為B。F8群體株系帶型來(lái)源于H461的記為A，來(lái)源于川麥107的記為B，雜合型為H。

(3)小麥抽穗期田間鑒定所述F8群體植株的旗葉長(zhǎng)。

(4)利用JoinMap4.0作圖軟件將獲得的所述RIL群體基因型資料構(gòu)建小麥分子連鎖圖譜，尋找最優(yōu)的標(biāo)記數(shù)和標(biāo)記順序，確定后續(xù)使用的連鎖群。利用軟件MapQTL 6.0的區(qū)間作圖模型(Interval Mapping)和多重QTL作圖模型(Multiple QTL Model)，并結(jié)合F8群體旗葉表型數(shù)據(jù)將旗葉長(zhǎng)QTL QFll.sicau-2D定位于2DL染色體上一個(gè)0.71cM的區(qū)段內(nèi)。

(5)獲取該區(qū)段內(nèi)的DArT探針序列，通過(guò)在IWGSC小麥中國(guó)春的基因組測(cè)序數(shù)據(jù)(ftp://ftpmips.helmholtz-muenchen.de/plants/wheat/IWGSC/)，獲得目標(biāo)區(qū)段更多的序列信息，電子延長(zhǎng)DArT探針序列兩端對(duì)應(yīng)的序列，并進(jìn)行序列分析，初步篩選用于后續(xù)熒光定量PCR引物設(shè)計(jì)的目標(biāo)區(qū)域。

(6)設(shè)計(jì)熒光定量PCR引物，用于后續(xù)篩選。利用Beacon Designer 7.0軟件設(shè)計(jì)熒光定量PCR引物10對(duì)(表1)。熒光定量PCR引物設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)：引物長(zhǎng)度18～25bp，擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度65～100bp，退火溫度60℃，GC含量在40％～60％之間，SNP差異位點(diǎn)產(chǎn)物退火溫度差異大于0.2℃。

表1 10對(duì)HRM引物序列及擴(kuò)增片段長(zhǎng)度

(7)高分辨熔解曲線(HRM)分析

a)親本之間多態(tài)性分子標(biāo)記的篩選：選取上述設(shè)計(jì)的10對(duì)引物，以親本H461和CM107的DNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，共獲得1對(duì)效果良好的熒光定量PCR分子標(biāo)記引物，命名為HRM6-F/R(核苷酸序列如SEQ ID No:2-3所示)。擴(kuò)增產(chǎn)物為具有多態(tài)性的分子標(biāo)記HRM6，核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。

b)F8群體的HRM分析：用上述步驟獲得的具有多態(tài)性的分子標(biāo)記HRM6的PCR引物，擴(kuò)增親本H461、CM107和F8群體植株的DNA，進(jìn)行基因型鑒定，獲得分子標(biāo)記數(shù)據(jù)。親本H461的類型記為A，擴(kuò)增片段大小長(zhǎng)67bp，單堿基差異位點(diǎn)為“C”。親本CM107的類型記為B，擴(kuò)增片段長(zhǎng)67bp，單堿基差異位點(diǎn)為“A”。F8群體株系類型來(lái)源于H461的記為A，來(lái)源于CM107的記為B。

本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明首次公開(kāi)了來(lái)自小麥H461的旗葉長(zhǎng)QTL QFll.sicau-2D，位于小麥2D染色體，顯著增加了小麥旗葉長(zhǎng)。該QTL在小麥產(chǎn)量(調(diào)控旗葉長(zhǎng))育種中具有較高的利用價(jià)值。

本發(fā)明首次公開(kāi)了基于熒光定量PCR平臺(tái)精確檢測(cè)小麥H461新旗葉長(zhǎng)QTL QFll.sicau-2D的分子標(biāo)記HRM6，且為共顯性標(biāo)記，檢測(cè)準(zhǔn)確高效、擴(kuò)增方便穩(wěn)定。

本發(fā)明公開(kāi)的分子標(biāo)記HRM6與旗葉長(zhǎng)QTL QFll.sicau-2D極顯著相關(guān)，呈現(xiàn)共分離標(biāo)記特征，用于分子標(biāo)記輔助選擇的準(zhǔn)確性高，提高適應(yīng)不同環(huán)境的小麥特定分蘗品種的選擇鑒定效率，且成功率高。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明小麥H461旗葉長(zhǎng)QTL QFll.sicau-2D在2D染色體上的位置及與分子標(biāo)記HRM6之間的連鎖遺傳圖譜。

圖2為本發(fā)明實(shí)施例2中利用熒光定量PCR引物對(duì)H461、川麥107三葉期的葉片DNA做基因型分型的結(jié)果。

圖3為本發(fā)明實(shí)施例2中H461×川農(nóng)16的F8RIL群體后代利用熒光定量PCR引物進(jìn)行基因型分型的結(jié)果。

具體實(shí)施方式

以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例均按照常規(guī)實(shí)驗(yàn)條件，如Sambrook等分子克隆實(shí)驗(yàn)手冊(cè)(Sambrook J&Russell DW,Molecular Cloning:a Laboratory Manual,2001)，或按照制造廠商說(shuō)明書(shū)建議的條件。

實(shí)施例1 小麥旗葉長(zhǎng)QTL QFll.sicau-2D的定位及分子標(biāo)記HRM6的獲得

1、利用長(zhǎng)旗葉小麥H461作為母本，以小麥川麥107為父本雜交，得到雜種F1，F(xiàn)1代單株自交獲得F2，采用單粒傳法獲得含有200個(gè)株系的F8代RIL群體，隨機(jī)選擇165個(gè)株系構(gòu)成遺傳作圖群體。

2、用CTAB法提取所述的遺傳作圖群體的各株系的DNA，用DArT芯片技術(shù)，以親本H461和川麥107的DNA為模板，進(jìn)行基因分型，獲得所述RIL群體的基因型資料。親本H461的帶型記為A，親本川麥107的帶型記為B。F8群體株系帶型來(lái)源于H461的記為A，來(lái)源于川麥107的記為B，雜合型為H。

3、小麥抽穗期田間鑒定所述F8群體植株的旗葉長(zhǎng)。

4、利用JoinMap4.0作圖軟件將獲得的所述RIL群體基因型資料構(gòu)建小麥分子連鎖圖譜，尋找最優(yōu)的標(biāo)記數(shù)和標(biāo)記順序，確定后續(xù)使用的連鎖群。利用軟件MapQTL 6.0的區(qū)間作圖模型(Interval Mapping)和多重QTL作圖模型(Multiple QTL Model)，并結(jié)合F8群體旗葉表型數(shù)據(jù)將旗葉長(zhǎng)QTLQFll.sicau-2D定位于2DL染色體上一個(gè)0.71cM的區(qū)段內(nèi)。

5、獲取該區(qū)段內(nèi)的DArT探針序列，通過(guò)在IWGSC小麥中國(guó)春的基因組測(cè)序數(shù)據(jù)，獲得目標(biāo)區(qū)段更多的序列信息，電子延長(zhǎng)DArT探針序列兩端對(duì)應(yīng)的序列，并進(jìn)行序列分析，初步篩選用于后續(xù)熒光定量PCR引物設(shè)計(jì)的目標(biāo)區(qū)域。

6、設(shè)計(jì)熒光定量PCR引物，用于后續(xù)篩選。利用Beacon Designer 7.0軟件設(shè)計(jì)熒光定量PCR引物10對(duì)(表1)。熒光定量PCR引物設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)：引物長(zhǎng)度18～25bp，擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度65～100bp，退火溫度60℃，GC含量在40％～60％之間，SNP差異位點(diǎn)產(chǎn)物退火溫度差異大于0.2℃。

7、高分辨熔解曲線(HRM)分析

(a)親本之間多態(tài)性分子標(biāo)記的篩選：選取上述設(shè)計(jì)的10對(duì)引物，以親本H461和CM107的DNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，共獲得1對(duì)效果良好的熒光定量PCR分子標(biāo)記。

(b)F8群體的HRM分析：以上述步驟獲得的具有多態(tài)性的分子標(biāo)記HRM6，擴(kuò)增親本H461、CM107和F8群體植株的DNA，進(jìn)行基因型鑒定，獲得分子標(biāo)記數(shù)據(jù)。親本H461的類型記為A，擴(kuò)增片段大小長(zhǎng)67bp，單堿基差異位點(diǎn)為“C”。親本CM107的類型記為B，擴(kuò)增片段長(zhǎng)67bp，單堿基差異位點(diǎn)為“A”。F8群體株系類型來(lái)源于H461的記為A，來(lái)源于CM107的記為B。分子標(biāo)記HRM6的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。

(c)利用軟件MapQTL 6.0的區(qū)間作圖模型(Interval Mapping)，并結(jié)合F8群體旗葉長(zhǎng)表型數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)分子標(biāo)記HRM6位于旗葉長(zhǎng)QTL位點(diǎn)QFll.sicau-2D 0.71cM的區(qū)段內(nèi)，結(jié)果如圖1所示，由圖1可知，旗葉長(zhǎng)QTL QFll.sicau-2D定位在標(biāo)記MK10324和MK2107之間的0.71cM的區(qū)段內(nèi)，而分子標(biāo)記HRM6距離DArT標(biāo)記MK10324為0.317cM，QFll.sicau-2D與分子標(biāo)記HRM6距離0.01cM，呈緊密連鎖。

實(shí)施例2 與小麥旗葉長(zhǎng)QTL QFll.sicau-2D緊密連鎖的分子標(biāo)記HRM6的應(yīng)用

1.1 DNA的提取

試驗(yàn)材料選取H461、川農(nóng)16(CN16)及川麥107(CM107)，其中川農(nóng)16、川麥107為短旗葉長(zhǎng)品種，H461為長(zhǎng)旗葉長(zhǎng)品種。采用CTAB法提取小麥樣品三葉期的葉片DNA。

1.2檢測(cè)小麥旗葉長(zhǎng)QTLQFll.sicau-2D的引物的篩選

1.2.1引物設(shè)計(jì)

(1)獲取該區(qū)段內(nèi)的DArT探針序列，通過(guò)在IWGSC小麥中國(guó)春的基因組測(cè)序數(shù)據(jù)，獲得目標(biāo)區(qū)段更多的序列信息，電子延長(zhǎng)DArT探針序列兩端對(duì)應(yīng)的序列，并進(jìn)行序列分析，初步篩選用于后續(xù)熒光定量PCR引物設(shè)計(jì)的目標(biāo)區(qū)域。

(2)設(shè)計(jì)熒光定量PCR引物，用于后續(xù)篩選。設(shè)計(jì)熒光定量PCR引物。熒光定量PCR引物設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)：引物長(zhǎng)度18～25bp，擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度65～100bp，退火溫度60℃，GC含量在40％～60％之間，SNP差異位點(diǎn)產(chǎn)物退火溫度差異大于0.2℃。

1.2.2熒光定量PCR平臺(tái)測(cè)試引物及其親本間的差異性

(1)提取川農(nóng)16、H461、川麥107三葉期的葉片DNA。

(2)以步驟(1)所得的DNA作為模板，HRM6-F(SEQ ID No:2)和HRM6-R(SEQ ID No:3)為引物進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增。

(3)熒光定量PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系：SsoFast EvaGreen超混合液5μL、上下游引物各300ng、模板DNA 100ng、Dnaes/RNase-free去離子水加至總量為10μL。

(4)熒光定量PCR程序：95℃預(yù)變性5min；94℃變性15s、55℃退火30s，共50個(gè)循環(huán)；熔解曲線范圍為65～95℃，每0.2℃讀一次數(shù)，時(shí)間為10s。

(5)將步驟(4)所得結(jié)果文件，導(dǎo)入BioRadPrecisionMelt軟件進(jìn)行基因分型，結(jié)果如圖2所示。在繪制熔解曲線過(guò)程中，根據(jù)堿基對(duì)A＝T，C≡G解鏈的溫度不同，BioRadPrecisionMelt將樣本分為兩種類型。H461為類型A，川農(nóng)16/川麥107為類型B。

1.3群體檢測(cè)過(guò)程中引物序列HRM6-F/R的適用性

(1)以H461為母本，川農(nóng)16為父本雜交得到F1，F(xiàn)1自交獲得F2，通過(guò)單粒傳法加代至F8代RIL驗(yàn)證群體。提取群體中各株系三葉期的葉片DNA。

(2)以步驟(1)所得的DNA作為模板，利用本發(fā)明所提供的引物進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增，熒光染料為SsoFast EvaGreen。

(3)熒光定量PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系：5μL SsoFast EvaGreen超混合液、上下游引物各300ng、100ng模板DNA、Dnaes/RNase-free去離子水加至總量為10μL。

(4)熒光定量PCR程序：95℃預(yù)變性5min；94℃變性15s、55℃退火30s，共50個(gè)循環(huán)；熔解曲線范圍為65～95℃，每0.2℃讀一次數(shù)，時(shí)間為10s。

(5)將步驟(4)所得結(jié)果文件，導(dǎo)入BioRadPrecisionMelt軟件進(jìn)行基因分型，結(jié)果如圖3所示。隨機(jī)抽檢96株株系，56株能擴(kuò)增出與H461相同類型的片段，為含有旗葉長(zhǎng)QTL QFll.sicau-2D的植株，預(yù)測(cè)株系植株在抽穗后旗葉長(zhǎng)較長(zhǎng)。40株能擴(kuò)增出與川農(nóng)16、川麥107相同的B型片段，為不含有旗葉長(zhǎng)QTL QFll.sicau-2D的植株，預(yù)測(cè)這些植株在抽穗后旗葉長(zhǎng)較短。

(6)小麥抽穗期間田間鑒定該96個(gè)F8植株的旗葉長(zhǎng)，結(jié)果見(jiàn)表2，旗葉長(zhǎng)QTL QFll.sicau-2D的分子標(biāo)記HRM6預(yù)測(cè)遺傳群體旗葉長(zhǎng)的結(jié)果。與H461類型相同的植株平均旗葉長(zhǎng)為24.28cm，顯著高于與川農(nóng)16、川麥107類型的植株旗葉長(zhǎng)(平均22.84cm)。實(shí)際結(jié)果與預(yù)期結(jié)果一致，說(shuō)明本發(fā)明的旗葉長(zhǎng)QTL QFll.sicau-2D確實(shí)具有顯著增加旗葉長(zhǎng)的作用，且分子標(biāo)記HRM6可以用于跟蹤鑒定旗葉長(zhǎng)QTL QFll.sicau-2D。

表2

雖然，上文中已經(jīng)用一般性說(shuō)明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。

序列表

<110> 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)

<120> 與小麥旗葉長(zhǎng)QTL QFll.sicau-2D緊密連鎖的分子標(biāo)記及應(yīng)用

<130> KHP171110011.3TQ

<160> 3

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 67

<212> DNA

<213> 小麥

<220>

<221> misc_feature

<222> (27)..(27)

<223> n為c或a

<400> 1

gcttcaacac tttgccgttt catcaangat gcagctcgaa acatataggg gtatgtaagc 60

gtcggat 67

<210> 2

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

gcttcaacac tttgccttt 19

<210> 3

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

atccgacgct tacatacc 18