本發(fā)明屬于禽類遺傳標(biāo)記
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及一種降低肉鴿腹脂率的分子標(biāo)記方法及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：我國是肉鴿養(yǎng)殖大國，全國種鴿存欄約5000萬對，年產(chǎn)乳鴿8億只。我國肉鴿生長以農(nóng)戶小規(guī)模養(yǎng)殖為主，且大多數(shù)實(shí)行自繁自養(yǎng)，因小群體近交和缺乏相關(guān)育種技術(shù)，鴿群生產(chǎn)性能不佳甚至退化。白羽王鴿是從美國引進(jìn)的品種，是我國當(dāng)前肉鴿生產(chǎn)的主要鴿種，然而伴隨著雜交、近交、盲目選種，導(dǎo)致白羽王鴿種源混雜、生產(chǎn)性能良莠不齊。近年來，一些規(guī)模較大的企業(yè)、科研單位著手肉鴿育種工作，但是至今尚未培育成國家級新品種，表明肉鴿育種較雞、豬等其他畜禽滯后。分子標(biāo)記輔助選擇是利用表型數(shù)據(jù)和基因型數(shù)據(jù)來選擇的育種技術(shù)，在豬、牛、雞等畜禽育種中已經(jīng)得到了較廣泛的應(yīng)用，然而在肉鴿育種中尚未多見。家禽的腹脂可食價(jià)值低，減少腹脂沉積可以節(jié)約飼料，因此，降低腹脂率是肉用家禽的育種目標(biāo)之一。本發(fā)明人前期研究發(fā)現(xiàn)，白羽王鴿肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白基因(L-FABP)外顯子1存在T100C突變，且與乳鴿腹脂率顯著相關(guān)，因此可以通過選育提高鴿群L-FABP等位基因T的頻率來降低乳鴿腹脂率，培育更節(jié)糧、更符合人類飲食健康的肉鴿品種。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種降低白羽王鴿乳鴿腹脂率的分子標(biāo)記輔助選擇方法。在常規(guī)選育的基礎(chǔ)上，利用L-FABP基因分子標(biāo)記，開展標(biāo)記輔助選擇，逐代降低白羽王鴿乳鴿腹脂率。其具體技術(shù)方案為：一種降低白羽王鴿乳鴿腹脂率的分子標(biāo)記輔助選擇方法，包括以下步驟：步驟1、育種基礎(chǔ)群建立選擇成年白羽王鴿種鴿作為育種基礎(chǔ)群，即0世代。種鴿采取籠養(yǎng)、鴿編號。步驟2、基礎(chǔ)群繁殖獲得G1代基礎(chǔ)群(0世代)種鴿連續(xù)繁殖，獲得G1代。由種鴿孵化、哺育。步驟3、G1代后備種鴿飼養(yǎng)乳鴿25日齡時(shí)，淘汰明顯體重偏小的個(gè)體，留種的個(gè)體佩戴帶有唯一編號的腳環(huán)作為個(gè)體識別。佩戴腳環(huán)的同時(shí)，翼根靜脈取血0.2ml，抗凝冷凍保存?zhèn)溆?。乳鴿佩戴腳環(huán)后，轉(zhuǎn)入青年鴿舍作為后備種鴿飼養(yǎng)。步驟4、G1代后備種鴿分子標(biāo)記輔助選擇(1)配對前選留羽色、脛色等符合本品種外貌特征、體重中等偏上、體型勻稱的個(gè)體，留種比例約80％。(2)對選留的個(gè)體進(jìn)行肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白基因(L-FABP)外顯子1基因型鑒定①后備鴿基因組DNA提?。翰捎梅?氯仿法提取乳鴿血液中的基因組DNA。②L-FABP基因片段PCR擴(kuò)增：合成PCR引物：上游引物序列為CATCCCCACTGTCATCTCCA、下游引物序列為ACCCCAAACCAACAATTGCA；PCR擴(kuò)增體系為20μL，其中基因組DNA1μL、上下游引物各1μL、2×PremixTaq10μL、ddH2O7μL；PCR程序?yàn)?4℃5min，后接35個(gè)循環(huán)(94℃30s，57℃45s，72℃30s)，后接72℃10min；③L-FABP基因型鑒定：PCR產(chǎn)物進(jìn)行DNA測序，所得測序圖與L-FABP基因外顯子1中T100C位點(diǎn)基因型測序圖比較進(jìn)行基因型鑒定。所有樣本個(gè)體被分為TT型或TC型或CC型。(3)在選留的個(gè)體中，再進(jìn)行基因型的選擇。優(yōu)先選留TT型個(gè)體，其次選留TC型個(gè)體。如果TT型和TC型個(gè)體不足，則由CC型個(gè)體增補(bǔ)。由此步驟，可逐代提高鴿群等位基因T的頻率。步驟5、G1代選留的后備種鴿進(jìn)入繁殖期選種(1)選留的種鴿自由配對，配對成功轉(zhuǎn)入籠養(yǎng)，查看每對種鴿腳環(huán)編號，如果有親緣關(guān)系，則人工調(diào)整配對，保證配對種鴿無親緣關(guān)系，并登記系譜。(2)性能記錄：自種鴿配對后，記錄每對種鴿的產(chǎn)蛋數(shù)、出雛數(shù)、乳鴿成活率、乳鴿25日齡體重。統(tǒng)計(jì)一年的記錄資料，選留繁殖性能較好、乳鴿生長較快的種鴿組建繁育核心群。步驟6、核心群種鴿純繁繼代，獲得G2代。G2代按照步驟3-6執(zhí)行獲得G3代繁，如此循環(huán)，獲得Gn代。隨著世代的增加，種鴿的繁殖性能、乳鴿的生長速度會(huì)保持穩(wěn)定或一定的提升，同時(shí)L-FABP等位基因T的頻率會(huì)逐代提高，乳鴿腹脂率也隨著降低。本發(fā)明所述降低白羽王鴿乳鴿腹脂率的分子標(biāo)記輔助選擇方法在針對乳鴿腹脂率的選擇過程中的應(yīng)用。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：家禽腹脂率性狀屬于破壞性度量性狀，即需要屠宰才能測定，常規(guī)選育方法為：通過屠宰測定，確定腹脂率低的個(gè)體，然后利用同胞選擇。本發(fā)明提供的L-FABP基因分子標(biāo)記與腹脂率有遺傳關(guān)聯(lián)，因此可以通過標(biāo)記輔助選擇來降低腹脂率，避免破壞性度量；另外，利用標(biāo)記輔助選擇可以實(shí)現(xiàn)早期選種，加快育種進(jìn)展。附圖說明圖1是L-FABP基因外顯子1中T100C位點(diǎn)基因型測序圖；圖2是各世代選育技術(shù)流程圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)地說明。一種降低白羽王鴿乳鴿腹脂率的分子標(biāo)記輔助選擇方法，包括以下步驟：步驟1、育種基礎(chǔ)群建立選擇成年白羽王鴿種鴿作為育種基礎(chǔ)群，即0世代。種鴿采取籠養(yǎng)、編號。步驟2、基礎(chǔ)群繁殖獲得G1代基礎(chǔ)群(0世代)種鴿連續(xù)繁殖，獲得1世代。由種鴿孵化和哺育。步驟3、G1代后備種鴿飼養(yǎng)乳鴿25日齡時(shí)，淘汰明顯體重偏小的個(gè)體，留種的個(gè)體佩戴帶有唯一編號的腳環(huán)作為個(gè)體識別。佩戴腳環(huán)的同時(shí)，翼根靜脈取血0.2ml，抗凝冷凍保存?zhèn)溆谩Ｈ轼澟宕髂_環(huán)后，轉(zhuǎn)入青年鴿舍作為后備種鴿飼養(yǎng)。步驟4、G1代后備種鴿分子標(biāo)記輔助選擇(1)配對前，選留羽色、脛色等符合本品種外貌特征、體重中等偏上、體型勻稱的個(gè)體，留種比例約80％。(2)對(1)選留的個(gè)體進(jìn)行肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白基因(L-FABP)外顯子1基因型鑒定①后備種鴿基因組DNA提?。翰捎梅?氯仿法提取乳鴿血液中的基因組DNA。②L-FABP基因片段PCR擴(kuò)增：合成PCR引物：上游引物序列為CATCCCCACTGTCATCTCCA、下游引物序列為ACCCCAAACCAACAATTGCA；PCR擴(kuò)增體系為20μL，其中基因組DNA1μL、上下游引物各1μL、2×PremixTaq10μL、ddH2O7μL；PCR程序?yàn)?4℃5min，后接35個(gè)循環(huán)(94℃30s，57℃45s，72℃30s)，后接72℃10min；③L-FABP基因型鑒定：PCR產(chǎn)物進(jìn)行DNA測序，所得測序圖與L-FABP基因外顯子1中T100C位點(diǎn)基因型測序圖(附圖1)比較進(jìn)行基因型鑒定。所有樣本個(gè)體被分為TT型或TC型或CC型。(3)在(1)選留的個(gè)體中，再進(jìn)行基因型的選擇。優(yōu)先選留TT型個(gè)體，其次選留TC型個(gè)體。如果TT型和TC型個(gè)體不足，則由CC型個(gè)體增補(bǔ)。由此步驟，可逐代提高鴿群等位基因T的頻率。步驟5、G1代選留的后備鴿進(jìn)入繁殖期選種(1)選留的種鴿自由配對，配對成功轉(zhuǎn)入籠養(yǎng)，查看每對種鴿腳環(huán)編號，如果有親緣關(guān)系，則人工調(diào)整配對，保證配對種鴿無親緣關(guān)系，并登記系譜。(2)性能記錄：自種鴿配對后，記錄每對種鴿的產(chǎn)蛋數(shù)、出雛數(shù)、乳鴿成活率、乳鴿25日齡體重。統(tǒng)計(jì)一年的記錄資料，選留繁殖性能較好、乳鴿生長較快的種鴿組建繁育核心群。步驟6、核心群種鴿純繁繼代，獲得G2代。各世代選育技術(shù)流程圖見附圖2。G2代按照步驟3-6執(zhí)行獲得G3代繁，如此循環(huán)，獲得Gn代。隨著世代的增加，種鴿的繁殖性能、乳鴿的生長速度會(huì)保持穩(wěn)定或一定的提升，同時(shí)L-FABP等位基因T的頻率會(huì)逐代提高，乳鴿腹脂率也隨著降低。實(shí)施例步驟1、育種基礎(chǔ)群建立選擇成年白羽王鴿種鴿作為育種基礎(chǔ)群(0世代)，基礎(chǔ)群種鴿規(guī)模1000對以上。種鴿采取籠養(yǎng)并編號。步驟2、基礎(chǔ)群繁殖獲得G1代基礎(chǔ)群種鴿連續(xù)繁殖，獲得G1代。由種鴿孵化和哺育。步驟3、G1代后備種鴿飼養(yǎng)乳鴿25日齡時(shí)，淘汰明顯體重偏小的個(gè)體，留種的個(gè)體佩戴帶有唯一編號的腳環(huán)作為個(gè)體識別。佩戴腳環(huán)的同時(shí)，翼根靜脈取血0.2ml，抗凝冷凍保存?zhèn)溆?。乳鴿佩戴腳環(huán)后，轉(zhuǎn)入青年鴿舍作為后備種鴿飼養(yǎng)。后備種鴿數(shù)量公母總數(shù)5000只以上。步驟4、G1代后備鴿分子標(biāo)記輔助選擇(1)配對前，選留羽色、脛色等符合本品種外貌特征、體重中等偏上、體型勻稱的個(gè)體，留種比例約80％，即至少選留2000只公鴿、2000只母鴿。(2)對(1)選留的個(gè)體進(jìn)行肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白基因(L-FABP)外顯子1中T100C位點(diǎn)基因型鑒定，TT型占17.0％，TC型占42.6％，CC型40.4％。經(jīng)計(jì)算，等位基因T頻率為0.38。抽樣屠宰測定94只，結(jié)果見表1，可見T等位基因純合顯著降低(P<0.05)乳鴿腹脂率。表1：L-FABP基因不同基因型的遺傳效應(yīng)(平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤)TT型TC型CC型腹脂率，％0.7±0.15a1.3±0.14b1.2±0.11b(3)在(1)選留的個(gè)體中，再進(jìn)行基因型的選擇。優(yōu)先選留TT型個(gè)體，其次選留TC型個(gè)體，如數(shù)量不足則以CC型個(gè)體補(bǔ)充。最終選留公鴿1500只、母鴿1500只。由此一代選育，可使鴿群等位基因T的頻率由0.38提升到0.51。步驟5、G1代選留的后備鴿進(jìn)入繁殖期選種(1)選留的種鴿自由配對，配對成功轉(zhuǎn)入籠養(yǎng)，查看每對種鴿腳環(huán)編號，如果有親緣關(guān)系，則人工調(diào)整配對，保證配對種鴿無親緣關(guān)系，并登記系譜。(2)性能記錄：自種鴿配對后，記錄每對種鴿的產(chǎn)蛋數(shù)、出雛數(shù)、乳鴿成活率、乳鴿25日齡體重。統(tǒng)計(jì)一年的記錄資料，選留繁殖性能較好、乳鴿生長較快的種鴿1000對，組建繁育核心群。步驟6、核心群種鴿純繁繼代，獲得G2代G2代按照步驟3-6執(zhí)行獲得G3代繁，如此循環(huán)，獲得Gn代。隨著世代的增加，種鴿的繁殖性能、乳鴿的生長速度會(huì)保持穩(wěn)定或一定的提升，同時(shí)L-FABP等位基因T的頻率會(huì)逐代提高直至純合，乳鴿腹脂率也隨著降低。以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式，本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此，任何熟悉本
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，可顯而易見地得到的技術(shù)方案的簡單變化或等效替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。SEQUENCELISTING<110>安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)<120>一種降低白羽王鴿乳鴿腹脂率的分子標(biāo)記輔助選擇方法<160>2<170>PatentInversion3.3<210>1<211>20<212>DNA<213>人工合成<400>1catccccactgtcatctcca20<210>2<211>20<212>DNA<213>人工合成<400>2accccaaaccaacaattgca20當(dāng)前第1頁1 2 3