本實(shí)用新型涉及微流控液滴數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)領(lǐng)域，特別是涉及一種液滴數(shù)字PCR芯片。此外本實(shí)用新型還涉及一種具有該液滴數(shù)字PCR芯片的檢測系統(tǒng)。

背景技術(shù)：

實(shí)時熒光定量PCR(以下簡稱qPCR或qRT-PCR)技術(shù)是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中以熒光化學(xué)物質(zhì)測每次PCR循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法，其中，通過內(nèi)參或者外參法對待測樣品中的特定DNA序列進(jìn)行定量分析。由于qPCR技術(shù)具有準(zhǔn)確度高，線性范圍寬等優(yōu)勢，因此，已經(jīng)廣泛地用于分子診斷、疾病研究、臨床醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。

通常遵循傳統(tǒng)PCR的擴(kuò)增原理，模板的Ct值和該模板的起始拷貝數(shù)存在線性關(guān)系，所以成為定量檢測溶液中模板的原始拷貝數(shù)的依據(jù)。利用TaqMan探針測定PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光曲線時，需要PCR擴(kuò)增產(chǎn)物達(dá)到10¹¹個拷貝/微升的飽和量，為了使10μl的PCR反應(yīng)體系在30個循環(huán)后達(dá)到這樣的產(chǎn)物濃度，PCR反應(yīng)體系至少需要10³個起始模板量。如果將PCR的體積減少至10納升(nl)，則單個模板就可以在經(jīng)30個PCR循環(huán)后被檢測到。

專利文獻(xiàn)CN103451088A(一種微液滴式PCR芯片及其制作方法)公開一種使用PDMS和玻璃片作為微流控芯片的材料，亦即作為微液滴的產(chǎn)生芯片。其中如此得到的微液滴尺寸具有均勻、界面穩(wěn)定、PCR反應(yīng)效率高等優(yōu)點(diǎn)，但由于使用PDMS作為芯片材料，而PDMS材料的透氣性特別好，透水性也會有，因此在這種芯片上直接進(jìn)行PCR會導(dǎo)致PCR反應(yīng)液蒸發(fā)而造成結(jié)果不準(zhǔn)確。并且該芯片只具有液滴生成功能，而沒有對反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行檢測的功能，所以該芯片的功能并不完整。另外，所述芯片還在3個試劑注入口均設(shè)置了單相液滴成型微結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本實(shí)用新型基于以下原理，利用微液滴技術(shù)可以對納升級別的微小體積液體進(jìn)行操控，具體而言將起始樣本反應(yīng)液分割成皮升至納升級的微液滴，在這樣大小的微液滴中最多只包含一個目的DNA或RNA模板。當(dāng)完 成PCR之后，通過計(jì)算陽性液滴的數(shù)量就可以推導(dǎo)出起始反應(yīng)液中目的DNA或RNA的總模板數(shù)。微液滴芯片基于傳統(tǒng)的單相微流控芯片技術(shù)，但相比于單相微流控系統(tǒng)，由于其水/油兩相分離的特征，其優(yōu)點(diǎn)在于：消耗樣品和試劑量更少、混合速度更快、不易造成交叉污染、易于操控等。

本實(shí)用新型提出一種液滴數(shù)字PCR芯片，具有一個單元或者兩個或多個相同單元，單元包括：油相儲液池、PCR起始反應(yīng)液儲液池和液滴儲存池，連接油相儲液池的流道和連接PCR起始反應(yīng)液儲液池的流道匯合，成為通向液滴儲存池的液滴導(dǎo)流流道，其中液滴儲存池部分地或全部位于油相儲液池和PCR起始反應(yīng)液儲液池的下方，用于收集所生成的液滴并進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。

按照本實(shí)用新型，由油相儲液池流出的油相與由起始反應(yīng)液儲液池流出的起始反應(yīng)液交匯，生成油包水型液滴。所生成的液滴經(jīng)流道匯入液滴儲存池并在此進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。

按照本實(shí)用新型，所述單元可以包括兩個或更多個PCR起始反應(yīng)液儲液池，以容納不同的PCR反應(yīng)物。在這種情況下，來自所有PCR起始反應(yīng)液儲液池的液體首先匯合形成混合物，然后與由油相儲液池流出的油相交匯，生成油包水型液滴。

按照本實(shí)用新型，可以通過在芯片上設(shè)置的單層液滴平鋪腔，將液滴儲存池中經(jīng)過PCR擴(kuò)增反應(yīng)后的液滴引入單層液滴平鋪腔，對位于單層液滴平鋪腔中的液滴進(jìn)行PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測。因此，按照本實(shí)用新型的芯片的每個單元還包括用于檢測PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的單層液滴平鋪腔和廢液儲液池，單層液滴平鋪腔通過流道與液滴儲存池相通，廢液儲液池通過流道與單層液滴平鋪腔和液滴儲存池相通。其中有利地，所述芯片可以具有上中下三層式結(jié)構(gòu)，其中上層結(jié)構(gòu)包括所述油相儲液池、PCR起始反應(yīng)液儲液池、廢液儲液池；中層結(jié)構(gòu)包括所述流道和液滴導(dǎo)流流道以及單層液滴平鋪腔；下層結(jié)構(gòu)包括液滴儲存池。

按照本實(shí)用新型，在另一實(shí)施形式中，位于液滴儲存池中的液滴在經(jīng)過PCR擴(kuò)增反應(yīng)后，也可以使用吸液針，從液滴儲存池中吸出液滴，轉(zhuǎn)移至其他裝置中，對液滴進(jìn)行PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測。因此，在本實(shí)用新型一種有利的實(shí)施形式中，所述芯片可以具有上中下三層式結(jié)構(gòu)，其中上層結(jié)構(gòu)包括所述油相儲液池、PCR起始反應(yīng)液儲液池；中層結(jié)構(gòu)包括所述流道和液滴導(dǎo)流流道；所述液滴儲存池貫穿所述上中下三層，以便插入吸液針。

按照本實(shí)用新型提出的微流控芯片集成了液滴生成和PCR擴(kuò)增的功能以及任選的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物檢測功能，從而可極大的提高利用液滴進(jìn)行低拷 貝基因的數(shù)字PCR檢測。此外，按照本實(shí)用新型提出的芯片無需在各試劑注入口設(shè)置單相液滴成型微結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)更為簡單。

此外有利地，在按照本實(shí)用新型芯片的應(yīng)用中采用具有缺口、例如米字或十字缺口的硅膠塞對所述各儲液池進(jìn)行密封。通過采用具有米字或十字缺口的硅膠塞進(jìn)行密封，從而有效避免交叉污染。

此外有利地，當(dāng)按照本實(shí)用新型的芯片包括單層液滴平鋪腔時，在用于引導(dǎo)液滴進(jìn)入液滴儲存池的流道中的出口部分設(shè)有向下引流通道，以便這樣生成的液滴流體直接匯入所述液滴儲存池。通過這樣的設(shè)計(jì)，可以有效避免微腔道的虹吸現(xiàn)象產(chǎn)生，從而可以防止液滴直接流入單層液滴平鋪腔。

在一種實(shí)施形式中，所述油相儲液池、PCR起始反應(yīng)液儲液池、單層液滴平鋪腔、廢液儲液池和所述的流道形成上半芯片，所述液滴儲存池形成下半芯片，所述上半芯片和下半芯片封接為一個整體。在另一實(shí)施形式中，所述油相儲液池、PCR起始反應(yīng)液儲液池、所述流道和所述液滴儲存池的上部分形成上半芯片，所述液滴儲存池下部分形成下半芯片，所述上半芯片和下半芯片封接為一個整體。

有利地，所述上半芯片和下半芯片經(jīng)熱壓鍵合封接為一個整體。

此外，按照本實(shí)用新型的芯片可以由具有良好光學(xué)性和能耐受PCR反應(yīng)溫度的材料制成。作為實(shí)例，所述材料可以為聚碳酸酯(PC)塑料或環(huán)烯烴共聚物(COC)材料。

當(dāng)按照本實(shí)用新型的芯片由聚碳酸酯(PC)塑料或環(huán)烯烴共聚物(COC)材料制成時，可采用熱壓鍵合實(shí)現(xiàn)芯片的封接，從而在PCR整個過程中都處于完全封閉的環(huán)境中，因此這樣可以有效的避免PCR過程產(chǎn)生DNA氣溶膠的問題，為實(shí)際的應(yīng)用提供有效的解決方案。

此外有利地，按照本實(shí)用新型的芯片由聚碳酸酯(PC)塑料或環(huán)烯烴共聚物(COC)材料注塑成型。由于按照本實(shí)用新型的芯片是采用注塑成型并且在應(yīng)用中一般是一次性使用的，因此按照本實(shí)用新型的芯片相比于采用PDMS材料的芯片是在成本上是非常有利的。此外由于采用耐高溫材質(zhì)PC或COC制作芯片，那么無需取出所生成的液滴，通過薄壁的錐形孔(液滴儲存池)就可以直接進(jìn)行PCR溫控反應(yīng)(升溫和降溫)。

作為一個實(shí)例，按照本實(shí)用新型的芯片中的所述油相儲液池的內(nèi)腔具有0.5cm的直徑、0.8cm的深度以及1.2mm的壁厚；所述PCR起始反應(yīng)液儲液池的內(nèi)腔具有0.6cm的直徑、0.8cm的深度、1.2mm的壁厚；所述流道具有200μm的寬度、50μm的深度；所述單層液滴平鋪腔具有0.9cm的寬 度、150μm的深度；所述液滴儲存池的形狀為錐形，其具有0.6cm的上圈直徑、0.3cm的下圈直徑、18度的錐度、1cm的內(nèi)部深度以及0.5mm的壁厚。

此外，本實(shí)用新型提出一種使用按照本實(shí)用新型的芯片的相應(yīng)檢測方法，包括以下步驟：

將油相和PCR起始反應(yīng)液分別添加到油相儲液池和PCR起始反應(yīng)液儲液池中并且施加具有預(yù)留通氣孔的硅膠帽；

分別在所述油相儲液池和PCR起始反應(yīng)液儲液池施加氣壓并持續(xù)特定時間，以便使分別來自油相儲液池和PCR起始反應(yīng)液儲液池的液體匯合而生成大量大小均勻的小液滴；和

當(dāng)所述生成的液滴都匯入所述液滴儲存池后進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)；和

當(dāng)PCR擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，讀取PCR反應(yīng)結(jié)果。

有利地，該方法還可以包括以下步驟：

當(dāng)PCR擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，經(jīng)所述油相儲液池和/或PCR起始反應(yīng)液儲液池給所述液滴儲存池注入比重大于液滴比重的重油，使得所述液滴能流入所述單層液滴平鋪腔；

對位于單層液滴平鋪腔中的液滴，讀取PCR反應(yīng)結(jié)果。

其中，利用按照本實(shí)用新型的芯片采用油相抬升的方法在實(shí)現(xiàn)PCR反應(yīng)后驅(qū)動液滴流入單層平鋪腔內(nèi)。由于所述油的比重大于液滴的比重，注入液滴儲存池的油位于液滴之下，從而使液滴儲存池的液面抬高，使液滴能從出口流出，平鋪成單層的液滴，方便對PCR結(jié)果的記錄。

在此優(yōu)選地，對位于單層液滴平鋪腔中的液滴，使用帶有特定濾鏡的熒光顯微鏡讀取PCR反應(yīng)結(jié)果。

有利地，在按照本實(shí)用新型提出的方法中，在PCR擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后經(jīng)油相儲液池給液滴儲存池注入油的步驟中使用100mbars氣壓并持續(xù)5分鐘，從而液滴儲存池的液面持續(xù)抬高，以至于實(shí)現(xiàn)液滴能從出口流入單層液滴平鋪腔中。

在另一有利實(shí)施形式中，該方法還可以包括以下步驟：當(dāng)PCR擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，通過吸液針把經(jīng)反應(yīng)后的液滴從所述液滴儲存池吸到透明檢測裝置中；對位于所述透明檢測裝置中的液滴，讀取PCR反應(yīng)結(jié)果。

其中優(yōu)選地，使用PMT光電倍增管模塊讀取PCR反應(yīng)結(jié)果。

此外，本實(shí)用新型還提出一種檢測系統(tǒng)，包括：

按照本實(shí)用新型的PCR芯片；

用于PCR擴(kuò)增反應(yīng)的循環(huán)加熱裝置；和

PCR結(jié)果讀取裝置。

在一個實(shí)施形式中，PCR結(jié)果讀取裝置可以包括：

激發(fā)光源，其位于在芯片區(qū)域正上方并且具有45°入射方向；

可變焦鏡頭和CCD相機(jī)，它們位于在所述芯片區(qū)域正上方；

帶通熒光濾光片，其位于在所述可變焦鏡頭與CCD相機(jī)之間。

有利地，激發(fā)光源包括發(fā)光二極管(LED)和15°透鏡以及帶通激發(fā)光濾光片，其中帶通激發(fā)光濾光片具有473nm的中心波長和10nm的帶寬。其中，15°透鏡和帶通激發(fā)光濾光片分別用于發(fā)光二極管發(fā)出的光的聚焦和過濾，而45°斜射角度可以確保在芯片的單層液滴平鋪區(qū)域上的均勻照射，從而可有效降低激發(fā)光散射背景，提高熒光檢測的靈敏度。

有利地，帶通熒光濾光片具有535nm的中心波長和40nm的帶寬。具體地，在應(yīng)用中在芯片上液滴內(nèi)部的熒光被激發(fā)并被上方的可變焦鏡頭收集，經(jīng)該帶通熒光濾光片過濾后進(jìn)入CCD相機(jī)采集熒光圖片，從而實(shí)現(xiàn)PCR結(jié)果的獲取。

在另一有利實(shí)施形式中，PCR結(jié)果讀取裝置可以包括：吸液針和PMT光電倍增管模塊。

有利地，吸液針一端插入到液滴儲存池中，另一端具有透明檢測裝置。

附圖說明

為了更清楚地說明本實(shí)用新型實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅描述本實(shí)用新型的一部分實(shí)施例。這些附圖對于本實(shí)用新型來說并不是限制性的，而是起示例性的作用。其中：

圖1示意地示出按照本實(shí)用新型的液滴數(shù)字PCR芯片的正面和對應(yīng)截面圖；

圖2示意地示出按照本實(shí)用新型的相應(yīng)檢測方法200流程圖。

圖3示意地示出按照本實(shí)用新型的另一種液滴PCR芯片的正面和對應(yīng)截面圖。

具體實(shí)施方式

圖1示意地示出按照本實(shí)用新型的液滴數(shù)字PCR芯片的正面和對應(yīng)截面圖。在圖1的上部分是芯片的正面圖，下部分是相應(yīng)的截面圖。

如圖1上部分的芯片正面圖所示，該芯片作為一種液滴PCR芯片具有上下兩個相同單元，每個單元包括：油相儲液池1、流道2、PCR起始反應(yīng)液儲液池3、液滴導(dǎo)流流道4、液滴儲存池5、單層液滴平鋪腔6、支撐線7 以及廢液儲液池8。此外，在應(yīng)用時還包括施加在各儲液池上用于密封的硅膠塞9。其中，PCR起始反應(yīng)液儲液池3、廢液儲液池8、流道2和4、單層液滴平鋪腔6形成上半芯片，而液滴儲存池5形成下半芯片，上半芯片和下半芯片均由PC塑料經(jīng)注塑并且經(jīng)熱壓鍵合封接為一個整體。

從圖1中下部分的截面圖來看，該芯片具有上中下三層結(jié)構(gòu)。上層結(jié)構(gòu)包括油相儲液池1、PCR起始反應(yīng)液儲液池3、廢液儲液池8。中層結(jié)構(gòu)包括各儲液池相連的流道例如流道2和液滴導(dǎo)流流道4以及單層液滴平鋪腔6。下層結(jié)構(gòu)只包括液滴儲存池5。

其中，油相儲液池1的內(nèi)腔具有0.5cm的直徑、0.8cm的深度以及1.2mm的壁厚；PCR起始反應(yīng)液儲液池3的內(nèi)腔具有0.6cm的直徑、0.8cm的深度、1.2mm的壁厚；流道2、4具有200μm的寬度、50μm的深度；單層液滴平鋪腔6具有0.9cm的寬度、150μm的深度；液滴儲存池5的形狀為錐形，其具有0.6cm的上圈直徑、0.3cm的下圈直徑、18度的錐度、1cm的內(nèi)部深度以及0.5mm的壁厚。

從功能上來講，油相儲液池1和PCR起始反應(yīng)液儲液池3用于將起始反應(yīng)液分割成體積在0.5-1納升的液滴反應(yīng)液，即來自油相儲液池1的油相和PCR起始反應(yīng)液儲液池3的起始反應(yīng)液匯合，生成0.5-1納升的油包水型液滴反應(yīng)液；液滴存儲池5用于收集液滴并進(jìn)行PCR；當(dāng)PCR完成后，單層液滴平鋪腔6用于接收從液滴存儲池5導(dǎo)入的液滴，以便隨后實(shí)現(xiàn)采用適合的方式讀取相關(guān)PCR結(jié)果，例如利用特定濾鏡的熒光顯微鏡。

特別地，由于液滴導(dǎo)流流道4專門用于引導(dǎo)液滴匯入液滴儲存池5，在此可設(shè)有向下引流通道，以便這樣生成的液滴流體直接匯入所述液滴儲存池。該設(shè)計(jì)的目的在于，有效防止在狹小的流道腔內(nèi)比較顯著的液體虹吸作用。

圖2示意地示出按照本實(shí)用新型的相應(yīng)檢測方法200的流程圖。方法200包括以下步驟：

將油相和PCR起始反應(yīng)液分別添加到油相儲液池和PCR起始反應(yīng)液儲液池中并且施加具有預(yù)留通氣孔的硅膠帽201；

分別在所述油相儲液池和PCR起始反應(yīng)液儲液池施加氣壓并持續(xù)特定時間，以便使分別來自油相儲液池和PCR起始反應(yīng)液儲液池的液體匯合而生成大量大小均勻的小液滴202；和

當(dāng)所述生成的液滴都匯入所述液滴儲存池后進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)203；和

當(dāng)PCR擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，讀取PCR反應(yīng)結(jié)果205。

其中有利地，該方法還可以包括以下步驟：當(dāng)PCR擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，經(jīng)所述油相儲液池和/或PCR起始反應(yīng)液儲液池給所述液滴儲存池注入比重重于液滴的重油，使得所述液滴能流入所述單層液滴平鋪腔204；

隨后對位于單層液滴平鋪腔中的液滴，讀取PCR反應(yīng)結(jié)果205。

其中，利用按照本實(shí)用新型的芯片采用油相抬升的方法在實(shí)現(xiàn)PCR反應(yīng)后驅(qū)動液滴流入單層平鋪腔內(nèi)。由于所述油的比重大于液滴的比重，注入液滴儲存池的油位于液滴之下，從而使液滴儲存池的液面抬高，使液滴能從出口流出，平鋪成單層的液滴，方便對PCR結(jié)果的記錄。

在方法200中一次性地使用上述按照本實(shí)用新型提出的具有如圖1所述結(jié)構(gòu)的芯片，按照本實(shí)用新型的芯片由聚碳酸酯(PC)塑料或環(huán)烯烴共聚物(COC)材料注塑成型，因此相比于采用PDMS材料的芯片是在成本上是非常有利的。

具體而言，在步驟201中，在油相儲液池1中添加50μl油作為油相，添加25μl PCR起始反應(yīng)液在儲存池3中。完成添加之后，在兩個儲液池上分別施加如圖1所示的專用單向進(jìn)氣硅膠帽9；

隨后，在步驟202中，分別給油相儲液池2和PCR起始反應(yīng)液儲液池3施加100mbars和125mbars的氣壓，這樣在油相和PCR反應(yīng)液的交匯處會形成大約20000-30000個大小均勻的微液滴，這些形成的微液滴經(jīng)液滴導(dǎo)流流道4匯聚到液滴儲存池5里面。為了更好地收集所形成的液滴，在液滴流出口設(shè)計(jì)了一個向下引流的流道，這樣生成液滴后流體會隨著流道直接匯入液滴儲存池。液滴生成的時間大約需要10分鐘。

當(dāng)液滴生成完畢、生成的液滴全部都匯入液滴儲液池5中之后，在步驟203中進(jìn)行PCR。例如，可以根據(jù)用戶具體設(shè)置好的PCR反應(yīng)程序進(jìn)行PCR反應(yīng)。

當(dāng)PCR結(jié)束后，進(jìn)入步驟204，其中在油相儲存池1中注入50-80μl油，所述油的比重大于液滴，而且所述油與液滴這兩相是互不相容的，隨后給油相儲存池1施加100mbars的氣壓約5分鐘，任選同時給PCR反應(yīng)液儲存池3上施加20mbars的氣壓。由此，添加的油流入液滴儲存池5中位于底部從而抬高液面，使得上層的液滴可以流入單層液滴平鋪腔6內(nèi)。由于在芯片的生產(chǎn)過程中平鋪腔高度為150μm，而該芯片在上述氣壓的控制下形成的液滴直徑在100-150μm之間，因此，平鋪腔中的液滴只會慢慢流入形成單層的液滴面。

隨后，在步驟205中，使用特定檢測系統(tǒng)進(jìn)行熒光成像，再通過相關(guān)的軟件對檢測結(jié)果的進(jìn)行分析，最后可以計(jì)算出PCR起始反應(yīng)液中總的DNA模板數(shù)。

其中該特定檢測系統(tǒng)可以設(shè)計(jì)如下：除了按照本實(shí)用新型提出的PCR芯片之外，該檢測系統(tǒng)還可以包括：用于PCR的循環(huán)加熱裝置；激光光源，其位于在芯片區(qū)域正上方并且具有45°入射方向；可變焦鏡頭和CCD相機(jī)，它們位于在所述芯片區(qū)域正上方；帶通熒光濾光片，其位于在所述可變焦鏡頭與CCD相機(jī)之間。

在該例子中，激發(fā)光源包括發(fā)光二極管(LED)和15°透鏡以及帶通激發(fā)光濾光片，其中所述帶通激發(fā)光濾光片具有473nm的中心波長和10nm的帶寬。此外，所述帶通熒光濾光片具有535nm的中心波長和40nm的帶寬。

在按照本實(shí)用新型的方法的具體應(yīng)用中，在PCR反應(yīng)結(jié)束之后，系統(tǒng)中的發(fā)光二極管經(jīng)由15°透鏡以及帶通激發(fā)光濾光片，從芯片上方45°均勻斜射在芯片的單層液滴平鋪區(qū)域6。15°透鏡和帶通激發(fā)光濾光片分別用于聚焦和過濾。在此，45°的斜射光路可有效降低激發(fā)光散射背景，從而提高熒光檢測的靈敏度。由此激發(fā)液滴內(nèi)部的熒光之后，上方的可變焦鏡頭可進(jìn)行收集，并經(jīng)帶通熒光濾光片過濾后進(jìn)入CCD相機(jī)，通過CCD相機(jī)采集熒光圖片從而獲取PCR反應(yīng)結(jié)果。

圖1所示的芯片集成了液滴生成、PCR擴(kuò)增和PCR擴(kuò)增產(chǎn)物檢測。按照本實(shí)用新型提出的芯片也可以僅集成液滴生成和PCR擴(kuò)增的功能，如圖3所示。

圖3示意地示出按照本實(shí)用新型的另一種液滴數(shù)字PCR芯片的正面和對應(yīng)截面圖。在圖3的上部分是芯片的正面圖，下部分是相應(yīng)的截面圖。其中1為油相儲存池，2為流道，3為PCR起始反應(yīng)液儲存池，4為液滴導(dǎo)流流道，5為液滴儲存池，9為硅膠塞，10為PMT光電倍增管，11為吸液針，12為透明檢測裝置。

如圖3所示，除了液滴儲存池5含有上下兩個部分之外，芯片中的油相儲液池1、PCR起始反應(yīng)液儲液池3、流道2和液滴導(dǎo)流流道4以及液滴儲存池5的設(shè)置與圖1中相應(yīng)結(jié)構(gòu)的設(shè)置相似。當(dāng)使用如圖3所示的芯片時，在按照上文關(guān)于圖1所示芯片所述的方法形成油包水型液滴并完成PCR擴(kuò)增之后，可以使用吸液針11從液滴存儲池5中吸取液滴到透明檢測裝置12中，隨后采用適合的方式(例如利用光電倍增管PMT)讀取相關(guān)PCR結(jié)果。因此，如圖3所示的芯片無需包括單層液滴平鋪腔和廢液儲液池。

對所提出的實(shí)施例的上述說明，使本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員能夠?qū)崿F(xiàn)或使用本實(shí)用新型。本實(shí)用新型并不限于以列舉的具體實(shí)施方式。例如，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員根據(jù)本實(shí)用新型的原理，根據(jù)想要獲得的油包水液滴的體積，可以對各項(xiàng)參數(shù)(例如各儲液池、流道單層液滴平鋪腔和流道的尺寸、所施加的氣壓等)做出相應(yīng)地調(diào)整。

應(yīng)當(dāng)理解，以上實(shí)施例中所公開的特征，除了有特別說明的情形外，都可以單獨(dú)地或者相結(jié)合地使用。對這些實(shí)施例的多種修改對本領(lǐng)域的專業(yè)技術(shù)人員來說將是顯而易見的，本文中所定義的一般原理可以在不脫離本實(shí)用新型的精神或范圍的情況下，在其它實(shí)施例中實(shí)現(xiàn)。因此，本文所公開的本實(shí)用新型并不局限于所公開的具體實(shí)施例，而是意在涵蓋如所附權(quán)利要求書所限定的本實(shí)用新型的精神和范圍之內(nèi)的修改。