本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，更具體地說，涉及一種用作尿酸轉(zhuǎn)運蛋白1抑制劑的2-[5-溴-4-(4-氟代環(huán)丙基萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸化合物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
尿酸是人類嘌呤代謝的終末產(chǎn)物，由次黃嘌呤和黃嘌呤在黃嘌呤氧化酶(xo)的作用下生成。在絕大多數(shù)哺乳動物體內(nèi)，尿酸可再經(jīng)尿酸氧化酶氧化成水溶性的尿囊素排出體外。而在人體，由于尿酸氧化酶的基因沉默，使尿酸不能再氧化生成尿囊素，導致血尿酸升高而極易形成高尿酸癥。
高尿酸血癥是常見的代謝綜合征，在西方國家高尿酸血癥的患病率為15％-20％，據(jù)估計，目前我國約有高尿酸血癥患者1.2億[中華醫(yī)學會內(nèi)分泌學分會.高尿酸血癥和痛風治療的中國專家共識[j].中華內(nèi)分泌代謝雜志，2013，29(11)：913-920.]。近年的研究表明，高尿酸血癥不僅是痛風的重要生化基礎(chǔ)，而且與高血壓、高脂血癥、動脈粥樣硬化、肥胖、胰島素抵抗的發(fā)生密切相關(guān)，已成為威脅人類健康的嚴重代謝性疾病。目前治療高尿酸血癥的藥物非常有限，在臨床上主要依賴于xo抑制劑別嘌醇和促尿酸排泄藥丙磺舒、苯溴馬隆等，這些藥物多為20世紀50年代研制的產(chǎn)品，其在體內(nèi)對靶點的選擇性差且毒副作用大，使得患者常常不能耐受，在一定程度上限制了其使用。因此，尋找新型高效低毒的抗高尿酸血癥藥物依然是目前藥學研究的一個熱點。
由于生理情況下尿酸以有機陰離子的形式存在，不能自由通過細胞膜，因而腎小管對尿酸的排泄依賴于位于近曲腎小管各種轉(zhuǎn)運蛋白。隨著對生理學和遺傳學研究的深入，已發(fā)現(xiàn)大量尿酸轉(zhuǎn)運蛋白負責尿酸在近端腎小管的重吸收及分泌，其中最重要的是尿酸轉(zhuǎn)運蛋白1(urat1)。在2002年日本學者enomoto等首次發(fā)現(xiàn)了在腎皮質(zhì)近曲小哲上皮細胞哲腔膜側(cè)大量表達尿酸鹽陰離子轉(zhuǎn)運體1，并檢測到該蛋白在近曲小哲內(nèi)重吸收尿酸的量高達50％左右[enomotoa，kimurah，chairoungduaa，etal.molecularidentificationofarenalurateanionexchangerthatregulatesblooduratelevels[j].nature，2002，417(6887)：447-452.]。urat1主要介導尿酸的重吸收，通過與多種單價的有機陰離子和少數(shù)無機陰離子交換完成對尿酸的重吸收，不受膜電壓和細胞內(nèi)外ph值的影響，是一個電中性的尿酸鹽交換子。因此抑制urat1可促進尿酸排泄，從而降低血尿酸濃度，與其他轉(zhuǎn)運體相比，urat1還表現(xiàn)出對底物選擇的特異性，故目前urat1是促尿酸排泄藥物的關(guān)鍵研究靶點。雖然苯溴馬隆、丙磺舒等促尿酸排泄藥對urat1具有抑制作用，但是其均為非選擇性抑制劑，在體內(nèi)作用于多個靶點，導致了藥物副作用大。因此，選擇性的urat1抑制劑為治療高尿酸血癥的發(fā)展方向。
wo2006057460、wo2009134995、wo2009145456、wo2011159839、wo2012102405、wo2014170792、wo2014183555、wo2009070740等公開了多種urat1抑制劑的結(jié)構(gòu)。其中，曾進入臨床的只有l(wèi)esinuradsodium、urc-102以及jtt-552。目前，jtt-552由于藥效學原因在臨床ii期中終止了；urc-102正處于臨床ii期；進展最快的為lesinuradsodium，現(xiàn)處于臨床iii期，其結(jié)構(gòu)如下：
我們對lesinuradsodium進行了深入的研究，意外的發(fā)現(xiàn)：在環(huán)丙基上引入氟原子，可以增強其藥理活性。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于，針對現(xiàn)有技術(shù)的lesinuradsodium的結(jié)構(gòu)進行了研究，提供一種用作尿酸轉(zhuǎn)運蛋白1抑制劑的2-[5-溴-4-(4-氟代環(huán)丙基萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸化合物及其應(yīng)用。
本發(fā)明中，“藥學上可接受的鹽”，指的是與常用堿所形成的鹽，如堿金屬鹽(例如鈉鹽或鉀鹽)，堿土金屬鹽(例如鈣鹽或鎂鹽)或由氨或有機胺如二乙胺、三乙胺、乙基二異丙基胺、普魯卡因、二芐基胺、n-甲基嗎啉、二松香胺或甲基哌啶衍生物的銨鹽。
本發(fā)明中，“光學異構(gòu)體”，指的是分子結(jié)構(gòu)完全相同，物理化學性質(zhì)相近，但旋光性不同的物質(zhì)，包括手性分子和、內(nèi)消旋體和外消旋體。
本發(fā)明中，“前藥”指本發(fā)明上述結(jié)構(gòu)的化合物，其本身可以是生物活性的或無活性的，但可以被轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的生物活性形式(例如代謝等)。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：提供一種具有式(i)結(jié)構(gòu)的2-[5-溴-4-(4-氟代環(huán)丙基萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸化合物及其藥學上可接受的鹽、光學異構(gòu)體或前藥；
其中，r1、r2、r3、r4分別獨自代表h或f，且r1、r2、r3、r4不全為h。
本發(fā)明所述的2-[5-溴-4-(4-氟代環(huán)丙基萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸化合物及其藥學上可接受的鹽、光學異構(gòu)體或前藥，具有以下式(ii)結(jié)構(gòu)：
本發(fā)明所述的2-[5-溴-4-(4-氟代環(huán)丙基萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸化合物及其藥學上可接受的鹽、光學異構(gòu)體或前藥，具有以下式(iii)結(jié)構(gòu)：
本發(fā)明還提供一種如上所述的2-[5-溴-4-(4-氟代環(huán)丙基萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸化合物及其藥學上可接受的鹽、光學異構(gòu)體或前藥在制備預防或治療痛風、糖尿病、高血壓、高血脂等高尿酸血癥的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供一種藥物組合物，包括如上所述的2-[5-溴-4-(4-氟代環(huán)丙基萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸化合物及其藥學上可接受的鹽、光學異構(gòu)體或前藥的藥物組合物以及藥學上可接受的輔料。
本發(fā)明在合成2-[5-溴-4-(4-氟代環(huán)丙基萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸化合物及其藥學上可接受的鹽、光學異構(gòu)體或前藥主要采用兩種方法，以下是本發(fā)明所采用的方法。
方法一：
制備所述的2-[5-溴-4-(4-氟代環(huán)丙基萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸化合物及其藥學上可接受的鹽、光學異構(gòu)體或前藥，其具體的合成路線如下：
具體包括以下步驟：以1-乙烯萘酯(化合物1)為原料，與二溴二氟甲烷或三氟甲基三甲基硅烷反應(yīng)成1-(2，2-二氟環(huán)丙基)萘(化合物2)，與硝酸發(fā)生硝化反應(yīng)得1-(2，2-二氟環(huán)丙基)-4硝基萘(化合物3)，在鈀碳氫氣的條件下還原為1-(2，2-二氟環(huán)丙基)-4-氨基萘(化合物4)，與硫光氣反應(yīng)生成1-(2，2-二氟環(huán)丙基)-4-異硫氰基萘(化合物5)，與氨基胍鹽酸鹽反應(yīng)再在堿性條件下環(huán)合得3-氨基-4-(4-(2，2-二氟環(huán)丙基)萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-5-硫醇(化合物6)，于氯乙酸甲酯反應(yīng)，生成2-(5-氨基-4(4-(2，2-二氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h1，2，4-三唑-3-基硫基)乙酸甲酯(化合物7)，在二氯乙酸存在下與亞硝酸鈉反應(yīng)生成2-(5-羥基-4(4-(2，2-二氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h1，2，4-三唑-3-基硫基)乙酸甲酯(化合物8)，經(jīng)三溴化磷溴代生成2-(5-溴-4(4-(2，2-二氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h1，2，4-三唑-3-基硫基)乙酸甲酯(化合物9)，在堿性條件下水解生成目標產(chǎn)品2-[5-溴-4-(4-(2，2-二氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸化合物(化合物10，即式(iii))。
方法二：
制備所述的2-[5-溴-4-(4-氟代環(huán)丙基萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸化合物及其藥學上可接受的鹽、光學異構(gòu)體或前藥，其具體的合成路線如下：
具體包括以下步驟：以1-乙烯萘酯(化合物1)為原料，與二溴氟甲烷反應(yīng)生成1-(2-溴-2-氟環(huán)丙基)萘(化合物11)，在乙醇金屬鈉的條件下發(fā)生消除反應(yīng)得1-(2-氟環(huán)丙基)萘(化合物12)，與硝酸發(fā)生硝化反應(yīng)得1-(2-氟環(huán)丙基)-4硝基萘(化合物13)，在鈀碳氫氣的條件下還原為1-(2-氟環(huán)丙基)-4-氨基萘(化合物14)，與硫光氣反應(yīng)生成1-(2-氟環(huán)丙基)-4-異硫氰基萘(化合物15)，與氨基胍鹽酸鹽反應(yīng)再在堿性條件下環(huán)合得3-氨基-4-(4-(2-氟環(huán)丙基)萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-5-硫醇(化合物16)，于氯乙酸甲酯反應(yīng)，生成2-(5-氨基-4(4-(2-氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h1，2，4-三唑-3-基硫基)乙酸甲酯(化合物17)，在二氯乙酸存在下與亞硝酸鈉反應(yīng)生成2-(5-羥基-4(4-(2-氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h1，2，4-三唑-3-基硫基)乙酸甲酯(化合物18)，經(jīng)三溴化磷溴代生成2-(5-溴-4(4-(2-氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h1，2，4-三唑-3-基硫基)乙酸甲酯(化合物19)，在堿性條件下水解生成目標產(chǎn)品2-[5-溴-4-(4-(2-氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸(化合物20，即式(ii))。
實施本發(fā)明的2-[5-溴-4-(4-氟代環(huán)丙基萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸化合物，具有以下有益效果：
過深入研究，本發(fā)明意外的發(fā)現(xiàn)：在lesinuradsodium的環(huán)丙基上引入f原子，其對尿酸轉(zhuǎn)運蛋白1的抑制活性大大增強，并沒有表現(xiàn)出嚴重副作用，因此特別適合用于制備預防或治療高尿酸血癥的藥物。高尿酸血癥，在本發(fā)明指的是在正常嘌呤飲食狀態(tài)下，非同日兩次空腹血尿酸水平男性高于420μmol/l，女性高于360μmol/l，包括原發(fā)性的高尿酸血癥和由于糖尿病、高血壓、高血脂等引起的繼發(fā)性高尿酸血癥。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步闡述，但這些實例不是對本發(fā)明保護范圍的限制。
所有實施例中，1hnmr由varianinova-300型核磁共振儀測定，以tms為內(nèi)標質(zhì)譜用msq型質(zhì)譜儀測定，柱層析所用硅膠為青島海洋化工廠生產(chǎn)(柱層析h型)。
實施例11-(2，2-二氟環(huán)丙基)萘(化合物2)的合成
將1.54g(10mmol)1-乙烯萘酯(化合物1)溶于22ml50％的氫氧化鈉水溶液，冰浴下緩慢加入緩慢滴入至含2.53g(13.2mmol)溴二氟甲烷和0.1g(0.04mmol)芐基三乙基氯化銨的20ml二氯甲烷中。滴加完畢后，升溫至室溫。室溫攪拌72小時。反應(yīng)結(jié)束后加入20g冰淬滅反應(yīng)。分離有機相，水相用二氯甲烷萃取三次，無水硫酸鎂干燥。柱層析分離，得無色油狀物1.10g，產(chǎn)率54％。
esi/ms[m+h]：205.
實施例21-(2，2-二氟環(huán)丙基)-4硝基萘(化合物3)的合成
將2.04g(10mmol)化合物2置于反應(yīng)瓶中，冰浴攪拌10分鐘。冰浴下將10ml亞硝酸鈉緩慢滴入反應(yīng)瓶中(至少1個小時)。冰浴下反應(yīng)1.5小時。加入冰水100ml，乙酸乙酯萃取三次，無水硫酸鎂干燥。柱層析分離，得1.79g化合物3，產(chǎn)率72％。
1h-nmr(cdcl3300mhz)：0.92-1.17(m，2h)，2.04-2.36(m，1h)，7.25-7.39(d，1h)，7.90-8.04(m，2h)，8.25-8.31(d，1h)，8.51-8.57(d，1h)，8.87-8.93(d，1h).
esi/ms[m+h]：250.
實施例31-(2，2-二氟環(huán)丙基)-4-氨基萘(化合物4)的合成
將2.49g(10mmol)化合物3溶于200ml乙醇中，加入10％0.9g鈀碳，通入氫氣，室溫攪拌過夜。經(jīng)硅藻土過濾，減壓濃縮，柱層析分離，得1.84g化合物4，產(chǎn)率84％。
esi/ms[m-h]：218.
實施例41-(2，2-二氟環(huán)丙基)-4-異硫氰基萘(化合物5)的合成
將2.19g(10mmol)化合物4溶于100ml二氯甲烷，加入2.59g(20mmol)二異丙基乙胺，冰浴下通入1.14g(10mmol)硫光氣。冰浴下反應(yīng)10分鐘，加入20ml1％的鹽酸水溶液淬滅反應(yīng)，分離有機層，飽和食鹽水洗三次，無水硫酸鈉干燥。過濾，減壓濃縮，加入正己烷重結(jié)晶，得1.83g化合物5，產(chǎn)率71％。
esi/ms[m+h]：262.
實施例53-氨基-4-(4-(2，2-二氟環(huán)丙基)萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-5-硫醇(化合物6)的合成
將2.61g(10mmol)化合物5溶于30mldmf，加入3.89g(30mmol)二異丙基乙胺，2.21g(20mmol)氨基胍鹽酸鹽，50℃下反應(yīng)24小時。減壓蒸出溶劑，添加甲苯，再次蒸發(fā)溶劑，加入2m氫氧化鈉20ml，60℃下反應(yīng)48小時，過濾，濾液用2m的鹽酸調(diào)成中性，過濾，減壓蒸出溶劑，柱層析分離，得1.15g化合物6，產(chǎn)率36％。
1h-nmr(cdcl3300mhz)：0.94-1.19(m，2h)，2.05-2.37(m，1h)，6.92(s，2h)，7.55-7.99(m，3h)，8.15-8.27(d，1h)，8.41-8.47(d，1h)，13.06(s，1h).
esi/ms[m-h]：317.
實施例62-(5-氨基-4(4-(2，2-二氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h1，2，4-三唑-3-基硫基)乙酸甲酯(化合物7)的合成
將3.18g(10mmol)化合物6溶于30mldmf，加入2.67g(20mmol)碳酸鉀，室溫下緩慢滴入1.30g(12mmol)氯乙酸甲酯，室溫反應(yīng)24小時。加入冰水淬滅反應(yīng)，過濾。濾液減壓濃縮，加入甲苯再次蒸出溶劑，冰水重結(jié)晶得2.31g化合物7，產(chǎn)率59％。
esi/ms[m-h]：389.
實施例72-(5-羥基-4(4-(2，2-二氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h1，2，4-三唑-3-基硫基)乙酸甲酯(化合物8)的合成
將3.90g(10mmol)化合物7溶于200ml二氯甲烷，加入13.8g(0.2mol)亞硝酸鈉，1.65ml二氯乙酸，室溫反應(yīng)3小時。柱層析純化，得1.25g化合物8，產(chǎn)率32％。
esi/ms[m+h]：392
實施例82-(5-溴-4(4-(2，2-二氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h1，2，4-三唑-3-基硫基)乙酸甲酯(化合物9)的合成
將0.39g(1mmol)化合物8溶于10ml氯仿，將0.81g三溴化磷用5ml二氯甲烷稀釋，冰浴下緩慢滴入反應(yīng)瓶內(nèi)。冰浴下攪拌30分鐘。加入冰淬滅反應(yīng)，分離有機相，有機相水洗三次，無水硫酸鎂干燥，柱層析純化，得0.27g化合物9，產(chǎn)率60％。
1h-nmr(cdcl3300mhz)：0.92-1.17(m，2h)，2.04-2.36(m，1h)，3.82(s，3h)，4.37(s，4h)，7.16-7.25(d，1h)，7.41-7.57(m，3h)，8.21-8.40(m，2h).
esi/ms[m-h]：454.
實施例92-[5-溴-4-(4-(2，2-二氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸(化合物10)的合成
將0.45g(1mmol)化合物9溶于10ml乙醇置于反應(yīng)瓶中，將0.36g(1.5mmol)氫氧化鋰溶于10ml水中，冰浴下緩慢滴加至反應(yīng)瓶中，冰浴下反應(yīng)1小時，用0.5m的鹽酸調(diào)節(jié)ph至中性，減壓濃縮，加入50ml水，用0.5m的鹽酸調(diào)節(jié)ph至2，室溫攪拌15分鐘，過濾，濾餅真空干燥，得0.42g化合物，產(chǎn)率97％。
1h-nmr(cdcl3300mhz)：0.95-1.21(m，2h)，2.09-2.41(m，1h)，3.92(s，2h)，7.21-7.30(d，1h)，7.46-7.52(m，3h)，8.23-8.42(m，2h)，12.3(s，1h).
esi/ms[m-h]：438.
實施例101-(2-氟環(huán)丙基)萘(化合物12)的合成
將2.64g(10mmol)化合物11溶于20ml乙醇，加入4.60g金屬鈉，室溫反應(yīng)24小時。加入100ml水，用乙酸乙酯萃取三次，水洗三次，無水硫酸鈉干燥，柱層析分離，得1.17g化合物12，產(chǎn)率74％。
esi/ms[m+h]：187.
實施例11化合物1-(2-氟環(huán)丙基)-4硝基萘(化合物13)的合成
將1.86g(10mmol)化合物12置于反應(yīng)瓶中，冰浴攪拌10分鐘。冰浴下將10ml亞硝酸鈉緩慢滴入反應(yīng)瓶中(至少1個小時)。冰浴下反應(yīng)1小時。加入冰水100ml，乙酸乙酯萃取三次，無水硫酸鎂干燥。柱層析分離，得1.80g化合物13，產(chǎn)率78％。
1h-nmr(cdcl3300mhz)：0.90-1.15(m，2h)，2.03-2.26(m，1h)，2.56-2.64(m，1h)，7.24-7.30(d，1h)，7.94-8.05(m，2h)，8.27-8.32(d，1h)，8.51-8.54(d，1h)，8.87-8.93(d，1h).
esi/ms[m+h]：232.
實施例12化合物1-(2-氟環(huán)丙基)-4-氨基萘(化合物14)的合成
將2.31g(10mmol)化合物13溶于200ml乙醇中，加入10％0.9g鈀碳，通入氫氣，室溫攪拌過夜。經(jīng)硅藻土過濾，減壓濃縮，柱層析分離，得1.91g化合物14，產(chǎn)率95％。
esi/ms[m-h]：200.
實施例13化合物1-(2-氟環(huán)丙基)-4-異硫氰基萘(化合物15)的合成
將2.01g(10mmol)化合物14溶于100ml二氯甲烷，加入2.59g(20mmol)二異丙基乙胺，冰浴下通入1.14g(10mmol)硫光氣。冰浴下反應(yīng)10分鐘，加入20ml1％的鹽酸水溶液淬滅反應(yīng)，分離有機層，飽和食鹽水洗三次，無水硫酸鈉干燥。過濾，減壓濃縮，加入正己烷重結(jié)晶，得1.58g化合物15，產(chǎn)率65％。
esi/ms[m+h]：244.
實施例14化合物3-氨基-4-(4-(2-氟環(huán)丙基)萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-5-硫醇(化合物16)的合成
將2.43g(10mmol)化合物15溶于30mldmf，加入3.89g(30mmol)二異丙基乙胺，2.21g(20mmol)氨基胍鹽酸鹽，50℃下反應(yīng)24小時。減壓蒸出溶劑，添加甲苯，再次蒸發(fā)溶劑，加入2m氫氧化鈉20ml，60℃下反應(yīng)48小時，過濾，濾液用2m的鹽酸調(diào)成中性，過濾，減壓蒸出溶劑，柱層析分離，得1.17g化合物16，產(chǎn)率39％。
1h-nmr(cdcl3300mhz)：0.92-1.09(m，2h)，1.80-1.97(m，1h)，2.45-2.51(m，1h)，6.94(s，2h)，7.57-8.01(m，3h)，8.17-8.30(d，1h)，8.42-8.49(d，1h)，13.03(s，1h).
esi/ms[m-h]：299.
實施例15化合物2-(5-氨基-4(4-(2-氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h1，2，4-三唑-3-基硫基)乙酸甲酯(化合物17)的合成
將3.00g(10mmol)化合物16溶于30mldmf，加入2.67g(20mmol)碳酸鉀，室溫下緩慢滴入1.30g(12mmol)氯乙酸甲酯，室溫反應(yīng)24小時。加入冰水淬滅反應(yīng)，過濾。濾液減壓濃縮，加入甲苯再次蒸出溶劑，冰水重結(jié)晶得2.38g化合物17，產(chǎn)率64％。
esi/ms[m-h]：371.
實施例16化合物2-(5-羥基-4(4-(2-氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h1，2，4-三唑-3-基硫基)乙酸甲酯(化合物18)的合成
將3.72g(10mmol)化合物17溶于200ml二氯甲烷，加入13.8g(0.2mol)亞硝酸鈉，1.65ml二氯乙酸，室溫反應(yīng)6小時。柱層析純化，得1.71g化合物18，產(chǎn)率46％。
esi/ms[m+h]：374.
實施例17化合物2-(5-溴-4(4-(2-氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h1，2，4-三唑-3-基硫基)乙酸甲酯(化合物19)的合成
將0.37g(1mmol)化合物18溶于10ml氯仿，將0.81g三溴化磷用5ml二氯甲烷稀釋，冰浴下緩慢滴入反應(yīng)瓶內(nèi)。冰浴下攪拌30分鐘。加入冰淬滅反應(yīng)，分離有機相，有機相水洗三次，無水硫酸鎂干燥，柱層析純化，得0.23g化合物19，產(chǎn)率58％。
1h-nmr(cdcl3300mhz)：0.93-1.18(m，2h)，2.02-2.32(m，1h)，2.56-2.68(m，1h)，3.84(s，3h)，4.27(s，4h)，7.18-7.26(d，1h)，7.44-7.52(m，3h)，8.23-8.41(m，2h).
esi/ms[m-h]：436.
實施例18化合物2-[5-溴-4-(4-(2-氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸(化合物20)
將0.44g(1mmol)化合物19溶于10ml乙醇置于反應(yīng)瓶中，將0.36g(1.5mmol)氫氧化鋰溶于10ml水中，冰浴下緩慢滴加至反應(yīng)瓶中，冰浴下反應(yīng)1小時，用0.5m的鹽酸調(diào)節(jié)ph至中性，減壓濃縮，加入50ml水，用0.5m的鹽酸調(diào)節(jié)ph至2，室溫攪拌15分鐘，過濾，濾餅真空干燥，得0.40g化合物，產(chǎn)率95％。
1h-nmr(cdcl3300mhz)：0.97-1.20(m，2h)，2.11-2.23(m，1h)2.51(m，1h)，4.24(s，2h)，7.22-7.26(d，1h)，7.45-7.56(m，3h)，8.13-8.22(m，2h)，11.5(s，1h).
esi/ms[m-h]：420.
實施例192-[5-溴-4-(4-(2，2-二氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸(化合物10)的手性拆分
將化合物10通過手性柱分離，可得2-[5-溴-4-(4-((s)-2，2-二氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸化合物(化合物21)、2-[5-溴-4-(4-((r)-(2，2-二氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸化合物(化合物22)。手性柱分離的條件為：采用正相柱(大賽璐as-h手性柱0.46cml.dx15cml)，進樣5.0ul；流動相：乙醇和正己烷-30∶70(v/v)，流速：1.0ml/min波長214nm。
化合物21：
1h-nmr(cdcl3300mhz)：1.86-2.13(m，2h)，3.16-3.24(m，1h)，3.95-4.07(m，2h)，7.27-7.29(d，1h)，7.45-7.55(m，3h)，7.62-7.66(t，1h)，7.71-7.48(t，1h)，8.27-8.26(d，1h).
19fnmr(cdcl3470mhz)：δ-244.5，δ-244.9
化合物22：
1h-nmr(cdcl3300mhz)：1.86-2.13(m，2h)，3.16-3.24(m，1h)，3.95-4.07(m，2h)，7.27-7.29(d，1h)，7.45-7.55(m，3h)，7.62-7.66(t，1h)，7.71-7.48(t，1h)，8.27-8.26(d，1h).
19fnmr(cdcl3470mhz)：δ-257.4，δ-258.0
實施例202-[5-溴-4-(4-(2-氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸(化合物20)的手性拆分
將2-[5-溴-4-(4-(2-氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸(化合物20)通過手性柱分離，可得2-[5-溴-4-(4-((1s、2s)-2-氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸(化合物23)、2-[5-溴-4-(4-((1s、2r)-2-氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸(化合物24)、2-[5-溴-4-(4-((1r、2r)-2-氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸(化合物25)、2-[5-溴-4-(4-((1r、2s)-2-氟代環(huán)丙基)萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸(化合物26)。手性柱分離的條件：采用正相柱(大賽璐as-h手性柱0.46cml.dx15cml)，進樣5.0ul；流動相：乙醇和正己烷＝30∶70(v/v)，流速：1.0ml/min波長214nm。
化合物23：
1h-nmr(cdcl3300mhz)：1.47-1.55(m，2h)，2.45-2.57(m，1h)，3.86-3.96(m，2h)，5.24-5.04(m，2h)，7.24-7.26(d，1h)，7.44-7.62(m，3h)，7.74-7.70(t，1h)，8.46-8.44(d，1h).
19fnmr(cdcl3470mhz)：δ-100.7
旋光度[α]20d(c＝1，ch3oh)：-7.835
化合物24：
1h-nmr(cdcl3300mhz)：1.49-1.57(m，2h)，2.43-2.56(m，1h)，3.87-3.97(m，2h)，5.25-5.03(m，2h)，7.25-7.27(d，1h)，7.44-7.62(m，3h)，7.74-7.70(t，1h)，8.46-8.44(d，1h).
19fnmr(cdcl3470mhz)：δ-100.7
旋光度[α]20d(c＝1，ch3oh)：+11.789
化合物25：
1h-nmr(cdcl3300mhz)：1.44-1.52(m，2h)，2.49-2.52(m，1h)，3.93-4.03(m，2h)，5.03-5.21(m，2h)，7.24-7.26(d，1h)，7.44-7.65(m，3h)，7.74-7.70(t，1h)，8.46-8.45(d，1h).
19fnmr(cdcl3470mhz)：δ-100.7
旋光度[α]20d(c＝1，ch3oh)：-8.569
化合物26：
1h-nmr(cdcl3300mhz)：1.44-1.53(m，2h)，2.49-2.52(m，1h)，3.94-4.02(m，2h)，5.02-5.20(m，2h)，7.25-7.27(d，1h)，7.45-7.65(m，3h)，7.75-7.70(t，1h)，8.47-8.45(d，1h).
19fnmr(cdcl3470mhz)：δ-100.7
旋光度[α]20d(c＝1，ch3oh)：+10.653
應(yīng)用實施例1：化合物21-26的體外活性測試
采用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染hurat1(人尿酸轉(zhuǎn)運蛋白)基因的mdck細胞系(購自上海藥明康德新藥開發(fā)有限公司)。將消化后的mdck-urat1-clone6細胞調(diào)整為2×105細胞/毫升的密度后，按照1毫升/孔(2×105細胞/孔)的細胞密度接種到24孔板中，隨后將細胞培養(yǎng)板置于37℃、5％co2培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)后，棄上清，并用600μlhbss緩沖液清洗兩遍后，再向每孔加入180μlhbss緩沖液。用dmso將化合物按照一定濃度稀釋，加入至24孔板中隨后將實驗板置于37℃、5％co2培養(yǎng)箱中孵育20分鐘。
14c標記-尿酸用1m的naoh配制成30mm的母液，用hbss緩沖液先稀釋成1mm后，取10μl尿酸溶液，分別加入化合物21-26處理20分鐘后的細胞板中，終濃度為50m。然后將培養(yǎng)板置于37℃、5％co2培養(yǎng)箱孵育15分鐘。
棄去上清后，用預冷的600μlhbss緩沖液清洗細胞三遍，然后每孔加入400μl0.1m的naoh溶液裂解細胞。將細胞裂解液收集于液閃管，使用液閃計數(shù)儀tri-carb讀取信號值。
以化合物lesinurad作為陽性對照，lesinurad是一種臨床常用的urat1抑制劑，適用于高尿酸血癥的治療?；衔?1-26組與陽性藥物對照組的體外活性結(jié)果如下表所示：
表1本發(fā)明化合物對尿酸轉(zhuǎn)運蛋白1(urat1)的活性抑制的ic50(mm)
從上述表格可得，與陽性藥物組相比，本發(fā)明制備的化合物21-26對尿酸轉(zhuǎn)運蛋白1均有一定的抑制活性，尤其化合物24和化合物25對尿酸轉(zhuǎn)運蛋白1的抑制活性大大增強。
應(yīng)用實施例2小鼠的毒性試驗
考察化合物21-26在小鼠體內(nèi)的毒性。取12-14周齡健康雄性nih小鼠56只隨機分為7組，每組8只。稱取各個化合物分別加入適量的吐溫-80使之質(zhì)量濃度為0.2％，渦旋使之完全溶解，加入適量的去離子水，配成一定濃度的藥液。
給藥前將各組小鼠禁食不禁水12h，各組分別給予一定量的化合物21～26及陽性對照lesinurad，每天3次，共給藥7天。于第八天解剖小鼠，觀察其生理變化。
結(jié)果：各組小鼠均未見死亡，各個化合物組與陽性對照組比較未見明顯的動物行為差異，動物處死后各個主要臟器如心、肝、脾、肺、腎、大腦、大小腸、胃等均未見出血、炎癥等急性病理學改變，也未見其他病理學差異，也未觀察到副作用。綜上所述，化合物21-26與陽性對照相比，毒性并未有增強。
本發(fā)明制備的具有化合物24和化合物25結(jié)構(gòu)的2-[5-溴-4-(4-氟代環(huán)丙基萘-1-基)-4h-1，2，4-三唑-3-基硫基]乙酸化合物對尿酸轉(zhuǎn)運蛋白1的抑制活性大大增強，且并沒有表現(xiàn)出嚴重副作用。其中，高尿酸血癥，指的是在正常嘌呤飲食狀態(tài)下，非同日兩次空腹血尿酸水平男性高于420μmol/l，女性高于360μmol/l，包括原發(fā)性的高尿酸血癥和由于糖尿病、高血壓、高血脂等引起的繼發(fā)性高尿酸血癥。
對本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，可根據(jù)以上描述的技術(shù)方案以及構(gòu)思，做出其它各種相應(yīng)的改變以及形變，而所有的這些改變以及形變都應(yīng)該屬于本發(fā)明權(quán)利要求的保護范圍之內(nèi)。