本發(fā)明涉及一種平板，特別涉及一種輻照滅菌后pH穩(wěn)定的培養(yǎng)基平板。
背景技術(shù)：
中國藥典2015年版通則9203藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則規(guī)定：“用于環(huán)境監(jiān)測的培養(yǎng)基須特別防護，最好要雙層包裝和終端滅菌”，目前市面上用于環(huán)境監(jiān)測的成品培養(yǎng)基普遍采用三層無菌包裝和終端輻照滅菌的方式。而用于終端產(chǎn)品檢測的成品培養(yǎng)基為保障無菌，也可采用終端輻照滅菌的方式。
但是，輻照會導(dǎo)致培養(yǎng)基理化性質(zhì)的改變(如培養(yǎng)基顏色的改變、pH和凝膠強度的降低)甚至是營養(yǎng)成分的破壞。尤其是含糖量較高的培養(yǎng)基(比如YPD平板，酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板)pH下降幅度更為明顯。這是因為輻照對于糖分子有水解和氧化降解的作用,引起輻解產(chǎn)物的形成，導(dǎo)致pH下降。輻照多糖會引發(fā)解聚。輻照單糖水溶液會產(chǎn)生H2、CO、CO2、甲醛、丙醛、乙二醛、醛糖糖酸、糖醛酸、糖聚合體、脫氧化合物等一系列對微生物生長有影響的物質(zhì)。
實踐證明，經(jīng)輻照的成品培養(yǎng)基在有效期內(nèi)pH值可能已低于標(biāo)準(zhǔn)要求下限，這大大縮短了產(chǎn)品的貨架期，影響產(chǎn)品的使用壽命。
如何在不影響微生物生長的情況下，使平板的pH在進行輻照滅菌后依然保持穩(wěn)定，是一件非常具有挑戰(zhàn)性的工作，同時也一件十分有價值的工作。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種輻照滅菌后pH穩(wěn)定的培養(yǎng)基平板。
本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：
一種輻照滅菌后pH穩(wěn)定的培養(yǎng)基平板，培養(yǎng)基由胨、酵母浸出粉、葡萄糖、瓊脂和抗氧化劑和水組成。
作為上述培養(yǎng)基平板的進一步改進，每1000ml培養(yǎng)基中含有胨5～20g，酵母浸出粉3～10g，葡萄糖10～40g，瓊脂9～20g和0.1～5g的抗氧化劑。
作為上述培養(yǎng)基平板的進一步改進，每1000ml培養(yǎng)基中含有胨10.0g、酵母浸出粉5.0g、葡萄糖20.0g、瓊脂14.0g、0.3～3g的抗氧化劑。
作為上述培養(yǎng)基平板的進一步改進，抗氧化劑選自硫酸亞鐵、檸檬酸鈉、硫代硫酸鈉和亞硫酸氫鈉中的至少一種，更佳的，抗氧化劑為亞硫酸氫鈉。
作為上述培養(yǎng)基平板的進一步改進，每1000ml培養(yǎng)基含有胨10.0g、酵母浸出粉5.0g、葡萄糖20.0g、瓊脂14.0g、亞硫酸氫鈉1.1～1.3g。
作為上述培養(yǎng)基平板的進一步改進，每1000ml培養(yǎng)基含有胨10.0g、酵母浸出粉5.0g、葡萄糖20.0g、瓊脂14.0g、亞硫酸氫鈉1.2g。
本發(fā)明的有益效果是：
本發(fā)明的YPD平板5KGy劑量輻照的最終滅菌后，pH值較為穩(wěn)定，20～25℃的陰涼庫貯存4個月后pH未見明顯變化，并且生物學(xué)特性未受明顯影響，培養(yǎng)基性能依舊良好，大大延長了產(chǎn)品的貨架期。
具體實施方式
一種輻照滅菌后pH穩(wěn)定的培養(yǎng)基平板，培養(yǎng)基由胨、酵母浸出粉、葡萄糖、瓊脂和抗氧化劑和水組成。
作為上述培養(yǎng)基平板的進一步改進，每1000ml培養(yǎng)基中含有胨5～20g，酵母浸出粉3～10g，葡萄糖10～40g，瓊脂9～20g和0.1～5g的抗氧化劑。
作為上述培養(yǎng)基平板的進一步改進，每1000ml培養(yǎng)基中含有胨10.0g、酵母浸出粉5.0g、葡萄糖20.0g、瓊脂14.0g、0.3～3g的抗氧化劑。
作為上述培養(yǎng)基平板的進一步改進，抗氧化劑選自硫酸亞鐵、檸檬酸鈉、硫代硫酸鈉和亞硫酸氫鈉中的至少一種，更佳的，抗氧化劑為亞硫酸氫鈉。
作為上述培養(yǎng)基平板的進一步改進，每1000ml培養(yǎng)基含有胨10.0g、酵母浸出粉5.0g、葡萄糖20.0g、瓊脂14.0g、亞硫酸氫鈉1.1～1.3g。
作為上述培養(yǎng)基平板的進一步改進，每1000ml培養(yǎng)基含有胨10.0g、酵母浸出粉5.0g、葡萄糖20.0g、瓊脂14.0g、亞硫酸氫鈉1.2g。
下面結(jié)合實施例，進一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案。
實施例1
一種培養(yǎng)基平板，每1000ml培養(yǎng)基含有胨10.0g、酵母浸出粉5.0g、葡萄糖20.0g、瓊脂14.0g、亞硫酸氫鈉1.2g。
實施例2
一種培養(yǎng)基平板，每1000ml培養(yǎng)基含有胨10.0g、酵母浸出粉5.0g、葡萄糖20.0g、瓊脂14.0g、硫代硫酸鈉1.2g。
實施例3
一種培養(yǎng)基平板，每1000ml培養(yǎng)基含有胨10.0g、酵母浸出粉5.0g、葡萄糖20.0g、瓊脂14.0g、硫酸亞鐵1.2g。
實施例4
一種培養(yǎng)基平板，每1000ml培養(yǎng)基含有胨10.0g、酵母浸出粉5.0g、葡萄糖20.0g、瓊脂14.0g、檸檬酸鈉1.2g。
實施例5
一種培養(yǎng)基平板，每1000ml培養(yǎng)基含有胨5.0g、酵母浸出粉10.0g、葡萄糖40.0g、瓊脂9.0g、亞硫酸氫鈉5.0g。
實施例6
一種培養(yǎng)基平板，每1000ml培養(yǎng)基含有胨15.0g、酵母浸出粉4.0g、葡萄糖15.0g、瓊脂16.0g、亞硫酸氫鈉1.1g。
實施例7
一種培養(yǎng)基平板，每1000ml培養(yǎng)基含有胨12.0g、酵母浸出粉7.0g、葡萄糖30.0g、瓊脂12.0g、亞硫酸氫鈉1.3g。
實施例8
一種培養(yǎng)基平板，每1000ml培養(yǎng)基含有胨20.0g、酵母浸出粉3.0g、葡萄糖10.0g、瓊脂20.0g、亞硫酸氫鈉0.1g。
平板性能測試：
1材料
1.1菌株
釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)ATCC9763，白色念珠菌(Candida albicans)CMCC(F)98001由本實驗室保存。當(dāng)然，也可以使用其他可以公開獲得的同種菌株進行測試。
1.2培養(yǎng)基及試劑
實施例1所述YPD平板(簡稱YPD平板1)、實施例2所述YPD平板(簡稱YPD平板2)、實施例3所述YPD平板(簡稱YPD平板3)、實施例4所述YPD平板(簡稱YPD平板4)、原配方Y(jié)PD平板(不含抗氧化物)和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板(簡稱SDA平板)由廣東環(huán)凱微生物科技有限公司提供。酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)品由中國食品藥品檢定研究院提供。
2方法
2.1培養(yǎng)基pH穩(wěn)定性能比較
2.1.1YPD平板制備：
按酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)配方稱取各原料(原配方平板)，并按比例加入抗氧化物亞硫酸氫鈉(YPD平板1)，或硫代硫酸鈉(YPD平板2)，或硫酸亞鐵(YPD平板3)，或檸檬酸鈉(YPD平板4)，調(diào)整pH值，煮沸溶解，121℃滅菌20min，冷卻至50℃傾注平板，備用。
2.1.2將制備好的上述各種YPD平板進行三層包裝，送交輻照中心進行5KGy劑量的電子束輻照，以不進行輻照的平板作為對照。
輻照后置于20～25℃陰涼庫儲存，分別于輻照后第1天、第7天、第15天、第30天、第60天、第90天和第120天測定pH值。
2.2培養(yǎng)基生物學(xué)性能評價
生長率試驗：采用定量方法進行。將白色念珠菌、釀酒酵母2株菌的新鮮斜面培養(yǎng)物制成約103cfu/ml的菌懸液。分別取上述各菌液0.1ml用全自動螺旋接種儀分別接種于經(jīng)5KGy輻照的YPD平板1及未經(jīng)輻照作為對照的原配方平板和酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)品上，白色念珠菌、釀酒酵母的菌液同時接種參比培養(yǎng)基SDA平板，23-28℃培養(yǎng)3～5d。每種平板進行3個重復(fù)。觀察各菌株在培養(yǎng)基上的生長情況，并對其進行菌落計數(shù)。按下列公式計算生長率PR：
PR＝NS/N0，NS：待測培養(yǎng)基平板上得到的平均菌落數(shù)；N0：參比培養(yǎng)基平板上獲得的平均菌落數(shù)。
3結(jié)果
3.1培養(yǎng)基pH值穩(wěn)定性能比較
各配方培養(yǎng)基pH穩(wěn)定性能比較見表1：
表1各配方培養(yǎng)基pH穩(wěn)定性能比較
從表中結(jié)果可以看出，原配方Y(jié)PD平板、YPD平板2、YPD平板3和YPD平板4輻照后pH值下降明顯(下降值分別為0.49、0.22、0.20和0.18)，原配方Y(jié)PD平板pH值下降更為明顯，而YPD平板1輻照后未引起pH值下降，反而有略微上升；原配方Y(jié)PD平板、YPD2平板、YPD平板3和YPD平板4輻照后4個月內(nèi)pH值下降值分別為0.56、0.50、0.52和0.66，與輻照前相比，總的pH值下降值分別為1.05、0.72、0.72和0.84，而YPD平板1輻照后4個月內(nèi)pH下降值為0.19，與輻照前相比，總的pH下降值為0.17。實施例1所述YPD平板pH值測定結(jié)果符合標(biāo)準(zhǔn)6.0±0.2的要求，pH變化值也在±0.2的范圍，而其他四種平板已低于標(biāo)準(zhǔn)6.0±0.2的下限要求，pH變化值也在±0.2的范圍外?？偟膩碚f，實施例1所述YPD平板的pH穩(wěn)定性能優(yōu)于其他四種YPD平板。
類似的，實施例5～8的培養(yǎng)基制備得到的平板在進行輻照滅菌后，pH也基本保持穩(wěn)定。
3.2培養(yǎng)基生物學(xué)性能評價
結(jié)果見表2：
表2培養(yǎng)基生物學(xué)性能評價
從結(jié)果可以看出實施例1所述培養(yǎng)基經(jīng)5KGy輻照后與未經(jīng)輻照的原配方和中檢所標(biāo)準(zhǔn)品相比，各目標(biāo)菌的生長率無明顯差異，目標(biāo)菌白色念珠菌CMCC(F)98001和釀酒酵母ATCC9763均能達到0.7的生長率，且目標(biāo)菌的菌落大小和形態(tài)與對照一致。表明實施例1所述培養(yǎng)基平板生物學(xué)性能良好，符合要求。
綜上所述，實施例1所述的酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板經(jīng)5KGy劑量輻照的最終滅菌后，pH值較為穩(wěn)定，陰涼庫貯存4個月后pH未見明顯變化。并且生物學(xué)特性未受明顯影響，培養(yǎng)基性能依舊良好。
雖然本發(fā)明對具體實施案例進行了描述，但是本發(fā)明并不局限于此。本行業(yè)技術(shù)人員應(yīng)該意識到，在本發(fā)明所述原理下對本發(fā)明做的多種修飾和改變，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護范圍。