本發(fā)明涉及一種鹵素香豆素類衍生物，以及該衍生物的具體應(yīng)用、利用該衍生物制備的猛水蚤殺滅劑，以及該衍生物和該猛水蚤殺滅劑的制備方法。
背景技術(shù)：
：猛水蚤是甲殼綱猛水蚤目(Harpacticoida)一些種類的統(tǒng)稱，為海洋小型底棲動物中的優(yōu)勢類群。在鮑魚、海參、蝦、蟹育苗生產(chǎn)中，有些種類大量繁殖，給苗種前期生產(chǎn)帶來嚴(yán)重的危害。危害主要體現(xiàn)在兩個(gè)方面：一是猛水蚤在水體中過度孳生，不但消耗大量氧氣，致使水體缺氧，而且與養(yǎng)殖鮑苗、參苗競爭餌料，同時(shí)由于單胞藻的缺乏，氨氮無法被利用，造成養(yǎng)殖苗種中毒；二是猛水蚤大量繁殖，對鮑苗、參苗、蛻皮蝦蟹苗均咬食傷害，造成苗種培育過程大量死亡。因此，在生產(chǎn)中，對猛水蚤的殺滅是苗種培育中關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。目前，在苗種生產(chǎn)中主要采用兩種方法殺滅猛水蚤：一是通過對養(yǎng)殖用水的過濾進(jìn)行阻斷；二是主要采用如敵百蟲、菊酯類等農(nóng)藥進(jìn)行海水苗種池中猛水蚤的殺滅。上述兩種方法均存在不足之處：第一種方法不但生產(chǎn)成本高，而且不適應(yīng)苗種的大規(guī)模培育對養(yǎng)殖用水的大水量要求；第二種方法使用的農(nóng)藥除本身對養(yǎng)殖鮑、海參、蝦、蟹等造成毒害以外，還對養(yǎng)殖水環(huán)境造成嚴(yán)重的污染，威脅人類食品安全。因此，為有效殺滅猛水蚤，應(yīng)用綠色無公害的藥物成為控制孳生的重要手段。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的上述不足，提出一種鹵素香豆素類衍生物，以及該衍生物的制備方法和具體應(yīng)用，同時(shí)還提出了一種利用該衍生物制備的猛水蚤殺滅劑和該殺滅劑的制備方法。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是：一種鹵素香豆素類衍生物，其特征在于：所述的衍生物的結(jié)構(gòu)式為：，所述衍生物的名稱為4-甲基-7-[6-溴己氧基]香豆素。一種如上所述的鹵素香豆素類衍生物的制備方法，其特征在于：所述的方法按照以下步驟進(jìn)行：向圓底燒瓶中加入一定質(zhì)量的7-羥基香豆素、無水K2CO3和1,6-二溴己烷，三者質(zhì)量比約為1:3:5，然后加入一定量的無水丙酮，于60-65℃的條件下回流反應(yīng)20-24h，反應(yīng)后減壓蒸除丙酮，得到中間產(chǎn)物A，向中間產(chǎn)物A中加入一定量的純水，并用氯仿進(jìn)行萃取，氯仿相用無水硫酸鈉干燥后減壓濃縮得粗品，粗品經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得到的鹵素香豆素類衍生物，即為4-甲基-7-[6-溴己氧基]香豆素。一種如上所述的鹵素香豆素類衍生物在制備猛水蚤殺滅劑中的應(yīng)用。一種猛水蚤殺滅劑，其特征在于：所述的猛水蚤殺滅劑由以下重量百分比的原料組成：4-甲基-7-(6-溴己氧基)香豆素40-60%，分散劑3-7%，潤濕劑3-7%，載體30-50%，所述的分散劑為MorwetD-400，所述的潤濕劑為MorwetEFW，所述的載體為硅藻土。一種如上所述的猛水蚤殺滅劑的制備方法，其特征在于：取4-甲基-7-(6-溴己氧基)香豆素，將其與潤濕劑和分散劑混合，并攪拌均勻，然后向其中加入硅藻土，攪拌均勻，即獲得猛水蚤殺滅劑。本發(fā)明同現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)：香豆素類化合物是一類重要的有機(jī)雜環(huán)化合物，具有抗凝血、抗腫瘤、殺蟲、抑菌、抗病毒等的生物學(xué)活性，廣泛的應(yīng)用于醫(yī)藥和農(nóng)藥領(lǐng)域。不僅如此，該類化合物還表現(xiàn)出對非靶標(biāo)生物毒性低等特點(diǎn)，具有重要的開發(fā)前景。鹵素香豆素類衍生物是在香豆素類化合物中引入鹵素功能團(tuán)，具有更優(yōu)的生物活性和安全性，本發(fā)明開發(fā)了鹵素香豆素類衍生物的新的用途，開拓了其新的應(yīng)用領(lǐng)域，而利用這種衍生物為有效成分的猛水蚤的殺滅劑，對養(yǎng)殖動物的毒性低，能夠一次性、徹底的殺滅猛水蚤，效果顯著，同時(shí)各個(gè)原料的成本低廉，獲得容易，且使用方法簡單、便捷，因此可以說它具備了多種優(yōu)點(diǎn)，特別適合于在本領(lǐng)域中推廣應(yīng)用，其市場前景十分廣闊。附圖說明圖1為本發(fā)明所述的鹵素香豆素類衍生物的合成路線示意圖。具體實(shí)施方式下面將說明本發(fā)明的具體實(shí)施方式。如圖1所示：（一）鹵素香豆素類衍生物的制備（1）試驗(yàn)方法參見圖1，將5.28g（30mmol）購買得到的4-甲基-7-羥基香豆素、13.8g無水K2CO3（100mmol）以及120mL無水丙酮加入到250mL圓底燒瓶中，室溫?cái)嚢?h后，向所述圓底燒瓶中再加入22g（90mmol）1,6-二溴己烷，60℃下回流反應(yīng)24h。減壓蒸除反應(yīng)體系中的無水丙酮（45℃，0.05MPa負(fù)壓），向所述圓底燒瓶中加入100mL蒸餾水，得混合液，混合液用氯仿萃?。?50mL×4），合并下層有機(jī)相；向有機(jī)相中加入20-30g無水硫酸鈉靜置過夜，過濾除去硫酸鈉固體、減壓濃縮（45℃，0.05MPa負(fù)壓）得固體化合物粗品。粗品經(jīng)硅膠柱層析（V石油醚：V乙酸乙酯=4:1）分離純化，TLC檢測收集含有目標(biāo)化合物的洗脫部分，減壓濃縮除去洗脫試劑（55℃，0.05MPa負(fù)壓），得7.44g白色針狀固體（產(chǎn)率73.37%）。（2）結(jié)果化合物結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)列于表1中：表14-甲基-7-[6-溴己氧基]香豆素的1HNMR、13CNMR與ESI-MS數(shù)據(jù)1HNMR(500MHz,CDCl3)13CNMR(126MHz,CDCl3)ESI-MS(m/z)7.49-7.47(d),6.86-6.84(dd),6.80-6.79(d),6.12(s),4.03-4.01(t),3.44-3.41(t),1.91-1.89(m),1.85-1.82(m),1.64(s),1.53-1.52(m).162.29,161.38,155.48,152.60,125.61,113.65,112.75,112.04,101.57,68.50,33.71,32.76,28.97,28.00,25.36,18.72.337.55[M]+本發(fā)明提供的化合物的制備方法有較高的產(chǎn)率。從表1可以確定化合物的結(jié)構(gòu)，即通過williamson反應(yīng)合成化合物1，表1中氫譜中4.03-1.82，碳譜中的33.71-25.36為烷烴側(cè)鏈的化學(xué)位移，這證明反應(yīng)的正確性。（二）猛水蚤殺滅劑活性測定（1）取按照上述步驟獲得的4-甲基-7-(6-溴己氧基)香豆素，將其與潤濕劑MorwetEFW、分散劑MorwetD-400充分混合，并攪拌均勻，然后向其中加入作為載體的硅藻土，再次攪拌均勻后，獲得猛水蚤殺滅劑，其中各個(gè)原料按照以下百分比組成：4-甲基-7-(6-溴己氧基)香豆素48%，分散劑5%，潤濕劑5%，載體42%。（2）藥液配制準(zhǔn)確稱取猛水蚤殺滅劑20.0g，置于1000mL容量瓶中，加蒸餾水溶解并定容，即得濃度為20mg/mL的待測藥液，4℃冰箱保存，備用。（3）試驗(yàn)動物試驗(yàn)用海參取自大連海寶漁業(yè)有限公司養(yǎng)殖基地，體質(zhì)健壯，規(guī)格均一，平均體重5.67g/頭。在水箱中暫養(yǎng)7d，每天投喂專用餌料1次。試驗(yàn)所用猛水蚤采集于大連海寶漁業(yè)有限公司養(yǎng)殖基地水域。（4）試驗(yàn)方法采用靜水式試驗(yàn)法，每個(gè)塑料水箱（規(guī)格30×30×40cm）加入經(jīng)過濾的海水20L，pH7.2，控制水溫為16±1℃。試驗(yàn)開始時(shí)，首先根據(jù)試驗(yàn)所設(shè)立的濃度（0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5g/m3）分別加入到水體中，攪拌均勻。每組加入試驗(yàn)用海參10頭和猛水蚤約4000只，試驗(yàn)過程要求保持水中溶氧在5mg/L以上。48h后統(tǒng)計(jì)猛水蚤殺滅率和海參死亡率。猛水蚤統(tǒng)計(jì)死亡率方法為：取樣時(shí)，充分?jǐn)嚢杌旌纤w后，立即隨機(jī)取1L水至燒杯中，統(tǒng)計(jì)猛水蚤存活和死亡數(shù)，大約計(jì)算出每組試驗(yàn)的猛水蚤死亡率。試驗(yàn)重復(fù)3次，并設(shè)對照組。（5）結(jié)果鹵素香豆素猛水蚤殺滅劑，在48h殺滅猛水蚤的結(jié)果見表2。從表2可以看出，當(dāng)濃度為1.5g/m3時(shí)，殺滅率為54.3%；當(dāng)濃度大于3.5g/m3時(shí)，其殺滅率可達(dá)100%；在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)（1.5-4.5g/m3），試驗(yàn)海參48h內(nèi)均沒有出現(xiàn)中毒現(xiàn)象，對照組中猛水蚤從第6h開始出現(xiàn)死亡，在48h內(nèi)死亡率小于5%。以上結(jié)果表明該制劑是一種猛水蚤殺滅效果良好且對海參安全的具有良好應(yīng)用前景的生物漁藥。表2鹵素香豆素猛水蚤殺滅劑在48h對猛水蚤殺滅效果（三）鹵素香豆素猛水蚤殺滅劑的安全性評價(jià)（1）試驗(yàn)動物試驗(yàn)所用海參選取于大連海寶漁業(yè)有限公司養(yǎng)殖基地，體質(zhì)健壯，規(guī)格均一，平均體重5.27g。在水箱中暫養(yǎng)7d左右，每天投喂1次。待適應(yīng)環(huán)境條件后再進(jìn)行毒性試驗(yàn)。（2）試驗(yàn)方法采用靜水式試驗(yàn)法，每個(gè)塑料水箱（規(guī)格60×60×80cm）加入經(jīng)過濾的海水100L，pH7.2，控制水溫為16±1℃。先加入試驗(yàn)藥液充分混勻后再加入試驗(yàn)用海參，每水箱放養(yǎng)50頭。放養(yǎng)海參后，要求保持水中溶氧在5mg/L以上。為了保持恒定的藥物濃度，每隔24h換水重新加藥。首先，在反復(fù)進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)基礎(chǔ)上，確定正式試驗(yàn)藥液濃度的大致范圍，即試驗(yàn)海參在24h內(nèi)全部中毒死亡的藥液濃度（17.0mg/L）和96h內(nèi)不發(fā)生死亡的藥液濃度(10.0mg/L)。在藥液濃度10.0～17.0mg/L范圍內(nèi)按濃度對數(shù)等差（公差d=1.0mg/L）插入七個(gè)濃度試驗(yàn)組和設(shè)立一個(gè)空白對照組，進(jìn)行正式試驗(yàn)，觀察各濃度下試驗(yàn)海參的中毒死亡情況。試驗(yàn)重復(fù)3次。在48小時(shí)后，記錄海參存活數(shù)量并計(jì)算死亡率。在根據(jù)SPSS的probit模塊計(jì)算LC50。（3）結(jié)果鹵素香豆素猛水蚤殺滅劑對海參的半數(shù)致死濃度值（LC50mg/L）為13.7mg/L(95%置信區(qū)間為11.4-15.9mg/L)。從結(jié)果顯示，鹵素香豆素猛水蚤殺滅劑的安全濃度不是很高，但是，實(shí)際中，濃度在10.0mg/L的情況下，48h海參沒有出現(xiàn)死亡。綜合考慮，鹵素香豆素作為猛水蚤殺滅劑具有很好的推廣價(jià)值。當(dāng)前第1頁1 2 3