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利用PCR?RFLP檢測(cè)綿羊PCNP基因單核苷酸多態(tài)性的方法及其應(yīng)用與流程

文檔序號(hào):12412771閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種利用PCR-RFLP檢測(cè)綿羊PCNP基因單核苷酸多態(tài)性的方法,其特征在于,包括以下步驟:

以待測(cè)綿羊全基因組DNA為模板,以引物對(duì)P為引物,PCR擴(kuò)增綿羊PCNP基因片段;用限制性內(nèi)切酶SPhI酶切PCR擴(kuò)增產(chǎn)物之后,再對(duì)酶切后的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳;根據(jù)電泳結(jié)果鑒定綿羊PCNP基因上單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的基因型;

所述的引物對(duì)P為:

上游引物:5’-AGAATAGCATGGGCAGAA-3’;

下游引物:5’-TCATTTCTGTGGGACACC-3’。

2.如權(quán)利要求1所述的利用PCR-RFLP檢測(cè)綿羊PCNP基因單核苷酸多態(tài)性的方法,其特征在于,所述的PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5min;94℃變性30s,55.3℃退火30s,72℃延伸50s,35個(gè)循環(huán);72℃延伸10min。

3.如權(quán)利要求1所述的利用PCR-RFLP檢測(cè)綿羊PCNP基因單核苷酸多態(tài)性的方法,其特征在于,所述的瓊脂糖凝膠的質(zhì)量濃度為1.0%。

4.如權(quán)利要求1所述的利用PCR-RFLP檢測(cè)綿羊PCNP基因單核苷酸多態(tài)性的方法,其特征在于,所述的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)表現(xiàn)為A或G的單核苷酸多態(tài)性,具有AA、GA以及GG三種基因型,電泳結(jié)果分別為:AA型表現(xiàn)為377bp和309bp兩個(gè)條帶;GA型表現(xiàn)為686bp,377bp和309bp三個(gè)條帶;GG型表現(xiàn)為686bp一個(gè)條帶。

5.如權(quán)利要求1所述的利用PCR-RFLP檢測(cè)綿羊PCNP基因單核苷酸多態(tài)性的方法在綿羊輔助選擇和分子育種中的應(yīng)用。

6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用,其特征在于:建立基因型為AA純合型的綿羊群體,提高綿羊產(chǎn)羔率。

7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用,其特征在于:所述綿羊選自湖羊或小尾寒羊。

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