本發(fā)明涉及有機(jī)物分離純化領(lǐng)域，具體而言，涉及一種從豬血中提取超氧化物歧化酶的方法及該超氧化物歧化酶。
背景技術(shù)：
超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，簡稱SOD)，是存在于生物體內(nèi)的一種至關(guān)重要的抗氧化酶，是國際上公認(rèn)的超氧陰離子氧自由基(O2-)的專一清除劑，它對平衡機(jī)體氧化與抗氧化系統(tǒng)，免除自由基損傷起著至關(guān)重要的作用。SOD對人體的功效可歸之為“一清四抗”：“一清”即有效清除機(jī)體內(nèi)的超氧陰離子氧自由基，保護(hù)人體細(xì)胞免氧自由基的毒害；“四抗”即抗衰老、抗疾病、抗輻射和抗疲勞。
近年來，以動(dòng)物血液為原料制取超氧化物歧化酶(SOD)的技術(shù)取得了很大的進(jìn)步，有些已經(jīng)實(shí)現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)，其中不少已申請了發(fā)明專利，例如CN03106275.X公開了一種動(dòng)物血快速提取超氧化物歧化酶的新方法，該方法在新鮮的動(dòng)物血中加入酒精和氯化銅去除血紅蛋白等雜蛋白，再通過丙酮分級沉淀，冷凍干燥制取SOD成品；CN200410041723.2公開了一種超氧化歧化酶的制備方法，該方法采用新鮮豬血塊為原料，包括加入氯化銅進(jìn)行熱變性反應(yīng)、乙醇-氯仿萃取、丙酮分級沉淀、柱層析純化、透析以及凍干等復(fù)雜工藝流程，最后獲得淺藍(lán)色的Cu,Zn-SOD。CN200410071087.8公開了一種用動(dòng)物血液提取超氧化歧化酶的新方法，該方法采用動(dòng)物血液加入檸檬酸鈉抗凝，不經(jīng)過離心處理，直接在全血液中加入保護(hù)劑葡萄糖、氯化銅、氯化鈉進(jìn)行熱變性去除雜蛋白，然后經(jīng)丙酮溶劑分級分離、再經(jīng)冷凍干燥得到SOD凍干粉。CN200810148899.6公開了一種超氧化歧化酶的制備方法，該方法在動(dòng)物凝血塊中加入蛋白質(zhì)沉淀劑去雜蛋白，再經(jīng)過濾、離心、超濾、凍干，得到凍干粉。CN201110228061.X公開了一種從動(dòng)物血球液中提取超氧化物歧化酶SOD的新工藝，該新工藝主要包括溶血、熱變性、超濾濃縮、丙酮分級沉淀、離子交換柱層析等步驟得到SOD精品。
現(xiàn)有的動(dòng)物血球液提取SOD技術(shù)方案基本上都使用了有害的化學(xué)試劑和有機(jī)溶劑，這一方面給產(chǎn)品和環(huán)境帶來二次污染，生產(chǎn)成本高，操作難度大，另一方面在萃取SOD之后的優(yōu)質(zhì)血紅蛋白被嚴(yán)重污染，無法綜合利用，造成資源浪費(fèi)。
有鑒于此，特提出本發(fā)明。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的第一目的在于提供一種從豬血中提取超氧化物歧化酶的方法，以解決現(xiàn)有通過動(dòng)物新鮮血液制備超氧化物歧化酶的制備方法中，均采用有害的化學(xué)試劑和有機(jī)溶劑、帶來二次污染的問題，所述的從豬血中提取超氧化物歧化酶的方法，該工藝以豐富的豬血為原料，通過無機(jī)酸堿調(diào)節(jié)pH并超濾濃縮，具有工藝簡單、成本低、綠色環(huán)保、易于實(shí)施等優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明的第二目的在于提供一種所述的從豬血中提取超氧化物歧化酶的方法所制備的超氧化物歧化酶，該超氧化物歧化酶凍干粉，具有高附加值、高生物活性等優(yōu)點(diǎn)。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：
一種從豬血中提取超氧化物歧化酶的方法，包括以下步驟：
(1)、在新鮮豬血中加入檸檬酸鈉做抗凝處理，離心后收集血紅細(xì)胞，即得到血球液，加水?dāng)嚢璧玫饺苎海?/p>
(2)、用酸調(diào)節(jié)步驟(1)中的溶血液的pH至5.2～5.5，升溫至60～65℃并保溫，然后降溫并進(jìn)行過濾，得到濾液；
(3)、用堿調(diào)節(jié)步驟(2)中的濾液的pH值至6.2～6.5，升溫至70～75℃并保溫，然后降溫并過濾，得到濾液；
(4)、將步驟(3)得到的濾液進(jìn)行超濾濃縮，得到SOD粗酶溶液，將SOD粗酶溶液加熱升溫，用堿調(diào)整pH值至8.5～9.0，并滴加保護(hù)劑A并保溫，保溫后冷卻，離心收集上清液，即得SOD酶液；
(5)、向步驟(5)中的SOD酶液加入保護(hù)劑B，攪拌混勻后，冷凍干燥，得到SOD凍干粉。
本申請所提供的從豬血中提取超氧化物歧化酶的方法，不使用任何有機(jī)溶劑，避免了環(huán)境污染和對酶活性的毒害，并使生產(chǎn)工藝簡化。與目前許多專利報(bào)道的硫酸銨鹽析法、丙酮分級沉淀法、離子交換樹脂或分子篩柱層析法等純化方法相比，具有生產(chǎn)周期短、成本低、更適合工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)的特點(diǎn)。
本申請所提供的從豬血中提取超氧化物歧化酶的方法，在步驟(1)中，要選用檢驗(yàn)合格的新鮮豬血，加入檸檬酸鈉做抗凝處理，檸檬酸鈉的質(zhì)量為豬血質(zhì)量的0.5～1.0％，檸檬酸鈉具有良好的金屬離子絡(luò)合能力，可以與Ca2+、Mg2+和Fe2+等金屬離子結(jié)合成可溶性絡(luò)合物，使這些離子失去形成不溶性的絡(luò)合物的機(jī)會(huì)，從而減緩凝固作用。離心分離得到血球液和血漿液，血漿液經(jīng)噴霧干燥制成血漿蛋白粉。在步驟(2)中和步驟(3)中，先調(diào)節(jié)溶血液至5.2～5.5，再調(diào)節(jié)至6.2～6.5，然后進(jìn)行升溫、保溫、降溫的操作，在操作過程中，升溫和降溫都要迅速進(jìn)行，在盡量短的時(shí)間內(nèi)完成升溫和降溫，以防止豬血質(zhì)變，影響所得到的超氧化物歧化酶凍干粉。在步驟(4)中，進(jìn)行超濾濃縮，得到SOD粗酶溶液，將SOD粗酶溶液加熱升溫，用堿調(diào)整pH值至8.5～9.0，并加入保護(hù)劑，保護(hù)劑的作用為避免熱、酸、堿對SOD的破壞作用。并結(jié)合熱變性和等電點(diǎn)沉淀技術(shù)，使SOD粗品得到進(jìn)一步提純和精制，與目前許多專利報(bào)道的硫酸銨鹽析法、丙酮分級沉淀法、離子交換樹脂或分子篩柱層析法等純化方法相比，具有生產(chǎn)周期短、成本低、更適合工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)的特點(diǎn)。
優(yōu)選的，在步驟(2)中，所述酸為鹽酸、硫酸或者磷酸中的一種，更優(yōu)選的酸為鹽酸。
酸用來調(diào)節(jié)溶液的pH值，本申請采用無機(jī)酸，不添加有機(jī)酸。
優(yōu)選的，在步驟(2)中，在所述升溫至60～65℃并保溫，然后降溫并過濾，得到濾液的過程中，具體包括以下步驟：升溫至60～65℃并保溫30～60分鐘后，降溫至45℃以下，然后進(jìn)行板框壓濾機(jī)壓濾，得到壓濾濾液。
降溫到45℃以下要迅速，并采用板框壓濾機(jī)壓濾，提高過濾的效率。
優(yōu)選的，在步驟(3)和步驟(4)中，所述堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀或者氫氧化鈣中的一種，更優(yōu)選為氫氧化鈉。
堿用來調(diào)節(jié)溶液的pH值，本申請采用無機(jī)堿。
優(yōu)選的，在步驟(3)中，在所述升溫至70～75℃并保溫，然后降溫并過濾，得到濾液的過程中，具體包括以下步驟：
升溫至70～75℃并保溫20～30分鐘后，降溫至35～45℃，然后進(jìn)行板框壓濾機(jī)壓濾，得到壓濾濾液。
優(yōu)選的，在步驟(4)中，所述超濾濃縮采用分子量為10000Da的超濾膜裝置超濾濃縮，濃縮至步驟(3)濾液體積的1/5～1/10。
優(yōu)選的，在步驟(4)中，所述升溫的過程升溫至45～50℃。
優(yōu)選的，在步驟(4)中，在所述滴加保護(hù)劑A并保溫，保溫后冷卻，離心收集上清液的過程中，具體包括以下步驟：
滴加SOD粗酶溶液質(zhì)量0.01％～0.03％的月桂酰氯并保溫1～2小時(shí)，保溫后冷卻至20℃以下，離心收集上清液；
更優(yōu)選的，所述離心的轉(zhuǎn)速為5000～10000r/min，時(shí)間為5～10分鐘。
優(yōu)選的，在步驟(5)中，所述保護(hù)劑B為海藻糖、乳糖和甘露醇中的一種或多種的組合；
更優(yōu)選的，所述保護(hù)劑B的添加量為步驟(4)中SOD酶液質(zhì)量的2.5～3％。
海藻糖又稱漏蘆糖、蕈糖等。是一種安全、可靠的天然糖類。海藻糖是由兩個(gè)葡萄糖分子以1,1-糖苷鍵構(gòu)成的非還原性糖，有3種異構(gòu)體即海藻糖(α,α)、異海藻糖(β,β)和新海藻糖(α,β)，并對多種生物活性物質(zhì)具有非特異性保護(hù)作用。
乳糖為白色的結(jié)晶性顆?；蚍勰?；無臭，味微甜。作為粉狀食品色素的吸附分散劑，降低色素濃度，便于使用并降低貯藏期間的變色。
甘露醇是山梨糖醇的同分異構(gòu)體，兩種醇類物質(zhì)的二號碳原子上羥基朝向不同，分子式是C6H14O6，分子量為182.17。易溶于水，為白色透明的固體，有類似蔗糖的甜味。具有防粘結(jié)作用。
如上所述的從豬血中提取超氧化物歧化酶的方法所制備的超氧化物歧化酶凍干粉。
超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase)簡稱SOD，是一種廣泛存在于自然界的生物酶，按所含金屬種類不同可分為銅鋅SOD、錳SOD和鐵SOD三種。
SOD能催化清除超氧陰離子自由基的反應(yīng)。自由基是具有不配對價(jià)電子的原子或原子團(tuán)，分子或離子構(gòu)成。在正常生理狀況下，生物體內(nèi)不斷地產(chǎn)生自由基，自由基的產(chǎn)生與清除處于平衡狀態(tài)。但在某些病理情況下，自由基產(chǎn)生量多時(shí)，就會(huì)對DNA、蛋白質(zhì)和脂類等生物大分子造成損傷,導(dǎo)致機(jī)體疾病的產(chǎn)生。由于自由基具有高度的化學(xué)活性,是人體生命活動(dòng)中多種生化反應(yīng)的中間代謝產(chǎn)物，自由基攻擊生物大分子導(dǎo)致組織損傷是許多疾病發(fā)生發(fā)展的根源。因而SOD在防御生物體免受超氧陰離子自由基損傷，抗輻射，抗腫瘤及延緩機(jī)體衰老等方面具有重要的作用。
SOD具有清除機(jī)體代謝過程中產(chǎn)生過量的超氧陰離子自由基的作用，可以延緩由于自由基侵害而出現(xiàn)的衰老現(xiàn)象，即延緩皮膚衰老和脂褐素沉淀的出現(xiàn)。衰老自由基學(xué)說認(rèn)為衰老是來自機(jī)體正常代謝過程中所產(chǎn)生的自由基隨機(jī)附帶破壞性的作用結(jié)果，自由基引起機(jī)體衰老的主要機(jī)制可概括為以下三方面：(1)減少生物大分子的交聯(lián)聚合和脂褐素的堆積；(2)減緩器官組織細(xì)胞的損傷與減少；(3)防止免疫能力的降低。
SOD可以提高人體對自由基損傷而誘發(fā)疾病的抵抗力自由基損傷而誘發(fā)疾病的抵抗力主要包括腫瘤、炎癥、肺氣腫、白內(nèi)障和自身免疫疾病等當(dāng)SOD作為功能性食品基料加入食品中時(shí)，可有效抑制許多疾病的發(fā)生、發(fā)展，對人體健康有極大作用。
SOD可以提高人體對自由基外界誘發(fā)因子的抵抗力，如煙霧、輻射、有毒化學(xué)品和有毒藥品等增強(qiáng)機(jī)體對外界環(huán)境的適應(yīng)能力。電離輻射引起生物體內(nèi)生成O2-、OH等自由基?！H對機(jī)體損傷作用大且其產(chǎn)生部位常為其作用部位，故遠(yuǎn)離·OH產(chǎn)生部位的生物大分子受損的機(jī)會(huì)小。O2-的損傷作用雖遠(yuǎn)小于·OH，但可從產(chǎn)生部位擴(kuò)散到其他部位，并在鐵離子鰲合劑存在下與H反應(yīng)生成·OH，從而造成DNA、生物膜等損傷。煙霧、有毒化學(xué)品和藥品也產(chǎn)生過量的O2-損傷機(jī)體，SOD同樣可以減少這些損傷。
SOD還可以清除機(jī)體疲勞，增強(qiáng)對超負(fù)荷大運(yùn)動(dòng)量的適應(yīng)力的作用。在超負(fù)荷大運(yùn)動(dòng)量過程中，機(jī)體中部分組織細(xì)胞會(huì)交替出現(xiàn)暫時(shí)性缺血及重灌流現(xiàn)象，引起缺血后重灌流損傷，加之乳酸量的增加，導(dǎo)致肌肉的疲勞與損傷。若在運(yùn)動(dòng)前供給SOD，則可保護(hù)肌肉避免出現(xiàn)上述現(xiàn)象。單次強(qiáng)烈運(yùn)動(dòng)可使體內(nèi)自由基水平明顯升高，過量的自由基作為引發(fā)劑攻擊細(xì)胞膜中的不飽和脂肪酸造成脂質(zhì)過氧化，引起膜流動(dòng)性下降，脆性增強(qiáng)。過氧化脂質(zhì)的一個(gè)特征是生成丙二醛，形成磷脂之間的交聯(lián)，也可與血紅蛋白形成褐色產(chǎn)物。機(jī)體經(jīng)劇烈運(yùn)動(dòng)后，ATP含量有所降低肌酸激酶活力暫時(shí)下降，AMP含量升高，在腺嘌呤轉(zhuǎn)氨酶的作用下促使IMP增高，然后在核苷酸酶和核苷酶的作用下，生成次黃嘌呤，運(yùn)動(dòng)后過量的次黃嘌呤在次黃嘌呤氧化酶的作用下，形成過量的O2-。因此，補(bǔ)充外源SOD能夠有效抑制運(yùn)動(dòng)引起的細(xì)胞損傷。
SOD的作用原理為，超氧陰離子(O2-)是生物體內(nèi)主要的自由基，很多情況下O2-對機(jī)體是有害的，它也是導(dǎo)致衰老的原因之一。而SOD是一類重要的清除氧自由基的抗氧化酶，它能催化O2-使其發(fā)生歧化反應(yīng)，生成O2和H2O2；H2O2又在過氧化氫酶(CAT)的作用下，生成無毒的H2O和O2，從而起到抗衰老作用。
本申請所制備的超氧化物歧化酶，活性高，單位酶活力達(dá)到4500U/mg干粉以上。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：
1)、本申請所提供的從豬血中提取超氧化物歧化酶的方法，以豬血為原料在提取、分離SOD過程中，不使用任何有機(jī)溶劑，避免了環(huán)境污染和對酶活性的毒害，并使生產(chǎn)工藝簡化。
2)、本申請所提供的從豬血中提取超氧化物歧化酶的方法，在SOD純化過程中，使用月桂酰氯作為保護(hù)劑，將SOD保護(hù)起來，以避免熱、酸、堿對SOD的破壞作用，并結(jié)合熱變性和等電點(diǎn)沉淀技術(shù)，使SOD粗品得到進(jìn)一步提純和精制，具有生產(chǎn)周期短、成本低、更適合工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)的特點(diǎn)。
3)、本申請所提供的從豬血中提取超氧化物歧化酶的方法所制備的超氧化物歧化酶，活性高，單位酶活力達(dá)到4500U/mg干粉以上。
具體實(shí)施方式
下面將結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下列實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
實(shí)施例1
(1)、采集經(jīng)過檢驗(yàn)合格的新鮮豬血1000L，在新鮮豬血中加入其質(zhì)量0.5％的食品級檸檬酸鈉做抗凝處理，采用管式離心機(jī)16300r/mim，連續(xù)分離離心后收集血紅細(xì)胞，即得到血球液420L，血漿液580L，加入與血球液等體積的水?dāng)嚢?0分鐘，得到840L溶血液；
(2)、用HCl調(diào)節(jié)步驟(1)中的溶血液的pH至5.2，快速升溫至60℃并保溫50分鐘，然后快速降溫至45℃以下，并經(jīng)板框壓濾機(jī)壓濾，得到濾液560L；
(3)、用NaOH調(diào)節(jié)步驟(2)中的濾液的pH值至6.2，快速升溫至70℃并保溫20分鐘，然后快速降溫至40℃以下，，經(jīng)板框壓濾機(jī)壓濾，得到濾液465L；
(4)、將步驟(3)得到的濾液經(jīng)截留分子量為10000Da的超濾膜裝置進(jìn)行超濾濃縮，濃縮至原體積的1/10，得到SOD粗酶溶液46L，將SOD粗酶溶液加熱升溫至45℃，用堿調(diào)整pH值至9.0，并滴加其質(zhì)量0.02％的月桂酰氯并保溫1小時(shí)后，快速冷卻至20℃以下，5000r/min離心10min，收集上清液，即得藍(lán)綠色的SOD酶液；
(5)、向步驟(5)中的SOD酶液加入其質(zhì)量2.5％的海藻糖，攪拌混勻后，冷凍干燥，得到55g淡藍(lán)綠色的SOD凍干粉。
實(shí)施例2
(1)、采集經(jīng)過檢驗(yàn)合格的新鮮豬血1000L，在新鮮豬血中加入其質(zhì)量0.6％的食品級檸檬酸鈉做抗凝處理，采用管式離心機(jī)16300r/mim，連續(xù)分離離心后收集血紅細(xì)胞，即得到血球液450L，血漿液550L，加入與血球液等體積的水?dāng)嚢?0分鐘，得到900L溶血液；
(2)、用HCl調(diào)節(jié)步驟(1)中的溶血液的pH至5.5，快速升溫至60℃并保溫40分鐘，然后快速降溫至45℃以下，并經(jīng)板框壓濾機(jī)壓濾，得到濾液610L；
(3)、用NaOH調(diào)節(jié)步驟(2)中的濾液的pH值至6.3，快速升溫至70℃并保溫25分鐘，然后快速降溫至45℃以下，經(jīng)板框壓濾機(jī)壓濾，得到濾液520L；
(4)、將步驟(3)得到的濾液經(jīng)截留分子量為10000Da的超濾膜裝置進(jìn)行超濾濃縮，濃縮至原體積的1/10，得到SOD粗酶溶液52L，將SOD粗酶溶液加熱升溫至45℃，用堿調(diào)整pH值至9.0，并滴加其質(zhì)量0.03％的月桂酰氯并保溫1小時(shí)后，快速冷卻至20℃以下，5000r/min離心10min，收集上清液，即得藍(lán)綠色的SOD酶液；
(5)、向步驟(5)中的SOD酶液加入其質(zhì)量2.5％的乳糖，攪拌混勻后，冷凍干燥，得到51g淡藍(lán)綠色的SOD凍干粉。
實(shí)施例3
(1)、采集經(jīng)過檢驗(yàn)合格的新鮮豬血2000L，在新鮮豬血中加入其質(zhì)量1.0％的食品級檸檬酸鈉做抗凝處理，采用管式離心機(jī)16300r/mim，連續(xù)分離離心后收集血紅細(xì)胞，即得到血球液930L，血漿液1070L，加入與血球液等體積的水?dāng)嚢?0分鐘，得到1860L溶血液；
(2)、用磷酸調(diào)節(jié)步驟(1)中的溶血液的pH至5.3，快速升溫至65℃并保溫50分鐘，然后快速降溫至45℃以下，并經(jīng)板框壓濾機(jī)壓濾，得到濾液1230L；
(3)、用KOH調(diào)節(jié)步驟(2)中的濾液的pH值至6.5，快速升溫至75℃并保溫30分鐘，然后快速降溫至45℃以下，經(jīng)板框壓濾機(jī)壓濾，得到濾液1050L；
(4)、將步驟(3)得到的濾液經(jīng)截留分子量為10000Da的超濾膜裝置進(jìn)行超濾濃縮，濃縮至原體積的1/10，得到SOD粗酶溶液100L，將SOD粗酶溶液加熱升溫至45℃，用堿調(diào)整pH值至9.0，并滴加其質(zhì)量0.02％的月桂酰氯并保溫1小時(shí)后，快速冷卻至20℃以下，5000r/min離心10min，收集上清液，即得藍(lán)綠色的SOD酶液；
(5)、向步驟(5)中的SOD酶液加入其質(zhì)量2.5％的乳糖，攪拌混勻后，冷凍干燥，得到107g淡藍(lán)綠色的SOD凍干粉。
實(shí)施例4
(1)、采集經(jīng)過檢驗(yàn)合格的新鮮豬血2000L，在新鮮豬血中加入其質(zhì)量0.7％的食品級檸檬酸鈉做抗凝處理，采用管式離心機(jī)16300r/mim，連續(xù)分離離心后收集血紅細(xì)胞，即得到血球液930L，血漿液1070L，加入與血球液等體積的水?dāng)嚢?0分鐘，得到1860L溶血液；
(2)、用磷酸調(diào)節(jié)步驟(1)中的溶血液的pH至5.5，快速升溫至65℃并保溫30分鐘，然后快速降溫至45℃以下，并經(jīng)板框壓濾機(jī)壓濾，得到濾液1130L；
(3)、用KOH調(diào)節(jié)步驟(2)中的濾液的pH值至6.5，快速升溫至70℃并保溫20分鐘，然后快速降溫至45℃以下，經(jīng)板框壓濾機(jī)壓濾，得到濾液1050L；
(4)、將步驟(3)得到的濾液經(jīng)截留分子量為10000Da的超濾膜裝置進(jìn)行超濾濃縮，濃縮至原體積的1/5，得到SOD粗酶溶液210L，將SOD粗酶溶液加熱升溫至50℃，用堿調(diào)整pH值至8.5，并滴加其質(zhì)量0.03％的月桂酰氯并保溫1小時(shí)后，快速冷卻至20℃以下，10000r/min離心5min，收集上清液，即得藍(lán)綠色的SOD酶液；
(5)、向步驟(5)中的SOD酶液加入其質(zhì)量3％的乳糖，攪拌混勻后，冷凍干燥，得到107g淡藍(lán)綠色的SOD凍干粉。
實(shí)驗(yàn)例1超氧化物歧化酶凍干粉酶活性測試
對本申請實(shí)施例1～4所提供的超氧化物歧化酶凍干粉進(jìn)行酶活性測試，并與申請?zhí)枮镃N201110228061.X的專利進(jìn)行對比。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示。
表1超氧化物歧化酶凍干粉進(jìn)行酶活性測試結(jié)果
實(shí)驗(yàn)證明，本申請所提供的從豬血中提取超氧化物歧化酶的方法所制備的超氧化物歧化酶，活性高，單位酶活力達(dá)到4500U/mg干粉以上。
綜上所述，本申請所提供的從豬血中提取超氧化物歧化酶的方法，以豬血為原料在提取、分離SOD過程中，不使用任何有機(jī)溶劑，避免了環(huán)境污染和對酶活性的毒害，并使生產(chǎn)工藝簡化。該方法，在SOD純化過程中，使用月桂酰氯作為保護(hù)劑，將SOD保護(hù)起來，以避免熱、酸、堿對SOD的破壞作用，并結(jié)合熱變性和等電點(diǎn)沉淀技術(shù)，使SOD粗品得到進(jìn)一步提純和精制，具有生產(chǎn)周期短、成本低、更適合工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)的特點(diǎn)。所制備的超氧化物歧化酶，活性高，單位酶活力達(dá)到4500U/mg干粉以上。
盡管已用具體實(shí)施例來說明和描述了本發(fā)明，然而應(yīng)意識(shí)到，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下可以作出許多其它的更改和修改。因此，這意味著在所附權(quán)利要求中包括屬于本發(fā)明范圍內(nèi)的所有這些變化和修改。