本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，涉及C20位差向異構(gòu)化鹽霉素及其?；苌镆约爸苽浞椒ê涂鼓[瘤用途，尤其是用于治療肝癌，結(jié)腸癌和肺癌的用途。
背景技術(shù)：
腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cell，CSC)是近年來發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新的潛在治療腫瘤的靶點(diǎn)，它們是存在于腫瘤組織中的一小部分具有干細(xì)胞性質(zhì)的細(xì)胞群體，具有自我更新的能力，可以形成不同分化程度的腫瘤細(xì)胞。現(xiàn)有的治療腫瘤的方法如化學(xué)治療和放射性治療多是針對(duì)一般腫瘤細(xì)胞，而非腫瘤干細(xì)胞，這就導(dǎo)致治療不徹底，仍會(huì)造成腫瘤的耐藥、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。
鹽霉素(salinomycin)是從白色鏈霉菌中分離得到的一種多聚醚類離子載體型抗生素，一直以來，鹽霉素鈉作為生長(zhǎng)促進(jìn)劑和抗球蟲劑用于家禽。2009年的研究發(fā)現(xiàn)，鹽霉素在體外能高選擇性乳腺癌干細(xì)胞，在小鼠體內(nèi)可以明顯抑制乳腺癌的生長(zhǎng)，其效力比臨床上使用的抗腫瘤藥物紫杉醇高100倍(Mertins，S.D.Cancer stem cells：a systems biology view of their role in prognosis and therapy.Anti-Cancer Drugs：2014，25(4)，353-367.)。鹽霉素還對(duì)其它腫瘤組織中的干細(xì)胞有很好的活性，如急性骨髓性白血病干細(xì)胞、肺癌干細(xì)胞、胃癌干細(xì)胞、骨肉瘤干細(xì)胞、大腸癌干細(xì)胞、鱗狀細(xì)胞癌干細(xì)胞、胰腺癌干細(xì)胞和前列腺癌干細(xì)胞等。
除此之外，鹽霉素還對(duì)分化的腫瘤細(xì)胞如白血病、乳腺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、食道癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肝癌、膀胱癌、前列腺癌和肺癌腫瘤細(xì)胞等具有很好的抑制作用，還對(duì)多藥耐藥，放療耐受以及細(xì)胞凋亡耐受的癌細(xì)胞具有很好的抑制活性，如慢性淋巴細(xì)胞白血病和人類轉(zhuǎn)移性乳腺癌(Huczynski，A.Salinomycin-A New Cancer Drug Candidate.Chem.Biol.Drug Des.，2012，79，235.)。
文獻(xiàn)報(bào)道鹽霉素具有抑制P-糖蛋白gp170、干擾Wnt信號(hào)級(jí)聯(lián)、增加DNA損傷和降低p21蛋白水平、克服ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白介導(dǎo)的多藥耐藥和凋亡耐受，增加氧化應(yīng)激以及提高活性氧水平等作用。其中鹽霉素通過抑制Wnt/β-Catenin信號(hào)通路從而誘導(dǎo)腫瘤干細(xì)胞凋亡被認(rèn)為是其發(fā)揮抗腫瘤活性的主要機(jī)理之一。
Wnt/β-Catenin通路在維持癌癥干細(xì)胞特性有重要作用，尤其Wnt/β-Catenin激活可使癌癥干細(xì)胞獲得放療及化療抗性。Lu等發(fā)現(xiàn)鹽霉素可以抑制白血病細(xì)胞Wnt/β-Catenin信號(hào)通路并闡明了機(jī)制：鹽霉素作用于Wnt/Fzd/LPR復(fù)合體，LPR(低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白)復(fù)合體活性被抑制，從而導(dǎo)致下游Wnt靶標(biāo)基因LEF1、Cyclin D1和Fibronectin表達(dá)下調(diào)，最終結(jié)果是癌細(xì)胞凋亡(Lu D，Choi MY，Yu J，Castro JE，Kipps TJ，Carson DA.Salinomycin inhibits Wnt signaling and selectively induces apoptosis in chronic lymphocytic leukemia cells.Proc Natl Acad Sci U S A.2011；108(32)：13253-7.)。
隨后，Tang等又發(fā)現(xiàn)骨母細(xì)胞瘤細(xì)胞U2OS、MG63及SAOS2中，鹽霉素可降低GSK3β磷酸化水平激活期活性，加速降解β-Catenin，從而使核內(nèi)β-Catenin減少，抑制癌關(guān)聯(lián)基因Cyclin D1表達(dá)。King等也發(fā)現(xiàn)鹽霉素通過抑制LPR，進(jìn)而抑制Wnt/β-Catenin通路，從而誘導(dǎo)三陰性乳腺癌腫瘤細(xì)胞凋亡19。Zhu等發(fā)現(xiàn)鹽霉素可誘導(dǎo)鼻咽癌NPC細(xì)胞CNE-1、CNE-2及CNE-2/DDP內(nèi)Wnt受體LRP蛋白水平，并促進(jìn)β-Catenin降解。Mao等發(fā)現(xiàn)激活wnt 1信號(hào)通路可以明顯加快胃癌腫瘤干細(xì)胞的增殖，而鹽霉素在抑制wnt 1信號(hào)通路中發(fā)揮了關(guān)鍵作用，繼而誘導(dǎo)胃癌腫瘤干細(xì)胞的調(diào)亡。Lu等最近發(fā)現(xiàn)鹽霉素在前列腺腫瘤干細(xì)胞中通過抑制LRP6的表達(dá)，不僅能抑制相關(guān)Wnt/β-catenin信號(hào)通路，還可以抑制mTORC1信號(hào)通路。以上研究結(jié)果說明LRP蛋白和Wnt/β-catenin通路是潛在的重要抗腫瘤藥物靶點(diǎn)。
這些研究結(jié)果表明，鹽霉素具有研發(fā)為一種新型的抗癌藥物的潛能。到目前為止，已經(jīng)開展鹽霉素治療三陰性乳腺癌、小兒高級(jí)別膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的臨床前試驗(yàn)。
然而，鹽霉素藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)欠佳，水溶性很差，酸性條件下不穩(wěn)定，生物利用率低，并且對(duì)哺乳動(dòng)物和人毒性較大，這給其臨床使用帶來了一定的困難。而對(duì)鹽霉素進(jìn)行構(gòu)效關(guān)系研究以及結(jié)構(gòu)優(yōu)化，就可能得到活性更好、毒性更低以及藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)更好的先導(dǎo)化合物。
目前，針對(duì)于腫瘤干細(xì)胞靶點(diǎn)的鹽霉素藥物化學(xué)研究才剛剛開始，已報(bào)道的研究主要在C1以及羥基的修飾上，Adam Huczynski小組合成了C1位酯化或者酰胺化取代的衍生物，體外抗腫瘤活性并未有顯著提高(Antoszczak，M.；Popiel，K.；J.；Wietrzyk，J.；Maj，E.；Janczak，J.；Michalska，G.；Brzezinski，B.，A.Synthesis，cytotoxicity and antibacterial activity of new esters of polyether antibiotic e salinomycin，Eur.J.Med.Chem.2014，76，435-444)；Daniel Strand小組合成了羥基酰化衍生物，其中發(fā)現(xiàn)了一些在體外比鹽霉素活性更好的化合物，活性提高了5倍(Borgstrom，B.；Huang，X.L.；Posta，M.；Hegardt，C.；Oredssonb S.and Strand.D.Synthetic modification of salinomycin：selective O-acylation and biological evaluation.Chem.Commun.，2013，49，9944.)。但總的來說，修飾策略比較簡(jiǎn)單，合成的衍生物不多，活性測(cè)試研究并不深入，構(gòu)效關(guān)系還不清楚。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
：
本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供一類C20位差向異構(gòu)化鹽霉素及其衍生物及其藥學(xué)上可接受的鹽、其制備方法、藥物組合物以及其在預(yù)防或/和治療腫瘤方面的應(yīng)用。
為解決本發(fā)明的技術(shù)問題，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
本發(fā)明技術(shù)方案的第一方面是提供了通式I所示的C20位差向異構(gòu)化鹽霉素及其酰化衍生物及其藥學(xué)上可接受的鹽，具體結(jié)構(gòu)如下：
其中，X選自H、Li、Na、K、Ca、Mg、Zn；
R1、R2和R3分別獨(dú)立地選自H、取代或未取代的飽和或不飽和C1-C14烷基?；?、含1-2個(gè)雜原子的取代或未取代飽和或不飽和的C1-C14烷基?；?、取代或未取代的飽和或不飽和C3-C8環(huán)烷基酰基、含1-2個(gè)雜原子的取代或未取代的飽和或不飽和C3-C8環(huán)烷基?；⑷〈蛭慈〈腃6-C12芳基甲?；?、取代或未取代的C5-C12雜環(huán)基甲酰基，所述取代基獨(dú)立選自C1-C3烷基、C1-C4烷氧基、羧基、氰基、鹵代C1-C3烷基、鹵素、羥基、硝基、C6-C12芳基、C6-C12雜環(huán)基，所述雜原子選自N、O、S。
其中優(yōu)選的化合物，R1、R3獨(dú)立的選自H，R2選自H、取代或未取代的飽和或不飽和C1-C6烷基?；⒑?-2個(gè)雜原子的取代或未取代飽和或不飽和的C1-C6烷基?；⑷〈蛭慈〈娘柡突虿伙柡虲3-C6環(huán)烷基?；?、含1-2個(gè)雜原子的取代或未取代的飽和或不飽和C3-C6環(huán)烷基?；?、取代或未取代的C6-C12芳基甲?；?、取代或未取代的C5-C12雜環(huán)基甲?；?，所述取代基獨(dú)立選自C1-C3烷基、C1-C4烷氧基、羧基、氰基、鹵代C1-C3烷基、鹵素、羥基、硝基、C6-C12芳基、C6-C12雜環(huán)基，所述雜原子選自N、O、S。
其中更優(yōu)選的化合物，R1、R3獨(dú)立的選自H，R2選自H、取代或未取代的飽和或不飽和C1-C4烷基?；?、含1-2個(gè)雜原子的取代或未取代飽和或不飽和的C1-C4烷基?；⑷〈蛭慈〈谋郊柞；?、取代或未取代的C5-C12雜環(huán)基甲?；?，所述取代基獨(dú)立選自C1-C3烷基、C1-C4烷氧基、羧基、氰基、鹵代C1-C3烷基、鹵素、羥基、硝基、C6-C12芳基、C6-C12雜環(huán)基，所述雜原子選自N、O、S。
以上所述的雜環(huán)基選自呋喃、噻吩、吡咯、噻唑、咪唑、四氫呋喃、四氫噻吩、四氫吡咯、四氫噻唑、吡啶、哌啶、吲哚。
最優(yōu)選的化合物如下：
本發(fā)明技術(shù)方案的第二方面提供了制備本發(fā)明第一方面所述化合物的方法，其包括以下步驟：
其中，X選自H、Li、Na、K、Ca、Mg、Zn；
R1、R2和R3分別獨(dú)立地選自H、取代或未取代的飽和或不飽和C1-C14烷基?；⒑?-2個(gè)雜原子的取代或未取代飽和或不飽和的C1-C14烷基?；⑷〈蛭慈〈娘柡突虿伙柡虲3-C8環(huán)烷基?；?、含1-2個(gè)雜原子的取代或未取代的飽和或不飽和C3-C8環(huán)烷基酰基、取代或未取代的C6-C12芳基甲酰基、取代或未取代的C5-C12雜環(huán)基甲酰基，所述取代基獨(dú)立選自C1-C3烷基、C1-C4烷氧基、羧基、氰基、鹵代C1-C3烷基、鹵素、羥基、硝基、C6-C12芳基、C6-C12雜環(huán)基，所述雜原子選自N、O、S。
其中優(yōu)選的化合物，R1、R3獨(dú)立的選自H，R2選自H、取代或未取代的飽和或不飽和C1-C6烷基酰基、含1-2個(gè)雜原子的取代或未取代飽和或不飽和的C1-C6烷基?；?、取代或未取代的飽和或不飽和C3-C6環(huán)烷基?；⒑?-2個(gè)雜原子的取代或未取代的飽和或不飽和C3-C6環(huán)烷基?；?、取代或未取代的C6-C12芳基甲酰基、取代或未取代的C5-C12雜環(huán)基甲?；?，所述取代基獨(dú)立選自C1-C3烷基、C1-C4烷氧基、羧基、氰基、鹵代C1-C3烷基、鹵素、羥基、硝基、C6-C12芳基、C6-C12雜環(huán)基，所述雜原子選自N、O、S。
其中更優(yōu)選的化合物，R1、R3獨(dú)立的選自H，R2選自H、取代或未取代的飽和或不飽和C1-C4烷基?；?、含1-2個(gè)雜原子的取代或未取代飽和或不飽和的C1-C4烷基?；⑷〈蛭慈〈谋郊柞；⑷〈蛭慈〈腃5-C12雜環(huán)基甲?；?，所述取代基獨(dú)立選自C1-C3烷基、C1-C4烷氧基、羧基、氰基、鹵代C1-C3烷基、鹵素、羥基、硝基、C6-C12芳基、C6-C12雜環(huán)基，所述雜原子選自N、O、S。
以上所述的雜環(huán)基選自呋喃、噻吩、吡咯、噻唑、咪唑、四氫呋喃、四氫噻吩、四氫吡咯、四氫噻唑、吡啶、哌啶、吲哚。
步驟一：化合物a與三甲基硅基乙醇反應(yīng)得到化合物b；
步驟二：化合物b通過Mitsunobu反應(yīng)得到化合物c，其中所用試劑分別為偶氮二甲酸二乙酯、偶氮二甲酸二異丙酯、偶氮二甲酸二叔丁酯和偶氮二甲酸二芐酯中的一種以及三苯基膦、三甲基膦、三丁基膦和三己基膦中的一種以及對(duì)硝基苯甲酸、鹵代苯甲酸、甲氧基取代苯甲酸中的一種；所用溶劑分別為四氫呋喃、吡啶、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、甲苯、二甲基亞砜、甲醇和乙醇等醇類溶劑等。反應(yīng)溫度-80℃-200℃；
步驟三：化合物c在堿的作用下脫去苯甲?；?，其中所用堿為碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸銫、碳酸鋰、氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銫、甲醇鈉、乙醇鈉、水合肼、DBU等，所用溶劑分別為四氫呋喃、吡啶、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、甲苯、二甲基亞砜、甲醇和乙醇等醇類溶劑等；
步驟四：化合物與酸酐或者酰氯反應(yīng)，得到中間體d，其中所用酸酐為乙酸酐、丙酸酐、丁酸酐、苯甲酸酐、取代苯甲酸酐或者乙酰氯、丙酰氯、丁酰氯、苯甲酰氯或者取代苯甲酰氯等，所用溶劑分別為四氫呋喃、吡啶、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、甲苯、二甲基亞砜、甲醇和乙醇等醇類溶劑等；
步驟五：化合物e在氟化試劑的作用下脫去酯基，其中氟化試劑包括氟化鉀、四丁基氟化銨、氟化銀等，所用溶劑分別為四氫呋喃、吡啶、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、甲苯、二甲基亞砜、甲醇和乙醇等醇類溶劑等；
步驟六：步驟五得到的產(chǎn)物再用堿處理，得到終產(chǎn)物，堿分別為碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸銫、碳酸鋰、氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銫、甲醇鈉、乙醇鈉等。
本發(fā)明技術(shù)方案的第三方面是提供了一種藥物組合物，其包含治療和/或預(yù)防有效量的本發(fā)明第一方面所述化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，以及任選的一種或多種藥學(xué)可接受的載體或賦形劑。
該藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備?？赏ㄟ^將本發(fā)明化合物與一種或多種藥學(xué)上可接受的固體或液體賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成適于人或動(dòng)物使用的任何劑型。本發(fā)明化合物在其藥物組合物中的含量通常為0.1-95重量％。
本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮膚、陰道、直腸等。
給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型或半固體劑型。液體劑型可以是溶液劑(包括真溶液和膠體溶液)、乳劑(包括o/w型、w/o型和復(fù)乳)、混懸劑、注射劑(包括水針劑、粉針劑和輸液)、滴眼劑、滴鼻劑、洗劑和搽劑等；固體劑型可以是片劑(包括普通片、腸溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡騰片、口腔崩解片)、膠囊劑(包括硬膠囊、軟膠囊、腸溶膠囊)、顆粒劑、散劑、微丸、滴丸、栓劑、膜劑、貼片、氣(粉)霧劑、噴霧劑等；半固體劑型可以是軟膏劑、凝膠劑、糊劑等。
本發(fā)明化合物可以制成普通制劑、也制成是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。
為了將本發(fā)明化合物制成片劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種賦形劑，包括稀釋劑、黏合劑、潤(rùn)濕劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、助溶劑。稀釋劑可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣、碳酸鈣等；濕潤(rùn)劑可以是水、乙醇、異丙醇等；粘合劑可以是淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纖維素、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、丙烯酸樹脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解劑可以是干淀粉、微晶纖維素、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉等；潤(rùn)滑劑和助溶劑可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸鹽、酒石酸、液體石蠟、聚乙二醇等。
還可以將片劑進(jìn)一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。
為了將給藥單元制成膠囊劑，可以將有效成分本發(fā)明化合物與稀釋劑、助溶劑混合，將混合物直接置于硬膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分本發(fā)明化合物先與稀釋劑、黏合劑、崩解劑制成顆粒或微丸，再置于硬膠囊或軟膠囊中。用于制備本發(fā)明化合物片劑的各稀釋劑、黏合劑、潤(rùn)濕劑、崩解劑、助溶劑品種也可用于制備本發(fā)明化合物的膠囊劑。
為將本發(fā)明化合物制成注射劑，可以用水、乙醇、異丙醇、丙二醇或它們的混合物作溶劑并加入適量本領(lǐng)域常用的增溶劑、助溶劑、pH調(diào)節(jié)劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑。增溶劑或助溶劑可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羥丙基-β-環(huán)糊精等；pH調(diào)節(jié)劑可以是磷酸鹽、醋酸鹽、鹽酸、氫氧化鈉等；滲透壓調(diào)節(jié)劑可以是氯化鈉、甘露醇、葡萄糖、磷酸鹽、醋酸鹽等。如制備凍干粉針劑，還可加入甘露醇、葡萄糖等作為支撐劑。
此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑或其它添加劑。
為達(dá)到用藥目的，增強(qiáng)治療效果，本發(fā)明的藥物或藥物組合物可用任何公知的給藥方法給藥。
本發(fā)明化合物藥物組合物的給藥劑量依照所要預(yù)防或治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，患者或動(dòng)物的個(gè)體情況，給藥途徑和劑型等可以有大范圍的變化。一般來講，本發(fā)明化合物的每天的合適劑量范圍為0.001-5mg/Kg體重。上述劑量可以一個(gè)劑量單位或分成幾個(gè)劑量單位給藥，這取決于醫(yī)生的臨床經(jīng)驗(yàn)以及包括運(yùn)用其它治療手段的給藥方案。
本發(fā)明的化合物或組合物可單獨(dú)服用，或與其他治療藥物或?qū)ΠY藥物合并使用。當(dāng)本發(fā)明的化合物與其它治療藥物存在協(xié)同作用時(shí)，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整它的劑量。
本發(fā)明技術(shù)方案的第四方面是提供第一方面所述化合物以及第三方面所述藥物組合物在制備預(yù)防或/治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。
其中所述的腫瘤包括但不限于：結(jié)腸癌、直腸癌、胰腺癌、胃癌、腎癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌(包括小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌)、前列腺癌、膀胱癌、上皮癌、食管癌、宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、腎上腺皮質(zhì)癌、基底細(xì)胞癌、腺癌、支氣管癌、肝瘤、膽管癌、絨膜癌、胚胎癌、白血病、黑色素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非-霍奇金氏淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤或原發(fā)性腦瘤。優(yōu)選的，所述腫瘤選自胃癌、肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌或肝癌。更優(yōu)選的，所述腫瘤選自肝癌、胃癌或結(jié)腸癌。特別優(yōu)選的，所述腫瘤選自肝癌。
有益技術(shù)效果
本研究?jī)?nèi)容提供了一類結(jié)構(gòu)新穎、藥理活性較強(qiáng)的鹽霉素衍生物，可用于癌癥及其相關(guān)病癥的預(yù)防和治療。本發(fā)明中所有化合物涉及到鹽霉素立體構(gòu)型的改變，均具有新穎的化學(xué)結(jié)構(gòu)，且本發(fā)明中大部分鹽霉素衍生物具有很強(qiáng)的抗腫瘤活性，比鹽霉素提高了10倍以上，最好的可以達(dá)到50倍，可能進(jìn)一步研發(fā)成為新型靶向腫瘤干細(xì)胞抗腫瘤藥物。
具體實(shí)施方式
通過下面的實(shí)施例可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的描述，然而，本發(fā)明的范圍并不限于下述實(shí)施例。本領(lǐng)域的專業(yè)人員能夠理解，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的前提下，可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種變化和修飾。本發(fā)明對(duì)試驗(yàn)中所使用到的材料以及試驗(yàn)方法進(jìn)行一般性和/或具體的描述。雖然為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的所使用的許多材料和操作方法是本領(lǐng)域公知的，但是本發(fā)明仍然在此作盡可能詳細(xì)描述。
對(duì)于以下全部實(shí)施例，可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)操作和純化方法。除非另有說明，所有溫度以℃(攝氏度)表示?；衔锏慕Y(jié)構(gòu)是通過核磁共振氫譜(1H NMR)和質(zhì)譜(MS)來確定的。核磁共振氫譜位移(δ)以百萬(wàn)分之一(ppm)的單位給出。核磁共振氫譜用Mercury-400型核磁共振儀測(cè)定，氘代氯仿(CDCl3)作溶劑，四甲基硅烷(TMS)為內(nèi)標(biāo)。
制備例
制備例1鹽霉素三甲基硅基乙基酯(中間體1)的制備
將2.4g(3.2mmol)鹽霉素溶于20ml二氯甲烷中，加入3ml(20.8mmol)三甲基硅基乙醇、1.8ml(10.1mmol)二異丙基乙胺(DIPEA)和1.0g(3.67mmol)N，N，N′，N′-四甲基氯甲脒六氟磷酸鹽(TCFH)，室溫下攪拌24h。分別用0.1M HCl水溶液10ml，飽和碳酸氫鈉水溶液10ml和水10ml洗，合并有機(jī)相，干燥，濃縮，通過柱層析分離(洗脫劑石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)，得到目標(biāo)產(chǎn)物1.36g，為無(wú)色油狀物，收率50％，回收未反應(yīng)的鹽霉素。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.06(d，J＝10.8Hz，1H)，5.97(d，J＝10.8Hz，1H)，4.41(dtd，J＝35.3，11.2，5.9Hz，2H)，4.09-3.94(m，3H)，3.93-3.77(m，2H)，3.68(dd，J＝10.4，7.2Hz，2H)，3.55(dd，J＝10.4，2.2Hz，1H)，3.17(td，J＝14.7，7.3Hz，1H)，3.08-2.91(m，2H)，2.70(d，J＝9.9Hz，1H)，2.38(dd，J＝21.9，9.4Hz，2H)，2.27-2.14(m，1H)，2.12-0.53(m，55H)，0.07(s，9H).
制備例2 20-epi-20-O-對(duì)硝基苯甲酰基鹽霉素三甲基硅基乙酯(中間體2)
將1.0g鹽霉素三甲基硅基乙酯溶于30ml四氫呋喃中，攪拌中加入3.0g三苯基膦和0.5g對(duì)硝基苯甲酸，然后將2ml偶氮二甲酸二異丙酯(DIAD)緩慢滴入，室溫下攪拌5h，TLC檢測(cè)原料反應(yīng)完。蒸干溶劑，通過柱層析分離(石油醚∶乙酸乙酯＝8∶1)，得到目標(biāo)產(chǎn)物0.93g，為無(wú)色油狀物，收率80％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.27(d，J＝8.2Hz，2H)，8.16(d，J＝8.2Hz，2H)，6.51(d，J＝10.6Hz，1H)，6.33(dd，J＝10.6，5.3Hz，1H)，5.22(d，J＝5.3Hz，1H)，4.55-4.32(m，1H)，4.12-3.99(m，1H)，3.76(d，J＝6.5Hz，1H)，3.69(d，J＝9.6Hz，1H)，3.59(d，J＝10.3Hz，1H)，3.49(d，J＝7.5Hz，1H)，3.24(dd，J＝15.1，7.7Hz，1H)，3.01(dd，J＝22.0，11.0Hz，1H)，2.75(d，J＝9.5Hz，1H)，2.54(s，1H)，2.13(dd，J＝16.0，9.0Hz，2H)，1.89(ddd，J＝64.8，25.5，13.4Hz，4H)，1.68-0.64(m，56H)，0.08(s，9H).
制備例3 20-epi-鹽霉素三甲基硅基乙酯的制備(中間體3)
將1.0g 20-epi-O-對(duì)硝基苯甲酰基鹽霉素三甲基硅基乙酯溶于20ml甲醇中，加入210mg碳酸鉀，室溫?cái)嚢?0分鐘，TLC檢測(cè)原料反應(yīng)完。蒸干溶劑，加入100ml二氯甲烷溶解殘留物，有機(jī)相再用20ml 0.1M NaOH水溶液、20ml水洗，干燥，蒸干溶劑得到C20-epi-鹽霉素三甲基硅基乙酯粗品，經(jīng)過柱層析純化得到0.6g。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.06(d，J＝10.8Hz，1H)，5.97(d，J＝10.8Hz，1H)，4.41(dtd，J＝35.3，11.2，5.9Hz，2H)，4.09-3.94(m，3H)，3.93-3.77(m，2H)，3.68(dd，J＝10.4，7.2Hz，2H)，3.55(dd，J＝10.4，2.2Hz，1H)，3.17(td，J＝14.7，7.3Hz，1H)，3.08-2.91(m，2H)，2.70(d，J＝9.9Hz，1H)，2.38(dd，J＝21.9，9.4Hz，2H)，2.27-2.14(m，1H)，2.12-0.53(m，55H)，0.07(s，9H).
實(shí)施例1 20-epi-鹽霉素鈉的制備(1)
將50mg中間體3溶于DMF中，再加入50mg氟化鉀，80℃反應(yīng)過夜，TLC檢測(cè)原料反應(yīng)完全。減壓蒸干溶劑，殘留物用乙酸乙酯溶解，用0.1M Na2CO3水溶液洗兩次，將有機(jī)相干燥，蒸干得到鈉鹽，抽干成無(wú)色泡沫狀固體30mg，收率62％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.31(dt，J＝21.7，7.7Hz，1H)，4.35(d，J＝4.5Hz，1H)，4.26(d，J＝10.1Hz，1H)，4.03(d，J＝2.4Hz，1H)，3.96(dd，J＝10.2，3.2Hz，1H)，3.84-3.69(m，3H)，3.58(d，J＝10.1Hz，1H)，3.43(d，J＝11.6Hz，1H)，2.86(dd，J＝10.5，8.4Hz，1H)，2.77-2.60(m，2H)，2.33-0.55(m，60H).
實(shí)施例2 20-epi-20-O-乙?；}霉素鈉的制備(2)
將50mg中間體3溶于2ml吡啶中，加入100μL乙酸酐和5mg DMAP，室溫下攪拌24時(shí)，TLC檢測(cè)原料反應(yīng)完，加入甲醇淬滅反應(yīng)。蒸干溶劑得到粗品，經(jīng)過柱層析純化，將其溶于DMF中，再加入50mg氟化鉀，80℃反應(yīng)過夜，TLC檢測(cè)原料反應(yīng)完全。減壓蒸干溶劑，殘留物用乙酸乙酯溶解，用0.1M Na2CO3水溶液洗兩次，將有機(jī)相干燥，蒸干得到鈉鹽，抽干成無(wú)色泡沫狀固體30mg，收率62％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.09-8.06(m，2H)，7.56(dd，J＝10.6，4.2Hz，1H)，7.44(t，J＝7.7Hz，2H)，6.09(dd，J＝9.9，6.0Hz，1H)，5.83(d，J＝9.9Hz，1H)，5.34(d，J＝6.0Hz，1H)，4.64-4.39(m，1H)，3.85(dd，J＝10.6，1.8Hz，1H)，3.74(dt，J＝16.7，8.2Hz，2H)，3.39(d，J＝10.7Hz，1H)，3.19-2.97(m，2H)，2.73(ddd，J＝9.3，4.1，1.9Hz，1H)，2.68-2.61(m，1H)，2.20-2.10(m，1H)，2.34-0.56(m，65H).
實(shí)施例3 20-epi-20-O-丙?；}霉素鈉的制備(3)
將50mg中間體3溶于2ml吡啶中，加入100μL丙酸酐和5mg DMAP，室溫下攪拌24時(shí)，TLC檢測(cè)原料反應(yīng)完全，加入甲醇淬滅反應(yīng)。蒸干溶劑得到粗品，經(jīng)過柱層析純化，將其溶于DMF中，再加入50mg氟化鉀，80℃反應(yīng)過夜，TLC檢測(cè)原料反應(yīng)完全。減壓蒸干溶劑，殘留物用乙酸乙酯溶解，用0.1M Na2CO3水溶液洗兩次，將有機(jī)相干燥，蒸干得到鈉鹽，抽干成無(wú)色泡沫狀固體46mg，收率94.5％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.39(d，J＝10.7Hz，1H)，6.31(dd，J＝10.6，5.6Hz，1H)，5.07(d，J＝5.6Hz，1H)，4.38(d，J＝6.5Hz，1H)，4.23(d，J＝10.3Hz，1H)，3.93(dd，J＝11.0，4.3Hz，1H)，3.72(d，J＝9.9Hz，1H)，3.60(d，J＝9.9Hz，1H)，3.39(d，J＝11.4Hz，1H)，2.87(td，J＝10.9，3.1Hz，1H)，2.75-2.60(m，2H)，2.34-2.24(m，2H)，2.15-0.58(m，65H).
實(shí)施例4 20-epi-20-O-異丁酰基鹽霉素鈉的制備(4)
將50mg中間體3溶于2ml吡啶中，加入100μL丙酸酐和120ul三乙胺，室溫下攪拌24時(shí)，TLC檢測(cè)原料反應(yīng)完，加入甲醇淬滅反應(yīng)。蒸干溶劑得到粗品，經(jīng)過柱層析純化，將其溶于DMF中，再加入50mg氟化鉀，80℃反應(yīng)過夜，TLC檢測(cè)原料反應(yīng)完全。減壓蒸干溶劑，殘留物用乙酸乙酯溶解，用0.1M Na2CO3水溶液洗兩次，將有機(jī)相干燥，蒸干得到鈉鹽，抽干成無(wú)色泡沫狀固體25mg，收率50％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.41(d，J＝10.7Hz，1H)，6.31(dd，J＝10.6，5.7Hz，1H)，5.07(d，J＝5.7Hz，1H)，4.40(q，J＝6.6Hz，1H)，4.25(d，J＝10.2Hz，1H)，3.94(dd，J＝11.0，4.5Hz，1H)，3.74(dd，J＝10.0，1.5Hz，1H)，3.62(d，J＝10.1Hz，1H)，3.40(dd，J＝11.8，1.6Hz，1H)，2.88(td，J＝10.9，3.1Hz，1H)，2.70(ddd，J＝17.6，10.6，4.8Hz，2H)，2.50(dt，J＝14.0，7.0Hz，1H)，2.15-0.63(m，69H).
實(shí)施例5 20-epi-20-O-苯甲?；}霉素鈉的制備(5)
將50mg中間體3溶于2ml吡啶中，加入100mg苯甲酸酐和5mg DMAP，室溫下攪拌24時(shí)，TLC檢測(cè)原料反應(yīng)完，加入甲醇淬滅反應(yīng)。蒸干溶劑，用乙酸乙酯溶解殘留物，再分別用0.1M NaOH水溶液、水洗，將有機(jī)相干燥濃縮得到粗品，經(jīng)過柱層析純化，將其溶于DMF中，再加入50mg氟化鉀，80℃反應(yīng)過夜，TLC檢測(cè)原料反應(yīng)完全。減壓蒸干溶劑，殘留物用乙酸乙酯溶解，用0.1MNa2CO3水溶液洗兩次，將有機(jī)相干燥，蒸干得到鈉鹽，抽干成無(wú)色泡沫狀固體30mg，收率58％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.96(d，J＝7.5Hz，1H)，7.52(t，J＝7.1Hz，1H)，7.39(t，J＝7.5Hz，1H)，6.40(q，J＝10.8Hz，1H)，5.27(d，J＝4.8Hz，1H)，4.38(d，J＝6.5Hz，1H)，4.22(d，J＝10.3Hz，1H)，4.11(dd，J＝14.3，7.1Hz，1H)，3.91(d，J＝8.3Hz，1H)，3.72(d，J＝9.9Hz，1H)，3.61(d，J＝9.8Hz，1H)，3.37(d，J＝11.6Hz，1H)，2.85(t，J＝10.5Hz，1H)，2.76-2.59(m，2H)，2.33-0.41(m，62H).
實(shí)施例6 20-epi-20-O-對(duì)氟苯甲?；}霉素鈉的制備(6)
將50mg中間體3溶于2ml二氯甲烷中，加入100μL對(duì)氟苯甲酰氯、150μL三乙胺和5mg DMAP，50℃攪拌12時(shí)，TLC檢測(cè)原料反應(yīng)完，加入甲醇淬滅反應(yīng)。蒸干溶劑，用乙酸乙酯溶解殘留物，再分別用0.1M NaOH水溶液、水洗，將有機(jī)相干燥濃縮得到粗品，經(jīng)過柱層析純化，將其溶于DMF中，再加入50mg氟化鉀，80℃反應(yīng)過夜，TLC檢測(cè)原料反應(yīng)完全。減壓蒸干溶劑，殘留物用乙酸乙酯溶解，用0.1M Na2CO3水溶液洗兩次，將有機(jī)相干燥，蒸干得到鈉鹽，抽干成無(wú)色泡沫狀固體40mg，收率76％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.05-7.85(m，2H)，7.05(t，J＝8.5Hz，2H)，6.38(dt，J＝10.6，8.3Hz，2H)，5.26(d，J＝5.3Hz，1H)，4.42-4.32(m，1H)，4.22(d，J＝10.3Hz，1H)，3.90(dd，J＝10.6，2.4Hz，1H)，3.70(d，J＝10.0Hz，1H)，3.60(d，J＝9.7Hz，0H)，3.37(d，J＝11.6Hz，1H)，2.85(dd，J＝10.5，9.3Hz，1H)，2.75-2.53(m，2H)，2.28-0.43(m，62H).
實(shí)施例7 20-epi-20-O-對(duì)硝基苯甲?；}霉素鈉的制備(7)
將25mg中間體2溶于DMF中，再加入25mg氟化鉀，80℃反應(yīng)過夜，TLC檢測(cè)原料反應(yīng)完全。減壓蒸干溶劑，殘留物用乙酸乙酯溶解，用0.1M Na2CO3水溶液洗兩次，將有機(jī)相干燥，蒸干得到鈉鹽，抽干成無(wú)色泡沫狀固體10mg，收率40％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.31(d，J＝8.6Hz，2H)，8.18(d，J＝8.7Hz，2H)，6.50(d，J＝10.5Hz，1H)，6.35(dd，J＝10.4，5.7Hz，1H)，5.31(d，J＝5.7Hz，1H)，4.22-4.16(m，1H)，4.06-3.92(m，2H)，3.86(dd，J＝12.4，5.6Hz，1H)，3.78-3.62(m，3H)，2.99-2.88(m，1H)，2.80(dd，J＝9.3，7.6Hz，1H)，2.67(d，J＝10.1Hz，1H)，2.39-0.44(m，62H).
實(shí)施例8 20-epi-20-O-對(duì)三氟甲基苯甲酰基鹽霉素鈉的制備(8)
將50mg中間體3溶于2ml二氯甲烷中，加入100μL對(duì)三氟甲基苯甲酰氯、150μL三乙胺和5mg DMAP，50℃攪拌12時(shí)，TLC檢測(cè)原料反應(yīng)完，加入甲醇淬滅反應(yīng)。蒸干溶劑，用乙酸乙酯溶解殘留物，再分別用0.1M NaOH水溶液、水洗，將有機(jī)相干燥濃縮得到粗品，經(jīng)過柱層析純化。將其溶于DMF中，再加入50mg氟化鉀，80℃反應(yīng)過夜，TLC檢測(cè)原料反應(yīng)完全。減壓蒸干溶劑，殘留物用乙酸乙酯溶解，用0.1M Na2CO3水溶液洗兩次，將有機(jī)相干燥，蒸干得到鈉鹽，抽干成無(wú)色泡沫狀固體40mg，收率72％。
1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ8.07(d，J＝8.1Hz，2H)，7.67(d，J＝8.2Hz，3H)，6.54-6.29(m，2H)，5.37(d，J＝5.4Hz，1H)，4.37(d，J＝7.1Hz，1H)，4.22(d，J＝10.4Hz，1H)，3.91(dd，J＝11.2，4.5Hz，1H)，3.65(dd，J＝39.6，10.1Hz，2H)，3.39(d，J＝11.8Hz，1H)，2.86(dt，J＝11.1，5.4Hz，1H)，2.78-2.56(m，2H)，2.31-0.58(m，69H).
實(shí)施例9 20-epi-20-O-呋喃-2-甲?；}霉素鈉的制備(9)
將50mg中間體3溶于2ml二氯甲烷中，加入100μL呋喃-2-甲酰氯、150μL三乙胺和5mg DMAP，50℃攪拌12時(shí)，TLC檢測(cè)原料反應(yīng)完，加入甲醇淬滅反應(yīng)。蒸干溶劑，用乙酸乙酯溶解殘留物，再分別用0.1M NaOH水溶液、水洗，將有機(jī)相干燥濃縮得到粗品。將其溶于DMF中，再加入50mg氟化鉀，80℃反應(yīng)過夜，TLC檢測(cè)原料反應(yīng)完全。減壓蒸干溶劑，殘留物用乙酸乙酯溶解，用0.1M Na2CO3水溶液洗兩次，將有機(jī)相干燥，蒸干得到鈉鹽，抽干成無(wú)色泡沫狀固體40mg，收率78.5％。
1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ7.59(d，J＝1.6Hz，1H)，7.09(d，J＝3.4Hz，1H)，6.53-6.45(m，2H)，6.40(t，J＝5.9Hz，1H)，5.33(d，J＝5.6Hz，1H)，4.40(d，J＝7.4Hz，1H)，4.25(d，J＝10.4Hz，1H)，3.95(dd，J＝11.5，4.5Hz，1H)，3.77-3.69(m，1H)，3.63(d，J＝11.1Hz，2H)，3.42(d，J＝11.8Hz，1H)，2.90(td，J＝11.0，3.3Hz，1H)，2.71(q，J＝10.4，9.4Hz，2H)，2.26-0.63(m，67H).
試驗(yàn)例部分
試驗(yàn)例1 20位差向異構(gòu)化鹽霉素以及?；a(chǎn)物的體外抗腫瘤活性試驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)方法
(1)選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的貼壁A549、Bel7402、HCT-8四種腫瘤細(xì)胞，分別用胰酶消化后，用10％小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液配成15000個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，接種在96孔培養(yǎng)板中，每孔接種190ul，37℃，5％CO2培養(yǎng)24h。
(2)實(shí)驗(yàn)組加樣品10ul，每孔終體積位200ul，用1640培養(yǎng)液補(bǔ)足。37℃，5％CO2培養(yǎng)3d。
(3)棄上清液，每孔加入100ul新鮮配制的0.5mg/mlMTT的無(wú)血清培養(yǎng)液，37℃繼續(xù)培養(yǎng)4h。小心棄上清，并加入150ul DMSO溶解MTT formazon沉淀，用微型超聲振蕩器混勻，在酶標(biāo)儀上測(cè)定波長(zhǎng)570nm處的光密度值。
(4)計(jì)算腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。
結(jié)果：測(cè)試化合物體外抗腫瘤活性IC50(μM)*
結(jié)果表明，20位差向異構(gòu)化鹽霉素以及酰化產(chǎn)物在體外具有顯著的抗腫瘤活性。其中，化合物3、4和6的藥理活性比母體化合物鹽霉素增強(qiáng)了10倍以上，其中化合物4藥理活性最好，對(duì)肝癌Bel7402腫瘤細(xì)胞的抑制作用比鹽霉素提高了50倍以上。