本發(fā)明關(guān)于一種多勝肽及其用途，尤其是關(guān)于一種可與胰島素受體結(jié)合且具有降血糖、降低糖化血紅素及/或減少糖尿病肝腎病變等功效的多勝肽及其用途。
背景技術(shù)：
：糖尿病為慢性的代謝異常的疾病，主要原因是由于體內(nèi)胰島素缺乏或功能不全，或者是因先天的基因加上后天環(huán)境造成周邊組織的胰島素抗性，以致于對(duì)糖類(lèi)的利用能力減低，甚至完全無(wú)法利用，進(jìn)而造成體內(nèi)血糖過(guò)高及蛋白質(zhì)與脂肪代謝的異常。此外，糖尿病會(huì)衍生慢性并發(fā)癥，包括：眼底病變、神經(jīng)病變(包含運(yùn)動(dòng)神經(jīng)、感覺(jué)神經(jīng)、及自主神經(jīng))、肝腎病變、糖尿病足、以及大血管病變(包含腦血管障礙、冠狀動(dòng)脈病變、及周邊血管阻塞)等。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(worldhealthorganization，who)的相關(guān)統(tǒng)計(jì)顯示，糖尿病患者的總數(shù)一直呈現(xiàn)驚人的成長(zhǎng)，從1985年到2000年，全球糖尿病患者的總數(shù)已由三千萬(wàn)人增加到超過(guò)一億七千一百萬(wàn)人。who更進(jìn)一步指出，預(yù)估到2030年時(shí)，全球罹患糖尿病的總?cè)丝趯⑼黄迫齼|四千六百萬(wàn)人。且根據(jù)統(tǒng)計(jì)，美國(guó)于糖尿病及其并發(fā)癥所耗的醫(yī)療保健費(fèi)用，由1997年的四百四十億美金至2007年攀升到一千七百四十億美金。由此可知，糖尿病是一影響全球人類(lèi)健康甚巨的疾病，是故，研發(fā)可有效調(diào)整血糖的物質(zhì)或藥劑乃是維系人類(lèi)健康的一重要課題。有關(guān)糖尿病的治療，自1922年以后，主要是利用胰島素來(lái)進(jìn)行，然而，胰島素的缺乏僅是胰臟功能異常的部分現(xiàn)象，并非糖尿病的完整病因。因此，僅使用胰島素來(lái)治療糖尿病，所達(dá)成的療效有限。除胰島素之外，根據(jù)藥物的作用機(jī)制，現(xiàn)有降血糖藥物可分為五大類(lèi)：一、磺酰尿素(sulfonylureas，su)類(lèi)，可促進(jìn)胰臟分泌胰島素及增加組織細(xì)胞的胰島素的接受器；二、安息香酸衍生物，可刺激胰島素的分泌；三、雙胍(biguanides)類(lèi)，可抑制胃腸吸收糖分、抑制肝臟制造糖分、及促進(jìn)組織利用糖分；四、α-葡萄糖酶抑制劑(α-glucosidaseinhibitors)，可抑制雙糖分解為腸道可吸收的單糖；五、胰島素敏感劑，可降低周邊組織與肝臟細(xì)胞對(duì)胰島素的阻抗性。然而，上述藥物各具不同副作用。舉例而言，磺酰尿素類(lèi)藥物會(huì)使病患發(fā)生皮疹及低血糖的現(xiàn)象；安息香酸衍生物會(huì)導(dǎo)致低血糖；雙胍類(lèi)藥物會(huì)造成胃腸不適及乳酸中毒；α-葡萄糖酶抑制劑會(huì)使病患胃腸不適；而胰島素敏感劑則會(huì)導(dǎo)致肝功能異常及肝細(xì)胞傷害。綜上所述，開(kāi)發(fā)具降血糖療效且低副作用的藥物是急迫需要的。與一般化合物相較，多勝肽因具較佳的生物可代謝性及生物可接受性，故較可符合低副作用的需求。是以，近數(shù)十年來(lái)，全世界已研究許多不同的多勝肽，并運(yùn)用于臨床治療中。例如中國(guó)臺(tái)灣專(zhuān)利第i283684號(hào)，公開(kāi)類(lèi)升糖素勝肽-1(glucagonlikepeptide-1)的類(lèi)似物具有降血糖的療效；美國(guó)專(zhuān)利第7,393,919號(hào)，則教導(dǎo)利用人類(lèi)胰島勝肽(humanproisletpeptide，hip)作為降血糖的藥物，其中，hip為胰臟炎相關(guān)蛋白前驅(qū)物(pancreatitis-associatedproteinprecursor)的活性片段。經(jīng)發(fā)現(xiàn)，具降血糖活性的多勝肽可自植物萃取物中取得。例如，美國(guó)專(zhuān)利第6,127,338號(hào)，公開(kāi)自苦瓜中取得具降血糖活性的多勝肽。根據(jù)該專(zhuān)利文獻(xiàn)，具有降血糖活性的多勝肽其氨基酸序列為ktnmkhmagaaaagavvg，且分子量小于10千道爾頓。盡管已有多種調(diào)節(jié)血糖的藥物，至今對(duì)于可成功地治療不同致病機(jī)制的糖尿病的單一或組合的治療方式或醫(yī)藥組合物，仍存在迫切的需求。本發(fā)明是針對(duì)上述需求所為的研究，提供一種新的多勝肽，其可與胰島素受體結(jié)合，并具有降血糖、降低糖化血紅素及減少糖尿病肝腎病變等功效，尤其可用于治療糖尿病。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的一目的在于提供一種多勝肽，其具有一選自下列群組的seqidno：1的片段氨基酸序列：seqidno：2、seqidno：3、seqidno：4、seqidno：5、及seqidno：6。本發(fā)明的另外一目的在于提供一種多勝肽，其具有一下列seqidno：7氨基酸序列或該序列進(jìn)行單一氨基酸的取代所衍生的同源性氨基酸序列：ivarpptig(seqidno：7)；其中，該同源性氨基酸序列具有選自由seqidno：8至seqidno：178所組成的群組中的任一氨基酸序列。本發(fā)明的又一目的在于提供一種多勝肽，其具有一選自下列群組的氨基酸序列：seqidno：179、seqidno：180、seqidno：181、seqidno：182、seqidno：183、seqidno：184、seqidno：185、seqidno：186、seqidno：187、及seqidno：188。本發(fā)明的再一目的在于提供一種多勝肽，其具有一下列氨基酸序列或該進(jìn)行單一氨基酸的取代所衍生的同源性氨基酸序列：rykyqx1x2yi(seqidno：189)；其中，x1為胱胺酸或色胺酸，x2為苯丙胺酸或色胺酸。本發(fā)明的再一目的在于提供一種分離的核酸分子，其編碼上述多勝肽。本發(fā)明的再一目的在于提供一種可與胰島素受體結(jié)合，并用于降血糖、降低糖化血紅素及減少糖尿病肝腎病變等的醫(yī)藥組合物，其包含上述多勝肽及一醫(yī)藥上可接受的載劑。本發(fā)明的詳細(xì)技術(shù)及較佳實(shí)施方式，將描述于以下內(nèi)容中，以供本發(fā)明所屬領(lǐng)域具通常知識(shí)者據(jù)以明了本發(fā)明的特征。附圖說(shuō)明圖1所示為irbp-1-68與胰島素受體的分子嵌合模式圖；圖2所示為irbp-1-68促進(jìn)胰島素受體自體磷酸化的免疫墨點(diǎn)分析圖；圖3所示為irbp-1-68促進(jìn)與胰島素信息路徑相關(guān)的基因的蛋白質(zhì)表現(xiàn)的西方墨點(diǎn)分析圖；以及圖4所示為irbp-1-68促進(jìn)3t3-l1脂肪細(xì)胞表現(xiàn)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4的免疫組織染色圖。具體實(shí)施方式以下將具體地描述根據(jù)本發(fā)明的部分具體實(shí)施例；惟，在不背離本發(fā)明的精神下，本發(fā)明還可以多種不同形式的實(shí)施例來(lái)實(shí)踐，不應(yīng)將本發(fā)明保護(hù)范圍解釋為限于說(shuō)明書(shū)所陳述的內(nèi)容。此外，除非文中有另外說(shuō)明，于本申請(qǐng)文件中所使用的“一”、“該”及類(lèi)似用語(yǔ)應(yīng)理解為包含單數(shù)及復(fù)數(shù)形式。本文所述的“同源性氨基酸序列”，除非特別說(shuō)明，否則是指于一多勝肽的氨基酸序列中，進(jìn)行單一或多個(gè)氨基酸的取代所衍生的氨基酸序列。此外，本文所述的“同源性多勝肽”，除非特別說(shuō)明，否則是指于一多勝肽的氨基酸序列中，進(jìn)行單一或多個(gè)氨基酸的取代所衍生的多勝肽同源物(homologues)。已知于細(xì)胞中，當(dāng)如胰島素的配體(ligand)與胰島素受體結(jié)合后，會(huì)引發(fā)胰島素受體自體磷酸化，進(jìn)而啟動(dòng)下游信息傳導(dǎo)反應(yīng)，引發(fā)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)譯作用，并使細(xì)胞啟動(dòng)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)效應(yīng)，從而降低細(xì)胞外或血液中的葡萄糖濃度，據(jù)以達(dá)成降血糖的效果。本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，將具有seqidno：1所示氨基酸序列(共68個(gè)氨基酸)的多勝肽分割成不同片段，或進(jìn)一步通過(guò)單點(diǎn)或多點(diǎn)突變技術(shù)，可提供各種多勝肽。這些多勝肽可與胰島素受體結(jié)合，且可降低血糖值、降低糖化血紅素及/或減少糖尿病肝腎病變。于不受理論限制下，本發(fā)明多勝肽通過(guò)與胰島素受體結(jié)合后，引發(fā)胰島素受體自體磷酸化的機(jī)制而達(dá)成上述功效。因此，本發(fā)明提供一種第一多勝肽，其是自seqidno：1所示氨基酸序列(共68個(gè)氨基酸)的多勝肽分割而得，具有一選自下列群組的seqidno：i的片段氨基酸序列：seqidno：2、seqidno：3、seqidno：4、seqidno：5、及seqidno：6。較佳地，該第一多勝肽的氨基酸序列為seqidno：2或seqidno：6。其中，seqidno：2為seqidno：i所示氨基酸序列的第1至19個(gè)氨基酸的片段氨基酸序列；seqidno：3為seqidno：1所示氨基酸序列的第17至35個(gè)氨基酸的片段氨基酸序列；seqidno：4為seqidno：1所示氨基酸序列的第34至52個(gè)氨基酸的片段氨基酸序列；seqidno：5為seqidno：1所示氨基酸序列的第45至68個(gè)氨基酸的片段氨基酸序列；而seqidno：6為seqidno：1所示氨基酸序列的第55至68個(gè)氨基酸的片段氨基酸序列。于下文中，將本發(fā)明多勝肽稱(chēng)為“胰島素受體結(jié)合蛋白(insulinreceptor-bindingprotein)”，或簡(jiǎn)稱(chēng)為“irbp”。例如，本發(fā)明具有seqidno：1所示68個(gè)氨基酸構(gòu)成的氨基酸序列的多勝肽，簡(jiǎn)稱(chēng)為“irbp-1-68”，而具有seqidno：2的氨基酸序列(即，seqidno：1中第1至19個(gè)氨基酸的片段氨基酸序列)的多勝肽則簡(jiǎn)稱(chēng)為“irbp-1-19”。本發(fā)明另外提供一種第二多勝肽，其具有下列seqidno：7氨基酸序列或具有seqidno：7的同源性氨基酸序列：ivarpptig(seqidno：7)；其中，該seqidno：7氨基酸序列為seqidno：1中第60至68個(gè)氨基酸的片段氨基酸序列(即，irbp-60-68)，自seqidno：1所示氨基酸序列分割而得；該同源性氨基酸序列則是通過(guò)以不同氨基酸對(duì)seqidno：7氨基酸序列施以單點(diǎn)突變技術(shù)而提供，且具有選自由seqidno：8至seqidno：178所組成的群組中的任一種氨基酸序列。較佳地，該第二多勝肽具有seqidno：7或seqidno：21的氨基酸序列。此外，本發(fā)明另外提供一種第三多勝肽，其分別以不同氨基酸對(duì)irbp-60-68中各個(gè)氨基酸進(jìn)行三至六點(diǎn)突變/取代(即，置換三至六個(gè)氨基酸)而獲得，具有一選自下列群組的氨基酸序列：seqidno：179、seqidno：180、seqidno：181、seqidno：182、seqidno：183、seqidno：184、seqidno：185、seqidno：186、seqidno：187、及seqidno：188。較佳地，該第三多勝肽具有一選自下列群組的氨基酸序列：seqidno：179、seqidno：184、seqidno：185、以及seqidno：186。本發(fā)明還提供一種第四多勝肽，其具有下列氨基酸序列或其進(jìn)行單一氨基酸的取代所衍生的同源性氨基酸序列：rykyqx1x2yi(seqidno：189)；其中，x1為胱胺酸或色胺酸，x2為苯丙胺酸或色胺酸。本發(fā)明的第四多勝肽是針對(duì)irbp-60-68中九個(gè)氨基酸都進(jìn)行置換而獲得，其也可與胰島素受體結(jié)合而降低血糖量。于本發(fā)明的一實(shí)施例中，該第四多勝肽具有seqidno：189的氨基酸序列，且較佳地，x1為胱胺酸，x2為苯丙胺酸或色胺酸。于本發(fā)明的另外一實(shí)施例中，該第四多勝肽具有rykyqcfyi(seqidno：191)的氨基酸序列(即，x1為胱胺酸，x2為苯丙胺酸)，或具有對(duì)seqidno：191的氨基酸序列進(jìn)行單點(diǎn)突變/取代所提供的同源性氨基酸序列，且該同源性氨基酸序列為seqidno：194至seqidno：364之一。本發(fā)明第一種至第四種多勝肽，都可與胰島素受體結(jié)合，并具降血糖活性，故可用于治療糖尿病(包括第一型糖尿病與第二型糖尿病)，且可改善糖尿病患者的后續(xù)病程(例如，降低糖化血紅素、治療由糖尿病所引起的肝腎病變等)。相較于臨床上用于治療糖尿病的胰島素及臺(tái)灣專(zhuān)利第i342781號(hào)與日本專(zhuān)利第4772884號(hào)中所公開(kāi)的irbp-1-68多勝肽，本發(fā)明多勝肽具有以下優(yōu)點(diǎn)：一、本發(fā)明多勝肽的氨基酸序列長(zhǎng)度較短且具優(yōu)異降血糖活性，故可降低制造降血糖多勝肽的成本，同時(shí)提供相似程度的藥效，從而減輕患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)；二、本發(fā)明多勝肽的氨基酸序列長(zhǎng)度較短而具較低分子量，其經(jīng)投予至糖尿病患者后較易于吸收，故可提升生體可用率(bioavailability)，而更有利于臨床治療；以及三、本發(fā)明多勝肽具不同長(zhǎng)度及氨基酸組成，故可依據(jù)病患的差異性(如性別、年齡、病狀、嚴(yán)重程度、及對(duì)藥物的反應(yīng)性等)而提供更具彈性的治療手段。本發(fā)明多勝肽可自植物萃取而得，或通過(guò)人工合成方式或通過(guò)生物體的基因重組方式取得，或者通過(guò)前述操作的結(jié)合而獲得。所謂人工合成方式，視所欲的多勝肽，通過(guò)人工方式使氨基酸依序連接，包括化學(xué)合成法或通過(guò)利用化學(xué)合成原理的勝肽合成儀所進(jìn)行的合成。人工合成法通常具有以下優(yōu)點(diǎn)：可方便地于合成過(guò)程中改變多勝肽的一級(jí)結(jié)構(gòu)、加入特殊的氨基酸、以及對(duì)多勝肽的末端進(jìn)行修飾等。可用以合成本發(fā)明多勝肽的化學(xué)合成法，可分為固相合成法及液相合成法。一般而言，液相合成法必須于完成每一氨基酸的連接后，進(jìn)行萃取操作。此外，由于萃取所得的多勝肽中間物通常為混合物，因此，尚須進(jìn)行層析純化步驟。換言之，以液相合成法進(jìn)行多勝肽的合成，通常須涉及繁瑣的萃取及層析純化步驟，才能得到高純度的產(chǎn)物。相對(duì)于此，固相合成法是于溶劑中，在固體聚合物顆粒(或聚合支撐物)上進(jìn)行勝肽的鍵結(jié)反應(yīng)。于此方法中，是先將所欲多勝肽的n端氨基酸共價(jià)鍵結(jié)至聚合物顆粒上，其后再通過(guò)專(zhuān)一性鍵結(jié)的方式將后續(xù)氨基酸依序連接上，最后合成該多勝肽。由于該聚合物顆粒并不溶于溶劑中，故僅需于反應(yīng)終了通過(guò)清洗及過(guò)濾操作，即可將該聚合物顆粒(以及連接在該聚合物顆粒上的所欲的多勝肽)與反應(yīng)試劑及副產(chǎn)物分開(kāi)。此即，相較于液相合成法，固相合成法只需于整個(gè)合成過(guò)程中的最終步驟進(jìn)行純化操作，不僅相對(duì)方便，且可大幅縮短反應(yīng)時(shí)間，于長(zhǎng)鏈多勝肽的合成上也較具優(yōu)勢(shì)。目前，業(yè)已開(kāi)發(fā)出多種可自動(dòng)合成多勝肽的裝置，例如：固相勝肽合成儀、液相勝肽合成儀、及微波勝肽合成儀等，都可視需要選用以合成本發(fā)明多勝肽。也可以“基因重組”方式合成本發(fā)明多勝肽。于此，是通過(guò)將包含編碼該多勝肽的核酸的表達(dá)載體轉(zhuǎn)形至宿主細(xì)胞中，并使該核酸表達(dá)的方式制得。其中，該宿主細(xì)胞可為大腸桿菌或酵母菌，且該表達(dá)載體可選自市面上常見(jiàn)的載體，例如：pqstrep2、pqstrep4、pgex-6p1、或pqtev等。此外，也可自植物萃取液中取得本發(fā)明多勝肽。經(jīng)發(fā)現(xiàn)，可自葫蘆科植物萃取液中得到可調(diào)整血糖的多種多勝肽，例如：苦瓜、山苦瓜、胡瓜、南瓜、葫蘆、西瓜、栝蔞仁、天花粉、及其組合。其中，先前研究已以蛋白質(zhì)電泳證實(shí)，葫蘆科植物的萃取液中所含可調(diào)整血糖的多勝肽，屬同源性蛋白質(zhì)。然而，本發(fā)明的多勝肽也可自葫蘆科植物以外的植物取得，例如：百日菊(zinniaelegans)、苜蓿(medicagotruncatula)、葡萄、葡萄柚、迷迭香(sambucusnigra)、阿拉伯芥(arabidopsisthaliana)、稻、及其組合。此即，本發(fā)明多勝肽的來(lái)源并不局限于葫蘆科植物。以苦瓜為例，可先以如下步驟取得植物萃取液，再自萃取液純化(例如：以蛋白質(zhì)電泳純化法或?qū)游黾兓襟E)取得本發(fā)明多勝肽。首先，于溶劑中將苦瓜離解(maceration)以得到一粗懸浮液，該溶劑可為磷酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、或水等，且可利用攪拌器或研磨器以離解苦瓜。接著，以12,000轉(zhuǎn)數(shù)/分鐘(revolutionperminute，rpm)至15,000轉(zhuǎn)數(shù)/分鐘的離心轉(zhuǎn)速，將粗懸浮液中的顆粒自液相中移除，并以孔徑為0.1微米至0.5微米的濾材來(lái)過(guò)濾上清液。然后，將所得的濾液通過(guò)30千道爾頓的濾膜，并取其濾液部分，即可獲得含有本發(fā)明的多勝肽的水溶性苦瓜萃取液。其中，該濾膜可選自現(xiàn)有濾材產(chǎn)品，例如：amicon濾膜及millipore濾膜等。其后，再以如蛋白質(zhì)電泳或?qū)游黾兓椒?，以分離出所欲的多勝肽，或者，可進(jìn)一步視需要以特定蛋白酶分解所得的多勝肽，以切割出所欲的多勝肽片段。于此，該蛋白酶并無(wú)特殊限制，其可為例如(但不限于)絲氨酸蛋白酶、蘇氨酸蛋白酶、半胱胺酸蛋白酶等。最后，可視需要添加防腐劑(例如：苯甲酸鈉或水楊酸等)，并于-80℃下保存該多勝肽。有關(guān)上述通過(guò)蛋白質(zhì)電泳分離純化法以取得本發(fā)明多勝肽的操作，包含可利用如二維凝膠電泳分離出蛋白質(zhì)的方式。首先，將上述的水溶性苦瓜萃取液進(jìn)行蛋白質(zhì)沉淀，將收集的蛋白質(zhì)沉淀物進(jìn)行一維等電點(diǎn)聚焦(iso-electricfocusing，ief)。第二天，配置十二基硫酸鈉-聚丙烯酰胺膠體電泳(sodiumdodecylsulfate-polyacrylamidegelelectrophoresis，sds-page)的膠體，再將該膠體注入一膠槽中，并以乙醇?jí)浩皆撃z體。20分鐘后，將乙醇倒出。接著，將經(jīng)等電點(diǎn)聚焦的膠條與蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(marker)樣品分別注入樣品槽，并以110伏特的電流進(jìn)行電泳。待染劑移動(dòng)至該膠體底部后，結(jié)束電泳，并將膠體取出并予以染色。接著，以清洗液(washbuffer)清洗染色劑，并以褪染劑(destainbuffer)進(jìn)行脫色。最后，將該膠體上的等電點(diǎn)為9至10且分子量約為7千道爾頓至1萬(wàn)道爾頓的蛋白質(zhì)色帶切出后，即可取得本發(fā)明多勝肽。此外，也可以上述手段的組合來(lái)取得本發(fā)明多勝肽。舉例而言，可以基因重組或植物萃取的方式取得所欲多勝肽的片段，或以人工合成的方式得到完整的多勝肽?；诒景l(fā)明多勝肽的降血糖活性，本發(fā)明另外提供一種可結(jié)合到胰島素受體，且具有降血糖、降低糖化血紅素及/或減少糖尿病肝腎病變等功效的醫(yī)藥組合物，其包含有效量的本發(fā)明多勝肽及一醫(yī)藥上可接受的載劑。該醫(yī)藥組合物可使用于獸醫(yī)與人類(lèi)醫(yī)藥上，且可呈任何形式，并以任何合宜的方式施用。舉例言之，但不以此為限，為避免多勝肽被消化道中的酶分解，可選用皮下或靜脈注射方式進(jìn)行本發(fā)明醫(yī)藥組合物的投藥，以通過(guò)血液直接將藥物帶至釋放處。當(dāng)以口服的方式進(jìn)行投藥時(shí)，則可于醫(yī)藥組合物中包含吸收延遲劑，以克服胃中強(qiáng)酸及小腸前半部的酶的破壞，以將藥物順利帶至釋放處。以制備適于皮下或靜脈注射的藥劑形式為例，可于本發(fā)明醫(yī)藥組合物中含有一或多種例如等張溶液、鹽類(lèi)緩沖液(如磷酸鹽緩沖液或檸檬酸鹽緩沖液)、增溶劑、乳化劑、以及其他載劑等成分，以制成如靜脈輸注液、乳劑靜脈輸注液、干粉注射劑、懸液注射劑、或干粉懸液注射劑等。至于制備適于口服投藥的藥劑形式，則可于本發(fā)明醫(yī)藥組合物中含有不會(huì)對(duì)本發(fā)明的多勝肽活性產(chǎn)生不利影響的醫(yī)藥可接受載劑，例如：溶劑、油性溶劑、稀釋劑、安定劑、吸收延遲劑、崩散劑、乳化劑、抗氧化劑、黏合劑、潤(rùn)滑劑、吸濕劑等?？衫萌魏魏弦说姆椒?，將該組合物制成適于口服投藥的形式，例如：錠劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、流浸膏劑、溶液劑、糖漿劑、懸液劑、乳劑、及酊劑等等。本發(fā)明醫(yī)藥組合物可視需要另外含有調(diào)味劑、調(diào)色劑、著色劑等添加劑，以提高所得藥劑服用時(shí)的口適感及視覺(jué)感受；另外可添加合理用量的保存劑、防腐劑、抗菌劑、抗真菌劑等，以改善所得藥劑的儲(chǔ)存性。視需要地，可于本發(fā)明醫(yī)藥組合物中并含一種或多種其他活性成分，進(jìn)一步加強(qiáng)本發(fā)明醫(yī)藥組合物的功效或增加制劑配方的運(yùn)用靈活性與調(diào)配度。舉例言之，可于本發(fā)明醫(yī)藥組合物含有一種或多種如下活性成分：胰島素、α-葡萄糖酶抑制劑、胰島素敏感劑、以及其他活性成分等，只要該其他活性成分對(duì)本發(fā)明多勝肽的效益沒(méi)有不利的影響即可。當(dāng)使用含本發(fā)明多勝肽的醫(yī)藥組合物以降低人類(lèi)或動(dòng)物血糖時(shí)，可以一日一次、一日多次、或數(shù)日一次等不同投藥頻率施用本發(fā)明醫(yī)藥組合物，視投予對(duì)象的需求和投予的方式而異。舉例言之，當(dāng)以口服投藥于人體以治療糖尿病時(shí)，藥劑的用量，以本發(fā)明的多勝肽的用量計(jì)，可為每天約10毫克/千克體重至約50毫克/千克體重；若以注射的方式投藥，則其調(diào)整血糖的有效劑量可為每日注射約1奈莫耳/千克體重至約5奈莫耳/千克體重。其中，該單位“毫克/千克體重”或“奈莫耳/千克體重”是指每千克體重所需的投藥量。但是，對(duì)于急性病患而言，其用量可視實(shí)際需要而酌增至數(shù)倍或數(shù)十倍。本發(fā)明另外提供一種分離的核酸分子，其編碼本發(fā)明的多勝肽。其中，該核酸分子可以現(xiàn)有的選殖方式獲得。舉例言之，可自植物細(xì)胞中取得基因組去氧核糖核酸(genomicdeoxyribonucleicacid)后，以其作為聚合酶連鎖反應(yīng)(polymerasechainreaction，pcr)的模板，并于pcr反應(yīng)結(jié)束后，純化所得的產(chǎn)物，以提供本發(fā)明的分離的核酸分子。茲以下列具體實(shí)施例以進(jìn)一步例示說(shuō)明本發(fā)明。其中，這些實(shí)施例僅提供作為說(shuō)明，而非用以限制本發(fā)明的范疇。[實(shí)施例][制備實(shí)施例](a)多勝肽的制備：以固相合成法制備以下實(shí)施例的多勝肽，這些多勝肽具有如后附序列表所示的seqidno：1至seqidno：364的氨基酸序列。(b)實(shí)驗(yàn)小鼠：使用balb/c(血糖代謝正常)、stz-induced(鏈佐霉素誘發(fā)第一型糖尿病)、及ob/ob(自發(fā)性第二型糖尿病)的三種品系的小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，這些小鼠均由國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(nationallaboratoryanimalcenter)所提供。[實(shí)施例1]分子嵌合分析以下列方法進(jìn)行分子嵌合(moleculardocking)分析：由proteindatabank網(wǎng)站獲得胰島素受體(pdb碼為2dtg)與胰島素受體結(jié)合蛋白(即，具seqidno：1所示的氨基酸序列的irbp-1-68多勝肽，pdb碼為1vbw)的pdb檔案，接著使用分子嵌合軟體(autodock，3.05及4.0版本)與基于網(wǎng)格的嵌合程式(grid-baseddockingprograms)進(jìn)行分子嵌合分析，評(píng)估配體(即，irbp-1-68多勝肽)與胰島素受體間的分子間交互作用能量(包括范德華力、排斥能、氫鍵交互作用能量、庫(kù)倫靜電能量、內(nèi)部空間能量(stericenergy))。結(jié)果顯示于圖1，此試驗(yàn)結(jié)果顯示irbp-1-68(圖1的中央塊狀部分)可結(jié)合至胰島素受體。[實(shí)施例2]胰島素受體自體磷酸化試驗(yàn)已知于細(xì)胞中，如胰島素的配體與胰島素受體結(jié)合后，會(huì)引發(fā)胰島素受體自體磷酸化，進(jìn)而啟動(dòng)下游信息傳導(dǎo)反應(yīng)，引發(fā)相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)譯作用，接著使細(xì)胞啟動(dòng)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)效應(yīng)，而降低細(xì)胞外或血液中的葡萄糖濃度。因此，本實(shí)施例以胰島素受體自體磷酸化試驗(yàn)來(lái)分析irbp-1-68多勝肽是否可引發(fā)胰島素受體自體磷酸化，以觀察其是否與胰島素受體結(jié)合。試驗(yàn)方法如下：將人類(lèi)淋巴癌細(xì)胞株(im-9)在無(wú)血清的培養(yǎng)液(rpmi培養(yǎng)液，包含0.1％小牛血清蛋白)中培養(yǎng)16小時(shí)，接著在37℃下以irbp-1-68刺激15分鐘，以冰冷pbs緩沖液沖洗后純化約250毫克的總蛋白，再以抗胰島素受體的多株抗體(c-19)進(jìn)行免疫沉淀。接著在4℃下以蛋白質(zhì)g洋菜膠磁珠(gibco-brl，gaithersburg，md)吸附所得蛋白質(zhì)2小時(shí)后，以sds-page電泳分析并轉(zhuǎn)漬至immobilon-p轉(zhuǎn)印膜后，在4℃下以抗磷酸酪氨酸抗體(4g10)孵育(incubate)至隔天，進(jìn)行免疫墨點(diǎn)(immunoblotting)分析，結(jié)果顯示于圖2。于圖2中，免疫墨點(diǎn)分析的條帶越寬，表示所觀察的蛋白質(zhì)的量愈高；此外，圖2中所示的磷酸化胰島素受體與胰島素受體比率隨著irbp-1-68濃度的增加而變大。如圖2所示，irbp-1-68可引發(fā)胰島素受體的自體磷酸化，說(shuō)明其可結(jié)合至胰島素受體。[實(shí)施例3]受體結(jié)合試驗(yàn)：irbp-1-68進(jìn)行全細(xì)胞受體結(jié)合試驗(yàn)，以進(jìn)一步確認(rèn)irbp-1-68是否可與胰島素受體結(jié)合。首先，將1.2×106個(gè)人類(lèi)淋巴癌細(xì)胞株(im-9)與溶于1毫升pbs緩沖液(含有0.1％小牛血清蛋白)的胰島素(對(duì)照組)或irbp-1-68的多勝肽于室溫下混合培養(yǎng)15分鐘，以進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性試驗(yàn)。接著添加經(jīng)碘-125(125i)標(biāo)定的胰島素(20,000每分鐘計(jì)數(shù)(cpm)/毫升)，于16℃下培養(yǎng)90分鐘后，將細(xì)胞冷卻并于4℃下以2000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心10分鐘，取沉淀物以冰冷清洗緩沖液(10毫莫耳濃度/公升tris及150毫莫耳濃度/公升nacl，ph7.6)清洗二次后，以伽瑪計(jì)數(shù)器(gammacounter)計(jì)數(shù)。每一多勝肽至少重復(fù)進(jìn)行三次上述試驗(yàn)。多勝肽促進(jìn)碘-125結(jié)合至胰島素受體的濃度(ec50)顯示于表1，其中，ec50代表可促進(jìn)50％的經(jīng)碘-125標(biāo)定的胰島素與胰島素受體結(jié)合的多勝肽的濃度，ec50值愈低，則促進(jìn)結(jié)合的效果愈強(qiáng)。表1如表1所示，胰島素與irbp-1-68都可有效促進(jìn)經(jīng)碘-125標(biāo)定的胰島素結(jié)合至胰島素受體，其中，irbp-1-68的ec50值為4.15±1.77奈莫耳濃度，較胰島素為低，顯示irbp-1-68確實(shí)可與胰島素受體結(jié)合，且具有更優(yōu)異的促進(jìn)胰島素結(jié)合至胰島素受體的效果。[實(shí)施例4]葡萄糖攝取試驗(yàn)由于脂肪組織可自血液中攝取葡萄糖，使血中糖量降低，此為血糖調(diào)控的關(guān)鍵步驟，因此，于此實(shí)施例中進(jìn)一步以3t3-l1脂肪細(xì)胞作為試驗(yàn)平臺(tái)，以進(jìn)行葡萄糖攝取試驗(yàn)。以24孔培養(yǎng)盤(pán)培養(yǎng)3t3-l1脂肪細(xì)胞，經(jīng)過(guò)4.5小時(shí)的饑餓期間(starvationperiod)后，以不含胰島素(負(fù)向控制組)、含1奈莫耳濃度胰島素(控制組)、及含1奈莫耳濃度胰島素與irbp-1-68(實(shí)驗(yàn)組)的krb緩沖液(krebsringerbicarbonatebuffer；118毫莫耳濃度nacl、4.7毫莫耳濃度kcl、1.3毫莫耳濃度cacl2、1.2毫莫耳濃度mgso4、1.2毫莫耳濃度na2hpo4、2％小牛血清蛋白、0.5毫莫耳濃度葡萄糖、25毫莫耳濃度nahco3，ph7.4)孵育30分鐘，接著添加[3h]-2-去氧-d-葡萄糖(0.1微居里/試驗(yàn))孵育10分鐘，以冰冷pbs清洗細(xì)胞三次并回溶于0.1％sds，以閃爍計(jì)數(shù)器(scintillationcounter)分析細(xì)胞內(nèi)的放射性，結(jié)果顯示于表2。表2名稱(chēng)比率胰島素2.9irbp-1-681.79±0.49表2中胰島素的放射比率參照l(shuí)ifesciences2004；75：2653-64，該文獻(xiàn)全文并于此處以供參考。如表2所示，胰島素與irbp-1-68都可有效促進(jìn)3t3-l1脂肪細(xì)胞進(jìn)行葡萄糖攝取。此試驗(yàn)說(shuō)明irbp-1-68可通過(guò)促進(jìn)脂肪細(xì)胞攝取葡萄糖而達(dá)成降血糖功效。[實(shí)施例5]微陣列晶片分析以微陣列晶片進(jìn)行全基因體掃描，探討irbp-1-68促進(jìn)3t3-l1脂肪細(xì)胞進(jìn)行葡萄糖攝取的可能機(jī)轉(zhuǎn)。使用rneasyminikit(qiagen，valencia，加州，美國(guó))萃取經(jīng)irbp-1-68處理或未經(jīng)處理的3t3-l1脂肪細(xì)胞的總rnas，并以agilent2100bioanalyzer(agilenttechnologies，santaclara，加州，美國(guó))進(jìn)行評(píng)估，選擇rna完整度數(shù)值大于8.0的rna樣品，接著進(jìn)行微陣列晶片分析(可參見(jiàn)cheng，w.y.等人，2009，comprehensiveevaluationofanovelnuclearfactor-κbinhibitor，quinoclamine，bytranscriptomicanalysis.brit.j.pharmacol.157(5)：746-756；cheng，h.m.等人，2010，applicationofbioactivitydatabaseofchineseherbalmedicineonthetherapeuticprediction，drugdevelopment，andsafetyevaluation.j.ethnopharmacol.132(2)：429-437；以及hsiang，c.y.等人，2009，nuclearfactor-κbbioluminescenceimaging-guidedtranscriptomicanalysisfortheassessmentofhoist-biomaterialinteractioninvivo.biomaterials30(17)：3042-3049，這些文獻(xiàn)全文并于此處以供參考)，統(tǒng)計(jì)出表現(xiàn)量增加或減少達(dá)2倍以上的與胰島素信息路徑或脂肪細(xì)胞因子(adipocytokine)信息路徑相關(guān)的基因的數(shù)量，結(jié)果顯示于表3。表3如表3所示，irbp-1-68在3t3-l1脂肪細(xì)胞中可通過(guò)調(diào)控與胰島素信息路徑相關(guān)的基因的表達(dá)量，而促進(jìn)脂肪細(xì)胞攝取葡萄糖，進(jìn)而達(dá)成降血糖功效。[實(shí)施例6]西方墨點(diǎn)分析利用西方墨點(diǎn)法分析與胰島素信息路徑相關(guān)的基因的蛋白質(zhì)表現(xiàn)量。在37℃下培養(yǎng)3t3-l1脂肪細(xì)胞24小時(shí)，以irbp-1-68處理16小時(shí)，收集并以冰冷pbs清洗細(xì)胞，以300微升樣品緩沖液(62.5毫莫耳濃度tris-hcl，ph6.8、2％sds、10％甘油、50毫莫耳濃度二硫蘇糖醇、0.1％溴酚藍(lán))打破細(xì)胞，并以bradford方法(bio-rad，hercules，加州，美國(guó))測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。取10微克蛋白質(zhì)進(jìn)行sds-page電泳分析，并轉(zhuǎn)漬至硝化纖維膜(amershampharmaciabiotech公司，piscataway，紐澤西，美國(guó))，以封鎖緩沖液(20毫莫耳濃度tris-hcl，ph7.6、140毫莫耳濃度nacl、0.1％tween-20、5％脫脂牛奶粉末)進(jìn)行封鎖，并與抗-akt、抗-磷酸化-akt(ser473)、抗-磷酸化-akt(thr308)、抗-磷酸化-第10號(hào)染色體同源刪除磷酸酶及張力蛋白(phosphataseandtensinhomologdeletedonchromosometen，pten)(ser380)、抗-磷酸化-糖原合成酶激酶-3β(glycogensynthasekinase-3β，gsk-3β)(ser9)、抗-磷酸化-raf(ser259)、抗-磷酸化-磷酸肌醇依賴(lài)性激酶1(phosphoinositide-dependentkinase1，pdk1)(ser241)的抗體(cellsignalingtechnology，beverly，麻薩諸塞州，美國(guó))進(jìn)行反應(yīng)，結(jié)果顯示于圖3，其中，圖3中所示的數(shù)值為西方墨點(diǎn)法分析的條帶的強(qiáng)度，數(shù)值愈大表示所觀察的蛋白質(zhì)的量愈高。如圖3所示，irbp-1-68在3t3-l1脂肪細(xì)胞中可增加pdk-1、磷酸化-akt(thr308)、磷酸化-akt(ser473)、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(glucosetransporter4，glut4)等與胰島素信息路徑相關(guān)的基因的蛋白質(zhì)表現(xiàn)量。此試驗(yàn)顯示irbp-1-68在3t3-l1脂肪細(xì)胞中可通過(guò)調(diào)控與胰島素信息路徑相關(guān)的基因的表現(xiàn)量，而具有降血糖效果。[實(shí)施例7]免疫組織分析以下列方法進(jìn)行免疫組織染色：將3t3-l1脂肪細(xì)胞培養(yǎng)并固定于蓋玻片上，接著使細(xì)胞與1∶50稀釋倍數(shù)的抗葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4的單株抗體(millipore，billerica，麻薩諸塞州，美國(guó))孵育至隔天，于室溫下以生物素化二級(jí)抗體(zymedlaboratories，southsanfrancisco，加州，美國(guó))孵育20分鐘，接著以抗生物素蛋白-生物素復(fù)合試劑孵育，并以3，3-二氨基聯(lián)苯胺(-pluskit，zymedlaboratories，southsanfrancisco，加州，美國(guó))進(jìn)行染色，結(jié)果顯示于圖4。如圖4所示，3t3-l1脂肪細(xì)胞的免疫組織染色結(jié)果也顯示irbp-1-68可以促進(jìn)3t3-l1脂肪細(xì)胞表現(xiàn)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4。已知葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4為脂肪細(xì)胞中具有轉(zhuǎn)運(yùn)葡萄糖功能的蛋白質(zhì)，因此，上述試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明irbp-1-68可通過(guò)提升葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4的表現(xiàn)量，而促進(jìn)脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)葡萄糖，進(jìn)而達(dá)成降血糖效果。實(shí)施例1至7的試驗(yàn)顯示irbp-1-68可與胰島素受體結(jié)合，且可促進(jìn)脂肪細(xì)胞攝取葡萄糖，而達(dá)成降血糖功效。[實(shí)施例8]受體結(jié)合試驗(yàn)：irbp-1-68的片段氨基酸序列以與實(shí)施例2相同的實(shí)驗(yàn)方法，針對(duì)具表4所示的片段氨基酸序列(seqidno：2、seqidno：3、seqidno：4、seqidno：5seqidno：6、及seqidno：7)的多勝肽進(jìn)行受體結(jié)合試驗(yàn)。這些多勝肽促進(jìn)經(jīng)碘-125標(biāo)定的胰島素結(jié)合至胰島素受體的濃度(ec50)顯示于表4。表4如表4的結(jié)果所示，本發(fā)明的具有irbp-1-68的片段氨基酸序列(即，seqidno：2至seqidno：7)的多勝肽都具有促進(jìn)胰島素結(jié)合至胰島素受體的功效，其中，irbp-1-19、irbp-50-68、及irbp-60-68具有較佳的促進(jìn)效果。此試驗(yàn)說(shuō)明將irbp-1-68裁剪至19個(gè)氨基酸(即，irbp-1-19與irbp-50-68)、甚至9個(gè)氨基酸后仍具有結(jié)合至胰島素受體的效果。以下針對(duì)irbp-60-68做進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)分析。[實(shí)施例9]分子嵌合分析：irbp-60-68進(jìn)行單一氨基酸的取代所衍生的同源性多勝肽如表5所示，以固相合成法制備具有針對(duì)irbp-60-68進(jìn)行單一氨基酸的取代所衍生的同源性氨基酸序列(seqidno：8至seqidno：178)的多勝肽，并以實(shí)施例1所述的方法進(jìn)行這些多勝肽的分子嵌合試驗(yàn)，評(píng)估其與胰島素受體間的分子間交互作用能量(包括范德華力、排斥能、氫鍵交互作用能量、庫(kù)倫靜電能量、內(nèi)部空間能量)。其中，以評(píng)分7000至8000標(biāo)記為「+」；評(píng)分8000至9000標(biāo)記為「++」；評(píng)分9000至10000標(biāo)記為「+++」。于此，評(píng)分愈高者表示多勝肽與受體間的分子間交互作用能量愈大，且結(jié)合作用愈強(qiáng)。表5如表5所示，具有針對(duì)irbp-60-68進(jìn)行單一氨基酸的取代所衍生的同源性氨基酸序列(seqidno：8至seqidno：178)的多勝肽都具有不同程度的結(jié)合到胰島素受體的能力。[實(shí)施例10]受體結(jié)合試驗(yàn)：irbp-60-68進(jìn)行單一氨基酸的取代所衍生的同源性多勝肽以如實(shí)施例3所述的方法，對(duì)表5所示的具seqidno：21的氨基酸序列的多勝肽(即，將irbp-60-68的氨基酸序列中的蘇氨酸取代為丙氨酸所產(chǎn)生的同源性多勝肽；下文簡(jiǎn)稱(chēng)為“irbp-mc”)進(jìn)行受體結(jié)合試驗(yàn)，結(jié)果顯示于表6。表6如表6的結(jié)果所示，irbp-60-68進(jìn)行單一氨基酸的取代所衍生的irbp-mc多勝肽促進(jìn)經(jīng)碘-125標(biāo)定的胰島素與胰島素受體結(jié)合的濃度為0.86±0.05(奈莫耳濃度)，顯示irbp-60-68進(jìn)行單一氨基酸取代后所衍生的同源性多勝肽仍具有與胰島素受體結(jié)合的能力。此外，如下表7所示，進(jìn)一步將irbp-60-68進(jìn)行單一氨基酸的取代所衍生的同源性多勝肽進(jìn)行受體結(jié)合試驗(yàn)，于此，以胰島素受體酪氨酸激酶(insulinreceptortyrosinekinase)活性作為多勝肽與胰島素受體結(jié)合的活性指標(biāo)，胰島素受體酪氨酸激酶活性愈高，代表多勝肽與胰島素受體結(jié)合的能力愈強(qiáng)。以胰島素受體酪氨酸激酶活性評(píng)估多勝肽的受體結(jié)合能力的實(shí)驗(yàn)流程為：將多勝肽與胰島素受體置于冰浴上作用30分鐘，然后加入等體積的2倍激酶緩沖液(50毫莫耳濃度hepes，ph7.6；50毫莫耳濃度mgcl2；200微莫耳濃度atp；200微莫耳濃度釩酸鈉；5毫克/公升麩氨酸與酪氨酸聚合物(poly(glu，tyr))；50微居里[γ-32p]atp/毫升)，置于30℃水浴槽中反應(yīng)10分鐘，接著加入tca使受質(zhì)poly(glu，tyr)沉淀于濾紙上，再將濾紙放入貝他射線偵測(cè)器，然后由放射強(qiáng)度換算胰島素受體酪氨酸激酶活性。于表7中，每組多勝肽為irbp-60-68進(jìn)行一特定氨基酸取代后所得的多勝肽混合物。例如，irbp-60-68-1@代表irbp-60-68的第一個(gè)氨基酸分別以精氨酸(arg，r)、丙氨酸(ala，a)、纈氨酸(val，v)、苯基丙氨酸(phe，f)、脯氨酸(pro，p)、甲硫氨酸(met，m)、異白氨酸(ile，i)、白氨酸(leu，l)、天門(mén)冬氨酸(asp，d)、麩氨酸(glu，e)、離氨酸(lys，k)、甘氨酸(gly，g)、絲氨酸(ser，s)、蘇氨酸(thr，t)、酪氨酸(tyr，y)、組氨酸(his，h)、胱胺酸(cys，c)、天門(mén)冬酰氨酸(asn，n)、麩酰氨酸(gln，q)、或色氨酸(trp，w)進(jìn)行取代后所得的多勝肽混合物(包含seqidno：8、seqidno：16、seqidno：24、seqidno：32、seqidno：41、seqidno：48、seqidno：64、seqidno：73、seqidno：82、seqidno：91、seqidno：100、seqidno：108、seqidno：117、seqidno：125、seqidno134、seqidno：143、seqidno：152、seqidno：161、seqidno：170的多勝肽)。表7多勝肽名稱(chēng)序列活性單位/毫升irbp-60-68-1@@varpptig53.23±0.10irbp-60-68-2@i@arpptig54.65±0.37irbp-60-68-3@iv@rpptig52.66±0.05irbp-60-68-4@iva@pptig52.86±0.30irbp-60-68-5@ivar@ptig83.43±0.43irbp-60-68-6@ivarp@tig53.28±0.55irbp-60-68-7@ivarpp@ig53.80±0.57irbp-60-68-8@ivarppt@g53.19±0.16irbp-60-68-9@ivarppti@53.04±0.09如表7的結(jié)果所示，irbp-60-68進(jìn)行一特定氨基酸取代后所得的多勝肽混合物具有與胰島素受體結(jié)合的活性。[實(shí)施例11]受體結(jié)合試驗(yàn)：irbp-60-68進(jìn)行多點(diǎn)突變所衍生的同源性多勝肽如表8所示，進(jìn)一步以固相合成法制備具有irbp-60-68進(jìn)行多點(diǎn)突變/取代(置換3至6個(gè)氨基酸)后所衍生的同源性氨基酸序列的多勝肽，并以如實(shí)施例3所述的方法進(jìn)行受體結(jié)合試驗(yàn)。這些同源性多勝肽的名稱(chēng)、序列、及試驗(yàn)結(jié)果顯示于表8。表8如表8的結(jié)果所示，具有seqidno：179至seqidno：188的氨基酸序列的多勝肽具有促進(jìn)胰島素結(jié)合至胰島素受體的功效，此顯示由irbp-60-68進(jìn)行3至6個(gè)氨基酸的取代后所衍生的同源性多勝肽仍具有促進(jìn)胰島素結(jié)合至胰島素受體的功效，其中，irbp-mt、irbp-cm、irbp-vv-1、及irbp-cp具有較佳的促進(jìn)功效。[實(shí)施例12]受體結(jié)合試驗(yàn)：irbp-60-68進(jìn)行多點(diǎn)突變所衍生的同源性多勝肽以如實(shí)施例1所示的方式，通過(guò)分子嵌合軟體進(jìn)行分子嵌合分析，篩選出如表9所示的四種具有9個(gè)氨基酸長(zhǎng)度、與胰島素受體結(jié)合能力較佳的多勝肽(氨基酸序列為seqidno：190至seqidno：193；于本說(shuō)明書(shū)中簡(jiǎn)稱(chēng)為irbp-9a至irbp-9d)。這些多勝肽具有rykyqx1x2yi(seqidno：189)的通式序列，其中，x1為胱胺酸或色氨酸，x2為苯丙氨酸或色氨酸。將這些多勝肽以實(shí)施例10所述的方法進(jìn)行受體結(jié)合試驗(yàn)，并以胰島素受體酪氨酸激酶活性作為多勝肽與胰島素受體結(jié)合的能力的指標(biāo)，結(jié)果顯示于表9。表9多勝肽名稱(chēng)seqidno序列活性單位/毫升胰島素--61.28±0.53irbp-9aseqidno：190rykyqwfyi40.34±1.94irbp-9bseqidno：191rykyqcfyi79.76±5.64irbp-9cseqidno：192rykyqwwyi44.18±3.61irbp-9dseqidno：193rykyqcwyi65.95±1.74表9結(jié)果顯示，irbp-9a至irbp-9d(seqidno：190至seqidno：193)多勝肽可與胰島素受體結(jié)合，其中，以irbp-9b為例，磷酸酶活性可高達(dá)79.76±5.64(活性單位/毫升)。[實(shí)施例13]分子嵌合分析：irbp-9b進(jìn)行單一氨基酸的取代所衍生的同源性多勝肽如表10所示，以固相合成法制備具有針對(duì)irbp-9b進(jìn)行單一氨基酸的取代所衍生的同源性氨基酸序列(seqidno：194至seqidno：364)的多勝肽，并以實(shí)施例1所述的方法進(jìn)行這些多勝肽的分子嵌合試驗(yàn)，評(píng)估多勝肽配體與胰島素受體間的分子間交互作用能量(包括范德華力、排斥能、氫鍵交互作用能量、庫(kù)倫靜電能量、內(nèi)部空間能量)，以評(píng)分8000至10000標(biāo)記為「+」；評(píng)分10000至12000標(biāo)記為「++」；評(píng)分12000至14000標(biāo)記為「+++」，其中，評(píng)分愈高表示多勝肽與胰島素受體間的分子間交互作用能量愈大，且結(jié)合力愈強(qiáng)。表10表10的結(jié)果顯示，具有針對(duì)irbp-9b進(jìn)行單一氨基酸的取代所衍生的同源性氨基酸序列(seqidno：194至seqidno：364)的多勝肽都具有不同程度的結(jié)合到胰島素受體的能力。[實(shí)施例14]降血糖活性試驗(yàn)將irbp-1-68、具有irbp片段氨基酸序列的多勝肽、以及經(jīng)多點(diǎn)突變所獲得的多勝肽進(jìn)行降血糖活性試驗(yàn)。首先，使每組3只的血糖代謝正常小鼠(balb/c)禁食18小時(shí)、及糖尿病狀態(tài)的小鼠(stz-induced或ob/ob)禁食4小時(shí)后，以腹腔注射的方式投予實(shí)驗(yàn)組中每只小鼠如表11所示的各種多勝肽(100微升，2.5×10-9莫耳/千克體重)，而對(duì)照組中，則投予每只小鼠100微升的水。15分鐘后，以腹腔注射的方式將4公克/千克體重的葡萄糖溶液投予正常小鼠(balb/c)，并將1公克/千克體重的葡萄糖溶液投予糖尿病狀態(tài)的小鼠(stz-induced或ob/ob)，以造成小鼠的血糖值快速上升。150分鐘后，于小鼠的尾部取血，并以?xún)?yōu)勢(shì)血糖機(jī)(accu-checkadvantage，roche，德國(guó))測(cè)量其血糖值，比較并分析實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中小鼠的血糖值。表11(以student’st-test進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，*p＜0.05)如表11的結(jié)果所示，無(wú)論是正常小鼠或是糖尿病狀態(tài)的小鼠，以2.5×10-9莫耳/千克體重的irbp-1-68或由其衍生的同源性多勝肽都可以有效地降低小鼠的血糖值。其中，irbp-1-68、irbp-50-68、irbp-60-68、及irbp-9b的多勝肽在balb/c小鼠的組別中可達(dá)到約61％至70％的血糖抑制比率；irbp-1-68、irbp-50-68、irbp-60-68、irbp-9a、irbp-9b、irbp-9c、及irbp-9d的多勝肽在stz-induced小鼠的組別中可達(dá)到約22％至67％的血糖抑制比率；irbp-1-68、irbp-50-68、及irbp-60-68的多勝肽在ob/ob或db/db鼠的組別中可達(dá)到約33％至55％的血糖抑制比率。上述結(jié)果顯示irbp-1-68、具有irbp-1-68片段氨基酸序列的多勝肽、及經(jīng)多點(diǎn)突變所得的多勝肽都具有降血糖的功效。[實(shí)施例15]糖化血紅素值試驗(yàn)糖化血紅素值(hba1c)是指生物體的血液中的紅血球上所附著的葡萄糖濃度，一般而言，血糖濃度愈高則糖化血紅素值愈高，且糖化血紅素值也為評(píng)估藥物治療糖尿病效果的黃金準(zhǔn)則，因此本實(shí)施例通過(guò)測(cè)量糖化血紅素值評(píng)估多勝肽控制小鼠血糖值的效果。如表12所示，將irbp-50-68及irbp-60-68多勝肽投予糖尿病狀態(tài)的小鼠(stz-induced)。在實(shí)驗(yàn)組中，以口服方式將1×10-6莫耳/千克體重的多勝肽(20微升)投予每只實(shí)驗(yàn)組中的小鼠，而控制組中，則投予每只小鼠20微升的水。28天后測(cè)量其糖化血紅素值。表12多勝肽名稱(chēng)seqidno糖化血紅素值(％)(控制組)-7.55±0.33irbp-50-68seqidno：65.93±0.55*irbp-60-68seqidno：75.73±0.11***(以student’st-test進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，*p＜0.05，***p＜0.001)如表12所示，本發(fā)明多勝肽可以有效地降低糖尿病狀態(tài)小鼠的糖化血紅素值，顯示這些多勝肽確實(shí)具有控制糖尿病小鼠血糖值的功效。[實(shí)施例16]肝功能指數(shù)測(cè)定因?yàn)樘悄虿』颊叱０l(fā)生糖尿病肝腎病變等并發(fā)癥，因此本實(shí)施例通過(guò)測(cè)量肝功能指數(shù)評(píng)估多勝肽控制小鼠糖尿病肝病變的效果。以如實(shí)施例14所述的方法，將irbp-50-68的多勝肽以口服方式投予糖尿病狀態(tài)的實(shí)驗(yàn)組的小鼠，28天后測(cè)量其麩氨酸草乙酸轉(zhuǎn)氨酶(got)與麩氨酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶(gpt)的肝功能指數(shù)，以評(píng)估該多勝肽對(duì)于糖尿病狀態(tài)小鼠的后續(xù)糖尿病肝病變的影響，結(jié)果顯示于表13。表13多勝肽名稱(chēng)seqidnogotgpt(控制組)-838.45±33.64202.95±30.10irbp-50-68seqidno：6247.89±97.38***135.72±30.72*(以student’st-test進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，*p＜0.05，***p＜0.001)如表13所示，本發(fā)明多勝肽可以有效地降低糖尿病狀態(tài)小鼠的肝功能指標(biāo)(got及gpt)，顯示該多勝肽可通過(guò)降血糖的功效而改善糖尿病狀態(tài)小鼠的后續(xù)糖尿病肝病變。[實(shí)施例17]腎功能指數(shù)測(cè)定以如實(shí)施例14所述方法，將irbp-50-68及irbp-60-68的多勝肽以口服的方式投予糖尿病狀態(tài)的實(shí)驗(yàn)組的小鼠，28天后測(cè)量其血中尿素氨(bun)與血清肌酸酐(cre)的腎功能指數(shù)，以評(píng)估這些多勝肽對(duì)于糖尿病狀態(tài)小鼠的后續(xù)糖尿病腎病變的影響，結(jié)果顯示于表14。表14多勝肽名稱(chēng)seqidnobuncre(控制組)-88.84±11.760.302±0.06irbp-50-68seqidno：6107.25±42.990.191±0.12irbp-60-68seqidno：773.17±29.950.17±0.04*(以student’st-test進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，*p＜0.05)如表14所示，本發(fā)明多勝肽可以有效地降低糖尿病狀態(tài)小鼠的腎功能指數(shù)(bun及cre)，顯示該多勝肽可通過(guò)降低血糖而改善糖尿病狀態(tài)小鼠的后續(xù)糖尿病腎病變。上述實(shí)施例僅是用以例示說(shuō)明本發(fā)明的原理及功效，而非用于限制本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員可在不違背本發(fā)明的技術(shù)原理及精神的情況下，對(duì)上述實(shí)施例進(jìn)行修改及變化，該些變化與修飾均屬于本發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)所要求保護(hù)的范圍。當(dāng)前第1頁(yè)12