本發(fā)明涉及番茄青枯病生防
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種節(jié)桿菌(Arthrobactersp.)、拮抗番茄青枯病菌劑、拮抗番茄青枯病育苗基質(zhì)以及在防治番茄青枯病方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：番茄青枯病(Bacterialwiltoftomato)是一種由青枯勞爾氏菌(Ralstoniasolanacearum)引起的細(xì)菌性土傳病害，多在熱帶、亞熱帶的國家和地區(qū)，如：南美洲、日本、印度、菲律賓，我國廣東、浙江、福建、江蘇、湖北、四川、重慶等地發(fā)生。該病可造成植株大面積萎蔫死亡，一般田塊發(fā)病率為10％～15％，重病田發(fā)病率高達(dá)80％～98.5％，導(dǎo)致番茄產(chǎn)量嚴(yán)重下降，造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。R.solanacearum是一種土壤習(xí)居菌，能夠在無寄主情況下的土壤中存活很長時(shí)間。R.solanacearum主要從根系侵入植株，也可從莖部傷口侵入并直接進(jìn)入導(dǎo)管系統(tǒng)，在其中大量繁殖并產(chǎn)生代謝物質(zhì)，阻礙植物體內(nèi)水分運(yùn)輸，造成植株萎蔫。目前，針對番茄青枯病缺少有效的化學(xué)藥劑，加之青枯菌對化學(xué)農(nóng)藥易產(chǎn)生抗藥性，而且大量使用化學(xué)農(nóng)藥會(huì)造成環(huán)境污染和生產(chǎn)成本上升。生物防治作物病害具有可利用資源豐富、成本低廉、能夠避免環(huán)境二次污染，被認(rèn)為是解決土傳病害一條有希望的途徑。利用病原菌拮抗微生物進(jìn)行生物防治是生物防治的一個(gè)重要組成部分。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種節(jié)桿菌(Arthrobactersp.)。本發(fā)明要解決的另外一個(gè)技術(shù)問題是提供一種節(jié)桿菌的篩選方法。本發(fā)明要解決的還有一個(gè)技術(shù)問題是提供一種拮抗番茄青枯病菌劑的制備方法。本發(fā)明還要解決的一個(gè)技術(shù)問題是提供一種拮抗番茄青枯病育苗基質(zhì)的制備方法。對于節(jié)桿菌，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是，該節(jié)桿菌保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏編號(hào)為CCTCCNo.M2016421，它的16SrRNA具有SEQIDNo.1所示的核苷酸序列。對于節(jié)桿菌的篩選方法，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是，包括以下步驟：(1)按以下配方配制酪蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，并采用高壓濕熱115.0℃滅菌25分鐘，得到細(xì)菌斜面培養(yǎng)基；所述酪蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基由葡萄糖5.0g、酪蛋白水解物1.0g、細(xì)菌級(jí)蛋白胨10.0g、瓊脂15.0～20.0g和蒸餾水1000ml組成，且滅菌前酪蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基的pH值為7.0～7.2；(2)土壤稀釋液的制備a)稱取10g土壤，加入90ml無菌生理鹽水，振蕩15分鐘，得到10-1的稀釋土壤溶液A；b)吸取稀釋土壤溶液A1ml，加入9ml無菌生理鹽水，得到10-2的稀釋土壤溶液B；c)吸取稀釋土壤溶液B1ml，加入9ml無菌生理鹽水，得到10-3的稀釋土壤溶液C；d)吸取稀釋土壤溶液C1ml，加入9ml無菌生理鹽水，得到10-4的稀釋土壤溶液D；e)吸取稀釋土壤溶液D1ml，加入9ml無菌生理鹽水，得到10-5的稀釋土壤溶液E；f)吸取稀釋土壤溶液E1ml，加入9ml無菌生理鹽水，得到10-6的稀釋土壤溶液F；(3)分別吸取稀釋土壤溶液C、稀釋土壤溶液D、稀釋土壤溶液E0.2ml，加入到酪蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基平板中進(jìn)行涂布培養(yǎng)，并在25～28℃培養(yǎng)2～3天；(4)選擇20～200菌落數(shù)的培養(yǎng)皿進(jìn)行挑取菌落進(jìn)行斜面培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為25～28℃下培養(yǎng)2～3天；(5)分離得到所述的節(jié)桿菌。對于拮抗番茄青枯病菌劑的制備方法，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是，包括以下步驟：(1)將如權(quán)利要求2所篩選得到的節(jié)桿菌以酪蛋白胨培養(yǎng)基加入無機(jī)鹽鈣、鎂、磷進(jìn)行液體搖瓶發(fā)酵，25～35℃培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速120～220rpm；最后得到菌種；(2)以步驟(1)所得到的菌種接種液體發(fā)酵罐制作液體母種，所述液體發(fā)酵罐的原料為麩皮、菜餅和豆餅粉分別按重量百分比1％～5％∶0～3％∶0～3％及無機(jī)鹽鈣、鎂、磷攪拌混合，加水量為99～89％，高壓滅菌后，待發(fā)酵罐液體溫度冷卻至35℃以下時(shí)，再按1.0～10％的接種量以無菌操作方式接種于液體發(fā)酵罐的培養(yǎng)基中，液體發(fā)酵罐始終保持0.01MPa以上的正壓，25～35℃通氣培養(yǎng)24～48小時(shí)，發(fā)酵菌數(shù)達(dá)108cfu/ml以上即可，無菌包裝成菌劑。作為優(yōu)選，步驟(1)中酪蛋白胨培養(yǎng)基加入的無機(jī)鹽用量為：鈣0.9～1.5g/l，鎂0.5～1.3g/l，磷0.8～2.5g/l；步驟(2)中所述發(fā)酵罐中加入的無機(jī)鹽用量為：鈣0.9～1.5g/l，鎂0.5～1.3g/l，磷0.8～2.5g/l。對于拮抗番茄青枯病育苗基質(zhì)的制備方法，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是，包括以下步驟：(1)按質(zhì)量百分比取木屑20％、棉籽殼70％和輔料10％配制成蘑菇培養(yǎng)基并在上面種植蘑菇，再將經(jīng)過種植蘑菇后的蘑菇培養(yǎng)基粉碎至2～3cm的顆粒即為菇渣；所述輔料由麩皮、石灰、石膏按質(zhì)量百分比8:1:1配制而成；(2)菇渣的無害化處理：運(yùn)用堆肥原理將所述菇渣加入氮源，調(diào)整碳氮比，加水調(diào)整菇渣含水率為55～65％，按2kg/m3加入堆肥用發(fā)酵菌劑，做堆，經(jīng)過55～65℃的高溫過程30～35天，在其間經(jīng)過3～5次的翻堆混勻，得到菇渣腐熟料；并保持菇渣腐熟料含水量55～60％；(3)拮抗番茄青枯病育苗基質(zhì)的配制：將菇渣腐熟料、草炭、蛭石和珍珠巖分別按體積百分比45％、35％、13％、7％的比例均勻混合，按3kg/m3加入權(quán)利要求3所制得的拮抗番茄青枯病菌劑并混合均勻，再用自來水調(diào)節(jié)基質(zhì)的含水率至30％～40％，使基質(zhì)中含拮抗菌數(shù)達(dá)107cfu/g以上即得到拮抗番茄青枯病育苗基質(zhì)。作為優(yōu)選，菇渣為種植香菇或金針菇后的蘑菇培養(yǎng)基。另外，上述節(jié)桿菌在防治番茄青枯病方面的應(yīng)用。本發(fā)明的有益效果是：從自然界定向分離選育出本發(fā)明節(jié)桿菌(Arthrobactersp.)，通過平皿拮抗實(shí)驗(yàn)顯示，該菌株具有良好抑制青枯菌生長的能力，同時(shí)該菌株能夠在耐受重金屬鎘離子(200ug/ml)，說明該菌株能夠在鎘離子污染的土壤中存活。本發(fā)明針對番茄青枯病缺少有效的化學(xué)藥劑，且反復(fù)用藥易造成青枯菌產(chǎn)生抗藥性的問題。通過對番茄青枯病拮抗菌分離篩選及其防效試驗(yàn)，分離篩選出對番茄青枯病有拮抗作用的菌株，先通過培養(yǎng)繁殖后，制成該菌劑產(chǎn)品，利用食用菌栽培后的菇渣通過發(fā)酵腐熟后與其他基材按一定比例配制成育苗基質(zhì)，將生防菌劑直接與育苗基質(zhì)有機(jī)的結(jié)合起來，它具有可利用資源豐富、成本低廉，使用生物材料保藏節(jié)桿菌(Arthrobactersp.)SJN-5(以下簡稱為SJN-5菌株)，該菌于2014年4月至10月，用上述方法從安徽省各地土壤樣品分離得到。經(jīng)測序鑒定，最后分析確定，該細(xì)菌為節(jié)桿菌(Arthrobactersp.)。該新菌株于2016年8月10日在湖北省武漢市武漢大學(xué)內(nèi)武漢大學(xué)保藏中心中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏編號(hào)為CCTCCNO.M2016421。具體實(shí)施方式實(shí)施例1：節(jié)桿菌(Arthrobactersp.)SJN-5菌株的獲得本實(shí)施例提供了一種利用病原菌拮抗微生物防治番茄青枯病的菌株，具體是節(jié)桿菌(Arthrobactersp.)SJN-5。2014～2015年實(shí)驗(yàn)者從安徽貴池、黃山、舒城、歙縣、績溪等不同地區(qū)采集連作番茄地的土壤樣品，利用細(xì)菌培養(yǎng)基采用稀釋分離法從中定向分離出各類細(xì)菌等共100多株，并進(jìn)行菌株純化，進(jìn)而對菌株通過斜面和搖瓶在28～30℃培養(yǎng)條件下培養(yǎng)和在多種育苗基質(zhì)接種效果測定，從中篩選出拮抗番茄青枯病菌的節(jié)桿菌SJN-5。1培養(yǎng)基酪蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基：葡萄糖5.0g，酪蛋白水解物1.0g，細(xì)菌級(jí)蛋白胨10.0g，瓊脂15.0～20.0g，蒸餾水1000ml，pH值為7.0～7.2。采用高壓濕熱115.0℃滅菌25分鐘。2試驗(yàn)步驟2.1培養(yǎng)基的制備配制如1所述的酪蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，制備細(xì)菌斜面培養(yǎng)基。2.2土壤稀釋液的制備(1)稱取10g土壤樣品，加入90ml無菌水250ml三角瓶中，振蕩15分鐘，得到10-1的稀釋土壤溶液A；(2)吸取稀釋土壤溶液A1ml，加入9ml無菌水50ml三角瓶中，得到10-2的稀釋土壤溶液B；(3)吸取稀釋土壤溶液B1ml，加入9ml無菌水50ml三角瓶中，得到10-3的稀釋土壤溶液C；(4)吸取稀釋土壤溶液C1ml，加入9ml無菌水50ml三角瓶中，得到10-4的稀釋土壤溶液D；(5)吸取稀釋土壤溶液D1ml，加入9ml無菌水50ml三角瓶中，得到10-5的稀釋土壤溶液E；(6)吸取稀釋土壤溶液E1ml，加入9ml無菌水50ml三角瓶中，得到10-6的稀釋土壤溶液F。2.3細(xì)菌分離(7)分別吸取稀釋土壤溶液C、稀釋土壤溶液D、稀釋土壤溶液E各0.2ml，加入到酪蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基平板中進(jìn)行涂布培養(yǎng)，并在28-30℃培養(yǎng)2～3天。將上述細(xì)菌分離的步驟重復(fù)3次，綜合結(jié)果，篩選菌株。該做法是為了獲得較多的菌株，同時(shí)驗(yàn)證每次實(shí)驗(yàn)篩選獲得菌株的數(shù)量是否相同或者差距大小，最終選擇篩選效果好且菌株活性較高的作為目標(biāo)菌株。(8)選擇20～200菌落數(shù)的培養(yǎng)皿進(jìn)行挑取菌落進(jìn)行斜面培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為28～30℃下培養(yǎng)2～3天；2.4多個(gè)土壤樣品(9)共取10個(gè)土壤樣品，每個(gè)土壤樣品重復(fù)上述2.1～2.3步驟。2.5結(jié)果按上述方法分離得到細(xì)菌100多株。實(shí)施例2：分離得到的細(xì)菌對番茄青枯病茄青枯拉爾氏菌的平板拮抗試驗(yàn)1.培養(yǎng)基1.1固體培養(yǎng)基青枯病菌培養(yǎng)基的配制：磷酸二氫鉀0.2g，磷酸氫二鉀0.8g，酵母浸提物5.0g，酪蛋白水解物1.0g，葡萄糖5.0g，瓊脂15.0g，蒸餾水1000ml，pH7.0～7.2。采用高壓濕熱115.0℃滅菌25分鐘。酪蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基的配制：同實(shí)施例1中的酪蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基。1.2液體培養(yǎng)基采用酪蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基但不加瓊脂即可，且節(jié)桿菌和青枯病原菌都可以在該液體培養(yǎng)基上生長。2、試驗(yàn)步驟2.1培養(yǎng)基制備按上述配方分別配制青枯病菌培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，制備病原菌茄青枯拉爾氏菌斜面；按上述配方分別配制酪蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，制備細(xì)菌斜面。2.2平板拮抗試驗(yàn)2.2.1菌種活化番茄青枯病菌和細(xì)菌進(jìn)行菌種活化：番茄青枯病菌和分離細(xì)菌分別轉(zhuǎn)接至酪蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基斜面，28～30℃，培養(yǎng)16～28小時(shí)，備用。2.2.2制備青枯病菌平板將活化的青枯病菌接入液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，25～28℃，180轉(zhuǎn)/分。隔天以青枯病菌培養(yǎng)基倒平板，等培養(yǎng)基凝固后每個(gè)平板中加入0.2ml(稀釋青枯病原菌濃度為103～104cells/ml)青枯病菌發(fā)酵液(培養(yǎng)約36小時(shí))，均勻涂布，25～28℃培養(yǎng)過夜，備用。2.2.3準(zhǔn)備細(xì)菌液體發(fā)酵液青枯病菌在液體培養(yǎng)基搖瓶培養(yǎng)2天后，活化分離細(xì)菌再轉(zhuǎn)接入液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，25～28℃，180轉(zhuǎn)/分，隔天備用(培養(yǎng)約36小時(shí))。2.2.4平板拮抗試驗(yàn)用滅菌濾紙片(直徑為9mm)蘸取分離細(xì)菌發(fā)酵液放入青枯病菌平板，每個(gè)平板放3株不同拮抗細(xì)菌，3個(gè)重復(fù)。20小時(shí)左右觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果，主要考察抑菌圈有無和大小。3、結(jié)果通過平板拮抗試驗(yàn)得到拮抗效果較好的細(xì)菌3株，菌株SJN-5就是其中一株。實(shí)驗(yàn)為先在平板上涂0.5ml青枯拉爾氏菌發(fā)酵液，然后用濾紙片蘸取菌株SJN-5發(fā)酵液放在平板上，同時(shí)培養(yǎng)而得。通過觀察節(jié)桿菌株SJN-5對青枯拉爾氏菌的拮抗效果，可以看出抑菌圈明顯，說明菌株SJN-5生長速度快，擴(kuò)散能力強(qiáng)，對茄青枯拉爾氏菌具明顯地拮抗作用。節(jié)桿菌(Arthrobactersp.)SJN-5(以下簡稱為SJN-5菌株)，該菌于2014年4月至10月，用上述方法從安徽省各地分離而得。經(jīng)果測序鑒定，最后分析確定，該細(xì)菌為節(jié)桿菌(Arthrobactersp.)。該新菌株于2016年8月10日在湖北省武漢市武漢大學(xué)內(nèi)武漢大學(xué)保藏中心中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏編號(hào)為CCTCCNO.M2016421。實(shí)施例3：菌株SJN-5的拮抗菌劑的制備本實(shí)施例的具有拮抗番茄青枯病的微生物菌劑是由節(jié)桿菌(Arthrobactersp.)SJN-5菌株經(jīng)培養(yǎng)、繁殖而成。具體操作過程如下：節(jié)桿菌SJN-5以酪蛋白胨培養(yǎng)基為基礎(chǔ)加入無機(jī)鹽鈣0.9～1.5g/l、鎂0.5～1.3g/l、磷0.8～2.5g/l進(jìn)行液體搖瓶發(fā)酵，25～35℃培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速120～220rpm。以此為菌種接種液體發(fā)酵罐制作液體母種，液體發(fā)酵罐原料為麩皮、菜餅、和豆餅粉按重量百分比1％～5％∶0～3％∶0～3％∶0～3％)及少量的無機(jī)鹽(鈣0.9～1.5g/l、鎂0.5～1.3g/l、磷0.8～2.5g/l)，加水量為99～89％，高壓滅菌后，待發(fā)酵罐液體溫度冷卻至35℃以下時(shí)，再按1.0～10％的接種量以無菌操作方式接種于液體發(fā)酵罐的培養(yǎng)基中，液體發(fā)酵罐始終保持0.01MPa以上的正壓，25～35℃通氣培養(yǎng)24～48小時(shí)，發(fā)酵菌數(shù)達(dá)108cfu/ml以上即可，無菌包裝成菌劑，包裝形式袋裝或瓶裝。由節(jié)桿菌SJN-5制成的菌劑中的菌數(shù)達(dá)108cfu/ml時(shí)，將菌劑應(yīng)用于育苗基質(zhì)中即可以達(dá)到有效的防治番茄青枯病的效果，此108cfu/ml是作為發(fā)酵菌劑中菌數(shù)的最低臨界值，此數(shù)值以上均可以達(dá)到防治番茄青枯病的效果，但是因?yàn)樵诰唧w試驗(yàn)過程中菌劑中的發(fā)酵菌數(shù)不可能無限制的增加，所以在具體應(yīng)用過程中發(fā)酵菌數(shù)是存在上限的，下限即發(fā)酵菌數(shù)為108cfu/ml。實(shí)施例4：拮抗番茄青枯病育苗基質(zhì)的配制先按以下方法制作菇渣：按質(zhì)量百分比取木屑20％、棉籽殼70％和輔料10％配制成蘑菇培養(yǎng)基，其中輔料由麩皮、石灰、石膏按質(zhì)量百分比8:1:1配制而成。再在蘑菇培養(yǎng)基上面種植香菇或金針菇，將經(jīng)過種植香菇或金針菇后的蘑菇培養(yǎng)基粉碎至2～3cm的顆粒即得到菇渣。對菇渣進(jìn)行無害化處理得到菇渣腐熟料：運(yùn)用堆肥發(fā)酵原理將菇渣加入0.8～1.2kg/m3尿素作為氮源，加水調(diào)整菇渣含水量為55～65％之間，按2kg/m3加入堆肥專用發(fā)酵菌劑，做堆，堆高100～150cm、直徑200～300cm，經(jīng)過55～65℃的高溫過程30～35天，在其間經(jīng)過3～5次的翻堆混勻，得到菇渣腐熟料，并保持菇渣腐熟料含水量在55～60％。菇渣經(jīng)過生物發(fā)酵高溫分解后，菇渣中潛在的病原雜菌、有害生物及有毒物質(zhì)得到殺滅或消除，達(dá)到菇渣腐熟料理化性狀均一穩(wěn)定的效果。拮抗番茄青枯病育苗基質(zhì)的配制：將菇渣腐熟料、草炭、蛭石和珍珠巖按體積45％、35％、13％、7％的比例配制基質(zhì)并混合均勻，然后用權(quán)利要求3所得到的拮抗番茄青枯病菌劑，按3kg/m3混合均勻，并用自來水調(diào)節(jié)基質(zhì)的含水率至30％～40％，使基質(zhì)中含拮抗菌SJN-5數(shù)達(dá)107cfu/g以上即可包裝?；|(zhì)中含拮抗菌數(shù)達(dá)107cfu/g以上的數(shù)值范圍下限為107cfu/g，上限也是因具體試驗(yàn)過程而存在的，解釋同上。配制后的育苗基質(zhì)的基本理化性質(zhì)見表1：表1：總孔隙度60～82.6通氣孔隙度14～18.5持水孔隙55～66容重(g/cm3)0.25電導(dǎo)率(ms/cm)0.19～0.22全氮(％)0.28～0.33速效氮(g/kg)2.1速效磷(g/kg)5.5速效鉀(g/kg)13.4有機(jī)碳(％)22～36pH值6.3～7.0按本實(shí)施例配置的拮抗番茄青枯病育苗基質(zhì)進(jìn)行番茄育苗試驗(yàn)觀察顯示，配制的育苗基質(zhì)優(yōu)于常規(guī)配方的育苗基質(zhì)。實(shí)施例5：含有SJN-5菌劑的拮抗番茄青枯病的菇渣育苗基質(zhì)在盆栽上對番茄青枯病生防效果的試驗(yàn)具體實(shí)驗(yàn)步驟如下：1.育苗拮抗菌育苗基質(zhì)為：將菇渣腐熟料、草炭、蛭石和珍珠巖按體積45％、35％、13％、7％的比例配制基質(zhì)并混合均勻，然后用權(quán)利要求3所得到的拮抗番茄青枯病菌劑，按3kg/m3混合均勻，并用自來水調(diào)節(jié)基質(zhì)的含水率至30％～40％，使基質(zhì)中含拮抗菌SJN-5數(shù)達(dá)107cfu/g以上，備用。常規(guī)對照基質(zhì)為：將菇渣腐熟料、草炭、蛭石和珍珠巖按體積百分比45％、35％、13％、7％的比例配制基質(zhì)并混合均勻，自來水調(diào)節(jié)基質(zhì)的含水率至30％～40％，備用。2.播種在育苗穴盤(50孔)每穴中分別裝入四分之三高左右的上述制備的兩種基質(zhì)，用手輕壓，然后每穴中播入1～2顆番茄種子，再用基質(zhì)覆蓋，并用塑料薄膜蓋住穴盤，防止水分蒸發(fā)，備用。3.出苗將準(zhǔn)備好的播種穴盤放入溫室大棚，溫度25℃，維持日夜溫差在10℃以上。大約4～5天出苗，出苗后掀掉塑料薄膜，穴盤中培養(yǎng)至3～4片真葉(大約3～4周)，備用。4.青枯病菌雷爾氏菌發(fā)酵液準(zhǔn)備青枯雷爾氏菌活化，然后每株接液體搖瓶培養(yǎng)，25～28℃，180轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)約36小時(shí)，備用。5.盆栽采用番茄種植基地青枯病發(fā)病嚴(yán)重的地塊土壤，每盆(規(guī)格320×260mm)稱取3.0公斤的土壤，混合均勻2％有機(jī)肥，裝入盆中。所有盆中移裁番茄苗均帶根部基質(zhì)移栽，每盆中移栽5株番茄苗，根據(jù)需要適當(dāng)補(bǔ)水。本試驗(yàn)設(shè)兩個(gè)對照和一個(gè)處理，每個(gè)處理5盆，每盆5株苗，均勻分布。對照1：移栽時(shí)用對照基質(zhì)苗不加任何菌劑；對照2：移栽時(shí)每株只澆20ml青枯菌稀釋發(fā)酵液(105cfu/ml)；拮抗菌基質(zhì)處理：移栽時(shí)用拮抗菌基質(zhì)育苗移栽時(shí)每株根部先澆20ml青枯菌稀釋發(fā)酵液(105cfu/ml)，每天記錄發(fā)病株數(shù)。6.結(jié)果分析通過盆栽實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，未接種病原菌的番茄植株未出現(xiàn)發(fā)病植株；接種青枯病原菌發(fā)病率達(dá)到60％以上；采用SJN-5菌株處理的帶抗菌基質(zhì)育苗的處理延緩了番茄青枯病害的發(fā)生，將病害的發(fā)生率降低至35％，說明該育苗基質(zhì)培育處理對番茄青枯病具有防效。同時(shí)考慮菌株在基質(zhì)育苗中的存活數(shù)量，建議使用帶有菌株SJN-5的接抗菌基質(zhì)育苗進(jìn)行青枯病防治時(shí)，等到番茄幼苗長至20～25cm高時(shí)，且在定殖前補(bǔ)用菌株SJN-5制劑，同時(shí)結(jié)合種植預(yù)防措施，增強(qiáng)效果。以菇渣為主要原料配制的育苗基質(zhì)接種拮抗青枯病菌的菌劑SJN-5，培育番茄育苗后進(jìn)行移栽試驗(yàn)，與未接拮抗菌僅接種青枯病菌的對照相比，青枯病發(fā)病率降低至35％以下，且發(fā)病時(shí)期推遲10天以上。綜上，本實(shí)施例具有如下效果：一是利用拮抗番茄青枯病的節(jié)桿菌菌劑應(yīng)用于育苗基質(zhì)的生產(chǎn)，采用固體堆肥發(fā)酵的形式，提高生產(chǎn)蘑菇廢棄物的利用率，降低育苗的生產(chǎn)成本，然后復(fù)合配制成具有拮抗土傳病害番茄青枯病的育苗基質(zhì)。二是通過菇渣等農(nóng)業(yè)廢棄物的無害化處理，減少環(huán)境的二次污染，具有較好的經(jīng)濟(jì)、防治環(huán)境污染及防治土傳病害番茄青枯病的效果。本實(shí)施例篩選獲得具有拮抗青枯病原菌的節(jié)桿菌株，并能將蘑菇生產(chǎn)的廢棄物變?yōu)樵倮觅Y源，復(fù)配形成具有拮抗土傳病的商品育苗基質(zhì)，該產(chǎn)品適用于規(guī)模化農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，可提高農(nóng)業(yè)效益。以上所述的本發(fā)明實(shí)施方式，并不構(gòu)成對本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。任何在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的權(quán)利要求保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3