本發(fā)明涉及一種聯(lián)芐醚類化合物及其制備方法與用途。

背景技術(shù)：

現(xiàn)有文獻(xiàn)報道了如下所示的聯(lián)芐類化合物，具有抑制被動皮膚過敏反應(yīng)(passive cutaneous anaphylaxis)以及抑制RBL-2H3細(xì)胞(嗜堿性細(xì)胞白血病細(xì)胞)釋放β-己糖胺酶的藥效和用途(見：Matsuda H et al.Antiallergic Phenanthrenes and…Planta Med 2004；70:847-855)：

目前，未見有本發(fā)明式Ⅰ所示聯(lián)芐醚類化合物的研究報道，更未見有本發(fā)明式Ⅰ所示聯(lián)芐醚類化合物用于制備抗腫瘤藥物的研究報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種結(jié)構(gòu)和藥用價值都不同的新的聯(lián)芐醚類化合物：式Ⅰ所示的化合物。

本發(fā)明提供的式Ⅰ所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、晶型、溶劑合物：

其中，

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇分別獨立地選自H、羥基、巰基、C₁～C₄烷基或C₁～C₄烷氧基。

進(jìn)一步的，R₁、R₄、R₇分別獨立地選自H、羥基或巰基；R₂、R₃、R₅、R₆分別獨立地選自C₁～C₄烷基或C₁～C₄烷氧基。

進(jìn)一步的，R₁、R₄、R₇分別獨立地選自羥基或巰基；R₂、R₃、R₅、R₆分別獨立地選自甲氧基、乙氧基、正丙氧基或異丙氧基。

進(jìn)一步的，所述的化合物為

本發(fā)明還提供了一種制備化合物X的方法，它包括以下步驟：

a、取白及，用乙醇提取，得到乙醇提取液；

b、取乙醇提取液，濃縮，得到流浸膏；

c、將流浸膏用水分散，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，合并乙酸乙酯部分，回收溶劑，得到乙酸乙酯浸膏；

d、取乙酸乙酯浸膏，采用硅膠柱色譜，依次以石油醚-丙酮＝100:1、50:1、30:1為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，得到石油醚：丙酮＝30:1時的洗脫液Fr.16；

e、Fr.16上反相聚苯乙烯型樹脂柱，依次以乙醇-水＝10:90、30:70、50:50、70:30、90:10為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，得到乙醇-水＝90:10時的Fr.16-h；

f、Fr.16-h經(jīng)過中壓液相色譜，依次以甲醇-水＝20:80、30:70、50:50為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，得到甲醇-水＝50:50時的Fr.16-h-3；

g、Fr.16-h-3經(jīng)過硅膠柱色譜，依次以二氯甲烷-甲醇＝1:0、100:1、50:1為洗脫劑，分別洗脫4個柱體積，收集二氯甲烷-甲醇＝50：1時的Fr.16-h-3c；

h、Fr.16-h-3c采用高效液相制備色譜，以甲醇-水＝80:20為流動相，分離，得到化合物X。

進(jìn)一步的，

步驟d中，所述乙酸乙酯浸膏的量為155～165g，梯度洗脫的條件如下：

步驟e中，所述Fr.16的量為15～20g，梯度洗脫的條件如下：

步驟f中，所述Fr.16-h的量為4～6g，梯度洗脫的條件如下：

本發(fā)明還提供了上述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、晶型、溶劑合物在制備治療和/或預(yù)防腫瘤的藥物中的用途。

進(jìn)一步的，所述的腫瘤為肺癌和/或急性白血病。

本發(fā)明還提供了一種治療和/或預(yù)防腫瘤的藥物組合物，它是以上述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、晶型、溶劑合物為活性成分，加上藥學(xué)上常用的輔料制備得到的制劑。

進(jìn)一步的，所述的腫瘤為肺癌和/或急性白血病。

本發(fā)明的聯(lián)芐醚類化合物，同時具有聯(lián)芐結(jié)構(gòu)和二苯醚結(jié)構(gòu)，與現(xiàn)有的聯(lián)芐類化合物相比，在結(jié)構(gòu)上差異很大；并且，本發(fā)明聯(lián)芐醚類化合物具有新的藥效：對腫瘤細(xì)胞具有很好的抑制作用，特別是，對肺癌細(xì)胞具有很好的抑制作用，其IC₅₀達(dá)到3.9μg/mL，此外，本發(fā)明聯(lián)芐醚類化合物還對急性單白血病細(xì)胞的增殖具有顯著的抑制活性；同時，本發(fā)明聯(lián)芐醚類化合物的制備方法簡便，反應(yīng)條件溫和，便于操作和控制，能耗小，產(chǎn)率高，成本低，非常適合產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。

本發(fā)明中提供的化合物和衍生物可以根據(jù)IUPAC(國際純粹與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會)或CAS(化學(xué)文摘服務(wù)社，Columbus，OH)命名系統(tǒng)命名。

關(guān)于本發(fā)明的使用術(shù)語的定義：除非另有說明，本文中基團或者術(shù)語提供的初始定義適用于整篇說明書的該基團或者術(shù)語；對于本文沒有具體定義的術(shù)語，應(yīng)該根據(jù)公開內(nèi)容和上下文，給出本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠給予它們的含義。

“取代”是指分子中的氫原子被其它不同的原子或分子所替換。

碳?xì)浠鶊F中碳原子含量的最小值和最大值通過前綴表示，例如，前綴C_a～C_b烷基表明任何包含“a”至“b”個碳原子的烷基。因此，例如，C₁～C₄烷基是指包含1～4個碳原子的烷基，換句話說，C₁～C₄烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基。

術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”是指某載體、運載物、稀釋劑、輔料，和/或所形成的鹽通常在化學(xué)上或物理上與構(gòu)成某藥物劑型的其它成分相兼容，并在生理上與受體相兼容。

術(shù)語“鹽”和“可藥用的鹽”是指上述化合物或其立體異構(gòu)體，與無機和/或有機酸和堿形成的酸式和/或堿式鹽，也包括兩性離子鹽(內(nèi)鹽)，還包括季銨鹽，例如烷基銨鹽。這些鹽可以是在化合物的最后分離和純化中直接得到。也可以是通過將上述化合物，或其立體異構(gòu)體，與一定數(shù)量的酸或堿適當(dāng)(例如等當(dāng)量)進(jìn)行混合而得到。這些鹽可能在溶液中形成沉淀而以過濾方法收集，或在溶劑蒸發(fā)后回收而得到，或在水介質(zhì)中反應(yīng)后冷凍干燥制得。本發(fā)明中所述鹽可以是化合物的鹽酸鹽、硫酸鹽、枸櫞酸鹽、苯磺酸鹽、氫溴酸鹽、氫氟酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、丁二酸鹽、草酸鹽、蘋果酸鹽、琥珀酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、酒石酸鹽或三氟乙酸鹽。

本發(fā)明化合物或藥物組合物的施用方式?jīng)]有特別限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、腸胃外(靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下)、和局部給藥。

用于口服給藥的固體劑型包括膠囊劑、片劑、丸劑、散劑和顆粒劑。在這些固體劑型中，活性化合物與至少一種常規(guī)惰性賦形劑(或載體)混合，如檸檬酸鈉或磷酸二鈣，或與下述成分混合：(a)填料或增容劑，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合劑，例如，羥甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠；(c)保濕劑，例如，甘油；(d)崩解劑，例如，瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些復(fù)合硅酸鹽、和碳酸鈉；(e)緩溶劑，例如石蠟；(f)吸收加速劑，例如，季胺化合物；(g)潤濕劑，例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；(h)吸附劑，例如，高嶺土；和(i)潤滑劑，例如，滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉，或其混合物。膠囊劑、片劑和丸劑中，劑型也可包含緩沖劑。

固體劑型如片劑、糖丸、膠囊劑、丸劑和顆粒劑可采用包衣和殼材制備，如腸衣和其它本領(lǐng)域公知的材料。它們可包含不透明劑，并且，這種組合物中活性化合物或化合物的釋放可以延遲的方式在消化道內(nèi)的某一部分中釋放。可采用的包埋組分的實例是聚合物質(zhì)和蠟類物質(zhì)。必要時，活性化合物也可與上述賦形劑中的一種或多種形成微膠囊形式。

用于口服給藥的液體劑型包括藥學(xué)上可接受的乳液、溶液、懸浮液、糖漿或酊劑。除了活性化合物外，液體劑型可包含本領(lǐng)域中常規(guī)采用的惰性稀釋劑，如水或其它溶劑，增溶劑和乳化劑，例知，乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特別是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油或這些物質(zhì)的混合物等。

除了這些惰性稀釋劑外，組合物也可包含助劑，如潤濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、矯味劑和香料。

除了活性化合物外，懸浮液可包含懸浮劑，例如，乙氧基化異十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、甲醇鋁和瓊脂或這些物質(zhì)的混合物等。

用于腸胃外注射的組合物可包含生理上可接受的無菌含水或無水溶液、分散液、懸浮液或乳液，和用于重新溶解成無菌的可注射溶液或分散液的無菌粉末。適宜的含水和非水載體、稀釋劑、溶劑或賦形劑包括水、乙醇、多元醇及其適宜的混合物。

用于局部給藥的本發(fā)明化合物的劑型包括軟膏劑、散劑、貼劑、噴射劑和吸入劑?；钚猿煞衷跓o菌條件下與生理上可接受的載體及任何防腐劑、緩沖劑，或必要時可能需要的推進(jìn)劑一起混合。

本發(fā)明所述藥學(xué)上可接受的輔料，是指除活性成分以外包含在劑型中的物質(zhì)。

本發(fā)明所述藥學(xué)上可接受的輔助性成分，它具有一定生理活性，但該成分的加入不會改變上述藥物組合物在疾病治療過程中的主導(dǎo)地位，而僅僅發(fā)揮輔助功效，這些輔助功效僅僅是對該成分已知活性的利用，是醫(yī)藥領(lǐng)域慣用的輔助治療方式。若將上述輔助性成分與本發(fā)明藥物組合物配合使用，仍然屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例1所得化合物X的HR-ESI-MS譜。

圖2為本發(fā)明實施例1所得化合物X的¹H NMR譜。

圖3為本發(fā)明實施例1所得化合物X的¹³C NMR譜。

具體實施方式

本發(fā)明具體實施方式中使用的原料、設(shè)備均為已知產(chǎn)品，通過購買市售產(chǎn)品獲得。

實驗材料：

①試劑和填料

柱層析硅膠，200～300目(試劑級)，購于青島海洋硅膠干燥劑廠；

薄層層析硅膠G、GF254和H(化學(xué)純)，購于青島海洋硅膠干燥劑廠；

MCI gel CHP 20P，75～150μm，為反相聚苯乙烯型樹脂，購于日本三菱化學(xué)公司；

Sephadex LH-20葡聚糖凝膠，購于瑞典Amersham公司；

GF254硅膠制備薄層，購于煙臺江友硅膠開發(fā)有限公司；

95％乙醇(成都科龍化工試劑廠)；

甲醇(成都科龍化工試劑廠)；

二氯甲烷(成都科龍化工試劑廠)；

二甲基亞砜(成都科龍化工試劑廠)；

二甲基亞砜(色譜級)(Sigma公司)；

IMDM(Gibco公司生成)；

1640培養(yǎng)基、胎牛血清(Hyclone公司生產(chǎn))；

胰蛋白酶(Gibco公司)；

MTT(Amresco公司)；

所用其它試劑均為分析純。

②實驗儀器

Waters Synapt G₂HDMS高分辨飛行時間質(zhì)譜(美國Waters)；

Bruker-AV-600核磁共振儀(瑞士Bruker)；

BP211D十萬分之一電子天平(瑞士Sartorius)；

R-210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(瑞士BUCHI)；

DZG-6050型真空干燥箱(上海森信)；

酶標(biāo)儀(Thermo 3001，Thermo Fisher Scientific公司)；

電子天平(ESJ120-4型，沈陽龍騰電子稱量儀器有限公司)；

超凈臺(MCV-B161F(T)，日本SANYO公司)；

顯微鏡(Primo Vert，AxioCam ERc 5s，ZEISS公司)；

CO₂培養(yǎng)箱(HH.CP-T，上海齊欣科學(xué)儀器有限公司)。

③細(xì)胞

肺癌細(xì)胞A549、人急性淋巴髓單核細(xì)胞白血病細(xì)胞MV4-11均來源于美國ATCC公司。

實施例1、本發(fā)明聯(lián)芐醚類化合物的提取以及結(jié)構(gòu)鑒定

(1)藥材的提取：

干燥的白及藥材粗粉(3kg)，以95％乙醇回流提取3次(30L×3)，每次2h；

(2)成分的分離純化：

①、乙醇提取液(90L)經(jīng)減壓濃縮干燥得半固體流浸膏510g；

②、將半固體流浸膏(500g)用水(5L)分散，依次用乙酸乙酯(20L)、正丁醇(20L)萃取，合并乙酸乙酯部分，減壓回收溶劑，得乙酸乙酯浸膏160g；

③、采用硅膠柱色譜對乙酸乙酯浸膏(160g)進(jìn)行分離，石油醚：丙酮進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液經(jīng)薄層色譜法檢測，得到石油醚：丙酮＝30:1時的洗脫液Fr.16；

梯度洗脫的條件如下：

④、Fr.16組分(18g)經(jīng)過MCI處理以10％～100％v/v的乙醇水進(jìn)行梯度洗脫，并結(jié)合薄層色譜進(jìn)行檢測，分別得到10個組分Fr.16-a～Fr.16-j；

梯度洗脫的條件如下：

⑤、Fr.16-h組分(5.0g)經(jīng)過中壓液相色譜(Búchi Gradient Former B-687中壓液相色譜儀)以20％、30％、50％、70％、80％、95％、100％甲醇水進(jìn)行梯度洗脫，分別洗脫2、2、2、3、4、4、5個柱體積，得到Fr.16-h-1～Fr.16-h-7七個組分；

⑥、Fr.16-h-3組分(800mg)經(jīng)過硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇1：0、100：1、50：1為洗脫劑，每個比例洗脫劑洗脫4個柱體積，收集50：1洗脫的部分Fr.16-h-3c；

⑦、Fr.16-h-3c組分(280mg)以高效液相制備色譜分離，甲醇-水(80:20，V:V)為流動相，分離得到本發(fā)明化合物X(t_R＝26min)；

薄層色譜顯色時，噴以10％硫酸乙醇試液，于105℃下顯色3min多顯黃色、橘紅色至微紅色斑點，可以用于聯(lián)芐的追蹤檢測；

本發(fā)明化合物X的分子式C₃₂H₃₄O₈，高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)：HR-ESI-MS m/z 545.2175[M-H]^-(C₃₂H₃₃O₈的計算值為545.2175)，不飽和度為16；

化合物的核磁共振氫譜(¹H-NMR)和核磁共振碳譜(¹³C-NMR)由Bruker-AV-600核磁共振儀測定，具體數(shù)據(jù)見表1；

表1、本發(fā)明化合物X的¹H NMR(600MHz)和¹³C NMR(150MHz)in CD₃COCD₃

數(shù)據(jù)

由上述波譜學(xué)數(shù)據(jù)，結(jié)合HSQC、COSY、HMBC二維核磁共振數(shù)據(jù)，確定本發(fā)明化合物X的結(jié)構(gòu)如下：

Me表示甲基，名稱為4,5′,5″′-三羥基-5,3′,3″,3″′-四甲氧基二聯(lián)芐-3,4″-醚。

實施例2、本發(fā)明聯(lián)芐醚類化合物的抗肺癌A549活性試驗

①、細(xì)胞接種

用0.25％胰酶消化對數(shù)生長期的細(xì)胞。用含10％FBS的細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)配成單細(xì)胞懸液。采用細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)，將狀態(tài)良好的A549腫瘤細(xì)胞接種于96孔板，使細(xì)胞密度為4×10³個/mL，每孔加入細(xì)胞懸液100μL，置于37℃，5％CO₂培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h。

②、藥物處理

每個樣品從10μg/mL開始，用培養(yǎng)基梯度稀釋樣品，2倍稀釋，設(shè)置5個藥物濃度，每個濃度做復(fù)孔測試。以濃度為10、5、2.5、1.25、0.625μg/mL每孔加藥100μL，每個濃度設(shè)3個復(fù)孔，重復(fù)3次。陰性對照組為含有適量DMSO的培養(yǎng)基溶液，空白對照組為不含細(xì)胞的培養(yǎng)基和溶媒。將96孔板放回培養(yǎng)箱，37℃作用72h。

③、顯色及IC₅₀的計算

72h作用完畢后，避光條件下每孔加入MTT溶液(5g/L)20μL，繼續(xù)溫育培養(yǎng)4h后，棄掉上清液，每孔加入150μL DMSO，置于搖床上慢速振搖10min，使甲瓚充分溶解后，用酶標(biāo)儀測量570nm波長處的OD值，按下列公式計算增殖抑制率。

采用改良寇氏法IC₅₀＝log^-1[Xm-i(∑P-0.5)]進(jìn)行計算，其中Xm：設(shè)計的最大濃度的對數(shù)值；i：各濃度倍比濃度的對數(shù)值；ΣP：各組生長抑制率之和；0.5：經(jīng)驗常數(shù)。通過重復(fù)三次試驗，計算得到3個IC₅₀值(保留兩位小數(shù))，求平均值，得到本發(fā)明實施例1所得化合物X的IC₅₀值為3.9μg/mL。

上述結(jié)果表明，本發(fā)明的聯(lián)芐醚類化合物，對肺癌細(xì)胞的增殖具有顯著的抑制活性，能夠用于治療和/或預(yù)防肺癌，具有良好的臨床應(yīng)用前景。

實施例3、本發(fā)明聯(lián)芐醚類化合物的抗急性單白血病MV4-11活性試驗

①細(xì)胞接種

用0.25％胰酶消化對數(shù)生長期的細(xì)胞。用含10％FBS的細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)配成單細(xì)胞懸液。采用細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)，將狀態(tài)良好的MV4-11細(xì)胞接種于96孔板，使細(xì)胞密度為2×10⁴個/mL，每孔加入細(xì)胞懸液100μL，置于37℃，5％CO₂培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h。

②藥物處理

每個樣品從50μg/mL開始，用培養(yǎng)基梯度稀釋樣品，2倍稀釋，設(shè)置5個藥物濃度，每個濃度做復(fù)孔測試。以濃度為50、25、12.5、6.25、3.125μg/mL每孔加藥100μL，每個濃度設(shè)3個復(fù)孔，重復(fù)3次。陰性對照組為含有適量DMSO的培養(yǎng)基溶液，空白對照組為不含細(xì)胞的培養(yǎng)基和溶媒。將96孔板放回培養(yǎng)箱，37℃作用72h。

③顯色及IC₅₀的計算

72h作用完畢后，避光條件下每孔加入MTT溶液(5g/L)20μL，繼續(xù)溫育培養(yǎng)4h后，棄掉上清液，每孔加入150μL DMSO，置于搖床上慢速振搖10min，使甲瓚充分溶解后，用酶標(biāo)儀測量570nm波長處的OD值。

采用改良寇氏法IC₅₀＝log^-1[Xm-i(∑P-0.5)]進(jìn)行計算，其中Xm：設(shè)計的最大濃度的對數(shù)值；i：各濃度倍比濃度的對數(shù)值；ΣP：各組生長抑制率之和；0.5：經(jīng)驗常數(shù)。通過重復(fù)三次試驗，計算得到3個IC₅₀值(保留兩位小數(shù))，求平均值，得到本發(fā)明實施例1所得化合物X的IC₅₀值為24.3μg/mL。

上述結(jié)果表明，本發(fā)明的聯(lián)芐醚類化合物，同時還對急性單白血病細(xì)胞的增殖具有顯著的抑制活性，能夠用于治療和/或預(yù)防急性白血病，具有良好的臨床應(yīng)用前景。

綜上所述，本發(fā)明的聯(lián)芐醚類化合物，同時具有聯(lián)芐結(jié)構(gòu)和二苯醚結(jié)構(gòu)，與現(xiàn)有的聯(lián)芐類化合物相比，在結(jié)構(gòu)上差異很大；并且，本發(fā)明聯(lián)芐醚類化合物具有新的藥效：對腫瘤細(xì)胞具有很好的抑制作用，特別是，對肺癌細(xì)胞具有很好的抑制作用，其IC₅₀達(dá)到3.9μg/mL，此外，本發(fā)明聯(lián)芐醚類化合物還對急性單白血病細(xì)胞的增殖具有顯著的抑制活性；同時，本發(fā)明聯(lián)芐醚類化合物的制備方法簡便，反應(yīng)條件溫和，便于操作和控制，能耗小，產(chǎn)率高，成本低，非常適合產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。