本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一組用于皮膚相關(guān)基因檢測的引物組合物及檢測方法；

背景技術(shù)：

單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism,SNP)主要是指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性，它是人類可遺傳變異中最常見的一種，占所有已知多態(tài)性的90％以上。SNP在人類基因組中廣泛存在，平均每500～1000個堿基對中就有1個，估計其總數(shù)可達300萬個甚至更多。SNP所表現(xiàn)的多態(tài)性只涉及單個堿基的改變，這種改變可由單個堿基的轉(zhuǎn)換、顛換、堿基的插入或缺失引起。近年來研究表明，這種在DNA序列上的單個堿基的改變能夠影響人類疾病的發(fā)生、抵御外來病原微生物的能力、身體對化學物質(zhì)及藥物的反應等，這種相關(guān)性也被應用于各領(lǐng)域的研究中：1)生物醫(yī)學領(lǐng)域：在全基因組相關(guān)性分析中，SNP用來比較種群中基因組上的相應區(qū)域作為疾病相關(guān)的分子標記；2)法醫(yī)鑒定領(lǐng)域：SNP曾在最初的法醫(yī)鑒定方面做出過卓越貢獻。隨著DNA指紋技術(shù)的發(fā)展，SNP逐漸被STR(Short tandem repeat,短串聯(lián)重復序列)所代替。然而當樣品量極低，或樣品有降解發(fā)生時，SNP鑒定仍然是優(yōu)于STR的鑒定工具；3)藥物遺傳學領(lǐng)域：一些SNP與不同藥物的代謝能力有關(guān)，如攜帶特定SNP的人群在服用了相應的藥物，如丁胺卡那霉素、小諾霉素后出現(xiàn)耳聾癥狀。這些與藥物代謝能力有關(guān)的SNP位點，可以作為治療癌癥、感染性疾病等的治療靶標。

越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，大量的SNP位點與癌癥、糖尿病、自身免疫性疾病、心臟病甚至機體自身的抗氧化能力等有密切的聯(lián)系，如G6PC(葡萄糖－6－磷酸酶)、GCK(葡萄糖激酶)的SNP位點與機體糖尿病的發(fā)生有關(guān)；TNF-α(Tumor necrosis factor,腫瘤壞死因子)的SNP位點與機體過度免疫反應有關(guān)；SOD2(Superoxide Dismutase,超氧化物歧化酶)SNP位點與機體抗氧化能力下降有關(guān)?；驒z測是通過血液、其他體液、細胞對個體的DNA進行檢測的技術(shù)，通過提取其中特定的分子信息來預知身體患疾病的風險，比如乳腺癌風險基因檢測、阿爾茲海默氏癥風險檢測、心血管疾病風險檢測、糖尿病風險檢測等等，當然現(xiàn)階段人們接觸最多的就是無創(chuàng)產(chǎn)前診斷，這種診斷方式具有安全性高、準確性好、無痛無創(chuàng)、避免羊水穿刺引發(fā)感染的風險。隨著測序技術(shù)的不斷發(fā)展、測序成本的不斷降低，基因檢測已進一步擴大了應用領(lǐng)域和應用人群，除了與疾病相關(guān)的檢測外，基因檢測的公司還開發(fā)出了天賦基因檢測、智商基因檢測、健身基因檢測、肥胖基因檢測等與人們生活質(zhì)量相關(guān)的各種檢測項目。世界各國也正積極推動著基因檢測的發(fā)展，美國更是提出了精準醫(yī)療計劃，相信在不久的將來，基因檢測將會在我們?nèi)粘Ｉ畹母鱾€領(lǐng)域為人類服務。

除了上述疾病相關(guān)的基因，國外的一些護膚品公司更是提出了精準護膚的皮膚檢測項目，通過提取皮膚相關(guān)基因的基因信息，針對不同的體質(zhì)來制訂不同的護膚方案，以此來解決皮膚出現(xiàn)的健康問題，并延緩肌膚的衰老。而在我國，此類檢測還處于缺失狀態(tài)，大部分人的護膚還處于不斷地“試驗”階段，對自己的皮膚不夠了解，不能夠很好地根據(jù)自身機體狀態(tài)選擇護膚品，往往造成更嚴重的皮膚問題的出現(xiàn)。一些美容機構(gòu)使用皮膚檢測儀來確定膚質(zhì)，這種檢測儀只能觀察到皮膚表面存在的問題，而不能對機體的體質(zhì)有一個深入的了解，所以采取的方法往往治標不治本，不能夠解決根本問題。因而，目前的皮膚檢測方法仍有待改進。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一組用于皮膚相關(guān)基因檢測的引物組合物，用于對相應皮膚相關(guān)基因的特定區(qū)域進行擴增并測序，能夠同時對23個皮膚相關(guān)基因的SNP位點進行檢測，具有敏感度高、方便全面、快速的優(yōu)點。

本發(fā)明的另一目的在于提供利用本發(fā)明所述的引物組合物檢測皮膚相關(guān)基因的SNP位點的方法。

為解決上述問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：

一組用于皮膚相關(guān)基因檢測的引物組合物，該引物組合物包括第一引物組和第二引物組；所述第一引物組包括如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.46所示的23對引物序列；所述第二引物組包括如SEQ ID NO.47和SEQ ID NO.48所示的引物。

一種利用本發(fā)明所述用于皮膚相關(guān)基因檢測的引物組合物對皮膚相關(guān)基因進行檢測的方法，該方法包括以下步驟：

1)待測樣本提?。簭纳飿颖局刑崛“つw相關(guān)基因SNP位點的基因組獲得待測樣本DNA；

2)構(gòu)建皮膚相關(guān)基因SNP位點核酸測序文庫：利用第一引物組對皮膚相關(guān)基因SNP位點，以待測樣本DNA為模板，進行第一輪PCR擴增，獲得第一輪擴增產(chǎn)物；利用第二引物組，以第一輪擴增產(chǎn)物為模板進行第二輪PCR擴增，獲得第二輪擴增產(chǎn)物，用第二輪擴增產(chǎn)物構(gòu)成所述待測皮膚相關(guān)基因SNP位點核酸測序文庫；

3)測序：對上述待測皮膚相關(guān)基因SNP位點核酸測序文庫進行測序，基于測序結(jié)果確定待測樣本DNA的核酸序列。

本發(fā)明所述的利用本發(fā)明所述用于皮膚相關(guān)基因檢測的引物組合物對皮膚相關(guān)基因進行檢測的方法中，作為進一步的方案，步驟2)中，按照20μL總體反應體系計算，第一輪PCR擴增的反應體系如下：

本發(fā)明所述的利用本發(fā)明所述用于皮膚相關(guān)基因檢測的引物組合物對皮膚相關(guān)基因進行檢測的方法中，作為進一步的方案，所述第一輪PCR擴增的反應程序為：

本發(fā)明所述的利用本發(fā)明所述用于皮膚相關(guān)基因檢測的引物組合物對皮膚相關(guān)基因進行檢測的方法中，作為進一步的方案，步驟2)中，按照20μL總體反應體系計算，第二輪PCR擴增的反應體系如下：

本發(fā)明所述的利用本發(fā)明所述用于皮膚相關(guān)基因檢測的引物組合物對皮膚相關(guān)基因進行檢測的方法中，作為進一步的方案，所述第二輪PCR擴增的反應程序為：

本發(fā)明所述的利用本發(fā)明所述用于皮膚相關(guān)基因檢測的引物組合物對皮膚相關(guān)基因進行檢測的方法中，作為進一步的方案，所述生物樣本為人體唾液或口腔拭子樣本。

相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果如下：

1.本發(fā)明所述的引物組合物能夠特異性識別皮膚相關(guān)基因的SNP位點，并能夠同時對23個皮膚相關(guān)基因的SNP位點進行檢測；同時該引物組具有高度特異性，能夠?qū)x取的23個皮膚相關(guān)基因的SNP位點區(qū)域進行特異性擴增，無非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生；

2.本發(fā)明所述的引物組合物用于皮膚相關(guān)基因檢測，降低了實驗成本、簡化了實驗步驟并具有良好的可重復性，具有敏感度高、方便全面、快速的優(yōu)點；

3.本發(fā)明所述的利用本發(fā)明所述用于皮膚相關(guān)基因檢測的引物組合物對皮膚相關(guān)基因進行檢測的方法采用本發(fā)明所述的引物組，一步即能夠?qū)崿F(xiàn)23個皮膚相關(guān)基因的SNP位點核酸序列的富集及文庫的構(gòu)建，操作簡單、耗時少、鑒定結(jié)果準確、可重復性高；

4.本發(fā)明的引物通過與不同測序平臺adapter連接能夠?qū)崿F(xiàn)在不同的高通量測序平臺之間的轉(zhuǎn)換，滿足不同測序平臺的測序要求。

下面將結(jié)合附圖及實施例對本發(fā)明作進一步說明。

附圖說明

圖1是對23對引物結(jié)合特異性電泳檢測結(jié)果；其中(a)為1-19對引物的電泳結(jié)果，(b)為20-23對引物的電泳結(jié)果；

圖2是樣本PCR擴增結(jié)果，其中(a)為1號樣本的結(jié)果，M為標準帶；(b)為2號和3號樣本與陰性對照的結(jié)果(N)，N是模板為去離子水的陰性對照，M為標準帶；(c)為4號、5號樣本的結(jié)果，M為標準帶。

具體實施方式

需要說明的是，術(shù)語“第一”、“第二”僅用于描述目的，而不能用于指示相對重要性或者隱含指明所指示的技術(shù)特征的數(shù)量。由此，既定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隱含地包括一個或者更多個該特征。進一步地，在本發(fā)明的描述中，除非另有說明，“多個”的含義是兩個或兩個以上。

本發(fā)明所述的一組用于皮膚相關(guān)基因檢測的引物組合物，該引物組合物包括第一引物組和第二引物組；所述第一引物組包括如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.46所示的23對引物序列；所述第二引物組包括如SEQ ID NO.47和SEQ ID NO.48所示的引物。

本發(fā)明的引物組合物能夠特異性地識別皮膚相關(guān)基因的SNP位點，并能夠同時對23個皮膚相關(guān)基因的SNP位點進行檢測。進而，利用本發(fā)明的引物組合物對皮膚相關(guān)基因的23個SNP位點進行兩輪PCR擴增，并通過摸索引物的濃度比例及擴增條件，一步即能夠?qū)崿F(xiàn)23個皮膚相關(guān)基因的SNP位點核酸序列的富集；同時該引物組合物具有高度特異性，能夠?qū)x取的23個皮膚相關(guān)基因的SNP位點區(qū)域進行特異性擴增，無非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生。該引物組合物降低了實驗成本、簡化了實驗步驟并具有良好的可重復性。進而測序后，能夠有效獲得23個皮膚相關(guān)基因的SNP位點核酸序列信息，經(jīng)過比對分析即可獲得相應的基因信息。

一種利用本發(fā)明所述用于皮膚相關(guān)基因檢測的引物組合物對皮膚相關(guān)基因進行檢測的方法，該方法包括以下步驟：

1)待測樣本提取：從生物樣本中提取包含皮膚相關(guān)基因SNP位點的基因組獲得待測樣本DNA；

2)構(gòu)建皮膚相關(guān)基因SNP位點核酸測序文庫：利用第一引物組對皮膚相關(guān)基因SNP位點，以待測樣本DNA為模板，進行第一輪PCR擴增，獲得第一輪擴增產(chǎn)物；利用第二引物組，以第一輪擴增產(chǎn)物為模板進行第二輪PCR擴增，獲得第二輪擴增產(chǎn)物，用第二輪擴增產(chǎn)物構(gòu)成所述待測皮膚相關(guān)基因SNP位點核酸測序文庫；

3)測序：對上述待測皮膚相關(guān)基因SNP位點核酸測序文庫進行測序，基于測序結(jié)果確定待測樣本DNA的核酸序列。

上述方法中，利用本發(fā)明構(gòu)建待測皮膚相關(guān)基因SNP位點核酸測序文庫，一步即能夠?qū)崿F(xiàn)對23個待測皮膚相關(guān)基因SNP位點核酸序列的富集及文庫的構(gòu)建。進而，將利用本發(fā)明的方法獲得的待測皮膚相關(guān)基因SNP位點測序文庫，用于測序和比對分析后，即可確定相應核酸序列，以及SNP位點基因信息，實現(xiàn)對皮膚相關(guān)基因的23個SNP位點檢測的目的。因而，本發(fā)明的方法適用于各種皮膚相關(guān)基因SNP位點的檢測，一次反應即可獲得相應基因的基因信息，成本低、效率高、敏感度高、鑒定結(jié)果準確、可重復性好。

上述方法中，由于多個待測樣本的標簽序列各不相同，根據(jù)待測樣本的選擇，可以分別獨立地構(gòu)建多個待測樣本的皮膚相關(guān)基因SNP位點測序文庫，針對多個待測樣本中的每一個待測樣本，分別獨立地構(gòu)建待測皮膚相關(guān)基因SNP位點核酸測序文庫。此外，也可以將多個待測樣本的SNP位點核酸測序文庫混合以獲得混合文庫。

本發(fā)明所述的利用本發(fā)明所述用于皮膚相關(guān)基因檢測的引物組合物對皮膚相關(guān)基因進行檢測的方法中，作為進一步的方案，步驟2)中，按照20μL總體反應體系計算，第一輪PCR擴增的反應體系如下：

本發(fā)明所述的利用本發(fā)明所述用于皮膚相關(guān)基因檢測的引物組合物對皮膚相關(guān)基因進行檢測的方法中，作為進一步的方案，所述第一輪PCR擴增的反應程序為：

本發(fā)明所述的利用本發(fā)明所述用于皮膚相關(guān)基因檢測的引物組合物對皮膚相關(guān)基因進行檢測的方法中，作為進一步的方案，步驟2)中，按照20μL總體反應體系計算，第二輪PCR擴增的反應體系如下：

本發(fā)明所述的利用本發(fā)明所述用于皮膚相關(guān)基因檢測的引物組合物對皮膚相關(guān)基因進行檢測的方法中，作為進一步的方案，所述第二輪PCR擴增的反應程序為：

本發(fā)明所述的利用本發(fā)明所述用于皮膚相關(guān)基因檢測的引物組合物對皮膚相關(guān)基因進行檢測的方法中，作為進一步的方案，所述生物樣本為人體唾液或口腔拭子樣本。

以下是本發(fā)明具體的實施例，在下述實施例中，所采用的試劑、原料及設備均可以通過商業(yè)渠道獲得。

實施例1

利用本發(fā)明所述用于皮膚相關(guān)基因檢測的引物組合物對皮膚相關(guān)基因進行檢測，具體方法如下：

1)取樣：取健康人口腔唾液，在取樣前30分鐘，未進食或飲水，取樣時以舌尖刮擦上顎刺激唾液腺分泌唾液，并將唾液與唾液保存液1:1比例混勻；

2)待測樣本DNA提?。喝∩鲜龌旌衔?000g離心5分鐘，棄上清，180μl PBS重懸，并將重懸后的樣品轉(zhuǎn)移至新的2.0ml離心管中，加入25μl蛋白酶K溶液、200μl裂解緩沖液，震蕩混勻30秒，60℃水浴15分鐘；加入200μl無水乙醇，震蕩混勻；樣品轉(zhuǎn)移至DNA結(jié)合柱，最大轉(zhuǎn)速離心1分鐘，棄廢液，加入500μl DNA結(jié)合緩沖液，最大轉(zhuǎn)速離心1分鐘；棄廢液，加入700μl洗滌緩沖液，最大轉(zhuǎn)速離心1分鐘；加入70℃預熱的洗脫緩沖液70μl，室溫靜置3分鐘，最大轉(zhuǎn)速離心1分鐘，離心后液體作為PCR模板；

3)皮膚相關(guān)基因SNP位點的PCR擴增：基于23個皮膚相關(guān)基因的SNP位點設計能夠?qū)ζ溥M行特異性擴增的引物，包括第一引物組SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.46，其中第一引物組包含SNP位點序列特異性引物序列及一段通用引物序列；第一引物組的引物能夠分別同時與各自皮膚相關(guān)基因SNP位點序列特異性結(jié)合，以上述PCR模板進行第一輪PCR擴增，是擴增的內(nèi)引物；然后設計第二輪PCR擴增引物組SEQ ID NO.47和SEQ ID NO.48，該引物包含與第一引物組相同的通用引物序列和adapter序列，該引物能夠結(jié)合在第一輪PCR產(chǎn)物上，通過通用引物將adapter序列連接到第一輪PCR擴增產(chǎn)物上，是PCR的外引物；

第一引物組的23對序列如下：

第1對引物：F:TAATACGACTCACTATAGGGGGTTCCAGACCATTGACATCGAGC

R:ACGCCAAGCTATTTAGGTGAGACCTCCCTCGTAGGTTTAGAGGA

第2對引物：F:TAATACGACTCACTATAGGGGGGAAAACTGCCTGTGCCACGT

R:TACGCCAAGCTATTTAGGTGAGACATGGCGCAATTGTCCAAGAAG

第3對引物F:TAATACGACTCACTATAGGGGGTTACAGGTATAAGCCACCGCAC

R:TACGCCAAGCTATTTAGGTGAGAGTGGTTGGAGTGATGACGAACA

第4對引物F:TAATACGACTCACTATAGGGGGACTGACCGGGCTGTGCTTTCTCGTC

R:TACGCCAAGCTATTTAGGTGAGACATGATCTGCGCGTTGATGTG

第5對引物F:TAATACGACTCACTATAGGGTGAACTCACATGTTATGCCACTTAG

R:TACGCCAAGCTATTTAGGTGAGAACTTTCCTCCCCTTATGGATTCC

第6對引物F:TAATACGACTCACTATAGGGGGACACAGGCCGGACAGAAGCT

R:TACGCCAAGCTATTTAGGTGAGATAGACACGGACTCGGTAGTTGGA

第7對引物F:TAATACGACTCACTATAGGGGGGGAAGCTTTTTCATTTTACTGAAGC

R:TACGCCAAGCTATTTAGGTGAGAGGTATCACTTGGCAACCAGTCT

第8對引物F:TAATACGACTCACTATAGGGGGGGCCCTGCATCTAACCACTAAA

R:TACGCCAAGCTATTTAGGTGAGATGGACTGAATGAGACCCTCAGA

第9對引物F:TAATACGACTCACTATAGGGGGGCAGCTCTAATGACAGGATGGT

R:TACGCCAAGCTATTTAGGTGAGAGCATTTCCTGCTCCAGCCAG

第10對引物F:TAATACGACTCACTATAGGGGGAGCTAGGCCATATGATGAAGAT

R:TACGCCAAGCTATTTAGGTGAGATGAGTGCCATTTCATTCACACT

第11對引物F:TAATACGACTCACTATAGGGGGGCATTCTCCTATCTGCCTCTGC

R:TACGCCAAGCTATTTAGGTGAGACTGCTTCCCAAGTTCTGGTGTAGTG

第12對引物F:TAATACGACTCACTATAGGGGGCAGGCAGTTACTGGTTCTGGAT

R:TACGCCAAGCTATTTAGGTGAGAGGAGGATTTGCTTGCTGAACAC

第13對引物F:TAATACGACTCACTATAGGGGGCACCAGCCAAAGAATGTGGTTG

R:TACGCCAAGCTATTTAGGTGAGATGCTCACATCATGCTCGTGGA

第14對引物F:TAATACGACTCACTATAGGGGGACCCACCTCACAGGAAGAAAAC

R:TACGCCAAGCTATTTAGGTGAGACCTTCTCTTCTTGTCCTGGCTC

第15對引物F:TAATACGACTCACTATAGGGGGCTTGATACCCAGACACCCCTTG

R:TACGCCAAGCTATTTAGGTGAGAACCTTGTGAACCAGCTTTGCTA

第16對引物F:TAATACGACTCACTATAGGGGGAGAGATGGTACCTGACATCTGG

R:TACGCCAAGCTATTTAGGTGAGATCAGTAACTCTATAGACACTGTCTAGC

第17對引物F:TAATACGACTCACTATAGGGGGAGGGCTTTTCATCACTGGGAAG

R:TACGCCAAGCTATTTAGGTGAGATGAACAATTACATGCCAATAAACTG

第18對引物F:TAATACGACTCACTATAGGGGGCAGACCTGGTCCCCAAAAGAAA

R:TACGCCAAGCTATTTAGGTGAGAACACAAGCATCAAGGATACCCC

第19對引物F:TAATACGACTCACTATAGGGGGCAACCAGATCATGCAAAGCAGG

R:TACGCCAAGCTATTTAGGTGAGACTAGAGCTAGAAACGGGCCATG

第20對引物F:TAATACGACTCACTATAGGGGGAGGAGAGAAAGGGTGGTCTGAT

R:TACGCCAAGCTATTTAGGTGAGACCCCAGTGAGTTGTGTGTGTAA

第21對引物F:TAATACGACTCACTATAGGGGGCCCGACCAGGAGATGAAAACAT

R:TACGCCAAGCTATTTAGGTGAGACTTTTCTTTGCGGCATACCCTG

第22對引物F:TAATACGACTCACTATAGGGGGAGCAAGATCCTGTCTCTACCTGA

R:TACGCCAAGCTATTTAGGTGAGAAGTCATCAGAGTATCCAGGGTT

第23對引物F:TAATACGACTCACTATAGGGGGCATGGAGCTGCAGGTGATCAC

R:TACGCCAAGCTATTTAGGTGAGACCCATGTACTGCTTCATCTGCT

第二引物組序列如下：

A1:CCATCTCATCCCTGCGTGTCTCCGACTCAGCTAAGGTAACTAATACGACTCACTATAGGGGG

P1:CCTCTCTATGGGCAGTCGGTCATTACGCCAAGCTATTTAGGTGAGA

下表1為各引物對的各項指標：

同時在NCBI數(shù)據(jù)庫中驗證上述引物的特異性，結(jié)果顯示，上述引物都能夠特異性地擴增相應基因的SNP位點；采用二代高通量測序平臺測序，可在第二輪PCR引物SEQ ID NO.47和SEQ ID NO.48的5’端添加標簽序列(tag序列為6-8個隨機堿基)，然后通過將不同樣本的產(chǎn)物混合后再進行測序，并通過標簽序列對測序結(jié)果進行區(qū)分，由此能夠在滿足檢測要求的同時節(jié)約成本；同時為了滿足不同測序平臺的要求，可將第二引物組的adapter序列替換為相應測序平臺的adapter序列，便于使用不同的測序平臺進行測序；

其中PCR擴增具體如下：將所需試劑放于冰上融化，充分混勻后，按下表配制反應體系，分裝至PCR管，混勻并短暫離心；在20μl反應體系中，第一輪模板為被檢測樣本提取的基因組DNA溶液，上下游引物為SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.46，其中各引物混合成引物混合物溶液(上、下游引物分別混合成上游引物混合物溶液和下游引物混合物溶液)，上、下游引物混合物溶液各1.2μL(濃度10μM)，反應程序退火溫度為55℃，25個循環(huán)，以獲得第一輪擴增產(chǎn)物；第二輪PCR擴增，在20μl反應體系中，取上述第一輪反應產(chǎn)物2μl作為反應模板，上下游引物分別為0.4μl(濃度10μM)的SEQ ID NO.A1和SEQ ID NO.P1，反應程序退火溫度為58℃，15個循環(huán)，以便獲得第二輪擴增產(chǎn)物；反應管置于PCR儀按以下表的程序進行反應；

按照上述步驟1)-步驟3)另外處理4個樣本，得到5個樣本的第二輪擴增產(chǎn)物，分別標明1-5號；

4)電泳檢測：取3μl 5個樣本的第二輪擴增產(chǎn)物進行凝膠電泳檢測，采用1％(m/v)濃度瓊脂糖凝膠，150V恒定電壓電泳15分鐘，染色后在紫外燈下檢查擴增效果；圖2為PCR擴增結(jié)果，其中(a)為1號樣本的結(jié)果，M為標準帶；(b)為2號和3號樣本與陰性對照的結(jié)果(N)，N是模板為去離子水的陰性對照，M為標準帶；(c)為4號、5號樣本的結(jié)果，M為標準帶。圖2中可看到電泳條帶單一，大小約250bp左右，與理論值大致相符，沒有其他非特異條帶存在。由于各樣本的濃度存在差異，產(chǎn)物條帶亮度不一；第一引物組中23對引物的電泳圖參見圖1。

5)純化：對第二輪擴增產(chǎn)物進行純化，純化方式選用Ampure Beads，去除反應液中殘留的引物、dNTPs、鹽分、非特異PCR產(chǎn)物，最終滿足產(chǎn)物長度在200-500bp，DNA純度：OD260/OD280＝1.6-2.0；

6)測序：采用Ion torrent二代測序平臺測序，將1-5號樣本的第二輪擴增產(chǎn)物混合后進行測序，通過5’端添加的標簽序列對測序結(jié)果進行區(qū)分，由此能夠在滿足檢測要求的同時節(jié)約成本；

7)信息分析：將測序結(jié)果利用BWA序列分析軟件將待測皮膚相關(guān)基因SNP位點與參考序列進行比對，所述參考序列包括各種待測皮膚相關(guān)基因SNP位點的核酸序列，其中參考序列來源于NCBI人類基因組參考序列，以此獲得23個皮膚相關(guān)基因SNP位點的核酸序列：SEQ ID NO.49-SEQ ID NO.71，以此確定了樣本相應的基因信息。

上述實施方式僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，不能以此來限定本發(fā)明保護的范圍，本領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明的基礎(chǔ)上所做的任何非實質(zhì)性的變化及替換均屬于本發(fā)明所要求保護的范圍。