技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種串聯(lián)RAD標(biāo)簽測序文庫的構(gòu)建方法，步驟為：1）酶切：利用內(nèi)切酶對(duì)DNA進(jìn)行酶切反應(yīng)；2）接頭連接：對(duì)酶切片段分別連接接頭，接頭設(shè)計(jì)有SapI酶的酶切位點(diǎn)和用于實(shí)現(xiàn)標(biāo)簽串聯(lián)的特征序列以及擴(kuò)增引物結(jié)合的通用序列；3）連接產(chǎn)物擴(kuò)增：利用生物素引物和普通引物組合進(jìn)行PCR擴(kuò)增，富集，切膠回收PCR產(chǎn)物，再次擴(kuò)增，等量混合純化；4）串聯(lián)標(biāo)簽文庫：利用SapI酶對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行酶切，依次串聯(lián)；5）串聯(lián)長標(biāo)簽富集：串聯(lián)長標(biāo)簽經(jīng)凝膠純化后利用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，引入barcode構(gòu)建文庫；6）文庫測序本發(fā)明能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)全基因組范圍遺傳標(biāo)記和表觀遺傳變異進(jìn)行高通量、低成本地篩查和檢測。

技術(shù)研發(fā)人員：王師;包振民;劉平平;呂佳;張玲玲
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國海洋大學(xué)
文檔號(hào)碼：201610629494
技術(shù)研發(fā)日：2016.08.02
技術(shù)公布日：2016.12.07