本發(fā)明是利用人在健康狀態(tài)時(shí)的自體微生物構(gòu)建以用于菌群移植的菌群庫(kù)，將來通過菌群移植來治療疾病、保健等，涉及微生物學(xué)、精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
科學(xué)研究表明，生活在人體中的微生物細(xì)胞數(shù)量可能達(dá)到1014，超過人體細(xì)胞數(shù)目的10倍以上，其編碼的基因數(shù)量是人類基因組基因數(shù)量的100倍以上。這些微生物群對(duì)于人體有著重要的生理作用，它們幫助我們消化食物，產(chǎn)生各種維生素，調(diào)整我們的免疫系統(tǒng)，對(duì)抗有害微生物，保護(hù)我們的皮膚免受感染，甚至影響著人們的體型和情緒，對(duì)于人類疾病的治療意義重大。
人體許多部位都生活著微生物，其中腸道中的微生物數(shù)量最多、種群最豐富，大約80％的人體正常微生物都集中在這里，總重量超過一公斤，種類有四五百種。人的皮膚上也生活著許多微生物(膚表微生物)，有細(xì)菌也有真菌，人體汗液中的無機(jī)離子和有機(jī)物是這些微生物愜意的食物?？谇皇俏⑸锷娴暮玫胤?，唾液給這里的微生物帶來豐富的營(yíng)養(yǎng)和充足的水分，口腔高低不平的表面又為各類微生物提供了棲身之所，因此近百種細(xì)菌、真菌和原生動(dòng)物都能在這里安詳?shù)厣?。此外，鼻腔、咽腔以及女性生殖道也是一些微生物定居的?chǎng)所。人體的胃雖然不是微生物的好去處，但這里也生活有少量的耐酸細(xì)菌和酵母菌，它們粘附在胃壁上生長(zhǎng)。
健康人體內(nèi)，這些正常微生物的定植和生態(tài)平衡對(duì)維持人體健康起著非常重要的作用。最近研究發(fā)現(xiàn)，人類有超過90％的疾病和腸道菌群失衡有關(guān)。糞菌移植是將健康人的糞菌移植到患者胃腸道內(nèi)，幫助糾正患者失衡的腸道菌群和重建具有正常功能的腸道微生態(tài)。目前，糞菌移植對(duì)難辨梭狀芽孢桿菌感染具有良好療效已獲廣泛認(rèn)同；其對(duì)于與菌群失調(diào)相關(guān)的其他腸道內(nèi)外疾病的治療作用也成為研究熱點(diǎn)。同時(shí)，人體其他部位微生物菌群的失衡也引發(fā)了各種相關(guān)疾病，未來或許也可以通過菌群移植重建正常的微生態(tài)，從而達(dá)到減輕或治療疾病的目的。
然而目前有關(guān)菌群移植供體的選擇和篩檢仍無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，甚至還存在諸多爭(zhēng)論，供體的年齡、健康評(píng)價(jià)、菌群的免疫排斥和安全性(尤其是長(zhǎng)期安全性)等影響還需要相關(guān)對(duì)照研究和長(zhǎng)期隨訪深入探討。由于菌群移植的特殊性，家庭成員或朋友常被指定為捐贈(zèng)者，健康的志愿者也是合適的捐贈(zèng)者。然而，移植他人的微生物一方面可能有未知的安全因素(如未知有害微生物的存在、免疫排斥反應(yīng)、長(zhǎng)期安全性等)，另一方面還存在一定的倫理問題和心理排斥問題，而移植自體健康狀態(tài)尤其是青春期時(shí)候(兒童的糞便受環(huán)境因素影響較少，其腸道菌群的變異程度較低，可能也是良好的糞菌來源)的微生物菌群則可以有效避免這些問題。因此，“備份”自體健康狀態(tài)時(shí)尤其是兒童或未成年時(shí)期的微生物，未來一旦發(fā)生相關(guān)疾病需要菌群移植治療時(shí)，就可立即做自體微生物菌群的移植，恢復(fù)健康，減輕自己及家人經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。
研究還發(fā)現(xiàn)，人老是先由腸道有益微生物減少引起的。嬰兒自母親腹中出生后幾小時(shí)內(nèi)，通過喂奶和肛門等途徑，就有大量的有益微生物在其腸道內(nèi)定居，在青春期至40歲這個(gè)階段，有益菌類一直占據(jù)著絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，40歲以后，有益菌類數(shù)量逐漸減少，有害菌類增多，腸道粘膜變薄，其防御機(jī)能和免疫機(jī)能減弱，結(jié)果導(dǎo)致大量有害物質(zhì)及有害細(xì)菌產(chǎn)生的毒素進(jìn)入血液，損害內(nèi)臟器官，加速了各臟器的功能退化，使人身體慢慢變老。所以，應(yīng)用自存的健康狀態(tài)時(shí)尤其是青春期時(shí)的腸道微生物菌群，還有可能實(shí)現(xiàn)夢(mèng)寐以求的“保存美麗”“青春永駐”的美好愿望，擁有高品質(zhì)人生。同時(shí)，自體微生物菌群不但可用于本人，還可為其父母及相關(guān)親屬(如堂表弟妹，甚至父母)等人的臨床應(yīng)用。并且還可供全國(guó)和全世界患者進(jìn)行相關(guān)匹配后，選擇作為微生物菌群移植用。自體微生物菌群庫(kù)的構(gòu)建可為企業(yè)帶來巨大收益。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明是利用人在健康狀態(tài)時(shí)的自體微生物構(gòu)建以用于菌群移植的菌群庫(kù)，將來通過菌群移植來治療疾病、保健等，相比移植他人的微生物，具有心理接受性強(qiáng)、無免疫排斥、無倫理爭(zhēng)議等優(yōu)點(diǎn)。健康人自體微生物菌群庫(kù)的建立為未來個(gè)性化精準(zhǔn)醫(yī)療、保健等提供基礎(chǔ)。
本發(fā)明的一種利用自體健康狀態(tài)時(shí)微生物構(gòu)建以用于菌群移植的菌群庫(kù)的方法，它是按照以下步驟進(jìn)行的：
1、儲(chǔ)戶信息采集及健康狀態(tài)的確認(rèn)。儲(chǔ)戶簽訂“自體微生物菌群庫(kù)服務(wù)協(xié)議書”后，填寫身份信息，并詢問了解其疾病史(包括是否有腹瀉病史和慢性便秘，是否有惡性腫瘤病史，是否有系統(tǒng)性自身免疫性疾病，是否濫用靜脈注射藥物，是否有吸毒史，是否有高風(fēng)險(xiǎn)性行為，是否有紋身和監(jiān)禁史等)；之后對(duì)其進(jìn)行體檢和心理測(cè)評(píng)，體檢至少應(yīng)包含以下內(nèi)容：血清測(cè)試(檢查是否有已知的傳染性疾病，血清做甲型肝炎病毒IgM，乙型肝炎IgM和IgG，乙型肝炎表面抗原，乙型肝炎表面抗體IgM，丙型肝炎病毒IgG抗體，HIV 1型和2型，熒光梅毒密螺旋體抗體吸附試驗(yàn))；血液測(cè)試(檢查相關(guān)部位是否有炎癥，檢查血液中白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中間細(xì)胞數(shù)等)；糞便測(cè)試(對(duì)糞便進(jìn)行PCR、抗原、鏡檢和培養(yǎng)測(cè)試，檢查腸道內(nèi)是否有難辨梭狀芽胞桿菌毒素B、輪狀病毒、賈第蟲、隱孢子蟲、環(huán)孢子蟲、隱孢子蟲等孢子球蟲(抗酸染色)、蟲卵、寄生蟲、志賀產(chǎn)毒素大腸桿菌、沙門菌、志賀菌、耶爾森鼠疫桿菌、彎曲桿菌、非霍亂弧菌、鄰單胞菌、氣單胞菌等)。心理測(cè)評(píng)采用問卷調(diào)查的方式，主要檢測(cè)是否有心理和精神疾病。最后，確定身心健康的儲(chǔ)戶才建議實(shí)行自體微生物菌群的保存，最好應(yīng)為身心健康的兒童或未成年人，不健康的儲(chǔ)戶不建議保存。
2、自體相關(guān)部位微生物菌群的采集。采集部位包括口腔、鼻腔、女性生殖道、腸道，采集過程在無菌條件下進(jìn)行，最好是在GMP100的房間內(nèi)進(jìn)行?？谇?、鼻腔、生殖道的微生物菌群采用無菌棉簽取樣，腸道微生物采用專用的糞便取樣器進(jìn)行取樣，取樣后迅速置于已預(yù)先滅菌的厭氧還原液中密封保存。
3、微生物菌群多樣性分析。對(duì)同批次所得的微生物樣品，分別取一個(gè)樣進(jìn)行高通量測(cè)序，了解其微生物的多樣性，并保存記錄其檢測(cè)結(jié)果。
4、微生物菌群的保存。將上述所得的微生物樣品分裝好后放入凍存容器中，密封，編號(hào)，并登記，之后立即進(jìn)行程序是降溫，然后放入到-196℃液氮罐中長(zhǎng)期保存，或?qū)⑽⑸飿悠分谱鞒赡z囊進(jìn)行冷凍保存，儲(chǔ)存環(huán)境定期檢測(cè)。
5、微生物菌群中益生菌的分離保存。從上述所得的微生物樣品中分離純化得到相關(guān)益生菌，如雙歧桿菌(Bifidobacterium)、乳酸桿菌(Lactobacill)、擬桿梭菌(Bacteroides)、柔嫩梭菌、脆弱擬桿菌、奇異菌(Atopobium)、普氏菌(Prevotella)等，然后再將這些益生菌分別放入到-196℃液氮罐中長(zhǎng)期保存，或?qū)⑽⑸飿悠分谱鞒赡z囊進(jìn)行冷凍保存，儲(chǔ)存環(huán)境定期檢測(cè)。
6、建庫(kù)及庫(kù)的信息化管理。將樣品信息和儲(chǔ)戶信息匹配后錄入計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)庫(kù)，并建立數(shù)據(jù)庫(kù)信息檢索，按照微生物菌種保藏庫(kù)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行管理。
附圖說明
圖1為本發(fā)明所述的一種利用自體健康狀態(tài)時(shí)微生物構(gòu)建以用于菌群移植的菌群庫(kù)的方法流程圖。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行描述，以便更好的理解本發(fā)明，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其它實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
實(shí)施例
本實(shí)施例中的利用自體健康狀態(tài)時(shí)微生物構(gòu)建以用于菌群移植的菌群庫(kù)的方法，分為以下幾個(gè)步驟進(jìn)行。
1、儲(chǔ)戶信息采集及健康狀態(tài)的確認(rèn)。儲(chǔ)戶簽訂“自體微生物菌群庫(kù)服務(wù)協(xié)議書”后，填寫身份信息，并詢問了解其疾病史(包括是否有腹瀉病史和慢性便秘，是否有惡性腫瘤病史，是否有系統(tǒng)性自身免疫性疾病，是否濫用靜脈注射藥物，是否有吸毒史，是否有高風(fēng)險(xiǎn)性行為，是否有紋身和監(jiān)禁史等)；之后對(duì)其進(jìn)行體檢和心理測(cè)評(píng)，體檢至少應(yīng)包含以下內(nèi)容：血清測(cè)試(檢查是否有已知的傳染性疾病，血清做甲型肝炎病毒IgM，乙型肝炎IgM和IgG，乙型肝炎表面抗原，乙型肝炎表面抗體IgM，丙型肝炎病毒IgG抗體，HIV 1型和2型，熒光梅毒密螺旋體抗體吸附試驗(yàn))；血液測(cè)試(檢查相關(guān)部位是否有炎癥，檢查血液中白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中間細(xì)胞數(shù)等)；糞便測(cè)試(對(duì)糞便進(jìn)行PCR、抗原、鏡檢和培養(yǎng)測(cè)試，檢查腸道內(nèi)是否有難辨梭狀芽胞桿菌毒素B、輪狀病毒、賈第蟲、隱孢子蟲、環(huán)孢子蟲、隱孢子蟲等孢子球蟲(抗酸染色)、蟲卵、寄生蟲、志賀產(chǎn)毒素大腸桿菌、沙門菌、志賀菌、耶爾森鼠疫桿菌、彎曲桿菌、非霍亂弧菌、鄰單胞菌、氣單胞菌等)。心理測(cè)評(píng)采用問卷調(diào)查的方式，主要檢測(cè)是否有心理和精神疾病。最后，確定身心健康的儲(chǔ)戶才建議實(shí)行自體微生物菌群的保存，最好應(yīng)為身心健康的兒童或未成年人，不健康的儲(chǔ)戶不建議保存。
2、自體相關(guān)部位微生物菌群的采集。采集部位包括口腔、鼻腔、女性生殖道、腸道，采集過程在無菌條件下進(jìn)行，最好是在GMP100的房間內(nèi)進(jìn)行?？谇?、鼻腔、生殖道的微生物菌群采用無菌棉簽取樣，腸道微生物采用專用的糞便取樣器進(jìn)行取樣，取樣后迅速置于已預(yù)先滅菌的厭氧還原液中密封保存。
3、微生物菌群多樣性分析。對(duì)同批次所得的微生物樣品，分別取一個(gè)樣進(jìn)行高通量測(cè)序，了解其微生物的多樣性，并保存記錄其檢測(cè)結(jié)果。
4、微生物菌群的保存。將上述所得的微生物樣品分裝好后放入凍存容器中，密封，編號(hào)，并登記，之后立即進(jìn)行程序是降溫，然后放入到-196℃液氮罐中長(zhǎng)期保存，或?qū)⑽⑸飿悠分谱鞒赡z囊進(jìn)行冷凍保存，儲(chǔ)存環(huán)境定期檢測(cè)。
5、微生物菌群中益生菌的分離保存。從上述所得的微生物樣品中分離純化得到相關(guān)益生菌，如雙歧桿菌(Bifidobacterium)、乳酸桿菌(Lactobacill)、擬桿梭菌(Bacteroides)、柔嫩梭菌、脆弱擬桿菌、奇異菌(Atopobium)、普氏菌(Prevotella)等，然后再將這些益生菌分別放入到-196℃液氮罐中長(zhǎng)期保存或?qū)⑽⑸飿悠分谱鞒赡z囊進(jìn)行冷凍保存，儲(chǔ)存環(huán)境定期檢測(cè)。
6、建庫(kù)及庫(kù)的信息化管理。將樣品信息和儲(chǔ)戶信息匹配后錄入計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)庫(kù)，并建立數(shù)據(jù)庫(kù)信息檢索，按照微生物菌種保藏庫(kù)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行管理。
以上所述是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。